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血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行根治性前列腺切除术老年前列腺癌患者预后的评估价值
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作者 符红霞 周治彦 +1 位作者 王声兴 韩一南 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第17期2113-2116,共4页
目的分析血清微小RNA(miRNA)-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行腹腔镜根治性前列腺切除术(LRP)的老年前列腺癌患者预后的评估价值。方法选取2014年1月至2018年9月该院收治的行LRP治疗的213例老年前列腺癌患者作为研究对象,根据5年随访... 目的分析血清微小RNA(miRNA)-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行腹腔镜根治性前列腺切除术(LRP)的老年前列腺癌患者预后的评估价值。方法选取2014年1月至2018年9月该院收治的行LRP治疗的213例老年前列腺癌患者作为研究对象,根据5年随访结局将患者分为预后优良组(87例)和预后不良组(126例)。收集患者术前临床基线资料及血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平。采用Logistic回归分析筛选影响患者预后的因素,并以独立危险因素构建预后预测模型,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其预测价值。结果多因素Logistic回归分析结果显示,患者血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、切缘阳性、血清miRNA-21-5p与miRNA-5189-5p表达水平均为行LRP的老年前列腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),以独立危险因素构建联合预测模型,各因素单独预测行LRP的老年前列腺癌患者预后的曲线下面积均小于4项联合(P<0.05)。结论血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行LRP的老年前列腺癌患者预后的预测具有较高价值。 展开更多
关键词 mirna-21-5p mirna-5189-5p 前列腺癌 根治性前列腺切除术 预后 预测模型
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miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究
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作者 吴畏 杨飞云 +1 位作者 牛丽丹 石金河 《海南医学》 CAS 2024年第11期1521-1526,共6页
目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养... 目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。 展开更多
关键词 mirna-432-5p NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 凋亡 细胞损伤
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肺部超声评分及血浆miRNA-21-5p对脓毒症患者肺损伤程度及预后预判价值
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作者 张红玉 唐永军 《新疆医学》 2024年第5期530-535,共6页
目的分析外周血miRNA-21-5p水平与肺部超声评分(LUS)对脓毒症患者并发急性肺损伤(ALI)的病情及预后的预测价值。方法选择我院就诊的90例ALI患者作为研究对象,根据ALI患者病情严重程度分为3组:低危组(38例,APACHEⅡ评分≤10分)、中危组(3... 目的分析外周血miRNA-21-5p水平与肺部超声评分(LUS)对脓毒症患者并发急性肺损伤(ALI)的病情及预后的预测价值。方法选择我院就诊的90例ALI患者作为研究对象,根据ALI患者病情严重程度分为3组:低危组(38例,APACHEⅡ评分≤10分)、中危组(32例,APACHEⅡ评分10-20分)及重危组(20例,APACHEⅡ评分≥20分)。检测比较3组血浆miRNA-21-5p、B型脑钠肽(BNP)、D二聚体(D-dimer)、氧合指数(OI)、血管外肺水指数(EVLWI)以及LUS评分。采用Pearson直线分析评估血浆miRNA-21-5p水平及LUS评分和APACHEⅡ评分相关程度。依据患者预后结局分为存活组(71例)和死亡组(19例),比较上述临床指标的差异。应用多元Logistic回归分析上述指标与患者预后结局的危险程度。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miRNA-21-5p水平与LUS评分对ALI患者预后的诊断价值。结果中危组血浆miRNA-21-5p、BNP、EVLWI及LUS评分均低于重危组(P<0.05),但均高于轻危组(P<0.05);而中危组OI高于重危组(P<0.05),但低于轻危组(P<0.05)。三组D-dimer均无统计学差异(P>0.05)。血浆miRNA-21-5p水平及LUS评分和APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.857,P=0.026;r=0.795,P=0.036)。死亡组的血浆miRNA-21-5p、BNP、EVLWI及LUS评分显著高于存活组(P<0.05),但OI则显著低于存活组(P<0.05)。血浆miRNA-21-5p水平与LUS评分是ALI患者预后结局的危险因素(OR=3.656,P=0.013;OR=2.913,P=0.029)。血浆miRNA-21-5p切点3.25与LUS评分切点17.50对预测ALI患者短期预后的曲线下面积为0.856,灵敏度为84.2%和特异度为81.7%(P=0.018)。结论血浆miRNA-21-5p与LUS评分能有效评估ALI患者病情严重程度,对短期预后结局预测有较好价值。 展开更多
