miRNA-411对乳癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨微小RNA-411(miRNA-411)对人乳癌细胞株MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR方法检测高转移性乳癌细胞MDA-MB-231与低转移性乳癌细胞MCF-7中miRNA-411的表达。采用LipofectamineTM2000将miRNA-411成熟子(Mimic)转染至MDA-MB-231细胞中,通过采用实时定量PCR方法检测miRNA-411 Mimic的转染效率,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,免疫蛋白印迹法检测E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,MTT实验检测MDA-MB-231细胞的增殖能力。结果 miRNA-411在MDA-MB-231细胞中的表达水平显著低于MCF-7细胞(t=7.45,P<0.01)。miRNA-411Mimic瞬时转染MDA-MB-231细胞后,其迁移和侵袭能力均受到明显的抑制(t=7.24、6.62,P<0.01),而且经转染的细胞E-cadherin表达升高,而Vimentin表达下降。然而,miRNA-411Mimic对MDA-MB-231细胞增殖能力无明显影响(P>0.05)。结论 miRNA-411在高转移性乳癌细胞中低表达,转染miRNA-411 Mimic后乳癌细胞MDAMB-231迁移和侵袭能力明显减弱,其迁移和侵袭能力的下降并非通过降低MDA-MB-231细胞的增殖能力所致,而是可能通过逆转MDA-MB-231细胞的上皮-间质转化过程实现的。

MicroRNA-411a-3p过表达抑制Ca2+信号转导与羊驼黑色素细胞的增殖和迁移（英文）

黑色素细胞中产生的黑色素转移及黑色素细胞的增殖和迁移均与色素沉积有关。黑色素细胞的增殖需要有丝分裂原协同进行。黑色素细胞的增殖和分化受组织环境以及多种毛色基因的调控。miRNA-411a-3p在不同毛色羊驼皮肤中呈差异表达,且通过靶向IGF1R调控黑色素生成。但miRNA-411a-3p是否与黑色素颗粒迁移、黑色素细胞的增殖和迁移相关未见报道。本研究通过miRNA-411a-3p转染羊驼黑色素细胞后发现,与对照组相比,钙离子信号转导水平下降了(91.73±1.53)%(P<0.01),与黑色素转移有关的Rab27a和肌球蛋白Va在蛋白质水平的表达均被下调,同时与细胞增殖有关的整联蛋白β1和β5相关基因在转录水平分别下降了(44.67±13.67)%(P<0.01)和(30.72±6.23)%(P<0.01),在蛋白质水平表达下降了(45.18±1.96)%(P<0.001)和(11.52±1.09)%(P<0.001)。综上所述,miRNA-411a-3p过表达后会抑制钙离子信号转导,以及羊驼黑色素细胞的增殖和迁移。

Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞作用功能及相关分子机制的研究

目的:研究Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞功能作用及分子机制。方法:MTT检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS增殖的影响;流式细胞术检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS周期和凋亡的影响;RNAhybrid2.1.2、Miranda3.3a、TargetScan7.0预测Hsa-miR-411-3P靶基因,与m RNA测序结果联合分析,取交集基因认为是比较可靠的靶基因,进行GO、KEGG分析;Real-time PCR检测Hsa-miR-411-3P靶基因VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1的表达。结果:过表达Hsa-miR-411-3P抑制SGC-7901、AGS细胞增殖,促进凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞在S期,AGS细胞周期阻滞在G1期;软件预测和测序结果联合分析获得235个交集靶基因;Hsami R-411-3P靶基因分子功能集中在酶结合、蛋白质结合、转移酶活性等;生物学过程集中在代谢过程、细胞组件组装、解剖结构发展、细胞成分生物发生等(P<0.05);KEGG信号通路集中在胰岛素信号通路、cAMP信号通路、AMPK信号通路、FOXO信号通路等(P<0.05);VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1共同参与cAMP信号通路;过表达Hsa-miR-411-3P的SGC-7901、AGS细胞中,VAV3、ROCK2 m RNA表达量均减少,PLD1 m RNA表达量在SGC-7901细胞中增加,在AGS细胞中减少;PTCH1 m RNA表达量在SGC-7901细胞中减少,在AGS细胞中增加。结论:过表达Hsa-miR-411-3P将下调靶基因VAV3、ROCK2的表达,从而影响cAMP信号通路,抑制SGC-7901、AGS细胞增殖,促进凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞在S期,AGS细胞周期阻滞在G1期。

长链非编码RNA DHRS4-AS1与骨肉瘤患者无病生存的关系及其体外对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DHRS4-AS1与骨肉瘤患者无病生存的关系及其体外对骨肉瘤细胞增殖和迁移影响的机制。方法收集GEPIA数据库建库以来骨肉瘤患者DHRS4-AS1转录组水平和生存情况数据,依据DHRS4-AS1转录组中位水平将患者分为DHRS4-AS1高表达组和低表达组,各59例,采用Kaplan-Meier法分析两组无病生存情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测DHRS4-AS1在骨肉瘤细胞株MG-63、HOS、143B、U-2OS、Saos2及正常成骨细胞株hFOB1.19中的表达,选择DHRS4-AS1表达水平最低的骨肉瘤细胞株进行后续实验。将载有DHRS4-AS1序列的质粒和载有阴性对照序列的质粒分别转染至选取的骨肉瘤细胞中,分别为DHRS4-AS1组和对照组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,以吸光度值为细胞增殖能力;细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况。采用生物信息学网站starBase V2.0预测DHRS4-AS1的靶基因,双荧光素酶报告基因法验证DHRS4-AS1与靶基因的靶向关系。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测对照组和DHRS4-AS1组骨肉瘤细胞靶基因及下游基因表达水平。结果生存分析显示,GEPIA数据库中DHRS4-AS1高表达组骨肉瘤患者无病生存优于DHRS4-AS1低表达组(P<0.001)。与正常成骨细胞hFOB1.19细胞相比,各骨肉瘤细胞中DHRS4-AS1的表达水平均低(均P<0.01),其中U-2OS细胞中DHRS4-AS1的表达水平最低(P<0.001)。DHRS4-AS1组U-2OS细胞培养1、2、3、4 d后细胞增殖能力均较对照组降低(均P<0.05)。DHRS4-AS1组U-2OS细胞迁移率低于对照组[(31±6)%比(63±4)%,t=4.38,P=0.005]。starBase V2.0网站预测DHRS4-AS1与miRNA-411-3p(miR-411-3p)互补结合;双荧光素酶报告基因实验显示,miR-411-3p过表达降低了野生型DHRS4-AS1报告基因的荧光素酶活性(P<0.001),但对突变型DHRS4-AS1报告基因荧光素酶活性无影响(P>0.05)。qRT-PCR检测显示,与对照组相比,DHRS4-AS1组U-2OS细胞miR-411-3p相对表达量低(0.22±0.06比1.06±0.23,t=3.55,P=0.012),转移抑制因子MTSS1 mRNA相对表达量高(5.58±1.03比1.06±0.22,t=4.28,P=0.005);蛋白质印迹法检测显示,MTSS1表达升高,细胞增殖表型蛋白CDK3、cyclin C和细胞迁移表型蛋白ZEB2、KLF8表达水平均低。结论lncRNA DHRS4-AS1高表达骨肉瘤患者无病生存较好,其在骨肉瘤细胞株中低表达。DHRS4-AS1可能通过靶向下调骨肉瘤细胞miR-411-3p的表达,促进MTSS1基因表达,抑制细胞增殖和迁移。