miR-141及MMP-16对骨性关节炎疼痛及软骨损伤的影响

目的观察miR-141及基质金属蛋白酶-16(MMP-16)对骨性关节炎(OA)疼痛及软骨损伤的影响,并探讨其部分调控机制。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组10只和实验组20只,实验组大鼠利用十字韧带损伤法制作OA模型,分别于术前及手术2周和8周后采用冷痛阈法测定2组大鼠冷痛阈值,HE染色法观察2组大鼠软骨组织结构变化,实时定量PCR法检测大鼠背根神经节组织中miR-141表达情况,免疫组织化学法观察软骨组织中MMP-16蛋白表达情况。结果手术2,8周后,对照组大鼠对冷丙酮刺激的阳性反应次数未见明显变化(P均>0.05);实验组大鼠对丙酮刺激的阳性反应次数明显高于对照组(P<0.05),并且随着时间的延长,阳性反应次明显增加(P<0.05);HE染色显示,手术2周后实验组大鼠软骨细胞结构轻度紊乱伴少量炎性细胞浸润,同时细胞间质出现轻度纤维化;手术8周后,细胞形态基本消失,基质淡染,呈现广泛纤维化。手术2,8周后,实验组大鼠背根神经节组织中miR-141相对表达量和骨组织中MMP-16蛋白表达量均明显高于对照组(P均<0.05),且手术8周后明显高于手术2周后(P<0.05)。结论脊髓背角细胞中的miR-141在OA发展中调节疼痛的发生,而MMP-16促进OA的发展。

lncRNA⁃DINO靶向miR⁃141调控Keap1⁃Nrf2通路促进非小细胞肺癌化疗耐药的机制研究

目的研究lncRNA⁃DINO在非小细胞肺癌(NSCLC)化疗耐药中的作用机制。方法对比耐药的和敏感的NSCLC临床标本,用RT⁃PCR及Western实验检测DINO、miR⁃141、Keap1、Nrf2的表达,探索DINO、miR⁃141的表达与化疗耐药的关系,其次,将A549细胞株和A549/DDP细胞株进行细胞培养,使用Trizol法提取总RNA,用LncRNA芯片对比检测两组细胞株间LncRNA的表达差异。通过在线软件(RNAhybrid)预测和计算,评估DINO与miR⁃141结合可能性的高低。最后将A549细胞株和A549/DDP细胞株进行细胞培养,提取总RNA,RT⁃PCR验证两组细胞株间的DINO、miR⁃141、Keap1、Nrf2、HO⁃1、NQO1。结果耐药的A549/DDP细胞株中DINO表达较敏感的A549细胞显著降低(P<0.05),且DINO是通过与miR⁃141结合而发挥作用的。RT⁃PCR对比检测发现,与A549细胞相比,过表达miR⁃141的A549⁃miR⁃141细胞中Keap1基因表达明显下降(P<0.05),而PTEN和MSH2表达无明显变化。与A549细胞相比,A549⁃miR⁃141细胞中Keap1基因的表达下调,而Nrf2基因和其下游HO⁃1、NQO1基因表达显著上调(P<0.05)。结论非小细胞肺癌中lncRNA⁃DINO可靶向结合miR⁃141,进而调控Keap1⁃Nrf2通路而导致细胞的化疗耐药。