抗精神病药治疗对外周血单核细胞miRNA-92a-3p表达的影响

目的:探讨抗精神病药治疗对外周血单核细胞miRNA-92a-3p表达的影响。方法:给予26例汉族精神分裂症患者(患者组)非典型抗精神病药(奥氮平、喹硫平、氯氮平、利培酮、齐拉西酮、阿立哌唑)单药治疗12周;治疗前后使用阳性和阴性症状量表(PANSS)评估临床症状;采用实时定量荧光PCR检测外周血单核细胞内miRNA-92a-3p相对表达水平,并与48名正常者(对照组)比较;分析治疗前后PANSS评分与miRNA-92a-3p的相对表达量变化的关系。结果:患者组治疗前后外周血单核细胞内miRNA-92a-3p相对表达量明显高于对照组(P均<0.01),且治疗后显著高于治疗前(P<0.05);患者组治疗前后miRNA-92a-3p相对表达量变化与PANSS总分变化无相关性。结论:精神分裂症患者外周血单核细胞miRNA-92a-3p相对表达量增高,抗精神病药治疗进一步提高其表达水平。

miR-92a-1-5p通过调控SOCS3和P53促进急性白血病细胞增殖的机制研究

目的探讨miR-92a-1-5p通过调控细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、P53促进急性白血病(AL)细胞增殖的机制。方法收集20例初诊AL患者和15例正常人的骨髓标本,检测miR-92a-1-5p、SOCS3、P53 mRNA、蛋白质的表达水平,剖析其与临床特征和预后的关联性;利用基因工程手段,在急性淋巴细胞白血病细胞系HL-60和急性髓系白血病细胞系K562中分别提高和降低miR-92a-1-5p的表达水平,以评估其对SOCS3和P53蛋白表达水平的调控作用;研究miR-92a-1-5p对细胞周期、增殖和凋亡的影响。结果miR-92a-1-5p的表达水平与白细胞计数、骨髓增生程度、分化程度、髓外浸润和预后均呈负相关,与SOCS3和P53 mRNA表达水平均呈正相关。在HL-60和K562细胞中,上调miR-92a-1-5p表达水平能抑制SOCS3和P53 mRNA的表达,促进细胞周期进入S期,增加细胞增殖能力,抑制细胞凋亡;下调miR-92a-1-5p表达则产生相反的效果。结论miR-92a-1-5p通过调控SOCS3和P53促进AL细胞增殖,可能作为AL的潜在诊断标志物和治疗靶点。

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在HCC细胞中高表达,KLF4在HCC细胞中低表达(P<0.05)。与正常表达组相比,下调miR-92a-3p显著抑制了SMMC-7721和Bel-7402细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了miR-92a-3p与KLF4存在靶向结合位点。过表达KLF4能够阻碍HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制过表达miR-92a-3p对HCC细胞生长的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-92a-3p能够通过靶向下调KLF4来促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭。

血清miR-92a-3p、miR-147水平与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应的关系及对预后的评估价值

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-92a-3p、miR-147与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应以及预后的关系,分析miR-92a-3p、miR-147预测脓毒症患者预后的价值。方法将2018年3月至2022年6月邯郸市中心医院急诊科收治的157例脓毒症患者(患者组)和107例体检健康者(对照组)纳入研究。患者组又根据脓毒症病情分为脓毒症组(66例)和脓毒症休克组(91例)。检测纳入研究者血清miR-92a-3p、miR-147以及炎症因子水平,追踪临床结局。采用Pearson相关分析miR-92a-3p、miR-147水平与序贯器官衰竭(SOFA)评分、急性生理和慢性健康状态Ⅱ(APACHEⅡ)评分和炎症因子水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响脓毒症患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-92a-3p、miR-147在脓毒症患者预后判断中的价值。结果患者组血清miR-92a-3p水平高于对照组(P<0.05),miR-147水平低于对照组(P<0.05)。脓毒症休克组血清miR-92a-3p水平高于脓毒症组(P<0.05),miR-147水平低于脓毒症组(P<0.05)。脓毒症患者血清miR-92a-3p水平与白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)水平,APACHEⅡ评分、SOFA评分均呈正相关(P<0.05),miR-147水平与上述指标均呈负相关(P<0.05)。脓毒症休克、miR-92a-3p水平升高是脓毒症患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-147水平升高是保护因素(P<0.05)。miR-92a-3p、miR-147联合用于预测脓毒症患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.855,高于两者单独使用(AUC分别为0.711、0.723)。结论脓毒症患者血清miR-92a-3p水平增高,miR-147水平降低,而且与病情加重、炎症反应加剧以及预后不良有关。

