miRNA-630在鼻咽癌中的表达情况及与不良预后的相关性分析

目的探讨微小RNA(miRNA)-630在鼻咽癌中的表达情况及与鼻咽癌患者预后的相关性。方法从NCBI-GEO网站中下载了GSE70970、GSE43329和GSE12452共3个独立的鼻咽癌芯片数据,使用Graphpad prism 7对miRNA-630的表达差异进行统计分析;对miRNA-630的表达进行了受试者工作特征曲线(ROC)和Kaplan-Meier生存曲线分析。采用SPSS22.0对miRNA-630表达量、肿瘤病理(T)和淋巴结转移(N)指标建立了单因素和多因素COX风险比例模型。采用RT-qPCR检测鼻咽癌组织和正常组织标本中miRNA-630的表达情况。培养CEN2细胞,分为3组,分别仅加入磷酸盐缓冲液(对照组)、转染空载(空载组)和miRNA-630(miRNA-630组),采用MTT法测定细胞生长情况。最后,预测并验证miRNA-630在鼻咽癌中致癌的机制。结果miRNA-630在鼻咽癌组织中的表达量明显高于正常组织(P<0.05)。转染miRNA-630载体48、72、96h后,miRNA-630组细胞水平明显高于对照组和空载组(P<0.05)。miRNA-630组的CNE2细胞中TP53INP2基因和蛋白表达水平明显低于对照组和空载组(P<0.05)。结论miRNA-630在鼻咽癌中高表达,与不良预后相关,miRNA-630的高表达可促进鼻咽癌细胞的增殖,可作为鼻咽癌预后的独立预测因子;其作用机制可能与靶向抑制TP53INP2有关。

miR-630在胃癌组织中的表达变化及对胃癌细胞SGC-7901增殖、侵袭能力的影响

目的观察miR-630在胃癌组织中的表达变化,及miR-630对胃癌细胞株SGC-7901增殖、侵袭能力的影响。方法收集131例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常胃组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-630。培养SGC-7901细胞,分为实验组、空载组和对照组,实验组转染miR-630,空载组转染空质粒,对照组仅加入PBS;分别于培养12、24、48、72 h后采用MTT法检测细胞增殖能力;培养24 h后以Transwell小室检测细胞侵袭能力;培养24 h后,采用Western blotting法检测细胞中的p27、MMP-2、MMP-9蛋白。结果胃癌组织、癌旁组织中miR-630的相对表达量分别为1.93±0.41、2.74±0.48,胃癌组织中miR-630相对表达量低于癌旁组织(P均<0.05)。肿瘤直径≥5 cm者胃癌组织中miR-630相对表达量低于直径<5 cm者,有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者,浸润深度为T2~T4级者低于T1级者,Ⅲ~Ⅳ期者低于Ⅰ~Ⅱ期者(P均<0.05)。转染24、48、72 h后,实验组细胞增殖能力均低于转染同时点的空载组和对照组(P均<0.01)。实验组、空载组、对照组穿膜细胞数分别为15.4±2.7、24.3±23.1、29.7±19.4,实验组穿膜细胞数少于对照组和空载组(P均<0.01)。实验组细胞中p27蛋白相对表达量高于空载组和对照组,MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量低于空载组和对照组(P均<0.01)。结论胃癌组织中miR-630表达减少,mir-630低表达可能与胃癌的发生发展有关;miR-630有抑制胃癌细胞增殖、侵袭的作用,机制可能与p27蛋白表达上调及MMP-2、MMP-9蛋白表达下调有关。

miR-630调控BCL2抑制肺癌细胞的生长

目的为了揭示小分子RNA miR-630抑制肺癌细胞生长的作用,阐明其通过靶向抑制BCL2来发挥作用的分子机制。方法以CCK8检测细胞活力来评估细胞增殖的状况;以BD FACSCalibur流式细胞仪检测并分析细胞周期各个时期的变化;以mirPath和RNAhybrid两个生物信息学工具预测miR-630的下游靶点。通过一系列如PCR、琼脂糖胶回收、限制性克隆位点酶切链接以及质粒小提和大提等克隆工具,将miR-630基因构建到mi RNA表达质粒pmR-mcherry载体,使用Lipofectamine 2000转染miR-630表达质粒至细胞内以在体外表达miR-630;以Western blot检测BCL2蛋白的表达。结果成功构建表达miR-630的表达质粒,与对照组相比较,pmR-premiR630表达质粒转染48 h和72 h后miR-630的表达水平增高了(4.49±0.59)和(9.16±1.50)倍(P均<0.05)。与对照空质粒转染48 h和72 h后细胞活力为1.26±0.09和1.84±0.03相比较,miR-630表达质粒转染48 h和72 h后细胞活力降低到0.89±0.09和1.34±0.23(P均<0.05)。细胞转染miR-630表达质粒转染48 h后细胞周期中S期降低。生物信息学预测到BCL2是miR-630的一个靶点。与对照组相比较,pmR-premiR630表达质粒转染48 h和72 h后BCL2蛋白的表达分别下降了(0.6±0.03)和(0.4±0.01)倍(P均<0.05)。细胞转染miR-630表达质粒后BCL2蛋白表达降低。结论 miR-630通过抑制BCL2表达来抑制肺癌细胞的生长。