miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

鼻咽癌患者血清miRNA-331-3p的表达及对鼻咽癌筛查的价值分析

目的探讨鼻咽癌患者血清miRNA-331-3p表达水平、临床意义及对鼻咽癌筛查的价值。方法收集2017年10月至2019年2月湖南省人民医院耳鼻咽喉头颈外科诊断为鼻咽癌患者50例及健康体检者50例血清标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定血清标本miRNA-331-3p表达水平。统计分析鼻咽癌患者血清miRNA-331-3p相对表达水平与鼻咽癌临床及病理参数间的关联,采用受试者工作特征曲线分析miRNA-331-3p对鼻咽癌的诊断效率。结果①鼻咽癌组血清miRNA-331-3p相对表达量较正常组低(P<0.01)。②鼻咽癌组血清miR-331-3p相对表达量在不同TNM分期及远处转移情况中差异有统计学意义(P<0.01);在性别、年龄、肿瘤范围、淋巴结转移上差异均未见统计学意义(P均>0.05)。③血清中miR-331-3p相对表达量诊断鼻咽癌的最佳临界值为1.81,其诊断的灵敏度为74.2%,特异度为93.1%。结论鼻咽癌患者血清miRNA-331-3p表达水平出现下调,血清miRNA-331-3p与肿瘤TNM分期及远处转移有关,有较好的鼻咽癌检测效能,有助于肿瘤病情进展判断,有望成为鼻咽癌筛查的新分子标志物。

过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。

椎间盘退变程度与髓核中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3及白细胞介素1β的相关性

背景:研究表明,miRNA水平与椎间盘细胞的凋亡和增殖、细胞外基质代谢和炎症反应密切相关,而miR-142-3p在椎间盘退变中的具体作用尚不清楚。目的:探讨人腰椎间盘髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达与椎间盘退变程度的相关性。方法:选择2020年1月至2022年3月在苏州市第九人民医院因腰椎间盘退行性疾病而行手术的患者82例,术前均行MRI检查,根据Videman分级标准将患者分为轻度退变组(n=36)、中度退变组(n=26)和重度退变组(n=20),获取82份髓核组织标本,检测各组髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因表达,以及混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白表达,采用Spearman相关系数法评估miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素β表达与腰椎间盘退变程度的相关性。采用随机数字表法将30只成年SD大鼠分为假手术组(仅穿刺皮肤与肌肉后处死)、轻度退变组(穿刺Co7/8椎间盘1周后处死)与重度退变组(穿刺Co7/8椎间盘2周后处死),每组10只,检测各组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β的蛋白表达,以及miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β的基因表达。结果与结论:①人髓核组织:miRNA-142-3p的表达由高到低的顺序为轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05),混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅰ型胶原基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅱ型胶原基因与蛋白表达由高到低的顺序为:轻度退变组>中度退变组>重度退变组的趋势(P<0.05);Spearman相关分析显示,椎间盘退变程度与miRNA-142-3p表达呈负相关(P<0.05),与混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达呈正相关(P<0.05);②大鼠髓核组织:与假手术组比较,轻度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);与轻度退变组比较,重度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);③结果表明,人腰椎间盘退变程度与髓核组织中miRNA-142-3p表达呈负相关,与混合谱系激酶3和白细胞介素1β表达呈正相关。

