miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

椎间盘退变程度与髓核中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3及白细胞介素1β的相关性

背景:研究表明,miRNA水平与椎间盘细胞的凋亡和增殖、细胞外基质代谢和炎症反应密切相关,而miR-142-3p在椎间盘退变中的具体作用尚不清楚。目的:探讨人腰椎间盘髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达与椎间盘退变程度的相关性。方法:选择2020年1月至2022年3月在苏州市第九人民医院因腰椎间盘退行性疾病而行手术的患者82例,术前均行MRI检查,根据Videman分级标准将患者分为轻度退变组(n=36)、中度退变组(n=26)和重度退变组(n=20),获取82份髓核组织标本,检测各组髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因表达,以及混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白表达,采用Spearman相关系数法评估miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素β表达与腰椎间盘退变程度的相关性。采用随机数字表法将30只成年SD大鼠分为假手术组(仅穿刺皮肤与肌肉后处死)、轻度退变组(穿刺Co7/8椎间盘1周后处死)与重度退变组(穿刺Co7/8椎间盘2周后处死),每组10只,检测各组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β的蛋白表达,以及miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β的基因表达。结果与结论:①人髓核组织:miRNA-142-3p的表达由高到低的顺序为轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05),混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅰ型胶原基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅱ型胶原基因与蛋白表达由高到低的顺序为:轻度退变组>中度退变组>重度退变组的趋势(P<0.05);Spearman相关分析显示,椎间盘退变程度与miRNA-142-3p表达呈负相关(P<0.05),与混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达呈正相关(P<0.05);②大鼠髓核组织:与假手术组比较,轻度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);与轻度退变组比较,重度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);③结果表明,人腰椎间盘退变程度与髓核组织中miRNA-142-3p表达呈负相关,与混合谱系激酶3和白细胞介素1β表达呈正相关。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇耐药的关系

目的 探讨miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇(PTX)耐药的关系。方法 选取80例乳腺癌患者,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和癌旁组织中miRNA-455-3p的相对表达量及PTX耐药和PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p、自噬相关蛋白(ATG12)mRNA的相对表达量。将miRNA-NC、miRNA-455-3p mimics分别转染至乳腺癌耐药MCF-7/PTX细胞,分别作为miRNA-NC组、miRNA-455-3p组,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡情况以及P糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)蛋白的相对表达量。相关性分析采用Spearman相关分析。结果 乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于PTX耐药患者,ATG12 m RNA相对表达量明显低于PTX耐药患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-455-3p组细胞凋亡率明显高于miRNA-NC组,P-gp、GST-π蛋白相对表达量均明显低于miRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌组织中miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关(r=-0.697,P﹤0.01)。结论 乳腺癌组织miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关,通过靶向抑制ATG12的表达降低耐药乳腺癌细胞的自噬活性,促进细胞凋亡,有助于改善乳腺癌细胞对PTX药物的敏感性。

miRNA-128-3p通过下调KLHDC8A的表达抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为

目的探讨miRNA-128-3p在胶质瘤细胞中的作用,并确定其是否能够调控KLHDC8A介导恶性生物学行为,为寻找胶质瘤患者潜在的分子生物标志物和治疗靶点提供理论支持。方法采用双荧光素酶报告基因、qRT-PCR和Western blotting实验验证miRNA-128-3p与KLHDC8A的调控关系。通过Edu实验、流式细胞术、Transwell和划痕实验验证miRNA-128-3p和KLHDC8A对胶质瘤细胞恶性行为的影响。利用挽救实验验证miRNA-128-3p靶向KLHDC8A调控胶质瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。结果KLHDC8A在高级别胶质瘤组织中的表达水平显著升高,与恶性胶质瘤患者的生存状况密切相关。功能验证实验表明,高表达KLHDC8A可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,而miRNA-128-3p高表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移等恶性生物学行为。miRNA-128-3p靶向调节胶质瘤细胞中KLHDC8A的表达,miRNA-128-3p高表达通过靶向KLHDC8A抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为。结论miRNA-128-3p负向调控其下游靶基因KLHDC8A的表达,抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为,因此miRNA-128-3p/KLHDC8A是判断胶质瘤预后及治疗的分子靶点。

