miRNA-95-3p在人结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖、迁移能力的影响

目的探讨miRNA-95-3p在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖、迁移能力的影响。方法收集10例结肠癌患者的结肠癌组织和对应的癌旁正常肠黏膜组织,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测不同组织中miRNA-95-3p的表达情况,CCK-8实验检测转染后SW620细胞的增殖能力,划痕实验检测转染后SW620细胞的体外迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后SW620细胞中p21蛋白的表达情况,双荧光素酶实验检测转染后SW620细胞的荧光素酶活性。结果 miRNA-95-3p在结肠癌组织中的相对表达量明显高于癌旁正常肠黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.01);过表达组SW620细胞的增殖能力、划痕区域相对宽度均明显高于对照组(P<0.01);过表达组SW620细胞中p21蛋白的相对表达量低于对照组(P﹤0.05);4组SW620细胞的荧光素酶活性比较,差异有统计学意义(F=183.16,P<0.01)。结论 miRNA-95-3p在结肠癌组织中的高表达与结肠癌的发生、发展有关。miRNA-95-3p通过抑制p21蛋白的表达,促进结肠癌细胞SW620的增殖和迁移,有望成为结肠癌分子治疗的新靶点。

miRNA-95靶向FOXD1基因对结直肠癌LoVo细胞放射敏感性的影响及其机制

目的:探讨miRNA-95靶向FOXD1基因对结直肠癌loVo细胞放射敏感性的影响及其机制。方法:结直肠癌LoVo细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司,将LoVo细胞分为三组接种于6孔板中,每组3个复孔,实验重复3次,C组(对照组正常LoVo细胞),M组(miRNA-95-mimics转染LoVo细胞),I组(miRNA-95-inhibitions转染LoVo细胞),利用直线加速器6 MV/8 Gy的X射线垂直照射细胞,剂量率3 Gy/min,持续照射12 h后收集细胞。采用RT-PCR法检测LoVo细胞中FOXD1的表达情况,流式细胞术检测LoVo细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中FOXD1蛋白的水平,细胞克隆测定细胞存活率,裸鼠成瘤实验取转染未经X射线照射的C组、M组、I组LoVo细胞细胞悬液,各取0.2 ml分别接种于C组、M组、I组BALB/C-nu雄性裸鼠左下肢足部皮上1次,每组10只,注射2周后,各组选取5只裸鼠进行X射线照射,每天4 Gy照射一次,连续照射15 d,其余小鼠不照射,处死裸鼠并取出肿瘤进行称重。结果:与C组比对,M组FOXD1水平明显升高,I组FOXD1水平明显低于M组、C组(P<0.05);在同样8 Gy照射后,与I组比对,C组和M组loVo细胞凋亡率显著下降(P<0.05);在8 Gy照射后,与I组比对,M组和C组loVo细胞单克隆存活率有上升趋势(P<0.05)。无照射条件下,与M组相比,C组和I组肿瘤体积减少(P均<0.05),与C组比较,I组肿瘤体积减少(P<0.05)。X射线照射15 d后,与无照射组各组裸鼠相比肿瘤体积显著减小(P均<0.05),与M组相比,C组和I组肿瘤体积减少(P<0.05)。结论:miRNA-95低表达可提高LoVo细胞的放射敏感性,促进细胞凋亡,其作用机制可能抑制FOXD1蛋白的活性有关。

