miRNA-373在非小细胞型肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨非小细胞型肺癌石蜡包埋组织中miR-373的表达与临床病理因素之间的关系,及其在预测非小细胞型肺癌患者预后中的作用.方法:用微阵列芯片法和qRT-PCR检测非小细胞型肺癌石蜡包埋组织和癌旁组织中的miR-373表达.采用Kaplan-Meier法分析非小细胞型肺癌患者总生存期和无病生存期.结果:在原发非小细胞型肺癌中miR-373的表达下调,并用qRT-PCR进一步验证.另外,miR-373低表达与病理组织类型、分化程度、淋巴结转移、临床分期、血管浸润、复发时间和生存时间(OS)(P<0.05)显著性相关.Kaplan-Meier分析结果表明,miR-373低表达与高表达患者OS和无病生存期(DFS)(P<0.05)有显著性差异,miR-373低表达患者预后较差.多因素分析显示非小细胞型肺癌中miR-373的表达水平是预测OS和DFS(P<0.05)的独立危险因素.结论:miR-373的表达与非小细胞型肺癌患者预后显著相关,miR-373可作为预测非小细胞型肺癌患者预后的独立标志物.

miRNA-373在MDA-MB-231乳腺癌细胞中的表达及对生物学行为的影响研究

目的探讨miRNA-373对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭等生物学行为的影响及其机制。方法采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测MDA-MB-231、MDA-MB-435、MCF-7、ZR-75-1乳腺癌细胞株中miRNA-373的表达情况;MDA-MB-231细胞株中分别转染miRNA-373(NC组)和miRNA-373mimics(miRNA-373mimics组),采用CCK-8实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞增殖和侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达情况。结果MDA-MB-231乳腺癌细胞中miRNA-373的表达量相对MDA-MB-435、MCF-7、ZR-75-1细胞较低。miRNA-373mimics组乳腺癌细胞中miRNA-373、p-AKT表达量均高于NC组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。CCK8实验检测结果显示,细胞在转染24、48、72h时,NC组和miRNA-373mimics组细胞的吸光度值比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。流式细胞仪检测NC组和miRNA-373mimics组细胞的凋亡情况,两组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。转染24、48h时,NC组细胞迁移距离分别短于miRNA-373mimics组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论miRNA-373可诱导乳腺癌细胞侵袭及迁移,其机制可能是通过增强AKT信号通路的磷酸化水平来促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

miRNA-373在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨miRNA-373在乳腺癌组织、乳腺纤维腺瘤组织及正常乳腺组织中的表达差异,分析其表达水平与患者临床病理特征的相关性及意义。方法选取2014年4-9月该院手术收集的乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺纤维腺瘤组织标本各20例。Trizol法分别提取总RNA,特异性茎环法逆转录为cDNA。并运用实时荧光定量PCR法检测miRNA-373在上述3种组织中的表达情况,并进行临床病理特征的相关性分析。结果 miRNA-373在乳腺癌中的表达量(2.68±2.49)明显高于乳腺纤维腺瘤组织(1.11±0.93)和正常乳腺组织(1.07±0.80),差异有统计学意义(P<0.05);乳腺纤维腺瘤与正常乳腺组织比较,差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌组织中miRNA-373的高表达与患者肿块大小、腋窝淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者年龄、TNM分期无关(P>0.05)。结论 miRNA-373在乳腺癌中表达上调,miRNA-373表达与乳腺癌患者肿块大小、腋窝淋巴结转移有关,可能发挥类似促癌基因的作用。miRNA-373可作为乳腺癌诊断、治疗方案及预后判断的生物学标记。

血浆miRNA-372/373在正常献血者和HBV早期感染献血者中的表达差异

目的:研究miRNA-372/373与HBV早期感染的相关性,分析其在HBV早期感染诊断中的潜在应用价值。方法:收集来源于2013年3月至9月天津市内无偿献血者所献血液的血浆标本留样,共54份,分为正常组、酶免单阳组(E单阳组)和酶免核酸双阳组(EN双阳组)。提取此3组共54份血浆标本中的mi RNA-372和miRNA-373,用实时荧光定量PCR方法进行检测。分别比较mi RNA-372和mi RNA-373在3组血浆标本之间的表达差异,并对各组间的mi RNA表达趋势进行统计学分析;同时,对miRNA-372、miRNA-373的相对表达水平分别与核酸检测HBV核酸阳性血浆标本中的HBV DNA拷贝数进行相关性分析。结果:经实时荧光定量PCR检测,与正常献血者相比,miRNA-372、miRNA-373在E单阳组和EN双阳组中均表达上调,其中,mi RNA-372、mi RNA-373在EN双阳组中表达上调更为显著。进一步分析发现,在EN双阳组中,mi RNA-372、miRNA-373均与相应的HBV DNA拷贝数呈正相关性,且与mi RNA-372相比,mi RNA-373与相应的HBV DNA拷贝数的正相关性更为明显。结论:miRNA-372、miRNA-373与HBV早期感染密切相关,提示miRNA-372、miRNA-373在HBV感染的早期诊断中具有潜在价值。

