长链非编码RNA UCA1与miRNA-99b在膀胱癌细胞株和膀胱癌组织表达的相关性分析

目的:验证LncRNA UCA1与miRNA-99b的相关性。方法:采用荧光定量PCR法检测UCA1和miRNA-99b在过表达和敲低表达UCA1的膀胱癌细胞、膀胱癌组织中的表达。结果:在敲低UCA1表达的膀胱癌细胞5637中,UCA1表达下调60%,而miRNA-99b的表达上调250%;在过表达UCA1的膀胱癌细胞UMUC2中,UCA1表达上调410%,而miRNA-99b的表达下调60%;UCA1在膀胱癌中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),而miRNA-99b在膀胱癌中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05);UCA1与miRNA-99b在膀胱癌组织中的表达呈负相关(R=-0.502,P<0.05)。结论:UCA1负向调节miRNA-99b的表达,但是它对miRNA-99b的调节在膀胱癌发生发展中的作用机制还需深入研究。

miRNA-99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力

目的研究miRNA-99b及mTOR在胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤侵袭能力的影响及机制。方法用real-time PCR法检测脑胶质瘤组织与对照脑组织中miRNA-99b及mTOR的表达。miRNA-99b模拟物与野生型或突变型mTOR 3'UTR重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miRNA-99b是否与mTOR基因3'UTR结合。应用real-time PCR法和Western blot检测miRNA-99b模拟物转染U251细胞后,细胞中miRNA-99b、mTOR mRNA和mTOR蛋白的表达,Transwell法检测细胞的侵袭能力。mTOR质粒转染U251细胞后,检测细胞中miRNA-99b的表达及细胞的侵袭能力的变化。统计学分析miRNA-99b表达水平与胶质瘤及预后的相关性。结果脑胶质瘤组织中miRNA-99b表达明显低于对照脑组织,mTOR mRNA表达明显高于对照脑组织;miRNA-99b模拟物和野生型mTOR 3'UTR重组载体共转染的U251细胞的荧光强度明显降低。miRNA-99b模拟物转染后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平上升,而mTOR蛋白及mRNA的表达水平下降,U251细胞及侵袭能力下降。改变mTOR表达后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平无明显变化,升高mTOR表达能够恢复因miRNA-99b抑制的细胞侵袭能力。Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示,低表达miRNA-99b患者的总生存期明显低于高表达组。结论过表达miRNA-99b可能通过靶向调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,miRNA-99b可作为脑胶质瘤的治疗靶点。

卡介苗促进人树突细胞miRNA-99b调控CD^4+初始T淋巴细胞分化为Th17/Treg失衡

目的探究牛型结核分枝杆菌减毒活菌-卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染人树突细胞(Dendritic cells,DCs)对新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞分化的作用。方法使用BCG感染体外培养的人DCs,然后与新生儿脐血CD^4+初始T淋巴细胞共培养,采用qRT-PCR检测DCs中的miRNA-99b表达水平及CD^4+T淋巴细胞中的Foxp3、ROR-γt、IFN-γ及IL-10基因转录水平。利用miRNA-99b反义寡核苷酸转染DCs,与新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞共培养后,再次检测CD^4+T淋巴细胞相关基因转录水平。采用SPSS 15.0对数据进行分析。结果BCG感染的DCs中miRNA-99b基因转录水平明显高于未感染BCG的DCs中的转录水平(t=7.06,P<0.05)。与感染BCG的DCs共培养的CD^4+T淋巴细胞中的IFN-γ基因[(45.61±4.46)比(3.54±1.73),t=32.32,P<0.01]、IL-10基因[(4.17±1.06)比(1.26±0.67),t=2.24,P<0.05]转录水平明显高于与未感染BCG的DCs共培养的CD^4+T淋巴细胞,而ROR-γt基因转录水平低于与未感染BCG的DCs共培养的CD^4+T淋巴细胞[(0.08±0.02)比(0.63±0.10),t=0.42,P<0.01]。与转染NC-siRNA的DCs共培养的CD^4+初始T细胞相比,阻断DCs中miRNA-99b的表达后,共培养的CD^4+初始T淋巴细胞Foxp3基因[(0.12±0.01)比(1.57±0.90),t=1.06,P<0.05]、IFN-γ基因[(0.03±0.01)比(0.64±0.35),t=0.44,P<0.05]、IL-10基因[(0.03±0.01)比(0.76±0.09),t=0.54,P<0.01]表达均降低,ROR-γt基因表达增加[(17.03±5.51)比(1.32±0.14),t=11.54,P<0.01]。结论BCG通过调控DCs中miRNA-99b的表达进而诱导初始CD^4+T淋巴细胞分化为Th17/Treg的失衡,导致感染的发生、发展。