红景天苷通过miRNA-210-3p/E2F3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨红景天苷(salidroside,Sal)通过miRNA-210-3p/E2F3对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:通过生物信息网站分析miR-210-3p及其靶基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达及生存影响。采用免疫组化法检测肺腺癌组织和正常组织中E2F3蛋白的表达;qRT-PCR检测NSCLC细胞中miR-210-3p和E2F3基因表达;Western blot检测NSCLC细胞中E2F3蛋白表达;CCK-8、细胞划痕及克隆形成实验分别检测红景天苷和miR-210-3p对NSCLC细胞增殖、迁移及克隆形成的影响。结果:生物信息网站显示miR-210-3p和E2F3在肺腺癌组织中高表达,且与不良预后相关。Sal以时间-浓度依赖抑制NSCLC细胞的增殖活性(P<0.05),并显著降低NSCLC细胞的迁移及克隆形成能力(P<0.05),而低浓度Sal对正常肺上皮细胞的增殖无明显抑制效果。miRNA-210-3p和E2F3表达在NSCLC细胞中上调(P<0.05),Sal可抑制二者表达(P<0.05)。与对照组比较,miR-210-3p inhibitor组E2F3表达上调(P<0.05),miR-210-3p mimics组E2F3表达被抑制(P<0.05),Sal与miR-210-3p mimics联用进一步抑制了miR-210-3p mimics所致的E2F3表达下调和细胞增殖和迁移的增强作用(P<0.05)。结论:miR-210-3p和E2F3在肺腺癌中高表达,Sal可通过时间-浓度依赖负调控miRNA-210-3p/E2F3影响NSCLC细胞的生物学行为,发挥抗癌作用。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

糖类抗原125、人附睾蛋白4、miRNA-144-3p对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值及影响因素分析

目的 探讨糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)、miRNA-144-3p对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值及影响因素。方法 选取60例卵巢癌患者,术后给予化疗,根据化疗效果将其分为有效组和无效组,比较两组患者的CA125、HE4、miRNA-144-3p水平。卵巢癌患者化疗疗效的影响因素采用多因素Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估CA125、HE4、miRNA-144-3p单独及联合检测对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值。结果 化疗后,治疗有效39例,治疗无效21例,分别作为有效组和无效组。化疗前,有效组患者血清CA125、HE4水平均明显低于无效组,miRNA-144-3p水平明显高于无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,化疗前CA125水平≥35 U/ml、化疗前HE4水平≥140 pmol/L、化疗前miRNA-144-3p水平﹤3、肿瘤直径﹥5 cm均是卵巢癌患者化疗疗效的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测预测卵巢癌患者化疗疗效的AUC为0.965(95%CI:0.924~0.999),此时的灵敏度为89.74%,特异度为95.24%,准确度为91.67%。结论化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测卵巢癌患者化疗疗效具有较高的预测价值,较低的化疗前CA125、HE4水平和较高的miRNA-144-3p水平提示卵巢癌患者的化疗疗效较好。

血清miR-324-3p及miRNA-483-3p在PCOS中的表达水平及与超声诊断监测指标的关系

目的:探究与分析血清miR-324-3p及miRNA-483-3p在PCOS中的表达水平及与超声诊断监测指标的关系。方法:选取本院自2018年4月至2021年4月收治的PCOS患者103例作为观察组,另选择同时期来本院接受健康体检的未发生PCOS妇女100例作为对照组,对比两组患者的一般资料,采用实时定量PCR对血清miR-324-3p及miRNA-483-3p水平进行测量,同时采用GE公司生产的彩色多普勒诊断仪对两组的卵巢超声情况进行记录,采用Spearman相关性分析血清miR-324-3p及miRNA-483-3p与PCOS超声指标的关系。结果:观察组与对照组相比卵巢体积较大、卵泡数目较多,血流指数较快,血清miR-324-3p水平较低,miRNA-483-3p水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。行Spearman相关性分析可见,卵巢体积、卵泡数目及血流指数分别与血清miR-324-3p及miRNA-483-3p之间呈现出了明显的负相关性。结论:血清miR-324-3p及miRNA-483-3p在PCOS中呈现出了较低的表达水平,且与其超声诊断指标呈现出了明显的相关性,为PCOS的临床诊断及后续治疗提供了可靠依据。