miRNA-95在骨肉瘤组织中的表达及其对MG-63细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究miRNA-95在骨肉瘤组织和细胞株中的表达情况及其对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭能力的影响。方法:以实时荧光定量PCR检测15例骨肉瘤组织及其癌旁组织(标本收集自2015年1月至2018年1月青岛市海慈医疗集团外科手术的病例)和骨肉瘤细胞株(MG-63、U2OS、143B和HOS)与正常人成骨细胞株hFOB1.19中的miRNA-95表达。利用Lipofectamine 2000将miRNA-95 mimics和miRNA-95 inhibitors分别转染至人骨肉瘤MG-63细胞株中,并设置miRNANC对照组,CCK-8法检测各组细胞增殖活力变化,流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡变化,Transwell方法检测各组细胞侵袭能力变化,双荧光素酶活性实验检测并验证miRNA-95在MG-63细胞中的靶向基因。结果:miRNA-95在人骨肉瘤组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),在MG-63、U2OS、143B和HOS细胞中的表达水平显著高于hFOB1.19,且在MG-63细胞中表达水平最高(P<0.01)。与miRNA-NC对照组相比,miRNA-95 mimics组中MG-63细胞的增殖活力显著上升、细胞凋亡率显著下降而侵袭率显著上升(均P<0.01)、而miRNA-95 inhibitors组中MG-63细胞增殖活力显著下降、细胞周期被阻滞、细胞凋亡率显著上升而侵袭率显著下降(均P<0.01);miRNA-95在骨肉瘤MG-63细胞中靶向上皮膜蛋白-1(epithelial membrane protein-1,EMP-1)基因发挥作用。结论:miRNA-95在人骨肉瘤组织和细胞中均呈高表达,抑制骨肉瘤MG-63细胞中miRNA-95表达能够促进细胞凋亡进而抑制细胞增殖、细胞周期及侵袭能力,该作用可能通过靶向EMP-1基因而发挥。

LncRNA RSU1P2和miRNA-95在卵巢癌患者组织中的表达及其临床意义

目的 探究LncRNA RSU1P2和miRNA-95在卵巢癌患者组织中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测卵巢癌组织、癌旁组织及良性肿瘤组织中LncRNA RSU1P2和miRNA-95的相对表达量;采用受试者工作曲线(ROC曲线)检测LncRNA RSU1P2和miRNA-95对卵巢癌的诊断价值;并采用χ;检验检测LncRNA RSU1P2和miRNA-95与临床病理特征之间关系。结果 卵巢癌组织中LncRNA RSU1P2和miRNA-95表达明显高于癌旁组织及良性肿瘤组织(P<0.05);lncRNA RSU1P2、miRNA-95及联合分析后对于卵巢癌诊断的ROC曲线下面积AUC为0.840、0.816、0.911;另外lncRNA RSU1P2和miR-95与组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移有有显著相关性(P<0.05)。结论 lncRNA RSU1P2和miR-95在卵巢癌组织高表达,并与卵巢癌的早期诊断潜在分子标记物。

利普液基细胞学联合miRNA-95在FNAC不确定甲状腺结节中的应用价值

目的 探讨液基细胞学联合miRNA-95在甲状腺细针穿刺细胞学(Fine needle aspiration cytology,FNAC)不确定的甲状腺结节中的临床应用价值。 方法 选取2015年1月—2018年12月在连云港市一院进行超声引导下甲状腺细针穿刺标本,对细胞学诊断不确定的甲状腺结节并有手术病理的24例患者进行利普液基细胞学制片(Liquid-PRER,LPT),并应用实时荧光定量聚合酶反应检测穿刺样本中的miRNA-95的表达水平,评价利普液基细胞学联合miRNA-95对FNAC不确定甲状腺结节的诊断价值。 结果 术 后病理确诊为甲状腺癌19例(其中甲状腺乳头状癌17例,甲状腺滤泡状腺癌2例)、良性病变 5例 (滤泡性腺瘤2例、慢性淋巴细胞性甲状腺炎1例、结节性甲状腺肿2例)。与传统细胞涂片(CS)相比,LPT制片获得细胞数量较多,单层分布均匀,结构清晰和涂片背景干净,改善甲状腺癌的阳性诊断率(87.5% vs 70.8%)。恶性甲状腺结节患者FNAC中miRNA-95明显高于良性病变组(2.02±0.54 vs 0.52±0.36, P <0.05),ROC曲线分析提示miRNA-95诊断甲状腺恶性结节的AUC为0.615(95%CI:0.479~0.752),灵敏度70.8%,特异度64.3%;利普液基细胞学和miRNA-95两者联合诊断的准确率优于CS联合miRNA-95(91.7% vs 83.3%)。 结论 miRNA-95在恶性甲状腺结节中表达水平升高,与液基细胞学技术相结合有助于提高甲状腺良恶性肿瘤的诊断效能,值得在临床上推广应用。

