粪便SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化检测在大肠肿瘤筛查中的临床应用

目的评估检测大肠肿瘤患者粪便中SEPT-9和微RNA(miRNA)-34b/c基因甲基化对大肠肿瘤筛查的临床性能。方法采用病例对照研究方法,使用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法检测大肠肿瘤患者(大肠癌组35例、大肠腺瘤组47例)和正常对照人群(正常对照组52名)粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因是否存在甲基化,来评估其筛查大肠肿瘤的性能。结果大肠癌组SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率分别为68.6%、71.4%,大肠腺瘤组分别为57.4%、63.8%,正常对照组分别为9.6%、11.5%。3组的SEPT-9、miRNA-34b/c基因甲基化阳性率比较差异均有统计学意义(χ^(2)_(SEPT-9)=37.185,χ^(2)_(miRNA-34b/c)=40.040,P均<0.001),利用Bonferroni法进行两两比较,大肠癌组和大肠腺瘤组的甲基化阳性率比较差异无统计学意义,两者与正常对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.001)。3组联合检测SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率为88.6%、76.6%、13.5%,大肠癌组和大肠腺瘤组联合检测的甲基化阳性率均高于SEPT-9单基因检测和miRNA-34b/c单基因检测(P均<0.05)。结论检测粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化具有效好的大肠肿瘤筛查性能,或许可作为大规模人群筛查大肠肿瘤新的生物标志物组合;多基因甲基化联合检测筛查的性能优于单基因。

感音神经性耳聋患者外周血miR-34c、miR-29b的表达及意义

目的探讨感音神经性耳聋(SNHL)患者外周血miR-34c、miR-29b的表达情况及临床意义。方法筛选2020年6月至2023年6月我院收治的神经性耳聋患者140例为观察组,同期选取体检健康者40例为对照组。根据听力损伤情况将SNHL患者分为轻度耳聋组63例,中度耳聋组42例,重度耳聋组35例。采用qRT-PCR检测miR-34c、miR-29b的表达,并检测VEGF、氧化应激水平(TAC、SOD、MDA)、NO和Cx26;采用Pearson检验进行相关性分析,采用logistic回归分析SNHL病情严重程度的独立危险因素,采用ROC曲线评估miR-34c、miR-29b对SNHL患者病情严重程度的预测价值。结果4组NO、TAC、SOD、Cx26水平比较,重度耳聋组<中度耳聋组<轻度耳聋组<对照组(P<0.05);VEGF和MDA水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。4组miR-34c mRNA和miR-29b mRNA表达水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,SNHL患者外周血miR-34c、miR-29b与VEGF、MDA呈正相关,与NO、TAC、SOD、Cx26呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,VEGF、MDA、NO、Cx26、TAC、SOD、miR-34c、miR-29b是影响SNHL病情严重程度的独立因素。结论miR-34c、miR-29b在SNHL患者中过表达,可作为预测评估SNHL患者病情严重程度的血清标志物。

非小细胞肺癌组织miRNA-34b/c甲基化及预后相关性

目的探讨miRNA-34b/c在可手术的非小细胞肺癌组织中的甲基化及其与预后的相关性。方法回顾性分析中国医科大学附属盛京医院2009年12月-2015年12月期间行手术治疗的53例非小细胞肺癌患者的临床资料。采用定量RT-PCR检测上述病例肺癌标本中miRNA-34b/c的甲基化水平,应用Kaplan-Meier方法进行单因素生存曲线分析miRNA-34b/c甲基化水平与非小细胞肺癌生存的相关性,Log-rank法进行检验,采用Cox风险比例模型分析预后的独立影响因素。结果非小细胞肺癌miRNA-34b/c甲基化水平较高,生存分析显示miRNA-34b/c甲基化组生存期明显低于非甲基化组(P<0.01),Cox风险比例模型分析显示miRNA-34b/c甲基化可作为非小细胞肺癌患者预后的独立影响因素。结论非小细胞肺癌miRNA-34b/c甲基化水平高,miRNA-34b/c甲基化提示非小细胞肺癌患者预后不良。

