miRNA-491调节胶质母细胞瘤细胞凋亡和上皮间质转化的研究

目的研究miRNA-491(miR-491)对胶质母细胞瘤细胞上皮间质转化和凋亡的调控作用和机制。方法收集新鲜胶质瘤(glioblastoma multiforme,GBM)13例和对应的癌旁组织(nontumorous tissues,NT)13例。体外培养神经胶质细胞(normal human astrocytes,NHA)和神经胶质母细胞瘤细胞U-87 MG和U-118 MG。将U-118MG细胞分为无处理组(control)、miR-491的拟似物转染组(mimic)、mimic阴性对照组(mimic-NC)和mimic联合表达αB-crystallin组(mimic+αB-crystallin)。CCK-8法评估细胞增殖,RT-qPCR和或Western blot检测miR-491、αB-crystallin、Twist1、E-cadherin、N-cadherin、Bax、Bcl-2的表达。荧光素酶报告基因验证miR-491和αB-crystallin基因3′UTR区的结合。结果GBM组织与NT组织比较,U-87 MG和U-118 MG分别与NHA比较,miR-491显著降低(P<0.05)。与control组比较,mimic组αB-crystallin、N-cadherin、Twist1的表达水平下调,细胞凋亡率上调(P<0.05),E-cadherin的水平上调(P<0.05)。荧光素酶报告结果证实miR-491与αB-crystallin基因3′UTR区的结合。mimic+αB-crystallin组部分逆转mimic对于凋亡标记物和上皮间质转化标记物的表达(P<0.05)。结论miR-491抑制胶质母细胞瘤细胞的上皮间质转化且促进细胞凋亡,miR-491负调控αB-crystallin是其关键分子机制之一。

MiRNA-491-5p慢病毒过表达载体构建及其稳定表达细胞株的筛选

目的:构建miRNA-491-5p慢病毒过表达载体,筛选miRNA-491-5p稳定表达细胞株。方法 :构建PCDH-511B-miRNA-491-5p载体,转染HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR检测miRNA-491-5p的含量。结果:实时荧光定量PCR检测显示转染慢病毒载体组miRNA-491-59表达水平是对照载体组的1 000倍,证明目的基因已在转染细胞中成功表达。结论:成功构建了miRNA-491-5p慢病毒过表达载体和筛选出了miRNA-491-5p稳定表达细胞株。

microRNA-491-5p血浆水平及其靶基因多态性与早发冠心病易感性的研究

目的通过病例对照研究,探讨陕西省汉族人群血浆miRNA-491-5p水平和miRNA-491-5p(has-miR-491-5p)靶基因基质金属蛋白酶-9(MMP-9)单核苷酸多态性(SNP)改变与早发冠心病(pCAD)发生风险及预后的关系。方法连续收集pCAD病例270例,对照组300例。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测has-miR-491-5p靶基因MMP-9rs1056628的多态性,同时比较各种基因型与pCAD发生的相关性。结果 rs1056628位点存在A-C多态性,与CC基因型(发生率42%)相比,携带CA、AA基因型的个体冠心病的发生率为31%,差异有统计学意义(P=0.045);携带CA/AA基因型冠心病在低水平总胆固醇(TC)、较低水平的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)人群中的患病风险降低更为显著。结论 has-miRNA-491-5p靶基因MMP-9rs1056628C-A多态性改变可降低pCAD的发生率,携带C等位基因是pCAD发病的独立危险因素。