miRNA-2861,miRNA-483-3p与多囊卵巢综合征患者内分泌代谢及卵母细胞质量的相关性研究

分析miRNA-2861,miRNA-483-3p与多囊卵巢综合征(PCOS)患者内分泌代谢及卵母细胞质量的相关性。方法 于我院生殖中心PCOS患者中随机抽取40例,作为PCOS组;于男方不孕但女方身体健康的患者中随机抽取40例,作为对照组,对比两组内分泌代谢指标以及卵母细胞质量,以及miRNA-2861,miRNA-483-3p的关联性。结果 PCOS组BMI(26.54±1.75)kg/m2,胰岛素(15.78±2.49)mmol/L,TG(1.79±0.62)mmol/L,LDL-L(2.59±0.55)mmol/L,显著高于对照组[BMI(22.26±0.68)kg/m2,胰岛素(6.58±0.25)mmol/L,TG(1.12±0.36)mmol/L,LDL-L(2.03±0.37)mmol/L](P<0.05)。PCOS组获卵率82.80%,MII卵率75.97%,正常受精率70.78%,卵裂率96.59%,优质胚胎率20.00%,显著低于对照组[获卵率87.18%,MII卵率84.74%,正常受精率78.96%,卵裂率92.03%,优质胚胎率26.57%](P<0.05)。PCOS组miR-2861表达和胰岛素、TG、TC、LDH-L存在负相关关系(P<0.05),miR-483-3p和胰岛素、LDL-L呈现出负相关关系(P<0.05)。PCOS组miR-2861表达和MII卵率、卵裂率以及优质胚胎率存在正相关关系(P<0.05),miR-483-3p和正常受精卵率、获卵率存在正相关关系(P<0.05)。结论 PCOS患者体内miRNA-2861,miRNA-483-3p呈现出低表达水平,由于miRNA-2861,miRNA-483-3p的低表达造成卵母细胞质量降低,进而影响体外受精成功率,同时也对患者自身代谢水平产生不良影响,引起内分泌紊乱。

糖尿病视网膜病变患者血清circFTO和miR-141-3p表达情况及其与病变分期的关系

目的:探讨血清circFTO、miR-141-3p水平变化与糖尿病视网膜病变患者不同疾病分期的关系。方法:选取2019-10/2022-11本院收治的198例2型糖尿病患者为研究对象,根据不同分期将患者分为非糖尿病视网膜病变(NDR)组70例、非增殖期糖尿病视网膜病变(NPDR)组66例、增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)组62例;同期选取67例本院体检正常的志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清circFTO和miR-141-3p水平;采用Pearson相关性分析检验糖尿病视网膜病变患者血清circFTO、miR-141-3p与各指标间的相关性;采用多因素Logistic回归分析探讨糖尿病视网膜病变的影响因素。结果:PDR组circFTO、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)高于对照组、NDR组、NPDR组,miR-141-3p、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低于对照组、NDR组、NPDR组(P<0.05)。NDR组、NPDR组、PDR组空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)高于对照组(均P<0.05)。PDR组病程高于NDR组和NPDR组(P<0.05)。糖尿病视网膜病变患者血清circFTO与SBP、DBP、FPG、HbA1c呈正相关,miR-141-3p与SBP、DBP、FPG、HbA1c呈负相关(均P<0.05)。circFTO是影响糖尿病视网膜病变的危险因素,miR-141-3p是影响糖尿病视网膜病变的保护因素(P<0.05)。结论:糖尿病视网膜病变患者血清circFTO显著升高,miR-141-3p显著降低,二者均与疾病分期密切相关,有望成为评估疾病进展的重要指标。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用

