补肾活血方通过调控circ_0036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响

目的探究补肾活血方可能通过调控circ_0036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常及椎间盘退变(IDD)髓核细胞中circ_0036763、miR-583表达水平;将IDD髓核细胞分为pcDNA组、pcDNA circ_0036763组、pcDNA circ_0036763+mimic NC组、pcDNA circ_0036763+miR-583 mimic组,采用qRT-PCR检测各组髓核细胞circ_0036763、miR-583表达水平,MTT检测细胞增殖(A值),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测髓核细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、collagen Ⅰ、collagen Ⅱ蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证circ_0036763与miR-583靶向关系。将27只小鼠分为假手术组、IDD组、补肾活血方组,除假手术组外均建立IDD模型。建模成功后,假手术组、IDD灌胃生理盐水,补肾活血方组灌胃1.5 g/ml补肾活血方,连续灌胃3周。采用qRT-PCR检测各组小鼠髓核细胞circ_0036763、miR-583表达水平,MTT检测细胞增殖,Western blot检测PCNA、collagen Ⅰ、collagen Ⅱ蛋白表达。结果IDD髓核细胞中circ_0036763表达水平降低,miR-583表达水平升高(均P<0.05);过表达circ_0036763可促进髓核细胞增殖和胞外基质合成(均P<0.05);circ_0036763靶向调控miR-583,上调miR-583可逆转过表达circ_0036763对IDD髓核细胞增殖和胞外基质合成能力。与假手术组相比,IDD组collagen Ⅰ蛋白表达、miR-583表达水平增加(均P<0.05),细胞A值、PCNA及collagen Ⅱ蛋白表达、circ_0036763表达水平降低(均P<0.05);与IDD组相比,补肾活血方组collagen Ⅰ蛋白表达、miR-583表达水平降低(均P<0.05),细胞A值、PCNA及collagenⅡ蛋白表达、circ_0036763表达水增加(均P<0.05)。结论补肾活血方可能通过调控circ_0036763/miR-583轴诱导髓核细胞增殖和胞外基质合成。