血清人附睾蛋白4联合外泌体miRNA-200a/200b/200c用于糖链抗原125阴性卵巢上皮癌早期诊断的价值

目的研究血清人附睾蛋白4(human epididymal protein,HE4)联合外泌体中的微小RNA(miRNA)-200a/200b/200c用于糖链抗原125(sugar chain antigen,CA125)阴性卵巢上皮癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)早期诊断的价值。方法选取CA125阴性EOC患者120例作为研究对象,设为研究组;另选取同期收治的115例卵巢上皮良性肿瘤患者作为良性组,107例于武汉市第一医院体检的健康女性作为对照组。比较3组HE4、CA125、miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析各项血清指标鉴别CA125阴性EOC及卵巢上皮良性肿瘤的价值。结果研究组HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平显著高于良性组、对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经ROC分析证实,血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c能够用于CA125阴性EOC的诊断,且HE4+miRNA-200a/b/c联合诊断相对于单独及两两诊断可获得更高的曲线下面积,均有P<0.05。经logistic逐步回归分析证实,HE4≥163.110 pmol/L、miRNA-200a≥2.7002^(-△△CT)、miRNA-200b≥1.6652^(-△△CT)、miRNA-200c≥1.3952^(-△△CT)为CA125阴性EOC发生的危险因素(P<0.05)。结论血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c可用于CA125阴性EOC的早期诊断中,且四项指标联合诊断具有更高的敏感度与特异性,值得临床医师关注。

miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 选取151例肺癌患者,均进行手术切除治疗,取术后肺癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-138-5p、miRNA-34b水平。比较不同临床特征、不同预后肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平,肺癌患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估miRNA-138-5p、miRNA-34b单独及联合检测对肺癌患者预后的预测价值。结果 肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平均明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、分化程度为低分化的肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平分别明显低于肿瘤直径﹤2 cm、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、分化程度为中高分化的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。至随访结束,151例肺癌患者中,预后良好119例,预后不良32例。预后不良肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平均明显低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、分化程度为低分化、miRNA-138-5p水平降低、miRNA-34b水平降低均是肺癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-138-5p、miRNA-34b联合检测预测肺癌患者预后的AUC为0.951(95%CI:0.918~0.984),高于二者单独检测的0.603、0.572。结论 miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌组织中异常低表达,且与患者临床特征、预后密切相关,有望成为评估肺癌恶性程度及预后的重要分子标志物。

MALDI-TOF MS技术检测胃癌患者外周血中miR-34b/c甲基化及临床意义

目的探讨胃癌患者外周血中miR-34b/c启动子区甲基化状态及临床意义。方法采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionisation,time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术检测31例胃癌患者和24例正常人群外周血中miR-34b/c启动子区甲基化状态,筛选与胃癌发生相关的差异性甲基化CpG位点,并分析其与胃癌临床病理特征的相关性。14 C尿素呼气试验(UBT)检测胃癌患者HP感染状态,分析其与miR-34b/c甲基化的相关性。免疫组化EnVision两步法检测胃癌组织中MMR蛋白表达,分析其与miR-34b/c甲基化的相关性。结果胃癌中miR-34b/c整体甲基化水平高于正常对照组,其中3个CpG单位CpG_3.4、CpG_20、CpG_25在胃癌中的甲基化水平(13.61%、11.32%、15.32%)明显高于正常对照组(2.36%、0.41%、7.60%),差异有显著性(P<0.01)。进一步分析CpG位点与临床病理特征的关系,发现miR-34b/c CpG_3.4高甲基化与胃癌淋巴结转移相关(P<0.05),而miR-34b/c CpG_3.4、CpG_20、CpG_25高甲基化与患者年龄、性别、发病部位、分化程度、TNM分期无相关性(P>0.05)。31例胃癌患者HP感染阳性检出率为51.61%(16/31)。HP感染与miR-34b/c高甲基化无相关性(P>0.05)。31例胃癌患者中,错配修复基因缺失(deficient mismatch repair,dMMR)2例(6.45%),错配修复基因完整(proficient mismatch repair,pMMR)29例(93.55%)。MMR蛋白表达与miR-34b/c高甲基化无相关性(P>0.05)。结论miR-34b/c启动子区高甲基化改变可能在胃癌的发生、发展中发挥重要作用,并可作为胃癌诊断和预后预测的潜在生物学标志物。

