FAM 19A 4、PAX 1及miRNA124-2基因启动子区甲基化在宫颈病变早期诊断中的价值

背景与目的:目前有关宫颈病变的DNA甲基化研究较多,但DNA甲基化作为宫颈病变的诊断及分流指标在临床实践中的报道较少。本研究拟探讨FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化在宫颈病变进展中早期诊断的价值。方法:收集2020年3月—2022年3月在郑州大学第三附属医院同时行宫颈液基细胞学(thinprep cytologic test,TCT)和HPV检测的患者的宫颈细胞学标本共129例,采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测不同宫颈病变中FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化改变情况,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估3个基因甲基化改变对宫颈病变的诊断价值。本研究经郑州大学第三附属医院伦理委员会批准(伦理审批编号:2023-135-01)。结果:根据病理学检查结果分为4组:未见上皮内病变或恶性细胞(no intraepithelial lesions or malignant lesions,NILM)组(42例)、低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组(28例)、高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组(36例)和鳞癌(squamous cervical cancer,SCC)组(23例)。随宫颈病变级别的增加,FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因甲基化检出率逐步增高,差异有统计学意义(P均<0.05)。在HSIL组FAM19A4、PAX1、miRNA124-2甲基化检出率分别为81.2%、80.5%和71.8%,在SCC组3种基因甲基化检出率均高达100.0%;细胞学诊断宫颈癌的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.731,诊断灵敏度和特异度分别为65.9%和80.4%;FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因单独诊断HSIL+(HSIL和SCC)时,PAX1甲基化诊断HSIL+的效能最高,AUC为0.925,灵敏度为92.8%,特异度为87.3%;两两联合诊断时,FAM19A4与PAX1联合诊断HSIL+的AUC为0.930,灵敏度为95.7%,特异度为87.1%;FAM19A4与miRNA124-2联合诊断HSIL+,AUC为0.895,灵敏度为97.6%,特异度为85.7%;PAX1联合miRNA124-2诊断HSIL+,AUC为0.928,灵敏度为95.7%,特异度为89.1%;PAX1、FAM19A4及miRNA124-2基因甲基化联合诊断HSIL+,AUC为0.928,灵敏度为100.0%,特异度为81.8%。结论:FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化诊断宫颈病变具有较高的灵敏度和特异度,有潜力成为宫颈病变早期诊断的新指标。

Hsa-miRNA124-3p调控肺癌细胞株NCI-H460增殖和迁移的作用机制

目的·研究hsa-miRNA124-3p调控肺癌细胞NCI-H460增殖和迁移的作用及机制。方法·取临床肺癌及其癌旁组织标本4对,分别检测组织中hsa-miRNA124-3p及Krüppel样因子4(KLF4)蛋白含量。生物信息学预测hsa-miRNA124-3p与KLF4基因3’-UTR有理论结合位点,并通过荧光素酶报告基因实验进行验证。转染pshRNA-Sponge-miRNA124或pshRNA-KLF4到NCI-H460细胞,转染后48 h确定细胞转染效率,MTT检测NCI-H460细胞对数期增殖活性,划线法检测细胞迁移变化。结果·在检测的4对标本中,hsa-miRNA124-3p在肿瘤组织中的含量明显高于癌旁组织(P<0.01),而肺癌组织中KLF4蛋白表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。生物信息学分析结果显示,hsa-miRNA124-3p在KLF4基因3’-UTR有8个碱基的理论结合位点"5’-UGCCUUAA-3’"。荧光素酶活性检测数据显示,hsa-miRNA124-3p可以结合于KLF4基因3’-UTR并对蛋白表达进行负调控。细胞转染后72 h,pshRNA-SpongemiRNA124转染组细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.01),pshRNA-KLF4转染组细胞增殖活性较对照组增强(P<0.05),pshRNASponge-miRNA124与pshRNA-KLF4共转染组细胞增殖活性与对照组比较,无显著差异(P>0.05)。细胞迁移检测数据表明,不同处理组细胞转染后72 h细胞迁移能力变化与增殖活性的变化趋势完全一致。结论·Hsa-miRNA124-3p通过抑制KLF4基因表达,增强NCI-H460细胞的增殖和迁移;敲减细胞内hsa-miRNA124-3p,可以通过上调KLF4蛋白表达抑制NCI-H460细胞增殖和迁移活性。

MALAT1对胶质瘤细胞增殖迁移的作用及其ceRNA机制研究

目的探讨lncRNA MALAT1在胶质瘤细胞增殖侵袭过程的作用及其与miRNA124和CREB的作用机制。方法培养C_6胶质瘤细胞,设计lncRNA MALAT1的siRNA序列和scramble序列,以50nM浓度干预C_6细胞48小时,并设定空白对照组,使用CCK8法检测各组细胞增殖活力;Transwell检测各组细胞侵袭力;QPCR实验检测各组lnc RNA-MALAT1、miRNA124、CREB基因的表达情况;Western Blot实验检测CREB蛋白的表达情况。结果与正常C_6细胞相比,MALAT1 siRNA干预后,C_6细胞活力减弱(P<0.05),侵袭力降低(P<0.05);MALAT1基因表达降低,miRNA124表达升高,同时CREB mRNA表达降低。Western Blot实验结果显示,各组细胞中CREB蛋白表达与mRNA表达一致。结论在胶质瘤细胞中,lnc-MALAT1发挥关键作用,其可通过调控miRNA124的表达,引起CREB基因转录和蛋白表达升高,从而促进C_6胶质瘤细胞增殖。