急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义

目的:检测急性髓系白血病(AML)患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p)表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法:选取AML患者51例(AML组)和34名同期健康体检志愿者(对照组)作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平;根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUC),确定其临界值,根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果:在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构,纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30~100 nm,Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较,AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低(P<0.01);ROC曲线分析,血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最佳临界值为0.51,灵敏度为76.47%,特异度为94.12%,AUC为0.913,AUC 95%置信区间(CI)为(0.856,0.971)(P<0.001)。结论:AML患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平诊断AML的灵敏度和特异度较高,可应用于早期AML的临床诊断。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

circRNA_MYLK靶向miR-92a-3p调控急性B淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡

目的:探讨环状RNA_MYLK(circRNA_MYLK)对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:选取四川大学华西医院收治的56例急性淋巴细胞白血病患者为研究组,同时选取45例健康志愿者为对照组。取两组骨髓样本后分离单个核细胞,并通过流式细胞仪分选B淋巴细胞;qRT-PCR法检测单个核细胞中circRNA_MYLK、微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)表达量;Pearson法分析急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p相关性。体外培养人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)和正常B淋巴细胞,并将si-NC、si-circRNA_MYLK、anti-miR-NC、anti-miR-92a-3p、miR-NC、miR-92a-3pmimic、si-circRNA_MYLK和anti-miR-NC、si-circRNA_MYLK和anti-miR-92a-3p转染至SUP-B15细胞;qRT-PCR法检测circRNA_MYLK、miR-92a-3p表达量;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;双荧光素酶报告实验验证circRNA_MYLK与miR-92a-3p靶向作用。结果:与对照组和正常B淋巴细胞比较,研究组患者单个核细胞和人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)中circRNA_MYLK表达量升高(P<0.05),miR-92a-3p表达量降低(P<0.05)。急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p呈负相关(r=-0.9682)。干扰circRNA_MYLK或过表达miR-92a-3p降低SUP-B15细胞存活率和S期细胞比例(P<0.05),增加G 0/G 1期细胞比例、细胞凋亡率(P<0.05);circRNA_MYLK可靶向调节miR-92a-3p的表达;抑制miR-92a-3p表达可逆转干扰circRNA_MYLK表达对SUP-B15细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用(P<0.05)。结论:干扰circRNA_MYLK表达可诱导急性淋巴细胞白血病细胞凋亡并抑制细胞增殖,其机制与靶向调控miR-92a-3p表达有关。

