miRNA-93-5p通过调控FBXW7基因参与宫颈癌进展

目的:探究miRNA-93-5p是否可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌进展。方法:收集20例临床宫颈癌患者组织,分组为癌旁组织、宫颈癌组织,RT-qPCR检测宫颈组织中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,并检测人正常宫颈上皮细胞H8、宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33A细胞miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平。选择宫颈癌细胞C33A,分为对照组(正常培养)、miRNA-93-5p抑制组(转染低表达miRNA-93-5p),FBXW7激活组(转染高表达FBXW7),转染48h后收集细胞,RT-qPCR检测各组细胞中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,Western blotting检侧C33A细胞中FBXW7蛋白水平,流式细胞术检测C33A细胞凋亡率,平板克隆检测C33A细胞克隆能力,划痕实验检测C33A细胞迁移能力,Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.001)。与H8细胞相比,Caski、HeLa、C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.05),后续实验中选择C33A宫颈癌细胞株进行研究。与对照组相比,miRNA-93-5p抑制组C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平显著降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.01),细胞迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01),FBXW7蛋白及mRNA水平显著增加(P<0.01)。与对照组相比,FBXW7激活组C33A细胞中FBXW7 mRNA水平显著增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.001),迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01)。结论:miRNA-93-5p可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭水平。

miRNA-93在膀胱癌中的表达及其对T24细胞生物学特性的影响

目的:探讨miRNA-93在膀胱癌中的表达及对人膀胱癌细胞株T24细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法:选取郑州大学附属南阳市中心医院泌尿外科2010年5月至2016年5月收治的79例膀胱癌患者病理组织标本及配对癌旁正常组织,通过qRT-PCR检测miRNA-93的表达水平。沉默miRNA-93后,采用CCK-8法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖和迁移能力的变化及细胞的凋亡情况;Western blotting检测AKT/p-AKT、GSK3β/p-GSK3β蛋白表达水平的变化。结果:miRNA-93在膀胱癌组织及癌细胞中高表达,且表达水平与癌灶大小、淋巴结转移、病理分级及T分期有关(均P<0.05)。沉默miRNA-93后,T24细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),沉默miRNA-93促进T24细胞的凋亡并抑制其迁移;同时,沉默miRNA-93后p-AKT和p-GSK3β的蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。结论:miRNA-93能够促进人膀胱癌细胞株T24细胞的增殖和迁移,并抑制凋亡,其作用机制可能与下调p-AKT、p-GSK3β蛋白表达有关,提示miRNA-93可以作为诊断和靶向治疗膀胱癌的潜在作用位点。

糖尿病肾病患者血清miRNA-93的表达变化及意义

目的探讨miRNA-93在糖尿病肾病患者血清的表达情况及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术分别检测20例糖尿病肾病患者血清和健康对照组血清中miRNA-93的表达变化。分析其与临床病理参数的关系;运用TargetScan等靶基因预测分析软件预测miRNA-93靶基因。结果与健康对照组相比,糖尿病肾病患者血清中miRNA-93低表达(P<0.05);尿毒症组患者血清中miRNA-93较非尿毒症组低表达(P<0.05);生物信息学分析显示为糖尿病肾病中miRNA-93的靶基因为VEGFA、MTHFR、ADRA2B、SDC2、APOB、PPARG。结论 miRNA-93在糖尿病肾病患者血清中低表达,可能通过调控其下游靶基因在糖尿病肾病发生过程中起重要作用。

MiRNA-93-5p对VEGF的转录调控及其与梅花鹿茸细胞增殖的关系

为了探讨miRNA-93-5p对梅花鹿血管内皮生长因子(VEGF)的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系,分离了鹿茸顶端软骨组织细胞,利用Trizol试剂法提取细胞总RNA,反转录合成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3'端非编码区部分序列(3'UTR)特异引物并进行克隆,构建VEGF基因的3'UTR野生型及其突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。再将人工合成的miRNA-93-5p模拟物转染鹿茸软骨细胞,MTT法检测鹿茸细胞体外增殖的变化;Western blotting分析VEGF蛋白的表达丰度。结果表明:成功获得了鹿茸组织VEGF基因的3'UTR序列,野生型序列长度为356 bp,突变体长度为336bp。荧光素酶活性检测结果表明,转染野生型质粒组细胞荧光素酶活性降低,而转染突变体组细胞荧光素酶活性无明显变化。MTT法和Western blotting结果显示,鹿茸细胞的体外增殖受到抑制,VEGF蛋白的表达水平下降,且呈时间依赖性。

miRNA-93在消化系统肿瘤的研究进展

著名遗传学家Lee于1993年首次在秀丽隐杆线虫（C．elegans）中发现了调控胚胎发育的miRs基因Lin-4，之后更多的研究在动植物体中发现了更多的miRs，其中人类基因中已发现的miR总数已超过1000个，这类基因在进化中高度保守，广泛存在于真核细胞中，不仅如此，这类基因还具有调解蛋白质生物合成的作用，对于细胞生物活动的很多环节都有miR基因的参与，如细胞的生长发育、分化、血管形成、凋亡等。