关键词 mirna-21-5p 肺部超声评分 急性肺损伤 预后
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血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平对早期肝细胞癌的诊断价值
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作者 李睿尧 李丹 +2 位作者 李膺函 吴雪峰 于秀艳 《中国肝脏病杂志(电子版)》 CAS 2024年第1期7-12,共6页
目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-574-5p、miRNA-106b、高敏甲胎蛋白异质体(highly sensutive-alpha fetoprotein heterogeneity L3,hs-AFP-L3)水平检测对早期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值。方法选择吉林省肿瘤... 目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-574-5p、miRNA-106b、高敏甲胎蛋白异质体(highly sensutive-alpha fetoprotein heterogeneity L3,hs-AFP-L3)水平检测对早期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值。方法选择吉林省肿瘤医院2020年3月至2022年3月收治的HCC患者186例(HCC组)、肝硬化患者120例(肝硬化组)、接受体检的健康人员120例(对照组)为研究对象。比较各组血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,并比较HCC组不同病理特征患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,绘制受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3对早期HCC的诊断价值。结果HCC组、肝硬化组和对照组患者血清miRNA-574-5p(1.09±0.33比0.84±0.27比0.61±0.18)、miRNA-106b(1.22±0.39比0.71±0.22比0.56±0.19)、hs-AFP-L3[(23.08±4.36)μg/L比(2.61±0.79)μg/L比(0.47±0.14)μg/L]水平差异有统计学意义,HCC组患者各项指标均显著高于肝硬化组和对照组,肝硬化组患者各项指标均显著高于对照组(P均<0.05)。HCC肿瘤个数为多发、肿瘤最大径≥5 cm、中晚期、有远处转移、有静脉瘤栓患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平分别高于单发[miRNA-574-5p:1.24±0.43比0.83±0.27;miRNA-106b:1.46±0.45比0.97±0.31;hs-AFP-L3:(25.73±5.21)μg/L比(19.15±4.25)μg/L]、肿瘤最大径<5 cm[miRNA-574-5p:1.29±0.46比0.82±0.24;miRNA-106b:1.51±0.44比0.95±0.29;hs-AFP-L3:(26.82±5.03)μg/L比(19.12±3.99)μg/L]、早期[miRNA-574-5p:1.31±0.44比0.90±0.28;miRNA-106b:1.49±0.51比0.99±0.32;(26.60±4.98)μg/L比(18.94±4.02)μg/L]、无远处转移[miRNA-574-5p:1.36±0.46比0.88±0.25;1.45±0.41比0.96±0.32;hs-AFP-L3:(26.79±5.44)μg/L比(19.04±3.83)μg/L]、无静脉瘤栓患者[miRNA-574-5p:1.39±0.43比0.92±0.31;miRNA-106b:1.43±0.39比1.0±0.34;hs-AFP-L3:(26.41±4.54)μg/L比(20.11±4.01)μg/L](P<0.05);肝功能Child-Pugh分级A级、B级、C级患者血清miRNA-574-5p(0.85±0.26比1.08±0.37比1.27±0.40)、miRNA-106b(0.92±0.29比1.15±0.35比1.41±0.38)、hs-AFP-L3[(18.69±3.72)μg/L比(23.17±4.88)μg/L比(26.45±5.32)μg/L]含量逐渐增加(P均<0.05)。miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测诊断早期HCC的曲线下面积为0.919(95%CI为0.873~0.980),敏感度和特异度分别为0.882、0.901。结论miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测对早期HCC的诊断具有较高的临床价值。 展开更多
关键词 肝细胞癌 mirna-574-5p mirna-106b 高敏甲胎蛋白异质体
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过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响
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作者 姚伟佳 罗春海 +4 位作者 刘佳金 王薇 李丹阳 刘炳琦 付世新 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3635-3642,共8页
[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理... [目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 奶牛 mirna-424-5p AKT3 子宫内膜上皮细胞 凋亡
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miRNA-424-5p靶向VEGFA对胎衣不下奶牛胎盘胶原蛋白降解的影响
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作者 刘炳琦 罗春海 +4 位作者 姚伟佳 王薇 刘佳金 李丹阳 付世新 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期3083-3092,共10页