河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌遗传易感性及预后的关系

目的:探讨河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌(CRC)遗传易感性及预后的关系。方法:收集180例CRC患者术前及180例体检健康者(对照)空腹静脉血,采用PCR-RFLP法分析mir-34b/c基因启动子区rs4938723多态性;采用Kaplan-Meier法针对不同基因型患者绘制生存曲线并进行log-rank检验,采用Cox回归模型分析rs4938723多态性与CRC预后的关系。结果:CRC组C等位基因频率高于对照组(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,TT基因型与TC+CC基因型患者生存曲线差异有统计学意义(P<0.05),TC+CC基因型患者生存状况差于TT型患者。Cox回归分析结果显示,与TT基因型比较,TC、CC基因型是CRC预后不良的危险因素,HR(95%CI)分别为1.284(1.035~1.593)、2.042(1.415~2.946)。结论:mir-34b/c基因rs4938723多态性与河南汉族人群CRC遗传易感性及预后关系密切。

miRNA-34a和miRNA-29b在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织标本中miRNA-34a和miRNA-29b基因的表达与临床特征及化疗疗效的相关性。方法将已确诊的80例NSCLC患者肿瘤肺组织作为试验组(并按病理类型及TNM分期分组),同期随机选择肺部为良性疾病肺组织100例作为对照组,通过实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测miRNA-34a和miRNA-29b基因表达水平,并回顾性分析miRNA-34a和miRNA-29b基因表达与化疗疗效情况。结果miRNA-34a在试验组的组织表达水平高于对照组(P<0.05);miRNA-29b在试验组的组织表达水平低于对照组(P<0.05);miRNA-34a在腺癌组与鳞癌组均明显高于其他型肺癌组(P<0.05),在腺癌组组中的表达高于鳞癌组(P<0.05),miRNA-29b在腺癌组与鳞癌组均明显低于其他型肺癌组,在腺癌组中的表达低于鳞癌组(P<0.05),miRNA-34a和miRNA-29b在肺癌组织分级、TNM分期及淋巴结转移呈密切相关性(P<0.05)。miRNA-34a高表达组患者化疗有效率显著低于低表达组患者(P<0.05);miRNA-29b低表达组患者化疗有效率显著低于高表达组患者(P<0.05)。NSCLC组织中miRNA-34a的表达和miRNA-29b的表达之间呈负相关(r=-0.79,P<0.01)。结论 miRNA-34a的基因表达在NSCLC中高表达,miRNA-29b的基因表达在NSCLC中低表达,它们表达水平有助于临床分期组、织学分级和淋巴结转移的判断,并且miRNA-34a低表达或者miRNA-29b高表达的患者化疗有效率高,是化疗受益的指标之一。

MDA-MSP技术检测粪便miR34b/c甲基化及其在结直肠癌早期诊断中的意义

目的:探讨粪便miR34b/c甲基化状态的检测在结直肠癌早期诊断中的意义.方法:从126例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、粪便和64例正常对照者的粪便中分别提取DNA,采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)技术对经过亚硫酸氢盐修饰样本进行全基因组扩增,结合甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测组织和粪便中miR34b/c基因甲基化状态.结果:结直肠癌癌组织miR34b/c基因的甲基化阳性率为95.2%(120/126),对应的癌旁正常组织为11.9%(15/126),两者比较有显著差异(P<0.01);miR34b/c甲基化状态与各临床病理参数无显著相关(P>0.05).结直肠癌粪便miR34b/c甲基化阳性率为90.2%(111/123),显著高于正常对照7.8%(5/64),差异有统计学意义(P<0.01).粪便DNAmiR34b/c用于结直肠癌早期诊断的敏感性为91.2%,特异性为92.2%.结论:miR34b/c甲基化是结直肠癌的重要分子特征,检测粪便miR34b/c甲基化有望成为结直肠癌早期诊断的一个全新的肿瘤标志物.MDA结合MSP为miRNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段.

血清miRNA-15b和miRNA-34a的检测对ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者化疗疗效的评估’

目的探讨血清miRNA-15b和miRNA-34a的检测对ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者化疗疗效的评估价值。方法收集2010年1月1日至2016年1月1日于本院化疗的201例ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者化疗前和化疗后血清，另收集20例健康人血清做对照。设计miRNA-15b和miRNA-34a上下游引物，提取血清中总RNA，采用RT—PCR方法检测血清中miRNA-15b和miRNA34a含量水平，记录每份样品检测CT值，分析其与每例患者的治疗疗效相关性。结果①经过2个疗程的化疗后，201例非小细胞癌患者中69例为PR，94例为SD，38例为PD。②健康对照组的血清中miRNA-15b和miRNA-34a的CT值分别为（35．50±2．51）、（36．00±2．00）观察组化疗前、后血清中miRNA-15bCT值分别为（28．43±4．81）、（31．85±7．00）；观察组化疗前、后血清中miRNA-34a的CT值分别为（30．43±5．12）、（32．00±6．28）；与健康对照组相比，观察组化疗前、后血清中miRNA-15b和miRNA-34a含量均处于高水平；差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。③与化疗前相比，PR组和PD组两组患者血清中miRNA-15b和miRNA-34aCT值有显著变化，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论血清中miRNA-15b和miRNA-34a的检测对ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者的化疗疗效及病情评估具有重要的临床参考价值。

miRNA-34a靶向调控叉头框蛋白P1对活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞凋亡的影响

