miRNA21抑制物对食管癌细胞凋亡的影响

目的:利用miRNA21抑制物抑制食管癌细胞系ECA-109中miRNA21的表达,观察对ECA-109细胞凋亡的影响,为探讨miRNA21抑制物在食管癌治疗中的应用提供理论参考。方法:以正常培养的ECA-109细胞为空白对照组,转染miRNA21抑制物阴性对照物作为阴性对照组,转染miRNA21抑制物作为实验组,通过MTT法、流式细胞术、实时荧光定量PCR研究miRNA21抑制物对ECA-109细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响。结果:与空白对照组和阴性对照组相比,转染miRNA21抑制物能够显著性地抑制ECA-109细胞的增殖(P<0.05),并且明显提高ECA-109细胞的凋亡率(P<0.05),促进细胞凋亡。同时,转染miRNA21抑制剂的实验组ECA-109细胞中促凋亡基因caspase3、p53、在m RNA水平的表达均显著升高(P<0.05),而抗凋亡基因Bcl-2的表达则被显著抑制(P<0.05)。结论:miRNA21抑制剂能够抑制食管癌细胞ECA-109的增殖,增强促凋亡相关基因的表达,促进癌细胞的凋亡;miRNA21具有明显的原癌基因样功能,可作为食管癌细胞治疗的靶标。

miR-92b-3p抑制物在阿尔兹海默病并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应

目的:评估miR-92b-3p抑制物在阿尔兹海默病(AD)并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应。方法:通过生物信息学方法和双荧光素酶实验筛选解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的调控分子,采用实时定量聚合酶链反应和Western Blot评估miR-92b-3p和ADAM10在神经元细胞和AD并发癫痫动物模型中的表达水平,经鼻腔给药方法给予miR-92b-3p的抑制物,评估其在AD并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应。结果:通过生物信息学方法,双荧光素酶实验,Western Blot条带及其灰度分析,确认miR-92b-3p可转录后调控ADAM10,且在神经元细胞中对ADAM10调控作用较强。与AD动物模型组相比,miR-92b-3p在AD并发癫痫动物模型(AD+EP)组中显著上调。与AD+EP组相比,经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物的治疗组癫痫发生率,Racine 4级以上发生率均显著减少。Racine 4级以上发作的潜伏期显著延长。结论:本研究初步证实miR-92b-3p抑制物在AD并发癫痫动物模型中具有抗癫痫效应。

miR-21抑制物对A549细胞球增殖的影响及机制

目的研究miR-21抑制物在A549细胞球增殖的作用及其相关机制。方法在无血清培养基中培养A549细胞球,形成细胞球后进行CD133+CD44+表达检测。实验分为A549细胞球组:未经处理;IHN组:miR-21抑制物转染A549细胞球组;IHN-NC组:miR-21抑制物阴性对照物转染A549细胞球组。Western印迹检测A549细胞和A549细胞球中DKK2、β-catenin蛋白以及QPCR检测miR-21在两种细胞中的表达;合成miR-21抑制物和阴性对照,分别转染A549细胞球48 h后,应用QPCR检测转染前后miR-21的表达变化,以及使用Western印迹分析DKK2、β-catenin蛋白的表达变化,利用噻唑蓝(MTT)检测12、24、48 h细胞的增殖能力。结果流式细胞术检测A549细胞球中CD133+CD44+阳性率为65.800%;IHN组miR-21的表达以及β-catenin蛋白的表达较A549细胞球组和IHN-NC组显著下调(P<0.05),而DKK2蛋白表达显著升高(P<0.05);MTT结果示IHN组和IHN-NC组在12、24、48 h时抑制率显著高于A549 sphere组(P<0.05),IHN组在24、48 h时相点抑制率明显高于IHN-NC组(P<0.05)。结论miR-21抑制物可有效抑制A549 sphere的增殖,其可能成为治疗肺癌的潜在靶点。