多囊卵巢综合征痰湿证患者血清miRNA-93的表达及意义

目的:分析多囊卵巢综合征痰湿证患者生殖内分泌、糖脂代谢特征及血清中miRNA-93的表达差异,探讨多囊卵巢综合征痰湿证形成机理。方法:选取行体外受精-胚胎移植的不孕患者共44例,其中多囊卵巢综合征痰湿证患者15例(痰湿组)、多囊卵巢综合征非痰湿证患者14例(非痰湿组)、男方因素不孕症患者15例(对照组)。采用实时荧光定量PCR检测患者血清中miRNA-93的表达差异,分析比较3组患者临床资料、实验室指标和血清miRNA-93表达水平的差异。结果:①痰湿组BMI、WHR水平高于非痰湿组患者(P<0.05)。②痰湿组LH、T、HOMA-IR、HDL-C水平较对照组具有显著性差异(P<0.05);非痰湿组LH水平较对照组显著升高(P<0.05);与非痰湿组比较,痰湿组HOMA-IR、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平具有显著性差异(P<0.05)。③3组间血清miRNA-93表达水平具有显著性差异(P<0.05),PCOS患者较对照组表达水平显著升高(P<0.05),PCOS痰湿组较非痰湿组miRNA-93表达亦具有显著性差异(P<0.05)。结论:miRNA-93在多囊卵巢综合征患者,尤其是痰湿证患者血清中特异性高表达,可能参与了多囊卵巢综合征痰湿证的发病过程。

循环miRNA-93在DHEA多囊卵巢综合征大鼠模型中的表达及其意义

目的:通过检测多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠血清与卵巢组织中miRNA-93及血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达水平,探讨循环miRNA-93及靶基因VEGFA在PCOS发生发展过程中的作用机理与诊断价值。方法:选取3~4周龄雌性(SD)大鼠,随机分为实验组和对照组,每组20只。实验组每日颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA),按6mg/100g剂量溶于0.2ml无菌注射用油;对照组每日颈背部皮下注射0.2ml无菌注射用油剂。28天后观察两组大鼠的动情周期、卵巢形态学、性激素、体重、卵巢体积、OGTT血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血脂等代谢相关指标的变化。RT-PCR法检测大鼠血清和卵巢组织中miRNA-93表达,ELISA法检测血清中VEGFA表达,IHC、Western blot法分析卵巢组织中VEGFA蛋白表达量。结果:实验组大鼠失去规律的动情周期,卵巢体积增大,呈多囊样变,血清FSH、T、LH升高,糖耐量异常,空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数明显高于对照组,血清胆固醇、甘油三酯高于对照组,PCOS大鼠模型构建成功。RT-PCR、ELISA、Western blot、IHC等结果显示,miRNA-93及靶基因VEGFA在PCOS大鼠模型的血清、卵巢组织中表达一致且显著升高(P<0.05)。结论:miRNA-93在PCOS大鼠模型血清和卵巢组织中呈高表达,可能通过调控其靶基因VEGFA在PCOS发生发展中起重要作用,在PCOS诊断中循环miRNA-93可能作为一种新型非侵入性的诊断标记物。

miRNA-93在PCOS大鼠血清中的表达

目的运用脱氢表雄酮(DHEA)诱导SD大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型,研究模型大鼠的生殖表型和代谢表型。通过检测多囊卵巢综合征大鼠血清中miRNA-93及血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达水平,探讨循环miRNA-93及靶基因VEGFA在PCOS发生发展过程中的作用机理与诊断价值意义。方法选取3~4周龄雌性(SD)大鼠40只,随机分为观察组和对照组,每组20只,观察组每日每100 g体质量颈背部皮下注射DHEA 6mg;对照组每日颈背部皮下注射0.2 m L注射油剂。28 d后观察两组大鼠动情周期、卵巢形态学、性激素、体质量、卵巢体积、OGTT血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血脂等代谢相关指标的变化。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测大鼠血清中miRNA-93的表达量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中VEGFA的表达。结果观察组大鼠失去规律的动情周期,卵巢体积增大,呈多囊样变,血清FSH、T、LH升高,糖耐量异常,空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数明显高于对照组,血清胆固醇、甘油三酯高于对照组。RT-PCR、ELISA等实验结果显示miRNA-93及靶基因VEGFA在PCOS大鼠模型的血清中表达显著升高(P<0.05)。结论 DHEA可诱导SD大鼠出现与PCOS患者相似的生殖和代谢异常的改变,是研究多囊卵巢综合征生殖及代谢异常的较理想的动物模型。miRNA-93在PCOS大鼠模型血清中高表达,可能通过调控其靶基因VEGFA在PCOS发生发展中起重要作用,在PCOS诊断中循环miRNA-93可以作为一种新型非侵入性诊断标志物。