结直肠癌组织miR-331-3p、MLLT10 mRNA表达变化及其临床意义

目的观察结直肠癌(CRC)组织微小RNA-331-3p(miR-331-3p)、混合谱系白血病转位辅因子10(MLLT10)mRNA表达变化,并探讨其表达与临床病理特征和上皮间质转化的关系。方法选择CRC患者156例,取术中获取的CRC组织及其配对的癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-331-3p、MLLT10mRNA表达以及上皮间质转化相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、锌指转录因子Snail mRNA表达。比较CRC组织与癌旁正常组织miR-331-3p及MLLT10、E-cadherin、N-cadherin、Snail mRNA表达;分析CRC组织miR-331-3p、MLLT10 mRNA表达与临床病理特征的关系,二者表达的关系及其与E-cadherin、N-cadherin、Snail mRNA表达的关系。结果CRC组织MLLT10、N-cadherin、Snail mRNA相对表达量均高于癌旁正常组织,miR-331-3p、E-cadherin mRNA相对表达量均低于癌旁正常组织(P均<0.01)。CRC组织miR-331-3p、MLLT10 mRNA表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤最大径、肿瘤位置、组织分化程度无关(P均>0.05)。Pearson相关分析显示,CRC组织miR-331-3p表达与MLLT10 mRNA表达呈负相关(r=-0.678,P<0.05);CRC组织miR-331-3p表达与E-cadherin mRNA表达呈正相关(r=0.589,P<0.05),与N-cadherin、Snail mRNA表达呈负相关(r分别为-0.712、-0.654,P均<0.05);CRC组织MLLT10 mRNA表达与E-cadherin mRNA表达呈负相关(r=-0.549,P<0.05),与N-cadherin、Snail mRNA表达呈正相关(r分别为0.668、0.714,P均<0.05)。结论CRC组织miR-331-3p低表达、MLLT10 mRNA高表达,二者表达与TNM分期、淋巴结转移以及上皮间质转化密切相关。

内皮祖细胞外泌体中miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响

目的了解内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exo)中的miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法采用荧光染色法对C57BL/6小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)进行鉴定。对从EPCs培养基中分离出的EPCs-Exo进行鉴定以及miRNA高通量测序。建立糖尿病小鼠皮肤损伤模型,随机分为5组:PBS组、EPCs-Exo组、空白组、agomiR-222-3p组、antagomiR-222-3p组。根据不同分组,连续处理14 d,观察创面愈合率,免疫荧光方法了解治疗前后创缘组织中活性氧(ROS)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD31表达水平变化。结果EPCs-Exo促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。高通量测序提示miRNA-222-3p在EPCs-Exo中高度表达。创缘组织局部皮下注射miRNA-222-3p可显著促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。结论miRNA-222-3p促进糖尿病小鼠伤口愈合,在EPCs-Exo促进创面愈合过程中发挥重要作用。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

在抑郁症大鼠模型中MiRNA-103-3p调控Rab10促进神经细胞自噬

目的探讨与神经保护相关的基因Rab10在抑郁症体内外模型中发挥的功能和作用机制。方法选取36只大鼠作为慢性应激模型组(CUMS组),每只大鼠单笼饲养,进行6周慢性不可预测温和应激,另选取12只作为对照组。CUMS组大鼠完成6周CUMS刺激后,根据旷场实验数据和体质量分成3组(12只/组):CUMS+生理盐水组、CUMS+AAV载体组和CUMS+AAV过表达Rab10组,CUMS+saline组大鼠侧脑室注射生理盐水;CUMS+AAV组大鼠侧脑室注射AAV空病毒载体;CUMS+AAV-oe-Rab10组大鼠侧脑室注射AAV过表达Rab10载体实现Rab10基因过表达,CUMS刺激在整个实验期间持续进行。对照组大鼠始终不进行任何刺激。利用大鼠行为学指标的变化评价大鼠抑郁状态。构建CORT诱导的PC12细胞模型,CCK-8法检测细胞活力。通过TargetScan数据库预测与Rab10相互作用的miRNA及miRNA结合位点,并结合双荧光素酶和RIP实验探究miRNA-103-3p与Rab10的相互作用。在CORT刺激的PC12细胞中过表达Rab10,或在转染miRNA-103-3p inhibitor基础上沉默Rab10,qRT-PCR法检测miRNA-103-3p和Rab10的表达水平;Western blotting检测细胞中Rab10、BDNF、CREB、p62、Beclin-1、Wnt3a、Gsk3β、磷酸化(p)-Gsk3β和β-catenin的蛋白含量。结果病毒过表达Rab10后明显改善CUMS大鼠行为学指标(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting证实Rab10基因在CUMS大鼠海马与CORT诱导的PC12细胞中表达下调(P<0.05)。生物信息学结合双荧光素酶和RIP实验证实miRNA-103-3p靶向Rab10(P<0.05)。过表达Rab10或沉默miRNA-103-3p激活了Wnt/β-catenin信号通路,上调BDNF、CREB和Beclin-1的含量,下调p62蛋白的表达(P<0.05);下调miRNA-103-3p的基础上沉默Rab10逆转了miRNA-103-3p的作用(P<0.05)。结论miRNA103-3p靶向Rab10激活Wnt/β-catenin信号通路,改善神经细胞的可塑性,促进细胞自噬,从而对抗CORT诱导的PC12细胞损伤。