miR-92a-3p在小鼠胚胎神经管闭合中的作用及机制

目的探讨miR-92a-3p与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)之间的相互作用,以及两者在神经管畸形(neural tube defect,NTD)中对细胞迁移的影响。方法实验动物采用C57BL/6J小鼠,孕鼠随机分为NTD组与对照组,每组30只,NTD组采用全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导NTD模型,于E9.5采集胚胎样本。实验所用细胞系为小鼠神经干细胞C17.2,转染NOX4过表达质粒、miR-92a-3p模拟物/抑制剂、模拟物对照/抑制剂对照。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测胚胎和C17.2细胞中miR-92a-3p表达,采用蛋白质印迹法检测NOX4的表达。通过双荧光素酶报告基因实验明确miR-92a-3p对NOX4的结合及靶向调控关系。采用细胞划痕实验与Transwell实验观察miR-92a-3p和NOX4对细胞迁移活动的影响。统计学方法采用单因素方差分析、独立样本t检验。结果NTD组胚胎miR-92a-3p表达低于对照组(0.753±0.052与1.006±0.126,t=3.212,P=0.033),NOX4蛋白表达高于对照组(0.870±0.039与0.688±0.056,t=4.621,P=0.010)。在转染NOX43’端非翻译区(3’untranslated regions,3’UTR)荧光素酶报告基因的C17.2细胞中,共转染miR-92a-3p模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(0.368±0.102与1.000±0.149,t=5.530,P=0.005);共转染miR-92a-3p抑制剂组的荧光素酶活性高于抑制剂对照组(1.254±0.080与1.000±0.129,t=2.899,P=0.044)。C17.2细胞转染miR-92a-3p模拟物组,NOX4的蛋白表达低于模拟物对照组(1.077±0.142与1.432±0.300,t=2.396,P=0.044);转染miR-92a-3p抑制剂组,NOX4的蛋白表达高于抑制剂对照组(1.443±0.054与1.249±0.090,t=3.709,P=0.010)。细胞划痕的实验结果表明,转染NOX4质粒后,细胞伤口愈合的速度低于对照组[(8.8±6.5)%与(44.1±6.8)%,t=6.513,P=0.003],然而当过表达NOX4的同时转染miR-92a-3p,与转染NOX4组比较,细胞伤口愈合速度加快[(37.2±11.7)%与(8.8±6.5)%,t=3.680,P=0.021]。Transwell实验发现,转染NOX4质粒后,迁移的细胞数量低于对照组[(102.7±4.5)与(133.0±11.8)个,t=4.162,P=0.014],而共转染NOX4与miR-92a-3p后,与转染NOX4组比较,发生迁移的细胞明显增多[(176.0±11.0)与(102.7±4.5)个,t=10.680,P<0.001]。结论小鼠NTD模型中,异常低表达的miR-92a-3p能够通过上调NOX4的表达,阻碍小鼠胚胎神经管闭合过程中细胞的迁移活动,最终导致NTD的发生。

基于TCGA数据库分析miRNA-151a-3p在食管癌中的表达及与免疫细胞浸润的相关性

目的:采用生物信息学数据库癌症基因组图谱(TCGA)分析miRNA-151a-3p在食管癌(ESCA)中的表达情况及临床意义,研究miRNA-151a-3p在ESCA中与免疫细胞浸润的相关性。方法:样本下载:从TCGA数据库下载182例ESCA组织(肿瘤组)与16例癌旁组织(癌旁对照组)miRNAseq以及对应的临床数据;分析miRNA-151a-3p在ESCA中的表达情况;使用R软件中的pROC包制作受试者工作特征曲线(ROC)评价miRNA-151a-3p诊断ESCA的特异性和敏感性,并使用R软件中的survminer包绘制K-M生存曲线研究miRNA-151a-3p的表达水平对ESCA患者预后的影响。通过R软件中的GSVA包ssGSEA算法研究miRNA-151a-3p在ESCA中与免疫细胞浸润的相关性。运用Targetscan数据库对miRNA-151a-3p靶基因进行预测并通过DAVID在线分析工具对预测得到的靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:miRNA-151a-3p在ESCA肿瘤组中的表达水平显著高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P<0.001);K-M生存曲线分析差异无统计学意义(P>0.05),表明miRNA-151a-3p的表达水平与ESCA患者的预后无关;分析ROC曲线得出其曲线下面积(AUC)为0.814,在ESCA的诊断中具有良好的特异性和敏感性;研究miRNA-151a-3p在ESCA中与免疫细胞浸润的相关性,表明miRNA-151a-3p与树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞、NK细胞、Tcm细胞、Th1细胞的浸润水平呈负相关性。GO分析结果显示miRNA-151a-3p靶基因主要参与RNA聚合酶Ⅱ转录的正负调节、细胞凋亡、蛋白质结合等生物学进程(P<0.05)。KEGG分析结果显示miRNA-151a-3p靶基因显著富集于MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、肿瘤中枢碳代谢等信号通路上(P<0.05)。结论:miRNA-151a-3p在ESCA的诊断中具有较高的特异性和敏感性。对miRNA-151a-3p靶基因富集分析,结果显示其富集的信号通路均与肿瘤密切相关,并且其可能通过树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞、NK细胞、Tcm细胞、Th1细胞影响肿瘤免疫微环境进而促进ESCA的发生、发展,因此miRNA-151a-3p有望成为ESCA患者诊疗的新分子标志物。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