【目的】通过探究miRNA-424-5p对奶牛母体胎盘组织胶原蛋白降解的影响,进而明确miRNA-424-5p对奶牛胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)发生的调控作用及机制。【方法】检测胎衣正常排出与胎衣不下奶牛母体胎盘组织miRNA-424-5p表... 【目的】通过探究miRNA-424-5p对奶牛母体胎盘组织胶原蛋白降解的影响,进而明确miRNA-424-5p对奶牛胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)发生的调控作用及机制。【方法】检测胎衣正常排出与胎衣不下奶牛母体胎盘组织miRNA-424-5p表达水平,采用qRT-PCR和Western blot方法进行胎衣正常排出与胎衣不下奶牛的母体胎盘组织VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV的表达水平检测。应用生物信息学分析对miRNA-424-5p进行靶基因预测,并通过双荧光素酶试验验证miRNA-424-5p与VEGFA的靶向关系。在奶牛子宫内膜上皮细胞中转染miRNA-424-5p mimics和miRNA-424-5p inhibitor进行过表达和沉默miRNA-424-5p。采用免疫荧光技术观察VEGFA在奶牛子宫内膜上皮细胞的表达变化,qRT-PCR和Western blot检测VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV的mRNA与蛋白表达水平的变化。【结果】与健康组相比,RFM组母体胎盘组织中的miRNA-424-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.01),VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。miRNA-424-5p的潜在靶基因共有152个,并经双荧光素酶试验结果证实VEGFA是miRNA-424-5p的靶基因。过表达和沉默miRNA-424-5p后,免疫荧光结果显示,与对照组相比miRNA-424-5p mimics组VEGFA的表达较低,而miRNA-424-5p inhibitor组VEGFA表达较高;qRT-PCR和Western blot结果显示,过表达miRNA-424-5p,靶基因VEGFA mRNA与蛋白表达水平极显著降低,基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),胶原蛋白COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),而沉默miRNA-424-5p时VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.01),COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著降低。【结论】miRNA-424-5p可靶向VEGFA调控MMPs表达、胶原蛋白的分解从而引起细胞外胶原降解障碍,是引起胎衣不下发生的重要因素。 展开更多
关键词 奶牛 胎衣不下 mirna-424-5p 血管内皮生长因子A 胶原蛋白降解
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miRNA-140-5P在甲状腺癌细胞TPC-1中的表达及对其增殖迁移侵袭能力的影响
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作者 罗义 李阳敏 +3 位作者 鲜童丞 杨闵叶 王杰 苏强 《西部医学》 2024年第9期1277-1281,共5页
目的探讨miR-140-5p在甲状腺癌发展中的作用及其分子生物调节机制,miRNA-140-5P对甲状腺癌细胞TPC-1侵袭、迁移的调控作用机制。方法收集2021年1月—2022年1月南充市中心医院手术切除的甲状腺恶性肿瘤36例和良性肿瘤32例的肿瘤标本。qt-... 目的探讨miR-140-5p在甲状腺癌发展中的作用及其分子生物调节机制,miRNA-140-5P对甲状腺癌细胞TPC-1侵袭、迁移的调控作用机制。方法收集2021年1月—2022年1月南充市中心医院手术切除的甲状腺恶性肿瘤36例和良性肿瘤32例的肿瘤标本。qt-PCR检测miRNA-140-5P在甲状腺恶性肿瘤和良性肿瘤组织中mRNA的表达水平,外购甲状腺癌细胞TPC-1,WB实验检测miRNA-140-5P在甲状腺恶性肿瘤和良性肿瘤细胞中的蛋白表达水平,评估miRNA-140-5P在两种组织中的表达差异;实验引入miRNA-140-5Pmimics转染细胞,Transwell小室实验、CCK-8对甲状腺肿瘤细胞迁移、侵袭、增殖能力进行检测;实验对甲状腺癌细胞TPC-1中NLRP3炎性小体进行检测,并对NLRP3表达进行干预,评估甲状腺肿瘤细胞中miR-140-5P与NLRP3的调控关系。结果miRNA-140-5P在甲状腺恶性肿瘤组织和细胞中呈低表达(P<0.05)。而miRNA-140-5P mimics可增强甲状腺癌细胞TPC-1的增殖、迁移和侵袭能力,miRNA-140-5P可减弱甲状腺癌细胞中炎性介质NLRP3的表达。结论miRNA-140-5P可降低甲状腺癌细胞TPC-1的增殖、迁移和侵袭能力;并在甲状腺恶性肿瘤细胞中与NLRP3炎性小体存在交互调控,其可能降低了对NLRP3的抑制作用,从而激发了NLRP3参与的活化调控而诱发了甲状腺癌的发生发展。 展开更多
关键词 mirna-140-5p 甲状腺癌 增殖 迁移 侵袭
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高表达miRNA-9-5p的骨髓间充质干细胞对呼吸机引起的肺损伤大鼠的影响及机制研究
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作者 林新 余天兴 +3 位作者 许俊平 陈丽芳 谢万 包宇旺 《基层医学论坛》 2024年第16期1-5,共5页
