精浆miR-191-5p、miR-21-5p和miR-320a对体外受精能力的影响及相关性分析

全世界大约10%~15%的育龄夫妇都面临不孕不育难题。其中,40%~50%的不孕不育是由男性因素导致的[1]。随着辅助生殖技术的不断发展,体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)技术已经成为临床上不孕不育治疗的主要途径。体外移植前的胚胎发育越来越成为人们关注的话题。因为它提供了一个独特的视角来了解父方因素通过精子的直接影响,而不受母体体内子宫环境的影响。

COPD中MicRNA-320c-5p调节SERPINA1基因表达的研究

目的通过双荧光素酶报告系统验证miR-320c-5p对SERPINA1基因的靶向调控关系。方法从人正常肺上皮细胞基因组库中获取SERPINA1基因的3′UTR序列,并通过序列匹配拟定候选miRNA。利用3%香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导人支气管上皮细胞(BEAS-2b细胞)建立慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)细胞模型作为实验组,正常培养的BEAS-2b细胞作为对照组,使用实时荧光定量聚合酶链反应(real time flurocent qualitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测两组SERPINA1和候选miRNA的表达水平。构建野生型及突变型双荧光素酶报告基因载体,分别将双荧光素酶报告质粒(psiCHECK-2-SERPINA1-3′UTR和psiCHECK-2-SERPINA1-3′UTR mut)和miRNA质粒(miR-320-5p mimic)共转染到293T细胞,进行荧光活性测定。结果通过序列匹配,拟候选miR-26、miR-210、miR-320c和miR-96为目标miRNA。与对照组相比,实验组SERPINA1基因mRNA表达水平显著上调(P<0.05),四个候选miRNA表达水平均显著下调(P<0.01),其中miR-320c和miR-96更为显著(P<0.001),基于文献miR-320c与COPD的预后相关,挑选miR-320c用于后续双荧光素酶实验。携带micR-320c-5p mimic和SERPINA1野生型3,UTR的构建体的相对荧光素酶活性明显下降(P<0.001),SERPINA1突变型3′UTR的构建体的相对荧光素酶活性无明显下降(P>0.05)。结论SERPINA1在3%CSE诱导的BEAS-2b细胞中表达上调,miR-320c-5p表达下调,miR-320c-5p可能通过负向调控SERPINA1的表达,在COPD的发生发展过程中起重要作用。

血清miR-134-5p和miR-320a检测联合肺功能指标对煤工尘肺患者的早期诊断价值

目的探讨血清miR-134-5p和miR-320a联合肺功能指标对尘肺患者早期临床诊断价值。方法选取煤工尘肺(CWP)患者(CWP组)、煤矿接尘体检人群(接尘组)以及同期健康体检人群(对照组)各40例;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组血清miR-134-5p和miR-320a水平。检测各组受试者的肺功能指标:最大通气量(MVV)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、第3秒用力呼气容积(FEV3)、1秒率(FEV1/FVC)、3秒率(FEV3/FVC)、最大呼气中期流量(MMEF)、峰流速(PEF)、75%呼气流速(MEF75)、50%呼气流速(MEF50)、25%呼气流速(MEF25)、残气量/肺总量(TLC)、功能残气量(FRC)和肺泡通气量(VA);采用Logistic回归分析煤矿接尘相关作业的人群发生CWP的危险因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA联合肺功能指标对CWP患者的早期诊断价值。结果对照组、接尘组和CWP组血清miR-134-5p、miR-320a表达水平,MVV、FEV1、FEV1/FVC、MMEF、MEF50、FRC和VA逐渐降低(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果发现FRC降低是煤矿接尘人群发生CWP的独立危险因素(P<0.05)。miR-134-5p和miR-320a联合肺功能指标FRC预测煤矿接尘相关作业的人群发生CWP的诊断效能较高,AUC为0.975(95%CI:0.948~1.000)。结论血清miR-134-5p、miR-320a和肺功能指标FRC联合对早期CWP的临床诊断具有重要参考价值。

腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测对胃癌腹膜转移的诊断价值

目的探讨腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测对胃癌腹膜转移的诊断价值。方法纳入2017年5月至2020年6月荆门市第二人民医院收治的胃癌患者298例,其中胃癌腹膜转移患者87例作为转移组,胃癌无腹膜转移患者132例作为无转移组,胃癌预后良好患者79例作为对照组。通过实时荧光定量PCR检测受试患者腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达水平。用受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)分析腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测对胃癌腹膜转移的诊断价值。结果转移组腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达水平均高于无转移组和对照组(P<0.05),无转移组与对照组腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测用于鉴别胃癌腹膜转移患者与胃癌无腹膜转移患者的灵敏度分别为93%、91%、92%,特异度分别为93%、92%、91%。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合检测对胃癌腹膜转移诊断的灵敏度为94.25%,特异度为90.99%,准确度为91.95%。结论腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达水平可作为诊断胃癌腹膜转移的潜在标志物。

腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合对胃癌腹膜转移的诊断价值

目的探讨腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合对胃癌腹膜转移的诊断价值。方法纳入2019年5月—2020年6月我院收治的胃癌患者298例,其中胃癌腹膜转移患者87例为研究组、胃癌非腹膜转移患者132例为转移组、胃癌预后良好患者79例为对照组。通过实时荧光定量PCR检测受试人员腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达水平。用受试者工作特征曲线(ROC)的AUC分析腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测在胃癌腹膜转移中的诊断意义。结果研究组患者腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达量均高于转移组和对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05),研究组患者与对照组患者腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p鉴别研究组患者与转移组和对照组患者的灵敏度分别为93%,91%,92%,特异度分别为93%,92%,91%。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合对研究组的诊断的灵敏度为94.25%,特异度为90.99%,准确性为91.95%。结论腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达量检测可作为诊断胃癌腹膜转移的潜在标志。

LncRNA PCAT1对结直肠癌Colo320细胞的影响及作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录本1(PCAT1)对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR检测LncRNA PCAT1、miR-145-5p和肌动蛋白结合蛋白1(FSCN1)在结直肠癌组织、Colo320和5-Fu耐药细胞株中的表达;分析LncRNA PCAT1和miR-145-5p、miR-145-5p和FSCN1之间的作用靶点。检测下调PCAT1、miR-145-5p、FSCN1对Colo320细胞增殖和侵袭的影响;检测5-Fu耐药细胞株细胞活力和凋亡率的变化;检测上调LncRNA PCAT1对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响。结果:结直肠癌组织和Colo320细胞中LncRNA PCAT1和FSCN1表达上调,miR-145-5p表达下调;5-Fu耐药细胞株中LncRNA PCAT1和FSCN1表达下调,miR-145-5p表达上调。LncRNA PCAT1靶向miR-145-5p;miR-145-5p靶向FSCN1。上调LncRNA PCAT1通过miR-145-5p促进Colo320细胞增殖和侵袭。结论:LncRNA PCAT1通过miR-145-5p/FSCN1轴调控Colo320细胞增殖、侵袭及其化疗敏感性。

miR-320a-5p对高脂饮食诱导的小鼠肥胖和IR的影响研究

目的探讨miR-320a-5p对高脂饮食(HFD)诱导的小鼠肥胖和胰岛素抵抗(IR)的影响。方法45只雄性C57BL/6小鼠分为对照(ND)组、HFD组和mmu-miR-320a-5p agomir(MA)组。以HFD喂养8周后,HFD组尾静脉注射20 nmol/L的miRNA激动剂的阴性对照(micrONTM miRNA agomir NC)的100μL磷酸盐缓冲液,MA组注射等量mmu-miR-320a-5p agomir,直至20周。期间监测小鼠体重变化,分析3组小鼠20周腰围、代谢水平、胰岛素耐受实验(IPTT)、口服糖耐量实验(OGTT)情况;苏木素-伊红(HE)染色检测脂肪组织形态学变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组外周血和脂肪组织miR-320a-5p相对表达水平及Pparg、Ppara、Cebpa、Cebpb基因mRNA表达水平;ELISA检测外周血胰岛素样生长因子-1(Igf-1)水平;Western blot检测脂肪组织Igf-1、Phospho-Igf-1-rβ/Irβ(Tyr1131/1146)、Phospho-Irs1(Tyr1222)、Phospho-Gsk3(Ser9)、Phospho-PI3K p85/p55(Tyr458/199)、Phospho-Akt(Thr308)、phospho-FoxO1(Ser256)、Ppar-γ、Gck、G6Pase和Pepkc蛋白表达水平。结果与HFD组比较,MA组小鼠的腰围、内脏脂肪组织(eWAT)湿重、胰岛素水平和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)更低,体温热量输出值、呼吸熵、糖耐量、血糖清除速率和eWAT中miR-320a-5p水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HFD组比较,MA组外周血Igf-1水平,eWAT中Igf-1、Phospho-Igf-1-rβ/Irβ(Tyr1131/1146)、Phospho-Irs1(Tyr1222)、Phospho-Gsk3β(Ser9)、Phospho-PI3K p85/p55(Tyr458/199)、Phospho-Akt(Thr308)、Gck、G6Pase和Pepck蛋白及Pparg、Ppara、Cebpa和Cebpb基因mRNA水平更低,Phospho-FoxO1(Ser256)水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-320a-5p可抑制HFD小鼠的肥胖和IR。