MiRNA-199a-3p通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖和促凋亡作用

目的:探讨阿霉素对转染miRNA-199a-3p的子宫内膜癌(EC)的作用及机制。方法:构建pSIREN-miRNA-199a-3p过表达质粒并稳定转染内膜癌细胞系Ishikawa、SPEC-2细胞。应用逆转录PCR(RT-PCR)检测miRNA-199a-3p的表达;MTT、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:上调miRNA-199a-3p可显著抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa、SPEC-2的克隆形成能力(P<0.01,P<0.05);miRNA-199a-3p可增强阿霉素对Ishikawa、SPEC-2细胞的生长抑制(P均<0.05)和凋亡诱导作用(P均<0.05);Western blot证实,miRNA-199a-3p可显著下调mTOR及其效应蛋白p70S6K的磷酸化水平。结论:miRNA-199a-3p可能通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖并促进其凋亡,为联合应用miRNA和阿霉素治疗EC提供了实验依据。

微小RNA-92a-3p靶向PTEN调控胰腺癌细胞增殖和转移

目的:探讨微小RNA-92a-3p(microRNA-92a-3p,miR-92a-3p)靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)调控胰腺癌细胞增殖和转移的作用机制。方法:采用Real-time PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞株(HPDE6-C7)与胰腺癌细胞株(Panc-1,BxPC-3,AsPC-1,MIA Paca-2,Capan-2)中的miR-92a-3p表达;同时,采用蛋白质印迹法检测上述细胞中PTEN的表达。选取胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1的细胞进行实验,分为转染对照模拟物组(NC mimics组)、miR-92a-3p模拟物组(miR-92a-3p mimics组)、对照拮抗剂组(NC inhibitor组)、miR-92a-3p拮抗剂(miR-92a-3p inhibitor组),采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白表达水平。将野生型PTEN的3’-非编码区(untranslated regions,UTR)(wt-PTEN 3’UTR)或突变体PTEN的3’-UTR(mutPTEN 3’UTR)分别与NC mimics,miR-92a-3p mimics,NC inhibitor,miR-92a-3p inhibitor共转染293T细胞,采用双萤光素酶报告实验检测miR-92a-3p与PTEN的靶向结合关系。在BxPC-3细胞的回复实验中,实验又分NC inhibitor+siNC组、miR-92a-3p inhibitor+si-NC组、NC inhibitor+si-PTEN组和miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组;在Panc-1细胞的回复实验中,实验又分为NC mimics+NC组、miR-92a-3p mimics+NC组、NC mimics+PTEN组和miR-92a-3p mimics+PTEN组,再分别采用CCK-8检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白的表达。结果:与HPDE6-C7细胞相比,miR-92a-3p在胰腺癌细胞株中均呈高表达(均P<0.01),PTEN在胰腺癌细胞株中均呈低表达(均P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组BxPC-3和Panc-1细胞活力均升高(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组BxPC-3和Panc-1细胞活力均降低(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均增多(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均减少(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组的wtPTEN 3’UTR荧光素酶活性被抑制(P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组的wt-PTEN 3’UTR荧光素酶活性被增强(P<0.01)。与miR-92a-3p inhibitor+si-NC组相比,miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组恢复了miR-92a-3p inhibitor对BxPC-3细胞增殖和转移的影响;与miR-92a-3p mimics+NC组相比,miR-92a-3p mimics+PTEN组恢复了miR-92a-3p mimics对Panc-1细胞增殖和转移的影响。结论:MiR-92a-3p可靶向抑制PTEN的表达,促进胰腺癌细胞的增殖和转移。