毛蕊异黄酮抑制肺腺癌细胞增殖和迁移的miR-21/PTEN信号通路机制研究

目的:探讨毛蕊异黄酮(CA)通过调控微RNA-21(miR-21)/人类第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)信号通路对肺腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用机制。方法:以人肺腺癌SPC-A1细胞为对象,采用MTT法检测不同剂量CA(5、15、25、50、75、100μg/mL)作用12、24、48、72 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率、30%细胞生长抑制浓度(IC30)和半数抑制浓度(IC50);采用Transwell迁移试验检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/mL)作用24 h后的细胞迁移情况,记录染色细胞数并计算细胞迁移抑制率;采用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应法检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/mL)作用24 h后细胞miR-21以及PTEN、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白及其mRNA的表达情况;检测细胞在分别转染miR-21模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)后,CA(75μg/mL)对其miR-21及PETN、VEGF、MMP-9蛋白表达的影响。结果:经50、75、100μg/mLCA作用12、24、48 h,25、50、75、100μg/mL CA作用72 h后,细胞存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);12~72 h各时间点CA的IC30值分别为82.24、50.45、46.34、31.81μg/mL,IC50值分别为108.06、73.35、70.08、49.89μg/mL。与正常对照组比较,CA各剂量组染色细胞数,低剂量组细胞中VEGF蛋白以及中、高剂量组细胞中miR-21,VEGF、MMP-9蛋白及其mRNA的相对表达量均显著减少或降低,且中、高剂量组显著少于或低于低剂量组,高剂量组显著少于或低于中剂量组(P<0.05或P<0.01);CA各剂量组细胞迁移率以及中、高剂量组细胞中PTEN蛋白及其mRNA的相对表达量均显著升高,且中、高剂量组显著高于低剂量组,高剂量组显著高于中剂量组(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21mimic后,miR-21mimic组细胞miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著升高,PTEN蛋白的相对表达量显著降低(P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较miR-21mimic组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 inhibitor后,miR-21 inhibitor组细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及上述蛋白的表达较miR-21 inhibitor组均未见明显变化(P>0.05)。结论:CA可剂量依赖性地抑制肺腺癌SPC-A1细胞的增殖和迁移,且这种作用可能与调控miR-21/PTEN信号通路有关。

miRNA药物的发展前景

microRNA(miRNA)是一类非编码RNA(ncRNA),在转录后水平调节内源性基因表达。miRNA通过直接或间接上调或下调靶标mRNA的表达,几乎参与体内所有生理和病理过程。miRNA具有易于化学合成和修饰的优点,使其成为具有巨大治疗潜力的主要非编码RNA。本研究梳理miRNA类似物和抑制剂在癌症、心血管疾病、代谢性疾病等领域的的治疗靶点及作用机制,总结miRNA类似物和抑制剂的临床试验进展及优势,讨论miRNA药物治疗的机制、进展和存在的RNA稳定性和递送瓶颈问题及解决方案。尽管目前miRNA药物的发展尚存在一些挑战,但miRNA仍然是制药业中前景光明的靶标。

lncRNA GAS5调控miR-21抑制人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长特异抑制物(GAS)5调控微小RNA-21(miR-21)对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)成骨分化的影响。方法体外培养hBMSC,分为对照组(不转染)、mimic NC组(转染negative control-GAS5)、GAS5 mimic组(转染GAS5 mimic)、siRNA NC组(转染nonsense siRNA)和GAS5 siRNA组(转染GAS5 siRNA),实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组hBMSC中lncRNA GAS5、miR-21及Runt相关转录因子(RUNX)2、骨形态发生蛋白(BMP)2、骨唾液蛋白(BSP)、碱性磷酸酶(ALP)mRNA表达情况;检测各组hBMSC ALP染色情况及ALP活性;Western印迹检测各组hBMSC中RUNX2、BMP2、BSP蛋白表达情况。结果与mimic NC组相比,GAS5 mimic组hBMSC中lncRNA GAS5水平显著升高(P<0.05),ALP染色明显减弱,ALP活性、miR-21、RUNX2、BMP2、BSP、ALP mRNA水平及RUNX2、BMP2、BSP蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与siRNA NC相比,GAS5 siRNA组hBMSC细胞中lncRNA GAS5水平显著降低(P<0.05),ALP染色明显增强,ALP活性、miR-21、RUNX2、BMP2、BSP、ALP mRNA水平及RUNX2、BMP2、BSP蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论lncRNA GAS5可能通过下调miR-21表达进而抑制hBMSC成骨分化过程。

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

p21^(WAF1/CIP1)与大肠癌的相关性研究概况

细胞周期正常有序完成，受控于精密的分子调控机制，细胞周期蛋白激酶抑制物（cyclin kinase inhibitor，CKI）在该机制中起重要作用，细胞增殖抑制基因p21WAF1/CIP1（wide—typep53-activated factor 1．WAF1／cyclin—depedent kinase interacting protein1，CIP1，下述p21概指p21WAF1/CIP1）是CKI所包含的双重组特异性家族（CIP／KIP）的代表，具有广泛细胞周期蛋白依赖激酶（cyclin—dependent kinase，CDK）抑制活性，