miR-373-3p低表达慢病毒载体构建及其对子宫内膜癌细胞增殖迁移的抑制作用

目的构建人miR-373-3p低表达慢病毒载体,探讨miR-373-3p低表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖和迁移能力的影响。方法利用PCR扩增包含miR-373-3p前体序列的目的基因,经酶切后克隆入慢病毒载体GV280中构建GV280-pre-miR-373-3p inhibitor表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞,进行慢病毒的包装和滴度测定。分别用空载慢病毒(空载病毒组)及重组慢病毒miR-373-3p(miR-373-3p组)感染HEC-1A细胞,并设立空白对照组。采用RT-PCR法检测细胞miR-373-3p mRNA的相对表达水平,CCK-8法检测培养24、48、72、96 h时细胞增殖活力,细胞划痕和Transwell小室试验检测培养24、48 h时细胞迁移能力。结果成功构建了人miR-373-3p低表达慢病毒载体。与空白对照组和空载病毒组比较,miR-373-3p组miR-373-3p相对表达量低,培养48、72、96h HEC-1A细胞增殖活力均降低(P均<0.05),24、48 h HEC-1A细胞划痕面积迁移率低,24 h穿膜细胞数少(P均<0.05)。空载病毒组及空白对照组各指标比较,P均>0.05。结论成功构建了人miR-373-3p低表达慢病毒载体,miR-373-3p低表达可抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖、迁移能力。

微小RNA-373靶向调控LATS2的表达及其对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

目的探讨微小RNA-373(miR-373)靶向调控大肿瘤抑制因子2(LATS2)的表达及其对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测HepG2细胞及正常肝细胞LO2中miR-373的表达水平,采用Lipofectamine脂质体法将miR-373抑制剂及阴性对照转染至HepG2细胞并分为抑制剂组和对照组,采用QPCR法检测两组的miR-373水平以评价转染效果,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖及凋亡情况,Western blotting检测各组凋亡相关基因(Bax和caspase-3)及LATS2的表达情况,采用双荧光素酶报告实验验证miR-373与LATS2间的靶标关系。结果与LO2细胞相比,HepG2细胞中miR-373的表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);转染后抑制剂组的miR-373水平低于对照组(P<0.05),提示抑制HepG2细胞miR-373表达成功;与对照组比较,抑制组的细胞增殖率降低,凋亡率及Bax、caspase-3和LATS2蛋白水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-373可显著抑制野生型LATS2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性,而对突变型LATS2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-373可靶向调控LATS2的表达,且抑制miR-373表达可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,为肝癌的靶向治疗提供一定参考。

miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化

背景:肝星状细胞活化分泌大量胶原是肝纤维化进展的主要因素,miRNA在肝星状细胞活化、凋亡等方面发挥着重要作用,miR-373调控肝星状细胞胶原分泌的作用及机制尚不清楚。目的:探讨miR-373靶向调控转化生长因子βⅡ型受体在肝星状细胞胶原分泌中的作用。方法:(1)建立Bal b/c小鼠肝纤维化模型,Masson法测定肝组织胶原,采集小鼠血清样本,提取血清总RNA,qRT-PCR定量分析小鼠mmu-miR-291a-3p(人hsa-miR-373-3p的同源序列)水平。免疫组化检测肝组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA表达;(2)TargetScan软件预测miR-373的靶基因转化生长因子βⅡ型受体,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-373调控转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性;(3)用25,50 nmol/L miR-373 mimics转染人肝星状细胞(LX-2)过表达miR-373,并以转染随机miRNA序列做对照,采用Western blot和免疫荧光检测转化生长因子βⅡ型受体和成纤维细胞激活蛋白的蛋白表达。实验方案经江苏大学实验动物伦理委员会批准(批准号为UJS-IACUCAP-2020033127)。结果与结论:(1)健康对照组相比,肝纤维化组小鼠血清mmu-miR-291a-3p水平明显降低(P <0.001),肝组织胶原合成显著增加;(2)肝纤维化组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA共表达显著增加;(3)miR-373显著抑制了转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性(P <0.01),miR-373过表达显著抑制LX-2的转化生长因子βⅡ型受体(P <0.05)和成纤维细胞激活蛋白(P <0.01)的蛋白表达;(4)结果说明,miR-373通过调控转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化和肝组织胶原沉积。