胃癌患者的血清miRNA-93水平及与临床特征和预后的关系

目的探讨胃癌患者的血清miRNA-93水平及与临床特征和预后的关系。方法选取82例胃癌患者和82例胃部良性疾病患者,分别作为恶性组和良性组,比较两组患者的血清miRNA-93水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析血清miRNA-93水平对胃癌的诊断价值。以血清miRNA-93水平的中位值为界,将胃癌患者分为miRNA-93高表达组和miRNA-93低表达组,比较两组患者的临床特征,采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-93水平与胃癌患者临床特征的相关性。随访3年,记录胃癌患者预后,采用Cox比例风险回归模型分析血清miRNA-93水平与胃癌患者预后的关系。结果恶性组患者血清miRNA-93水平明显高于良性组(P﹤0.01)。血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值,AUC为0.852。miRNA-93高表达组中肿瘤直径≥5 cm、低分化、Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴转移的患者比例均高于miRNA-93低表达组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-93水平与胃癌患者的肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况均呈正相关(P﹤0.01)。miRNA-93高表达组患者预后不良发生率高于miRNA-93低表达组患者(P﹤0.05),血清miRNA-93高表达是胃癌患者预后不良的独立危险因素(OR=2.488,P﹤0.05)。结论血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值,其与胃癌患者的临床特征具有相关性,其高表达是胃癌患者预后不良的危险因素。

miRNA-93调控细胞信号转导与转录激活因子3信号通路影响喉癌细胞机制研究

目的研究miRNA-93调控细胞信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路影响喉癌细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组(miRNA-93组)、联合组(miRNA-93+STAT3组)。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hep-2细胞中STAT3及miRNA93的表达,蛋白质免疫印迹检测Hep-2细胞质粒-细胞信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、周期蛋白依赖性激酶(Cyclins)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)、B淋巴细胞瘤-2、生存素基因的表达。结果转染miRNA-93对STAT3基因mRNA含量无明显影响(P>0.05);转染miRNA-93可明显下调STAT3蛋白(P<0.05)。故而提示miRNA-93于转录后水平调控STAT3基因的表达;3组对Hep-2细胞周期无明显影响(P>0.05);与对照组比较,实验组可明显诱导细胞凋亡(P<0.05);而与实验组比较,联合组可明显抑制细胞凋亡(P<0.05);转染48 h后,与对照组比较,实验组转染miRNA-93后,p-STAT3、Cyclins、c-Myc、CKI、B淋巴细胞瘤-2、生存素基因明显下调,而联合组可使p-STAT3、c-Myc、B淋巴细胞瘤-2表达明显上升。结论 miRNA-93可通过与STAT3基因mRNA93结合而于转录后水平调控该基因的表达,并且通过下调STAT3信号通路的相关蛋白,从而抑制Hep-2细胞凋亡。

多囊卵巢综合征外周血miRNA-93的表达及作用意义

目的探究外周血miRNA-93在PCOS患者的表达情况及临床意义。方法选取本院妇产科就诊的40例PCOS患者为观察组,同时选取50例非PCOS患者为对照组。采用己糖激酶法检测各血清标本中空腹血糖(Fasting blood sugar,FBS);放射免疫法测定总睾酮(Total testosterone,TT)、雄烯二酮(androstenedione)和性激素结合球蛋白(SHBG,sex hormone-binding globulin)的水平,生化分析仪检测血清超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)的水平;电化学发光法测定空腹血清胰岛素(fasting serum insulin,FSI);计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);QRT-PCR检测外周血miRNA-93的表达水平。结果观察组患者血清FSI和TT激素指标均明显升高(P<0.05),且HOMA-IR值也显著高于对照组(P<0.05);观察组血清miRNA-93水平显著高于对照组(P<0.05);PCOS患者血清miRNA-93与胰岛素、HOMA-IR和TT指标均没有明显的相关性;PCOS患者的miRNA-93最佳cutoff值为1.035,其中敏感性70.0%,特异性67.5%,AUC值0.704。结论 PCOS患者血清miRNA-93的表达显著高于对照组,对于PCOS患者miRNA-93的检测将有助于临床上对该疾病的诊断和治疗效果。