LINC01006靶向miR-331-3p调控多发性骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和转移的机制研究

目的:探讨LINC01006靶向miR-331-3p在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)进展中的功能。方法:RT-qPCR检测39例MM患者和22例正常对照者骨髓标本来源的浆细胞中LINC01006和miR-331-3p的表达。分别转染si-LINC01006、si-NC、miR-331-3p mimics、miR-NC、si-LINC01006+anti-miR-NC、si-LINC01006+anti-miR-331-3p至MM细胞U266,通过CCK-8、流式细胞术和Transwell法评估U266细胞抑制率、凋亡率和转移数。DIANA Tools网站预测LINC01006与miR-331-3p的相互作用,并通过双荧光素酶报告基因法进一步验证。结果:MM患者骨髓标本来源的浆细胞中LINC01006表达升高,miR-331-3p表达降低。转染si-LINC01006可增加细胞抑制率和凋亡率(P<0.05),减少细胞转移数(P<0.05),并上调miR-331-3p表达(P<0.05)。转染miR-331-3p mimics可增加细胞抑制率和凋亡率(P<0.05),减少细胞转移数(P<0.05)。miR-331-3p与LINC01006直接结合。转染anti-miR-331-3p显著逆转转染si-LINC01006对MM细胞抑制率、凋亡率和转移数的影响。结论:沉默LINC01006通过促进miR-331-3p表达来抑制MM细胞增殖和转移,诱导凋亡,从而抑制MM进展。

三阴性乳腺癌组织中微RNA-331-3p和跨膜蛋白119水平变化与临床预后的相关性

目的探究三阴性乳腺癌(TNBC)组织中微RNA-331-3p(miR-331-3p)和跨膜蛋白119(TMEM119)水平变化与临床预后的相关性。方法选取2017年1月至2019年1月在信阳市中心医院行手术治疗的98例TNBC病人的癌组织以及癌旁组织,分别作为TNBC组和癌旁组。在术后3年对所有病人进行随访,分为预后良好组为23例,预后不良组为75例。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-331-3p和TMEM119的表达水平;采用Pearson法分析TNBC组织中miR-331-3p和TMEM119表达水平的相关性;分析miR-331-3p和TMEM119水平与TNBC病人预后的关系;影响TNBC病人预后的影响因素采用Cox回归的方法进行分析。结果TNBC组TMEM119(1.53±0.24)的表达水平与癌旁组相比(1.01±0.13)显著上升,miR-331-3p(0.74±0.13)的表达水平与癌旁组(1.02±0.11)相比显著下降(t=41.53、41.53,P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-331-3p和TMEM119表达水平呈负相关关系(r=−0.49,P<0.001)。miR-331-3p和TMEM119表达水平与肿瘤长径、TNM分期、腋窝淋巴结转移有关(P<0.05)。miR-331-3p高表达组病人3年内生存率16/49(32.65%)高于低表达组7/49(14.29%);TMEM119高表达组病人3年内生存率4/49(8.16%)低于低表达组19/49(38.78%)(Z=4.60,P=0.032;Z=12.78,P<0.001)。预后不良组miR-331-3p(0.65±0.13)表达水平与预后良好组(1.03±0.12)相比显著降低,TMEM119(1.69±0.27)表达水平与预后良好组(1.02±0.14)相比显著升高(t=38.74、33.30,P<0.05)。结果显示,TNM分期(HR=5.88)、miR-331-3p(HR=2.45)和TMEM119(HR=2.86)表达水平是影响TNBC病人预后的危险因素(P<0.05)。结论TNBC病人癌组织中miR-331-3p低表达,TMEM119高表达,二者水平与预后评估密切相关。