miRNA-520a-3p调控MAP3K2表达对肺癌干细胞凋亡的影响

背景:有研究证实,miRNA-520a-3p在肺癌干细胞中有一定调节作用,但具体功能和作用机制尚不明确。目的:探索miRNA-520a-3p对肺癌干细胞凋亡的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:采用免疫磁珠法从肺腺癌细胞株A549中分离出CD133^+肺癌干细胞。实时荧光定量PCR检测miRNA-520a-3p在CD133^+肺癌干细胞中的表达。采用脂质体转染法增加CD133^+肺癌干细胞中miRNA-520a-3p表达水平,流式细胞术检测过表达miRNA-520a-3p对CD133^+肺癌干细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-520a-3p对MAP3K2基因的调控作用。Western Blotting检测过表达miRNA-520a-3p对CD133^+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响。结果与结论:(1)在CD133^+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p表达水平显著低于CD133-肺癌细胞(P<0.05);(2)过表达miRNA-520a-3p后,显著增加了CD133^+肺癌干细胞凋亡百分比(P<0.05);(3)抑制miRNA-520a-3p表达能够显著增强含有MAP3K2基因3’-非翻译区(3’-UTR)报告质粒的荧光素酶活性(P<0.05),增加miRNA-520a-3p表达能够显著降低含有MAP3K2基因3’-UTR报告质粒的荧光素酶活性(P<0.05);(4)过表达miRNA-520a-3p后,CD133^+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2蛋白表达降低(P均<0.05),而Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);(5)结果表明,在CD133^+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p呈低表达状态。miRNA-520a-3p可能通过调控MAP3K2基因表达,诱导CD133^+肺癌干细胞凋亡。

miR-92a-3p对TNF-α,IL-6和DcR3的影响

目的探讨miR-92a-3p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和诱导因子3(DcR3)的影响。方法用人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)设置阴性对照组(NC)。用1μg/mL LPS分别处理THP-1细胞6 h和24 h,实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)检测TNF-α,IL-6和DcR3的表达,作为Sepsis组(NC+LPS)。利用1μg/mL的LPS处理过表达miR-92a-3p的THP-1细胞,作为过表达miR-92a-3p的Sepsis组(miR-92a-3p+LPS)。利用q-PCR,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot分别检测各组TNF-α,IL-6和DcR3的表达情况。结果q-PCR,ELISA和Western blot检测结果显示,TNF-α和IL-6在LPS组、miR-92a-3p+LPS组和NC组的相对表达量均呈下调趋势,差异有统计学意义(P<0.05),DcR3表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-92a-3p可抑制TNF-α和IL-6的释放,具有抗炎作用,但是其对DcR3的作用不显著。

血清miRNA-27a-3p、miRNA-210水平与ACI患者神经功能改善的关系

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者神经功能与miRNA-572和miRNA-218表达水平的关系。方法选择2020年5月至2020年11月在承德医学院附属医院神经内科就诊的ACI患者82例为ACI组,另选择同时期健康体检者82例作为对照组。采用RT-qPCR检测两组血清中miRNA-27a-3p和miRNA-210水平,全自动生化分析仪检测两组血清中TG、LDL-C和HDL-C的值,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评价患者入院前神经功能缺损情况;改良Rankin量表(mRS量表)评价ACI患者预后情况。应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估各指标对ACI预后的预测价值,采用多因素Logistic回归分析探讨预后影响因素。结果两组年龄、性别、吸烟、糖尿病、冠心病、高血压、TG、LDL-C和HDL-C比较差异无统计学意义(均P> 0.05);与对照组比较,ACI组血清miRNA-27a-3p显著降低,miRNA-210显著升高(P<0.05);与轻度组比较,中度组和重度组ACI患者miRNA-27a-3p显著降低、miRNA-210显著升高(P<0.05);与中度组比较,重度组ACI患者血清miRNA-27a-3p显著降低、血清miRNA-210显著升高(P<0.05)。预后不良患者血清miRNA-27a-3p低表达率和miRNA-210高表达率显著高于预后良好患者(P <0.05);ROC曲线结果显示,miRNA-27a-3p和miRNA-210的曲线下面积分别为0.892和0.704,预测ACI预后的灵敏度分别为90.82%和74.5%,特异度分别为87.7%和71.6%。预后多因素Logistic回归分析显示,年龄> 65岁[OR及95%CI:2.21 (1.06~3.57)]、miRNA-27a-3p <3.13[OR及95%CI:4.17 (1.86~9.32)]、miRNA-210≥6.91[OR及95%CI:3.82 (1.84~7.94)]为ACI患者预后危险因素(P<0.05)。结论 miRNA-27a-3p表达降低、miRNA-210表达升高与ACI患者的神经功能缺损及预后不良密切相关,两者对ACI患者预后具有较高的预测价值,有望作为急性脑梗死临床有效生物标志物。