基于miRNA探讨补肾健脾方治疗糖尿病肾病的机制研究

目的研究基于miRNA探讨补肾健脾方治疗糖尿病肾病的机制。法前瞻性随机选取2019年10月至2020年10月广东祈福医院内分泌科收治的2型糖尿病肾病3期患者80例,按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组各40例。对照组予糖尿病常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加补肾健脾方。统计分析2组患者治疗前、治疗3个月后的尿微量白蛋白、24 h尿蛋白、miRNA-93、空腹葡萄糖(FPG)、餐后2 h葡萄糖(2 h PBG)、空腹血清C肽、餐后2 h血清C肽、低密度脂蛋白胆固醇(LDC-L)、糖化血红蛋白(HbA1c)值。结果治疗前,2组患者尿微量白蛋白、24 h尿蛋白及miRNA-93表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后,治疗组患者的尿微量白蛋白、24 h尿蛋白水平分别为(0.10±0.03)g/24 h、(0.22±0.03)mg/L,显著低于对照组[(0.22±0.06)g/24 h、(0.26±0.04)mg/L],miRNA-93表达(1.84±0.05)均显著高于对照组(1.15±0.06),差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,2组患者FPG、2 h PBG、空腹血清C肽、餐后2 h血清C肽、LDC-L、HbA1c水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后,治疗组患者的FPG、2 h PBG、LDC-L、HbA1c水平分别为(6.7±1.8)mmol/L、(9.2±1.3)mmol/L、(2.00±0.82)mmol/L、(6.40±1.90)%,显著低于对照组[(7.3±1.2)mmol/L、(11.8±1.4)mmol/L、(2.11±0.44)mmol/L、(7.60±1.30)%],空腹血清C肽、餐后2 h血清C肽水平分别为(2.38±0.21)、(3.06±1.01)μg/L,显著高于对照组[(2.10±0.44)、(2.20±0.07)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在常规治疗基础上加补肾健脾方治疗糖尿病肾病可以提高miRNA-93表达水平,降低尿微量白蛋白、尿蛋白、血糖、血脂水平。miRNA可能作为中间因素参与补肾健脾方对糖尿病肾病尿微量白蛋白的调节作用。

miR-93-5p通过靶向CDKN1A促进多囊卵巢综合征颗粒样瘤细胞KGN的生长增殖

目的:验证CDKN1A是miR-93-5p直接调控的靶基因,阐明miR-93-5p可通过靶向CDKN1A促进人卵巢颗粒样肿瘤细胞系KGN的生长增殖。方法:选取我院2016年6月-2019年6月期间确诊的40例多囊卵巢综合征(PCOS)患者作为研究对象,q RT-PCR检测PCOS病变卵巢组织和病灶旁正常卵巢组织(对照)中miR-93-5p和CDKN1A的表达水平。TargetScan软件用以预测miR-93-5p靶基因,并使CDKN1A所含3’-UTR克隆至目的基因下游(CDKN1A-wt或CDKN1A-mut),并分别与miR-93-5p模拟物(miR-93-5p mimics)以及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因,q RT-PCR和Western blot分别检测转染miR-93-5p mimics及其对照scramble-1、miR-93-5p抑制剂(miR-93-5p inhibitor)及其对照scramble-2后的m RNA和蛋白表达水平。MTT实验验证分别转染miR-93-5p mimics、scramble、CDKN1A质粒(pcDNA3.1-CDKN1A)、空载体vector(pcDNA3.1)、miR-93-5p+CDKN1A质粒、scramble+vector质粒到KGN细胞中后细胞的生长增殖活性。结果:miR-93-5p在PCOS病变卵巢组织中的表达水平显著高于正常卵巢组织,CDKN1A在PCOS患者卵巢组织中的表达水平显著低于正常卵巢组织(均P<0.05)。在共转染miR-93-5p mimics和CDKN1A-wt、scramble和CDKN1A-wt的两组中,与共转染scramble和CDKN1A-wt组相比,共转染miR-93-5p和CDKN1A-wt组的荧光素酶活性强度降低了约40.9%(P<0.05)。转染miR-93-5p mimics后,CDKN1A的m RNA和蛋白表达水平均显著下调(P<0.05);转染miR-93-5p inhibitor后,CDKN1A的m RNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。在细胞增殖实验中,转染miR-93-5p mimics后,KGN细胞的生长速度显著高于scramble组(P<0.05);与vector组比,转染CDKN1A可显著抑制KGN细胞的生长(P<0.05);同时转染miR-93-5p mimics和CDKN1A后,miR-93-5p对细胞增殖的促进作用降低(P<0.05)。结论:miR-93-5p通过靶向调控CDKN1A表达而促进人卵巢颗粒样肿瘤细胞系KGN的生长增殖。