目的探讨miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用及可能机制。方法选取57例不明原因复发性流产患者,其中,流产2~3次36例,≥4次21例,同期,选取正常早孕行人工流产术患者42例作为对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测绒毛组织中miRNA-223-3p、Rps6kb1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,免疫组化法检测绒毛组织中微血管密度(MVD)。结果不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量高于对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量均低于对照组,≥4次不明原因复发性流产患者miRNA-223-3p表达量高于2~3次和对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量低于2~3次和对照组,均差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD为(23.3±6.1)个,远低于对照组的(41.6±5.3)个,≥4次不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD低于2~3次,均差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量与HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量及MVD均呈负相关(r=-0.496、-0.638和-0.597,P<0.001),HIF-1αmRNA表达量与VEGF mRNA表达量和MVD均呈正相关(r=0.584、0.439,P<0.001);VEGF mRNA表达量与MVD呈正相关(r=0.600,P<0.001)。结论 miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达上调,可能与Rps6kb1/HIF-1α信号通路有关。

miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β影响结直肠癌SW480细胞的奥沙利铂敏感性

目的:探讨miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β对结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性的影响。方法:选取100例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)根治性手术后奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)同种联合化疗患者作为研究对象,根据化疗情况分为耐药组(n=40)和非耐药组(n=60),用q PCR检测两组外周血miRNA-490-3p水平;选取人CRC细胞株SW480和CRC奥沙利铂(OXA)耐药型细胞株OXA-SW480进行研究,先用q PCR检测两种细胞株中miRNA-490-3p表达水平;后将miRNA-490-3p过表达载体转染OXA-SW480(过表达组),并设立空载体组(空载体转染OXA-SW480)和空白对照组(OXA-SW480未经任何处理)。用CCK-8检测各组细胞增殖能力,同时用不同浓度OXA处理各组细胞,计算其半数抑制浓度(IC50);用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率;用WB检测各组Smad2和TGF-β蛋白表达水平。结果:在CRC患者中,耐药组外周血miR-490-3p水平显著低于非耐药组,在CRC细胞株中,OXA-SW480耐药株细胞miR-490-3p水平显著低于正常株SW480细胞(P<0.05)。与空载体组和空白对照组相比,过表达组miR-490-3p水平显著降低(均P<0.05),增殖抑制率显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),Smad2蛋白水平显著降低(均P<0.05),TGF-β蛋白水平显著升高(均P<0.05)。经OXA处理后,过表达组的IC50显著低于空载体组和空白对照组(均P<0.05)。经Pearson相关法分析,miR-490-3p与Smad2的表达呈负相关(r=–0.943,P<0.01),miR-490-3p与TGF-β的表达呈正相关(r=0.961,P<0.01)。结论:过表达miRNA-490-3p可增加CRC SW480细胞的OXA敏感性,此作用Smad2/TGF-β信号通路有关。

miRNA-126-3p与先天性心脏病肺动脉高压发病机制相关性的临床研究

目的探讨miRNA-126-3p与肺动脉高压(以下简称肺高压)发病机制的相关性。方法选取25例先天性心脏病患者,其中,肺高压患者11例,对照组14例,采用qRT-PCR法检测其肺组织miRNA-126-3p的表达,并采用starBase进行靶基因预测,并从mRNA水平和蛋白水平进行验证。结果肺高压患者与对照组在年龄、性别、生化指标检查等方面比较差异无统计学意义(P>0.05);肺高压患者miRNA-126-3p表达水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);生物信息学预测发现miRNA-126-3p的生物学功能主要与结合蛋白、信号转导、细胞分化、调控细胞形态、调控MAPK和胰岛素受体信号通路等有关,其靶基因主要有VEGFA、SPRED1、PIK3R2等;肺高压组的VEGFA表达在mRNA水平和蛋白水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);miRNA-126-3p与VEGFA呈现正相关(P<0.01)。结论 miRNA-126-3p可能通过调控VEGFA参与先天性心脏病相关性肺动脉高压发病。