miRNA-193a-3p靶向TGF-β2基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-193a-3p在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞迁移、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测miR-193a-3p在肝癌及其癌旁正常组织中的表达;将miR-193a-3p mimic转染肝癌HepG2细胞系(NC为对照组),利用CCK-8(cell counting kit-8)实验、Transwell实验及流式细胞仪评估HepG2细胞的活性、迁移及凋亡情况;利用生物信息学分析、qRT-PCR及双荧光素酶报告实验确证miR-193a-3p对下游靶标转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β2的影响;在miR-193a-3p过表达的HepG2细胞中转染TGF-β2质粒,检测过表达TGF-β2对miR-193a-3p诱导HepG2细胞活性、迁移及凋亡的影响。结果miR-193a-3p在肝癌组织中的表达显著低于正常肝脏组织,差异有统计学意义(P<0.01):与NC组比较,miR-193a-3p组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),且以时间依赖性方式诱导HepG2细胞凋亡:miR-193a-3p与靶基因TGF-β2的互补结合序列在进化上高度保守,TGF-β2是miR-193a-3p的下游靶标;与miR-193a-3p+空质粒组比较,miR-193a-3p+TGF-β2组肝癌细胞的增殖活性及迁移数量增多,细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-193a-3p在肝癌组织中表达减少,miR-193a-3p通过靶向调控TGF-β2基因抑制HepG2细胞的活性和迁移,促进HepG2细胞的凋亡。

下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响

目的探讨下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响。方法选取37例下肢动脉粥样硬化闭塞症(AS)患者外周血为AS组。另外选取同期37名健康体检者外周血为对照组。新鲜血管组织取自1例下肢AS患者截肢远端血管为实验组,以其截肢近端血管为对照。实时荧光定量PCR检测新鲜血管组织,分离得到的外周血中单核细胞和微泡中miRNA-199a-3p表达水平。以人单核细胞TTHP-1为载体,miRNA-199a-3p mimics组和miRNA-199a-3p inhibitor组分别转染miRNA-199a-3p mimics和miRNA-199a-3p inhibitor,同时设置空白对照组。实时荧光定量PCR检测各组miRNA-199a-3p、趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、调解活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)和Fractalkine表达水平。结果下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。AS组外周血单核细胞和微泡中miRNA-199a-3p表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。与空白对照组相比,miRNA-199a-3p mimics组miRNA-199a-3p表达水平显著上升(P<0.05),miRNA-199a-3p inhibitor组miRNA-199a-3p表达水平显著下降(P<0.05)。与空白对照组相比,miRNA-199a-3p mimics组MCP-1、RANTES和Fractalkine的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),miRNA-199a-3p inhibitor组MCP-1、RANTES和Fractalkine的mRNA表达水平显著上升(P<0.05)。结论动脉粥样硬化斑块内巨噬细胞高表达miRNA-199a-3p,并以微泡形式分泌到外周血中,抑制单核细胞中MCP-1、RANTES和Fractalkine等趋化因子的表达,是一种动脉粥样硬化保护因素。

miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

目的探讨miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13(Homeobox protein 13,HOXA13)对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及其作用机制。方法实验分组:对照组、高糖组、anti-miR-NC+高糖组、antimiR-92a-3p+高糖组、pcDNA+高糖组、pcDNA-HOXA13+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-NC+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-HOXA13+高糖组;qRT-PCR法与Western blot法分别检测miR-92a-3p、HOXA13的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-92a-3p与HOXA13的靶向关系;Western blot法检测Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组miR-92a-3p的表达量升高(P<0.05),HOXA13 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平升高(P<0.05);转染anti-miR-92a-3p或转染pcDNA-HOXA13后,细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平降低(P<0.05);HOXA13是miR-92a-3p的靶基因;共转染anti-miR-92a-3p和si-HOXA13可减弱anti-miR-92a-3p对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡的抑制作用(P<0.05)。结论敲低miR-92a-3p可通过靶向调控HOXA13表达抑制细胞凋亡从而减轻高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤。

下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响

目的分析miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响。方法选取下肢动脉粥样硬化闭塞症患者(实验组)及健康体检者(对照组),各60例。取1例截肢患者截肢远端血管,以近端血管为对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测,获得血管组织及人外周血中单核细胞和微泡(MV)中miRNA-199a-3p的表达水平,此外,于细胞对数生长期,分设miRNA-199a-3p inhibitor组、miRNA-199a-3p mimics组、空白对照组,各组设复孔6个,转染miRNA-199a-3p inhibitor、miRNA-199a-3p mimics、FuGENE,分析miRNA-199a-3p对外周血单核细胞的影响。结果动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p表达水平(8.49±3.05)高于正常组织的(3.64±1.20),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组外周血单核细胞、MV中的miRNA-199a-3p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA-199a-3p inhibitor组的外周血单核细胞中的miRNA-199a-3p表达水平低于空白对照组,miRNA-199a-3p mimics组的外周血单核细胞中miRNA-199a-3p表达水平高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。检测Fractalkine、T细胞表达和分泌因子(RANTES)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的mRNA表达水平,miRNA-199a-3p inhibitor组高于空白对照组,miRNA-199a-3p mimics组低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下肢动脉粥样硬化斑块内miRNA-199a-3p通过MV作用于单核细胞,抑制其Fractalkine、RANTES、MCP-1等趋化因子表达,而起到抗炎抗动脉粥样硬化的作用。

miR-92a-3p和miR-25-3p海绵上调Kiss1并影响雌性小鼠的青春期启动及动情周期

下丘脑Kiss1神经元产生的神经肽kisspeptin通过影响促性腺激素释放激素的分泌,参与青春期的启动、生殖系统的成熟以及排卵等过程的神经内分泌调节。Kiss1基因的表达受到包括多种反式调控因子及表观遗传的调控。预测与前期研究表明,miR-92a-3p、miR-25-3p的种子序列能够与Kiss1的3′-UTR直接结合,抑制Kiss1的表达。为进一步研究miR-92a-3p、miR-25-3p在Kiss1表达调控中的作用,本研究分别构建了对miR-92a-3p、miR-25-3p具有抑制作用的特异性吸附海绵载体:sponge-miR-92a和sponge-miR-25,以实现miRNA的功能缺失。流式细胞术和双荧光素酶报告基因系统分别证实,这2个海绵载体均能够非常有效地吸附外源性或内源性靶miRNA。sponge-miR-92a和sponge-miR-25载体被进一步包装成慢病毒LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25。实时荧光定量PCR结果显示,经LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25感染的下丘脑原代神经元细胞中,Kiss1表达水平均显著上调(P<0.05);将LV-sponge-miR-92a注射到下丘脑后,雌性小鼠阴门开启时间明显提前(P<0.05);下丘脑注射LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25扰乱了雌性小鼠的正常动情周期。综上所述,成功构建了能够有效吸附miR-92a-3p、miR-25-3p的海绵载体,证明它们在解除miR-92a-3p、miR-25-3p对Kiss1的抑制中的作用,下丘脑注射海绵对雌性小鼠的阴门开启时间和动情周期均产生一定程度的影响,提示miR-92a-3p、miR-25-3p可能在青春期的启动和生殖成熟过程中发挥重要的作用。