卡介苗感染人树突状细胞对miRNA-99b表达和Th17/Treg分化的影响

目的 探讨牛型分枝杆菌减毒活菌—卡介苗(BCG)感染对人树突状细胞(DCs)microRNA-99b(miRNA-99b)表达的影响及对新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞分化为Th17/Treg的作用。方法 BCG感染体外培养的人树突状细胞,然后与新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞混合培养,qRT-PCR观察人树突状细胞miRNA-99b的表达变化,qRT-PCR检测CD4+T淋巴细胞Foxp3、ROR-γt、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)基因转录水平,观察CD4+T淋巴细胞分化亚型的改变;ELISA法检测培养上清INF-γ、IL-17和IL-23表达水平。结果 BCG感染后,人树突状细胞miRNA-99b基因表达增加(P<0.001);CD4+T淋巴细胞IFN-γ、IL-10基因表达增加(P<0.05),ROR-γt基因表达降低(P<0.05),Foxp3基因转录增加,但差异无统计学意义;感染组培养上清中INF-γ表达水平增加(P<0.001),IL-17和IL-23表达水平均有一定的增加,但差异无统计学意义。结论 结核感染可能通过影响树突状细胞miRNA-99b的表达进而诱导初始CD4+T淋巴细胞分化为Th17/Treg的失衡参与结核病的发病过程。

miR-99b在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达

目的:研究miRNA-99b(miR-99b)在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达。方法:宫颈癌患者55例分别于新辅助化疗前后收集肿瘤组织标本行micRNA的提取、反转录、实时定量PCR检测miR-99b的表达。结果:宫颈癌新辅助化疗后miRNA99b表达显著上升,与治疗前表达比较有统计学差异(P<0.05)。结论:新辅助化疗可通过上调miRNA-99b表达,实现对宫颈癌的抑制。

莫西沙星联合卷曲霉素治疗耐多药肺结核患者的效果

目的:观察莫西沙星联合卷曲霉素对耐多药肺结核患者的效果。方法:选取2020年3月—2023年1月龙岩市第二医院收治的80例耐多药肺结核患者,按照随机数表法分为研究组和对照组,各40例。对照组采用卷曲霉素治疗,研究组在对照组的基础上联用莫西沙星。比较两组的临床疗效、肺功能指标、免疫功能指标、炎症指标及临床症状改善情况。结果:研究组病灶总吸收率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组病灶空洞总闭合率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组PCT、CRP和WBC水平均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、FEV_(1)占用力肺活量(FVC)的百分比(FEV_(1)/FVC%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组FEV_(1)、FEV_(1)/FVC%均高于治疗前,且研究组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组γ干扰素(IFN-γ)、miRNA-99b、腺苷脱氨酶(ADA)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组IFN-γ水平高于治疗前,miRNA-99b、ADA水平低于治疗前,且研究组IFN-γ水平高于对照组,miRNA-99b、ADA水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组日咯血量与日排痰量比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组日咯血量与日排痰量低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:莫西沙星联合卷曲霉素治疗耐多药肺结核效果较好,可有效缓解患者临床症状,抑制炎症反应,改善其肺功能和免疫功能。