SH2B1基因及miR-276-3p对猪背部脂肪沉积的影响

本试验旨在研究SH2B衔接因子蛋白1(SH2B adaptor protein 1,SH2B1)基因在猪不同组织和生长发育各阶段背部脂肪中的表达情况,预测调控该基因的miR-276-3p对猪背部脂肪表达的影响。应用实时荧光定量PCR技术检测SH2B1基因在猪脂肪、下丘脑等6种组织,以及在30、60、90、120和180 d猪背部脂肪组织中的相对表达量。靶标预测SH2B1基因的调控miRNA,并通过实时荧光定量PCR检测miR-276-3p对该基因的调控作用。结果显示,SH2B1基因在猪的6种组织中均有表达,且在脂肪组织中表达量最高,在肌肉组织中表达量最低。在猪生长发育各阶段背部脂肪中SH2B1基因均有表达,在前期(30和60 d)表达量较低,在中、后期(90、120和180 d)持续高表达,且显著高于前期表达量(P<0.05)。高、低背膘厚组背部脂肪中miR-276-3p与SH2B1基因均呈差异表达,且两者表达呈相反趋势,miR-276-3p在高背膘厚组中的表达量显著低于低背膘厚组(P<0.05),而SH2B1基因在高背膘厚组中的表达量却显著高于低背膘厚组(P<0.05)。miR-276-3p可通过靶向负调控SH2B1基因,影响猪背部脂肪的沉积。本试验结果为进一步深入研究猪背部脂肪沉积和背膘厚差异的分子机制提供参考。

miRNA-210-3p对缺氧诱导海马神经细胞HT22凋亡的影响

目的:研究miRNA-210-3p对缺氧诱导海马神经细胞凋亡的影响及机制。方法:将海马神经元HT22细胞分成4组,分别为对照组、缺氧组、阴性对照+缺氧组、miRNA-210-3p+缺氧组,采用qRT-PCR方法检测HT22细胞中miRNA-210-3p的表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,用二硫代二硝基苯甲酸法检测GSH-Px活性,用水溶性四唑盐法检测SOD活性。结果:转染miRNA-210-3p模拟物的HT22细胞经缺氧处理后,细胞中miRNA-210-3p表达水平升高(P <0. 05)。缺氧处理后的HT22细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平升高,GSH-Px、SOD活性降低,MDA含量升高(P <0. 05);上调miRNA-210-3p表达可拮抗缺氧诱导的HT22细胞凋亡和活化型Caspase-3、Caspase-9蛋白表达,提高细胞中GSH-Px、SOD活性,降低细胞中MDA含量(P <0. 05)。结论:上调miRNA-210-3p能够抑制缺氧诱导的海马神经细胞凋亡,其作用机制可能与降低氧化应激有关。

外周血miRNA-17-3p的检测在结肠癌诊断中的临床意义

目的:外周血microRNA(miRNA)-17-3p对结肠癌的诊断意义及其与临床病理特征的相关性.方法:2012-01/2014-04在北京天坛医院接受住院治疗的结肠癌患者67例(观察组)资料,另选取50例健康体检者作为对照组.采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测miRNA-17-3p的表达量,分析两组外周血miRNA-17-3p、血癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平差异;并分析miRNA-17-3p与年龄、性别、临床分期、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征的关系.并分别对miRNA-17-3p、CEA水平对结肠癌的诊断意义行ROC曲线分析.结果:观察组患者血清中的miRNA-17-3p的相对表达量明显高于正常对照组(P<0.05).其表达与淋巴结转移、分化程度、TNM分期相关.受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析显示,miRNA-17-3p以相对表达量2.50为临界点时对结肠癌的诊断敏感性为87%,特异性为62%,曲线下面积0.910,优于CEA对结肠癌的诊断.术后外周血miRNA-17-3p水平明显低于术前,差异有统计学意义(P<0.05).结论:外周血miRNA-17-3p在结肠癌患者中的表达明显上调,对结肠癌的诊断价值优于CEA.

miRNA-330-3p/Ap2m1轴在过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体抗心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌外泌体(BMSC^(GATA-4)exosome)通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴减少心肌细胞凋亡,提高心肌梗死心功能。方法建立小鼠心梗模型,共分7组,分别经尾静脉注射BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome、BMSC^(miRNA-330-3p-inhibitor)-exosome、BMSC^(空载体)-exosome、BMSCexosome 48 h,同时将心梗未处理组及正常小鼠作为对照组。采用心脏彩超检测各组心功能,RT-PCR检测心梗心肌细胞内miRNA-330-3p的表达,Tunel法检测各组心梗心肌细胞凋亡数量。miRNA-330-3p对应靶基因Ap2.m1、Cnot4蛋白采用Western blot法进行检测。结果BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),其心肌细胞内miRNA-330-3p表达量最高(P<0.05)。BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心肌细胞的凋亡率最低(P<0.05),BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心肌细胞内的Ap2.m1的表达最低(P<0.05)。结论过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞外泌体通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴抗心肌细胞凋亡。