LINC00943调节miR-331-3p/KMT2A轴对宫颈癌细胞恶性生物学行为和上皮间质转化的影响

目的探讨LINC00943调节miR-331-3p/KMT2A轴对宫颈癌(CC)细胞恶性生物学行为和上皮间质转化(EMT)的影响。方法检测正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7和人CC细胞系(HeLa、SiHa、C33A、CaSki)中LINC00943表达,筛选HeLa细胞为最佳细胞系。Targetscan检索预测miR-331-3p与LINC00943、KMT2A的结合位点,培养HeLa细胞并分为sh-NC组、sh-LINC00943组、sh-LINC00943+NC inhibitor组、sh-LINC00943+miR-331-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-331-3p mimics组、miR-331-3p mimics+pcDNA组、miR-331-3p mimics+KMT2A组,检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及EMT相关蛋白的表达水平。结果LINC00943在CC细胞系的HeLa细胞中表达量最高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验表明,LINC00943靶向下调miR-331-3p,miR-331-3p靶向下调KMT2A。细胞实验结果显示:沉默LINC00943或过表达miR-331-3p可抑制HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,促进细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-331-3p表达或过表达KMT2A可逆转沉默LINC00943或过表达miR-331-3p对HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用(P<0.05)。体内肿瘤形成实验证实,沉默LINC00943可显著抑制肿瘤生长和EMT。结论LINC00943在CC细胞中高表达,沉默LINC00943可调节miR-331-3p/KMT2A轴抑制CC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT等恶性生物学行为,促进细胞凋亡。

乳腺癌患者血清HOTAIR、miR-331-3p水平预测术后复发的风险模型构建与验证

目的探讨乳腺癌患者血清HOX转录反义RNA(HOTAIR)、miR-331-3p水平与术后复发的关系,并构建风险模型。方法选取2019年6月至2021年6月我院乳腺癌手术患者108例为研究组,另选取同期健康体检者45例为对照组。比较两组血清HOTAIR、miR-331-3p水平,统计乳腺癌患者术后2年复发情况,采用Cox回归分析乳腺癌患者术后复发影响因素,建立列线图预测模型并验证。结果研究组血清HOTAIR、miR-331-3p水平高于对照组(P<0.05);Cox回归模型分析结果显示,临床分期Ⅲ期、人表皮生长因子受体2(HER2)阳性、血清HOTAIR与miR-331-3p高表达均为乳腺癌患者术后复发独立危险因素,雌激素受体(ER)表达阳性、孕激素受体(PR)表达阳性、术后化疗、术后内分泌治疗是保护因素(P<0.05);列线图模型预测的准确性和有效性较好。结论临床分期Ⅲ期、HER2阳性、血清HOTAIR与miR-331-3p高表达均为乳腺癌患者术后复发独立危险因素,ER阳性、PR阳性、术后化疗、术后内分泌治疗是保护因素,且据此建立的列线图模型具有较高的预测价值。

circ_0062389通过靶向miRNA-331-3p对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其机制研究