目的探讨miRNA-34a靶向调控叉头框蛋白P1(FOXP1)对活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)细胞凋亡的影响。方法将miRNA-34a mimics转染至SU-DHL-2细胞并验证转染效率,检测miRNA-34a过表达对SU-DHL-2细胞增殖和凋亡的影响。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测SU-DHL-2细胞转染miRNA-34a mimics后FOXP1 mRNA和FOXP1蛋白表达水平的变化。通过双荧光素酶报告实验验证miRNA-34a和FOXP1的相互作用机制。验证FCXP1 siRNA转染至SU-DHL-2细胞的转染效率,通过CCK8法和流式细胞仪检测FOXP1基因沉默对SU-DHL-2细胞增殖及凋亡的影响。结果SU-DHL-2细胞转染miRNA-34a mimics和FOXP1 siRNA后均获得满意的转染效果。miRNA-34a过表达明显降低了SU-DHL-2细胞中FOXP1 mRNA和FOXP1蛋白的相对表达量。miRNA-34a对FOXP13’非翻译区(3’-UTR)具有直接调控作用。miRNA-34a过表达组和FOXP1基因沉默组细胞凋亡率均明显高于NC组细胞,差异均有统计学意义(P<0.01)。miRNA-34a过表达和FCXP1基因沉默对细胞增殖能力没有影响。结论miRNA-34a抑制ABC-DLBCL细胞的发生发展可能与miRNA-34a通过结合FOXP13’-UTR有效抑制FOXP1蛋白表达进而促进肿瘤细胞凋亡有关。

粪便miR34b/c基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的价值

目的:探讨粪便miR34b/c基因甲基化状态的检测在结直肠癌早期诊断中的意义。方法:从98例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、粪便、血中分别提取DNA,采用甲基化特异性PCR结合变性高效液相色谱法检测患者组织、粪便和血中miR34b/c基因甲基化状态。结果:结直肠癌癌组织miR34b/c基因的甲基化阳性率为91.8%(90/98例),对应的癌旁正常组织为4.08%(4/98例),两者比较差异有统计学意义(P=0.000 1)。用癌组织、粪便、血标本miR34b/c基因甲基化诊断结直肠癌的敏感度、特异度分别为:组织91.8%(90/98例)和95.9%(94/98例);粪便88.8%(87/98例)和91.7%(66/72例);血83.7%(82/98例)和87.5%(63/72例)。结直肠癌患者粪便miR34b/c基因甲基化检测结果与癌组织检测结果大致相同。结论:miR34b/c甲基化是结直肠癌的重要分子生物学特征,粪便miR34b/c基因甲基化的敏感性和特异性较高,粪便miR34b/c甲基化异常可作为结直肠癌早期诊断的肿瘤标志物。

MicroRNA-34b/c rs4938723 T>C多态性与中国汉族人群肾细胞癌易感性的相关性

目的：研究中国汉族人群microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）多态性与肾细胞癌易感性之间的关系。方法采用病例对照研究模式，通过TaqMan探针PCR法检测年龄和性别匹配的710例中国汉族人群肾细胞癌患者和760例正常人群的microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）基因型，探讨该位点基因多态性与肾细胞癌易感性之间的关系。结果与 TT／TC基因型携带者相比，CC型（OR＝1．53，95％ CI＝1．06～2．21，CC基因型比TT基因型；OR＝1．48，95％ CI＝1．05～2．10，CC基因型比T T／TC基因型）携带者发生肾细胞癌的危险性明显升高。分层分析显示携带CC基因型的老年患者（OR＝1．80，95％CI＝1．08～3．01）、男性患者（OR＝1．64，95％ CI＝1．08～2．51）、吸烟患者（OR＝2．07，95％ CI＝1．16～3．69）及饮酒患者（OR＝1．94，95％ CI＝1．01～3．73）发生肾细胞癌的危险性明显升高。结论 microRNA‐34b／c启动子区T＞C（rs4938723）基因多态性与我国汉族人群肾细胞癌易感性有关，CC型携带者发生肾细胞癌的危险性要明显高于T T／TC型携带者。