芪玉三龙方抑制A549肺癌细胞对miRNA21“成瘾”的机制

目的:探讨芪玉三龙方(QYSL)抑制A549肺癌细胞对微小RNA21(miRNA21)"成瘾"的分子机制。方法:选择人A549肺癌细胞,常规传代培养,分别设置为空白组,空白血清组,含药血清组,干扰小RNA(siRNA)组。制备QYSL含药血清,以前期研究筛选的最佳药物浓度和作用时间进行干预。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)miRNA21及其靶向信号通路第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)相关分子的蛋白及mRNA的表达。结果:与空白血清组比较,含药血清组和siRNA组的miRNA21 mRNA表达显著降低,PTEN mRNA的表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与空白血清组比较,含药血清组和siRNA组的PI3K,雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01),但含药血清组蛋白激酶B(Akt)mRNA的表达无明显差异。与空白血清组比较,含药血清组和siRNA组的PTEN蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);含药血清组磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白表达明显降低(P<0.05),总蛋白Akt,mTOR表达无明显降低,PI3K蛋白的表达降低,但差异无统计学意义。结论:QYSL可抑制miRNA21的转录,使PTEN表达有所上升,下调PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子表达,从而温和抑制肺癌细胞对致癌基因的"成瘾"现象,阻断肺癌细胞增殖。

AD发病机制相关的微小RNA的研究

微小RNA(microRNA,miRNA)是长度在21~25nt的内源性非编码RNA。miRNA调控活性依赖于识别位于mRNA分子上的结合位点,其通过与靶mRNA的3’非翻译区结合并引起靶基因的翻译抑制或降解,在转录后水平调节基因表达。miRNA在许多重要的生物过程中都是至关重要的,也是许多疾病的重要标记物[1]。

The expression and functions of microRNAs in pancreatic adenocarcinoma and hepatocellular carcinoma

Pancreatic adenocarcinoma and hepatocellular carcinoma are devastating human malignancies that are characterized by poor prognosis,late onset,and a lack of known biomarkers.New diagnostic and therapeutic molecular targets are desperately needed to develop novel and effective treatment strategies.MicroRNAs (miRNAs) are an emerging class of molecules with roles in various cellular processes,including growth,survival,and apoptosis.Most importantly,aberrant expression of miRNAs has been implicated in cancer pathogenesis.miRNA expression profiles of pancreatic adenocarcinoma and hepatocellular carcinoma indicate selective overexpression of oncogenic miRNAs and down-regulation of tumor suppressive miRNAs in these cancers.This review summarizes results from key studies conducted to characterize the miRNA expression profiles of pancreatic adenocarcinoma and hepatocellular carcinoma and describes the potential mechanisms by which some oncogenic or tumor suppressive miRNAs act.Furthermore,this review outlines novel therapeutic strategies for targeting miRNAs.

辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响

目的：观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法：设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法（CCK-8）检测辣椒碱（50,100,150,200,250,300μmol·L-1）处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21（p21）和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1（FBI-1）mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平。结果：与空白组比较,辣椒碱（50,100,150,200,250,300μmol·L-1）在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用（P〈0.05,P〈0.01）,并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力（P〈0.01）;与空白组比较,辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平（P〈0.01）,下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平（P〈0.01）。结论：辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关。

Regulation of microRNA on plant development and viral infection

MicroRNAs (miRNAs ) 是非编码规章的 RNAswhich 的约 22 nt 的一个班在优核质是通用的。他们为劈开或翻译压抑由 targetingmRNAs 充当基因表示的否定管理者。miRNAs 广泛地参予与植物联系的基因表示的规定发展过程，例如在植物的机关形态发生和 signaltransduction 小径。类似于在植物的抗病毒的 RNA silencing， miRNA 小径被 silencing 也介入压制病毒编码的 ors。在这评论，我们给调停 miRNA 的规章的小径和调停 siRNA 的 RNA silencing 之间的差别的一篇简短摘要。Inparticular，我们在 miRNA 上考察最近的研究规章的角色在种发展进程，以及干扰病毒在 miRNA 小径压制 ors，试图在真核细胞的有机体把卓见装入基因表达式规定的复杂性。