目的探讨circ_0062389对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其可能机制。方法分别转染circ_0062389小干扰RNA、微RNA(miRNA)-331-3p模拟物或共转染circ_0062389小干扰RNA和miRNA-331-3p抑制剂至人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),然后用1.0μg/mL ox-LDL刺激24 h,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测HUVEC中circ_0062389和miRNA-331-3p表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HUVEC中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测HUVEC中活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)3和cleaved-caspase9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0062389和miRNA-331-3p调控关系。结果ox-LDL可促进HUVEC中circ_0062389表达(P<0.05),而抑制miRNA-331-3p表达(P<0.05)。敲减circ_0062389或过表达miRNA-331-3p可降低ox-LDL诱导的HUVEC中MDA水平(P<0.05)、提高HUVEC中SOD和GSH-Px活性(P<0.05),并降低细胞凋亡率及HUVEC中cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达(P<0.05)。circ_0062389可靶向结合并负调控miRNA-331-3p。敲减miRNA-331-3p可逆转敲减circ_0062389对ox-LDL诱导的HUVEC氧化应激及凋亡的影响。结论circ_0062389可能通过靶向抑制miRNA-331-3p促进ox-LDL诱导的血管内皮细胞氧化应激及凋亡,其可能成为动脉粥样硬化治疗的分子靶点。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

微小RNA-331-3p在上皮性卵巢癌血清中的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA-331-3p (miR-331-3p)在上皮性卵巢癌(EOC)患者血清中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法收集2015年1月至2018年1月70例初诊EOC患者(EOC组)和70例健康女性(对照组)的外周血样本,收集EOC组70例患者的卵巢肿瘤组织和30例正常卵巢组织。分别提取血清及组织中miRNA并采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测血清和组织中miR-331-3p的表达水平,分析血清miR-331-3p水平与EOC临床病理特征和预后的关系。结果QPCR结果显示,miR-331-3p在EOC组织中的相对表达量为8. 02±1. 07,高于正常卵巢组织的3. 53±1. 51(P<0. 05); EOC组患者血清中miR-331-3p的相对表达量为9. 59±1. 17,高于对照组的4. 87±1. 98(P<0. 05)。血清miR-331-3p表达与EOC临床分期有关(P<0. 05),但与年龄、组织类型、组织学分级、淋巴结转移和血清CA125水平无关(P>0. 05)。受试者工作特征曲线显示,血清miR-331-3p水平诊断EOC的曲线下面积为0. 868(95%CI:0. 789～0. 948)。EOC患者中血清miR-331-3p高表达者的中位总生存期为15. 5个月,显著低于低表达者的27. 1个月,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 miR-331-3p与EOC的发生发展有关,血清miR-331-3p表达有可能成为EOC诊断及预后评估的新标志物并可作为EOC治疗的有效靶点。

miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用

目的探讨miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用及可能机制。方法选取57例不明原因复发性流产患者,其中,流产2~3次36例,≥4次21例,同期,选取正常早孕行人工流产术患者42例作为对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测绒毛组织中miRNA-223-3p、Rps6kb1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,免疫组化法检测绒毛组织中微血管密度(MVD)。结果不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量高于对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量均低于对照组,≥4次不明原因复发性流产患者miRNA-223-3p表达量高于2~3次和对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量低于2~3次和对照组,均差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD为(23.3±6.1)个,远低于对照组的(41.6±5.3)个,≥4次不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD低于2~3次,均差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量与HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量及MVD均呈负相关(r=-0.496、-0.638和-0.597,P<0.001),HIF-1αmRNA表达量与VEGF mRNA表达量和MVD均呈正相关(r=0.584、0.439,P<0.001);VEGF mRNA表达量与MVD呈正相关(r=0.600,P<0.001)。结论 miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达上调,可能与Rps6kb1/HIF-1α信号通路有关。