miRNA-34c实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立稳定有效检测miR-34c的实时荧光定量技术体系,采用茎环结构法设计了反转录引物,并通过梯度浓度及梯度温度PCR法对miR-34c的最佳退火延伸温度和模板浓度进行了确定,最后通过实时荧光定量PCR对miR-34c进行检测。试验成功建立了精确检测miR-34c的实时荧光定量技术体系,其中miR-34c最佳退火延伸温度为62.4℃及每个实时定量反应体系中cDNA对应的RNA量最适浓度为50ng/μL,并得到重复性高、特异性强的检测结果。该技术体系的建立不仅为检测miR-34c提供了精准便捷的方法,而且可为设计检测其他miRNA提供技术支持。

肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及意义

目的探讨肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及其意义。方法将30例肾透明细胞癌手术患者的肾癌组织和癌旁正常组织标本按是否有淋巴结转移分为2组:A组15例为无淋巴结和(或)远处转移,B组15例为有淋巴结和(或)远处转移。提取各标本中的DNA,经甲基化处理后,用PCR的方法检测miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在2组肾癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。结果电泳结果显示,miRNA-34a和miR-34b/c基因成单一条带,其所处的位置及其在正常组织和癌组织中的甲基化情况符合前期的预计。miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态如下:A组肾癌组织中miR-34a 4例,占26.7%,miR-34b/c 15例,占100.0%,癌旁正常组织均为0;B组肾癌组织中miR-34a 13例,占86.7%,miR-34b/c 15例,占100.0%,癌旁正常组织均为0。miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高;伴有淋巴结转移的肾癌组织中,miR-34a基因CpG岛甲基化明显高于无淋巴结转移的肾癌组织(86.7%比26.7%,P<0.05)。结论 miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高,提示其与肾透明细胞癌的发生与进展有关,尤其是miR-34a基因CpG岛高甲基化与肾透明细胞癌的转移可能存在密切联系,有望成为指导肾透明细胞癌诊断、治疗及判断预后的新靶点。

MicroRNA-34b/c rs4938723位点单核苷酸多态性与男性不育的相关性研究

目的:探讨MicroRNA-34b/c单核苷酸多态性位点rs4938723与男性不育疾病风险的相关性。方法:应用病例-对照研究的方法,选取就诊于东部战区总医院的553例特发性男性不育患者,年龄19~40(29.42±5.09)岁,作为病例组,并按前向运动精子百分率和精子浓度分为无精子症组(n=153)、少弱精子症组(n=400)2个亚组;以332例正常生育的男性,年龄19~40(28.54±4.63)岁,作为对照组,收集病例组和对照组临床资料及外周血。用Sequenom Mass Array技术对MicroRNA-34b/c rs4938723位点进行基因分型,用Logistic回归模型分析MicroRNA-34b/c rs4938723位点不同基因型分型与男性不育发病风险之间的关系。结果:病例组与对照组在精子浓度[(18.71±15.19)×106/ml vs(79.91±43.96)×106/m1]、前向运动精子百分率[(13.27±24.52)%vs(42.82±8.86)%]和卵泡刺激素[(16.09±17.37)IU/L vs(12.20±4.73)IU/L]存在显著差异(P<0.01)。与TT基因型比较,基因型TC与基因型CC均显示与男性不育无相关性;亚组分析中也均显示该基因位点与男性不育不存在相关性。结论:我们没有发现MicroRNA-34b/c rs4938723位点多态性与男性不育的相关性,但还需要通过扩大样本进行验证。

早期食管癌患者外周血微小RNA-15b和微小RNA-34c的表达水平及其临床意义

目的探讨早期食管癌患者外周血中微小RNA(miRNA)-15b和miRNA-34c表达水平及其临床意义。方法纳入113例早期食管癌患者(食管癌组)及113例健康者(对照组)。检测两组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平。分析miRAN-15b和miRAN-34c与早期食管癌发生及临床病理特征关系,并评估两者对早期食管癌诊断价值。结果食管癌组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平均低于对照组(均P<0.05)。低分化早期食管癌患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于高、中分化患者(均P<0.05),TNM分期Ⅱ期患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于TNM分期Ⅰ期患者(均P<0.05)。miRNA-15b相对表达水平≤0.78、miRNA-34c相对表达水平≤0.69是早期食管癌发生的危险因素(均P<0.05)。外周血血清miRNA-15b相对表达水平与miRNA-34c相对表达水平联合预测早期食管癌的曲线下面积为0.949(P<0.001),敏感度为93.00%,特异度为81.80%,均高于单一指标。结论早期食管癌患者血清中miRNA-15b与miRNA-34c均低表达,这可能与食管癌发生与发展有关。两者联合诊断早期食管癌价值较高。

bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c靶基因预测及生物信息学分析

【目的】试验旨在对bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c的序列保守性、转录因子和靶基因进行生物信息学预测和分析,探究其影响精子发生的作用机制,为研究其生物学功能及作用机制提供指导和思路。【方法】利用miRBase数据库获取不同物种的bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c序列并进行相似性分析;通过TargetScan、miRWalk、miRDB等方法预测bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c的靶基因,对获得的靶基因集合分别进行GO功能和KEGG通路富集分析;通过AnimalTFDB获取共同调控bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c的转录因子,并构建TF-miRNA-mRNA作用网络。【结果】bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c在不同物种间高度保守。预测得到2个转录因子和49个候选靶基因,这些靶基因主要富集在精子发生、钙离子依赖性胞吐的调节、胰岛素分泌的调节等GO条目,以及HIF-1信号通路、甲状腺激素信号通路、Wnt信号通路等KEGG通路。bta-miR-34b/c、bta-miR-449a/b/c与上游转录因子NR2C2和HIC1,下游靶基因AXL、E2F3、DAAM1等共同构成的作用网络通过调控减数分裂、细胞周期、细胞凋亡、精子细胞能量代谢等生物过程影响精子发生。【结论】bta-miR-34b/c、bta-miR-449a/b/c通过上游转录因子和下游靶基因组成的分子调控网络共同调节精子发生过程。

miRNA-125b、miRNA-34a在不同分型鼻息肉中的表达与相关性分析

目的探讨miRNA-125b、miRNA-34a水平在不同分型鼻息肉中的表达与相关性。方法选取2020年3月至2021年3月收治的初发鼻息肉及复发鼻息肉患者51例,正常对照20例。鼻息肉患者收集患者切除的鼻息肉组织,对照组收集鼻黏膜组织作为试验材料,共收集标本71份;采用全血细胞自动分析仪进行(嗜酸性粒细胞,EOS)水平检测,当EOS比例>5.0%时记录为阳性(+);采用荧光定量PCR检测miRN-125b和miRN-34a的表达在鼻黏膜组织及息肉组织中的表达,通过列联系数法分析miRNA-125b、miRNA-34a水平与不同分型鼻息肉相关性。结果正常组织、初发鼻息肉组织、复发鼻息肉组织中EOS的阳性率分别为10.00%、70.37%、83.33%,不同类型鼻息肉组织与正常鼻黏膜组织中EOS阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);初发组、复发组标本组织中miRNA-125b平均水平约为正常标本组织的4倍,miRNA-34a的平均表达水平分别接近正常标本组织2倍,各组间miRNA-125b水平存在显著差异(P<0.05),miRNA-34a的水平也存在显著差异(P<0.05);EOS与miRNA-125b的相关系数为0.375,与miRNA-34a的相关系数为0.283。结论miRNA-125b、miRNA-34a水平与EOS水平及鼻息肉的发病存在密切相关性,此相关性对鼻息肉靶向治疗及预后具有重要意义。

宫颈癌组织中miRNA-34c的表达水平分析及其靶基因PLK4的鉴定

目的:分析miRNA-34c在宫颈癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法:利用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测甘肃省妇幼保健医院34例宫颈癌和癌旁正常组织中miRNA-34c表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miRNA-34c新的靶基因Polo样激酶4(PLK4)。将含有PLK4的3‘UTR片段荧光素酶载体分别与miRNA-34c模拟物或阴性对照共转染HEK293T细胞,并检测其荧光素酶活性。在人宫颈癌细胞Si Ha细胞中分别转染miRNA-34c模拟物或阴性对照,利用q RT-PCR法和Western blot法分别检测靶基因的m RNA和蛋白质的表达水平。结果:与癌旁正常组织相比,miRNA-34c在宫颈癌组织中表达下调。在HEK293T细胞中,miRNA-34c模拟物显著抑制荧光素酶的活性(P<0.01)。miRNA-34c模拟物显著下调Si Ha细胞中PLK4的m RNA和蛋白质的表达(P<0.01)。结论:miRNA-34c在人宫颈癌组织中表达下调,且能与PLK4的3’UTR结合并下调其m RNA和蛋白质的表达。