目的研究具有高表达miRNA-9-5p的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对呼吸机引起的肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)大鼠的影响以及机制。方法建立机械通气的肺损伤模型,通过慢病毒转染构建高miRNA-9-5... 目的研究具有高表达miRNA-9-5p的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对呼吸机引起的肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)大鼠的影响以及机制。方法建立机械通气的肺损伤模型,通过慢病毒转染构建高miRNA-9-5p表达的BMSCs,评估BMSCs和高miRNA-9-5p表达的BMSCs对VILI大鼠的影响。通过蛋白质印迹和qRT-PCR方法检测BMSCs和高表达miRNA-9-5p的BMSCs对VILI大鼠肺部的LC3、Atg5和Atg7表达的影响。结果移植BMSCs可显著降低VILI大鼠肺部损伤的严重程度以及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage,BAL)中的IL-1β和IL-2水平。移植高表达miRNA-9-5p的BMSCs能显著降低VILI大鼠的肺部损伤严重程度和BAL液中的IL-1β和IL-2水平。与VILI大鼠相比,移植的BMSCs明显增加了自噬相关蛋白的表达,包括Atg5和Atg7。与对照组相比,移植高表达miRNA-9-5p的BMSCs可显著提高VILI大鼠的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例以及Atg5和Atg7水平。结论BMSCs可能通过上调miRNA-9-5p表达提高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例、Atg5和Atg7介导的自噬水平,进而缓解VILI。 展开更多
关键词 BMSCS VILI mirna-9-5p 自噬
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Gga-miRNA-181-5p family facilitates chicken myogenesis via targeting TGFBR1 to block TGF-βsignaling
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作者 Xiaoxu Shen Yongtong Tian +10 位作者 Wentao He Can He Shunshun Han Yao Han Lu Xia Bo Tan Menggen Ma Houyang Kang Jie Yu Qing Zhu Huadong Yin 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2024年第8期2764-2777,共14页
MicroRNAs(miRNAs)have been demonstrated to control chicken skeletal muscle growth,however,the potential function of the miR-181-5p family in chicken myogenesis remains largely unknown.Here,our study identified the two... MicroRNAs(miRNAs)have been demonstrated to control chicken skeletal muscle growth,however,the potential function of the miR-181-5p family in chicken myogenesis remains largely unknown.Here,our study identified the two chicken(Gallus gallus;Gga)miR-181-5p family members widely expressed in various tissues,specifically miR-181a-5p and miR-181b-5p.Besides,the breast muscles of fast-growing broilers expressed higher levels of miR-181a-5p and miR-181b-5p than those of slow-growing layers.Functionally,miR-181a-5p and miR-181b-5p both promote the expression level of myogenic factors including myogenin(MyoG),myogenic differentiation 1(MyoD1),and myosin heavy chain(MyHC),meanwhile accelerating the myotube formation of skeletal muscle satellite cells(SMSCs).Mechanistically,miR-181a-5p and miR-181b-5p directly bind to the 3′untranslated region(UTR)of the transforming growth factor beta receptor 1(TGFBR1)mRNA,further reducing the expression of TGFBR1.TGFBR1 is a key Transforming growth factor beta(TGF-β)signaling transduction receptor and had a negative function in muscle cell differentiation.Furthermore,knockdown of TGFBR1 facilitated the expression of chicken myogenic factors,boosted myotube formation,and decreased the SMAD family member 2/3(SMAD2/3)phosphorylation in chicken SMSCs.SMAD2/3 are downstream of TGF-βsignaling,and miR-181a-5p and miR-181b-5p could reduce the expression of TGFBR1 to further diminish the SMAD2/3 phosphorylation.Our findings revealed that the miR-181-5p family targets TGFBR1 to break the TGF-βsignaling transduction,which resulted in promoting chicken skeletal muscle development. 展开更多