miRNA-95在宫颈癌放疗敏感性中的作用及其机制研究

目的 研究miRNA-95在不同放射敏感性的宫颈癌患者肿瘤组织和宫颈癌细胞株中的表达情况及其调控表达后对宫颈癌细胞放射敏感性的影响.方法 分别利用Real-time PCR方法检测放疗敏感患者组20例、 放疗耐受患者组20例的宫颈癌肿瘤组织和辐射抵抗宫颈癌细胞株(HeLa、SiHa)、辐射敏感宫颈癌细胞株(Me180)中miRNA-95的表达情况.利用脂质体2000将miRNA-95 mimics和miRNA-95 inhibitions转染至辐射抵抗的HeLa、SiHa细胞中,分别为miRNA-95mimics组和miRNA-95 inhibition组,同时设置miRNA-NC组为对照.CCk-8方法检测在0、2、4、6、8、10 Gy剂量60 Coγ射线照射下各组宫颈癌细胞的增殖情况;平板单克隆实验检测4 Gy照射后各组宫颈癌细胞单克隆形成能力;流式细胞术检测4 Gy照射后各组宫颈癌细胞凋亡变化;双荧光素酶活性实验检测miRNA-95在宫颈癌细胞中的靶向基因;裸鼠实验检测4 Gy照射后各组宫颈癌裸鼠成瘤的变化.结果 miRNA-95在放疗耐受患者组宫颈癌肿瘤组织中表达显著高于放疗敏感组(t=12.279,P<0.05);miRNA-95在HeLa、SiHa细胞中表达量显著,与Me180细胞比较,差异有统计学意义(t=5.162、7.114,P<0.05);与miRNA-NC组相比,miRNA-95 inhibition组HeLa、SiHa细胞株中miRNA-95表达水平显著下降(t=9.284、8.036,P<0.05),而细胞增殖率显著下降(t=8.273、11.354、13.489、15.396和6.197、9.185、10.994、12.442,P<0.05);单克隆形成率显著下降(t=8.378、7.931,P<0.05);细胞凋亡率显著上升(t=10.265、8.386,P<0.05);miRNA-95 inhibition组裸鼠成瘤重量显著降低(t=8.881、10.037,P<0.05).结论 miRNA-95在放疗敏感的宫颈癌肿瘤组织和辐照敏感的宫颈癌细胞中均呈低表达,而抑制miRNA-95表达水平能够显著提高宫颈癌细胞的辐射敏感性,并通过靶向SGPP1基因从而发挥作用.

microRNA-95与肿瘤发生机制的研究

microRNAs（miRNAs）是一种高度保守的非编码小RNA（约19-24个核苷酸长度），它通过序列特异性的方式来调节特异基因的表达，可以与mRNAs结合引起mRNAs降解或抑制其表达而在基因转录后水平的调控中发挥作用，这种作用既可见于生理水平也可见于病理状态。miRNAs与肿瘤之间存在密切关系，但是其在常见肿瘤中的功能目前尚未阐明。近年来多项研究证实，存在于肿瘤组织和癌旁组织中的某些特异性miRNAs表达呈现差异性，这种差异表达有可能作为肿瘤早期筛选和评估预后的较好指标而应用于临床。miRNA-95是近年来发现的miRNAs中的一个新成员，目前已经有了一定量的研究资料，本文将就miRNA-95在肿瘤发生机制及在某些肿瘤诊断治疗方面应用的研究做一综述。