苦木碱F通过miR-331-3p调控宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨苦木碱F调控miR-331-3p在宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡中的作用及机制。方法:MTT法检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响;RT-qPCR检测苦木碱F处理HeLa细胞后miR-331-3p的表达;miR-331-3p mimic或miR-331-3p inhibitor转染HeLa细胞,经苦木碱F处理后检测HeLa细胞的增殖及凋亡情况;使用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-331-3p与蛋白酶体活化复合物3(PSME3)的靶向关系;Western blot检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白表达情况。结果:苦木碱F能显著抑制HeLa细胞增殖,促进凋亡,且具有浓度依赖性(P<0.01);苦木碱F显著上调HeLa细胞中miR-331-3p的表达(P<0.01);miR-331-3p mimic能显著抑制HeLa细胞增殖能力,促进细胞凋亡;miR-331-3p inhibitor能显著降低苦木碱F对HeLa细胞增殖的抑制以及凋亡的促进作用(P<0.05);生物信息学预测PSME3是miR-331-3p的靶基因之一,双荧光素酶报告基因结果显示miR-331-3p与PSME33’UTR靶向结合;与苦木碱F+NC inhibitor+NC-siRNA组比较,苦木碱F+miR-331-3p inhibitor+NC-siRNA组中细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,β-catenin和Bcl-2蛋白水平升高,Bax蛋白水平降低,而敲低PSME3能逆转这一结果,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦木碱F通过介导miR-331-3p/PSME3轴抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进凋亡,发挥抗肿瘤作用。

miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β影响结直肠癌SW480细胞的奥沙利铂敏感性

目的:探讨miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β对结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性的影响。方法:选取100例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)根治性手术后奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)同种联合化疗患者作为研究对象,根据化疗情况分为耐药组(n=40)和非耐药组(n=60),用q PCR检测两组外周血miRNA-490-3p水平;选取人CRC细胞株SW480和CRC奥沙利铂(OXA)耐药型细胞株OXA-SW480进行研究,先用q PCR检测两种细胞株中miRNA-490-3p表达水平;后将miRNA-490-3p过表达载体转染OXA-SW480(过表达组),并设立空载体组(空载体转染OXA-SW480)和空白对照组(OXA-SW480未经任何处理)。用CCK-8检测各组细胞增殖能力,同时用不同浓度OXA处理各组细胞,计算其半数抑制浓度(IC50);用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率;用WB检测各组Smad2和TGF-β蛋白表达水平。结果:在CRC患者中,耐药组外周血miR-490-3p水平显著低于非耐药组,在CRC细胞株中,OXA-SW480耐药株细胞miR-490-3p水平显著低于正常株SW480细胞(P<0.05)。与空载体组和空白对照组相比,过表达组miR-490-3p水平显著降低(均P<0.05),增殖抑制率显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),Smad2蛋白水平显著降低(均P<0.05),TGF-β蛋白水平显著升高(均P<0.05)。经OXA处理后,过表达组的IC50显著低于空载体组和空白对照组(均P<0.05)。经Pearson相关法分析,miR-490-3p与Smad2的表达呈负相关(r=–0.943,P<0.01),miR-490-3p与TGF-β的表达呈正相关(r=0.961,P<0.01)。结论:过表达miRNA-490-3p可增加CRC SW480细胞的OXA敏感性,此作用Smad2/TGF-β信号通路有关。

miRNA-126-3p与先天性心脏病肺动脉高压发病机制相关性的临床研究

目的探讨miRNA-126-3p与肺动脉高压(以下简称肺高压)发病机制的相关性。方法选取25例先天性心脏病患者,其中,肺高压患者11例,对照组14例,采用qRT-PCR法检测其肺组织miRNA-126-3p的表达,并采用starBase进行靶基因预测,并从mRNA水平和蛋白水平进行验证。结果肺高压患者与对照组在年龄、性别、生化指标检查等方面比较差异无统计学意义(P>0.05);肺高压患者miRNA-126-3p表达水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);生物信息学预测发现miRNA-126-3p的生物学功能主要与结合蛋白、信号转导、细胞分化、调控细胞形态、调控MAPK和胰岛素受体信号通路等有关,其靶基因主要有VEGFA、SPRED1、PIK3R2等;肺高压组的VEGFA表达在mRNA水平和蛋白水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);miRNA-126-3p与VEGFA呈现正相关(P<0.01)。结论 miRNA-126-3p可能通过调控VEGFA参与先天性心脏病相关性肺动脉高压发病。