关键词 mirna-181-5p family SMSCs differentiation TGFBR1 TGF-βsignaling
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miRNA-28-5p对胆管细胞癌患者预后的预测作用及对肿瘤增殖和侵袭的作用
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作者 程立超 于国秀 李洁旭 《中国中西医结合外科杂志》 CAS 2024年第4期521-525,共5页
目的:探讨miR-28-5p表达与胆管细胞癌患者预后的关系及其对肿瘤增殖和侵袭的作用。方法:纳入2017年10月—2020年12月在我院接受根治性切除的胆管细胞癌患者112例。选取其胆管细胞癌组织和相邻癌旁组织,在胆管癌细胞系TFK-1、RBE、HuH28... 目的:探讨miR-28-5p表达与胆管细胞癌患者预后的关系及其对肿瘤增殖和侵袭的作用。方法:纳入2017年10月—2020年12月在我院接受根治性切除的胆管细胞癌患者112例。选取其胆管细胞癌组织和相邻癌旁组织,在胆管癌细胞系TFK-1、RBE、HuH28、HuCCT-1、QBC939及正常胆管上皮细胞HIBEpic中检测miR-28-5p的表达水平。采用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析miR-28-5p与患者预后的关系。采用CCK-8和Transwell实验分析miR-28-5p对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:胆管细胞癌组织和细胞系中miR-28-5p表达水平均显著高于癌旁组织和正常上皮细胞。miR-28-5p低表达与患者的不良预后显著相关。下调miR-28-5p可促进胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达miR-28-5p则可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。结论:miR-28-5p有作为胆管细胞癌患者的预后标志物和潜在治疗靶点的前景。 展开更多
关键词 胆管细胞癌 mirna-28-5p 预后 增殖 侵袭
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miRNA-93-5p通过调控FBXW7基因参与宫颈癌进展
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作者 王江 《河北医学》 2024年第1期35-40,共6页
目的:探究miRNA-93-5p是否可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌进展。方法:收集20例临床宫颈癌患者组织,分组为癌旁组织、宫颈癌组织,RT-qPCR检测宫颈组织中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,并检测人正常宫颈上皮细胞H8、宫颈癌细胞Caski、HeLa... 目的:探究miRNA-93-5p是否可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌进展。方法:收集20例临床宫颈癌患者组织,分组为癌旁组织、宫颈癌组织,RT-qPCR检测宫颈组织中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,并检测人正常宫颈上皮细胞H8、宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33A细胞miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平。选择宫颈癌细胞C33A,分为对照组(正常培养)、miRNA-93-5p抑制组(转染低表达miRNA-93-5p),FBXW7激活组(转染高表达FBXW7),转染48h后收集细胞,RT-qPCR检测各组细胞中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,Western blotting检侧C33A细胞中FBXW7蛋白水平,流式细胞术检测C33A细胞凋亡率,平板克隆检测C33A细胞克隆能力,划痕实验检测C33A细胞迁移能力,Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.001)。与H8细胞相比,Caski、HeLa、C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.05),后续实验中选择C33A宫颈癌细胞株进行研究。与对照组相比,miRNA-93-5p抑制组C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平显著降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.01),细胞迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01),FBXW7蛋白及mRNA水平显著增加(P<0.01)。与对照组相比,FBXW7激活组C33A细胞中FBXW7 mRNA水平显著增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.001),迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01)。结论:miRNA-93-5p可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭水平。 展开更多
关键词 宫颈癌 mirna-93-5p FBXW7 细胞凋亡 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
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恒温扩增检测miRNA-21-5p系统的构建和初步评价
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作者 曾元清 邓宁波 《中国当代医药》 CAS 2024年第13期4-9,共6页
目的建立一种基于滚环扩增和CRISPR-Cas9系统的荧光检测miRNA-21-5p方法,并对检测性能进行初步评价。方法设计一种特异性的锁式探针识别靶标miRNA-21-5p,在大肠杆菌DNA连接酶和Phi29 DNA聚合酶的作用下,进行滚环扩增,扩增形成一条长重... 目的建立一种基于滚环扩增和CRISPR-Cas9系统的荧光检测miRNA-21-5p方法,并对检测性能进行初步评价。方法设计一种特异性的锁式探针识别靶标miRNA-21-5p,在大肠杆菌DNA连接酶和Phi29 DNA聚合酶的作用下,进行滚环扩增,扩增形成一条长重复单链。在Cas9酶的辅助下进行特异性识别,并形成双链DNA,然后通过加SYBR GreenⅠ荧光染料与形成双链DNA产物结合,产生荧光信号的荧光强度与双链DNA产物浓度成正比,并对该系统进行特异性和灵敏度进行分析。用构建的方法对胃癌患者血清和健康人血清进行miRNA检测,是否成功检测miRNA,同时检测两组血清中胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅠ/Ⅱ)水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(AUC)分析miRNA-21-5p、胃蛋白酶原对胃癌的诊断价值。结果构建的扩增系统能检测到血清中miRNA,胃癌血清中miRNA-21-5p荧光强度高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线结果显示,miRNA-21-5p、PGⅠ/Ⅱ单独诊断胃癌的AUC分别为0.72、0.80,两者联合检测诊断的AUC为0.85,高于任意单个指标诊断。结论用该方法直接检测miR-21-5p操作方便快捷,不需要复杂热循环仪器,适用范围广。 展开更多
关键词 RCA扩增 mirna-21-5p Cas9酶 胃癌 胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ
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血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系
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作者 单永双 万学锋 王晓英 《癌症进展》 2024年第4期457-460,464,共5页
目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者... 目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 mirna-199a-5p α-1-B-糖蛋白反义RNA1 复发
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miR-141-5p/ZNF705A对慢性粒细胞白血病细胞源外泌体调控骨髓间充质干细胞黏附作用的机制
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作者 鲍静 许晗 +3 位作者 汪万杰 许婷婷 戴霁菲 夏瑞祥 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期506-514,共9页
目的探讨慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞源外泌体(exosome,Exo)中miR-141-5p/ZNF705A对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)黏附作用的影响。方法电镜和NTA粒径分析检测CML患者外周血和K... 目的探讨慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞源外泌体(exosome,Exo)中miR-141-5p/ZNF705A对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)黏附作用的影响。方法电镜和NTA粒径分析检测CML患者外周血和K562细胞中的Exo形态大小;qRT-PCR和Western blot检测转染前后K562细胞的Exo、BMSCs标记分子及黏附蛋白的表达情况;细胞黏附实验检测BMSCs的黏附能力;CCK-8法检测BMSCs活性、萤光素酶实验检测miR-141-5p与ZNF705A结合情况等。结果qRT-PCR结果显示,miR-141-5p表达在CML患者和K562细胞源Exo中均明显降低;qRT-PCR和Western blot等结果表明,CML患者中BMSCs的黏附蛋白CD44和CXCL12表达明显降低,且能够吞噬K562细胞源Exo。进一步发现,与CD34^(+)细胞相比,K562源性Exo能够降低Exo促进的BMSCs中CD44和CXCL12表达和黏附作用;同时,双萤光素酶基因报告等验证miR-141-5p与ZNF705A靶向结合;最后发现通过上调K562细胞源Exo中miR-141-5p的表达,靶向抑制ZNF705A,进而促进BMSCs的活性和黏附功能。结论K562细胞下调Exo中miR-141-5p表达,减少对ZNF705A的靶向抑制,进而抑制BMSCs的黏附功能,从而调控CML患者的骨髓造血功能。 展开更多
关键词 mirna-141-5p K562细胞 骨髓间充质干细胞 ZNF705A 外泌体 慢性粒细胞白血病
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血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值 被引量:14
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作者 蔡华忠 秦晓梦 +4 位作者 周峰 苗振军 王艳 贾珏 任国庆 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期736-738,共3页
目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清... 目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤. 展开更多
关键词 mirna-155-5p mirna-133a-3p 心肌损伤 脓毒症 受试者工作特征曲线(ROC)
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miRNA-194-5p通过减少神经炎症降低脑卒中风险 被引量:6
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作者 王霞 李美 +4 位作者 王冰 陈秋菊 李岩 刘振元 张文奇 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期679-683,共5页
目的探讨miRNA-194-5p通过减少神经炎症降低急性缺血性脑卒中风险。方法采集72例急性缺血性脑卒中(AIS)患者和72例无脑血管病健康志愿者外周血,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清中miRNA-194-5p表达量。脂多糖(LPS)诱导的人... 目的探讨miRNA-194-5p通过减少神经炎症降低急性缺血性脑卒中风险。方法采集72例急性缺血性脑卒中(AIS)患者和72例无脑血管病健康志愿者外周血,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清中miRNA-194-5p表达量。脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为体外细胞模型培养。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中炎症因子水平,采用Western印迹检测肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6蛋白表达。结果脑卒中患者血清中miRNA-194-5p表达显著低于正常组(P<0.05)。与正常组比较,在LPS诱导的HUVECs模型中miRNA-194-5p的表达被显著抑制(P<0.05),但激活miRNA-194-5p能够抑制HUVECs上清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,与空白组对比,差异均有统计学意义(P<0.05)。下调miRNA-194-5p表达,HUVECs上清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平被激活,与正常空白组对比,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-194-5p与TRAF6的荧光素酶表达量显著低于空白组与TRAF6组。在激活miRNA-194-5p后,TRAF6 mRNA表达量受到显著抑制。下调TRAF6可显著减少下调miRNA-194-5p对HUVECs上清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平的影响,与miRNA-194-5p下调组对比,差异均有统计学意义。结论miRNA-194-5p能够通过抑制TRAF6表达,减少神经炎症,降低脑卒中风险,miRNA-194-5p有希望成为临床治疗脑卒中相关神经炎症的重要指标。 展开更多
关键词 mirna-194-5p TRAF6 神经炎症 脑卒中
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急性心肌梗死患者血浆miRNA-423-5p与整合素连接激酶水平表达对评价近期临床预后的价值 被引量:8
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作者 达晶 张超 +3 位作者 吴红葵 刘刚 王文科 孙向阳 《现代检验医学杂志》 CAS 2020年第5期33-37,共5页
目的急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者血浆miRNA-423-5p与整合素连接激酶水平表达对评价近期临床预后的价值。方法按照研究标准,从宝鸡市中心医院老年心脑血管病科2016年1月~2018年1月收治患者中选取160例作为研究对... 目的急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者血浆miRNA-423-5p与整合素连接激酶水平表达对评价近期临床预后的价值。方法按照研究标准,从宝鸡市中心医院老年心脑血管病科2016年1月~2018年1月收治患者中选取160例作为研究对象,将80例急性心肌梗死患者随机编入实验组,80例稳定性心绞痛患者编入对照组,开展临床研究分析。结合抽血检查结果分析患者的心肌酶谱(LDH,AST,CK和ALT),心肌损伤(cTnI,Mb和CK-MB)指标,血浆miRNA-423-5p,利用酶联免疫法分析整合素连接激酶的表达水平,并在此基础上将实验组患者编入高表达组与低表达组,分析心室重构情况及生活质量评分。结果治疗后,血浆miRNA-423-5p相对表达量实验组(0.6±0.2)高于对照组(0.3±0.1),差异具有统计学意义(t=12.000,P<0.05);整合素连接激酶表达水平实验组(3.2±0.4)高于对照组(1.8±0.1),差异具有统计学意义(t=30.370,P<0.05);对照组心肌酶谱指标、心肌损伤指标、心室重构指标和生活质量评分均优于观察组,两组差异具有统计学意义(t=0.043~102.176,均P<0.05)。结论血浆miRNA-423-5p与整合素连接激酶均可作为急性心肌梗死近期预后监测的评估依据。 展开更多
关键词 mirna-423-5p 整合素连接激酶 急性心肌梗死
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miRNA-129-5p靶向调控VCP基因在人骨肉瘤细胞中表达初步探讨 被引量:4
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作者 龙新华 周云飞 +4 位作者 刘志礼 周扬 张志宏 陈文昭 黄山虎 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第7期679-682,共4页
目的含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)基因高表达能通过AKT/PI3K/NF-KappaB/MMP-9等信号通路促进骨肉瘤转移,但VCP基因上游调控机制仍不清楚。文中初步探讨miRNA-129-5p是否调控人骨肉瘤细胞中VCP基因表达及调控靶点。方... 目的含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)基因高表达能通过AKT/PI3K/NF-KappaB/MMP-9等信号通路促进骨肉瘤转移,但VCP基因上游调控机制仍不清楚。文中初步探讨miRNA-129-5p是否调控人骨肉瘤细胞中VCP基因表达及调控靶点。方法运用生物信息学预测软件TargetScanhuman 6.2(http://www.targetscan.org/)预测miRNA-129-5p在VCP基因(NM_007126)可能的作用位点。构建野生型VCP 3'UTR报告基因载体(psi-VCP Vector)及预测位点突变型VCP3'UTR报告基因载体(psi-VCPmut Vector),测序鉴定。细胞转染分4组,psi-VCP Vector+miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP实验组,psi-VCP Vector+阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP对照组;psi-VCP突变Vector+miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变实验组,psi-VCP突变Vector+阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变对照组。分别检测荧光海肾素酶活性。结果 Targetscan软件预测结果显示miRNA-129-5p在VCP 3'UTR163-169bp有且仅有1个保守作用位点;VCP实验组荧光海肾素酶活性(15.529±1.902)低于VCP对照组(21.781±0.854)、VCP突变实验组(19.978±1.377)、VCP突变对照组(21.952±1.516),差异有统计学意义(P<0.05);VCP突变对照组(21.952±1.516)与VCP对照组(21.781±0.854),差异无统计学意义(P=0.276)。结论 miRNA-129-5p在骨肉瘤细胞U2-OS中可能靶向调控VCP基因的表达及调控位点。 展开更多
关键词 mirna-129-5p 含缬酪肽蛋白 骨肉瘤 靶向调控
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MiRNA-509-5p靶向MDM2抑制胃癌细胞的侵袭和迁移 被引量:3
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作者 王栓虎 骆杰 +2 位作者 刘牧林 李仕青 姜从桥 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期1-7,共7页
目的明确miRNA-509-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的作用并阐明相关的机制。方法实时定量PCR检测miRNA-509-5p在胃癌细胞株及胃癌组织中的表达。对HGC-27细胞株转染miRNA-509-5p模拟物或抑制物后,分别采用CCK-8和Transwell法检测细胞的增殖和... 目的明确miRNA-509-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的作用并阐明相关的机制。方法实时定量PCR检测miRNA-509-5p在胃癌细胞株及胃癌组织中的表达。对HGC-27细胞株转染miRNA-509-5p模拟物或抑制物后,分别采用CCK-8和Transwell法检测细胞的增殖和迁移。软件预测miRNA-509-5p的靶基因,荧光素酶报告基因验证靶基因。靶基因过表达验证细胞增殖和迁移。结果 miRNA-509-5p在肿瘤组织及细胞株中的表达显著降低。转染miRNA-509-5p模拟物能够显著抑制细胞的增殖、迁移及侵袭。相反,转染miRNA-509-5p抑制物能够显著增加细胞的增殖、迁移及侵袭。此外,miRNA-509-5p能够通过靶向3'-UTR负调控鼠双微体-2(MDM2)。miRNA-509-5p能够显著抑制由MDM2过表达导致的肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭。结论 miRNA-509-5p是通过抑制MDM2表达的新型肿瘤抑制子,能够抑制胃癌的增殖、迁移及侵袭。 展开更多
关键词 mirna-509-5p MDM2 胃癌 增殖 侵袭
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MiRNA-93-5p对VEGF的转录调控及其与梅花鹿茸细胞增殖的关系 被引量:3
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作者 李璐 李婷 +4 位作者 李沐 吴炎 齐琳 崔东明 胡薇 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期146-149,共4页
为了探讨miRNA-93-5p对梅花鹿血管内皮生长因子(VEGF)的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系,分离了鹿茸顶端软骨组织细胞,利用Trizol试剂法提取细胞总RNA,反转录合成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3'... 为了探讨miRNA-93-5p对梅花鹿血管内皮生长因子(VEGF)的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系,分离了鹿茸顶端软骨组织细胞,利用Trizol试剂法提取细胞总RNA,反转录合成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3'端非编码区部分序列(3'UTR)特异引物并进行克隆,构建VEGF基因的3'UTR野生型及其突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。再将人工合成的miRNA-93-5p模拟物转染鹿茸软骨细胞,MTT法检测鹿茸细胞体外增殖的变化;Western blotting分析VEGF蛋白的表达丰度。结果表明:成功获得了鹿茸组织VEGF基因的3'UTR序列,野生型序列长度为356 bp,突变体长度为336bp。荧光素酶活性检测结果表明,转染野生型质粒组细胞荧光素酶活性降低,而转染突变体组细胞荧光素酶活性无明显变化。MTT法和Western blotting结果显示,鹿茸细胞的体外增殖受到抑制,VEGF蛋白的表达水平下降,且呈时间依赖性。 展开更多
关键词 鹿茸细胞 mirna-93-5p 血管内皮生长因子 转录调控 细胞增殖
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