MicRNA-126与肝癌细胞增殖、凋亡的关系研究

目的分析探究micRNA-126与肝癌细胞增殖、凋亡的关系,并筛查作用机制。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7以及人肝细胞株L02,将HepG2、MHCC97-L细胞随机分为micRNA-126 mimics组(转染micRNA-126 mimics)、micRNA-126 NC组(转染阴性对照序列)和control组(不转染任何序列),RT-PCR法检测人肝癌细胞株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7中micRNA-126表达水平以及过表达micRNA-126后HepG2、MHCC97-L中micRNA-126表达水平,MTT法检测HepG2、MHCC97-L细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,Western blot法检测PIK3R2、PI3K、PDK1、AKT、p-PI3K、p-PDK1、p-AKT蛋白水平,建立裸鼠皮下成瘤模型并观察过表达micRNA-126对肿瘤生长的影响,生物信息学软件预测micRNA-126与PIK3R2的靶向关系,采用荧光素酶实验进一步验证micRNA-126与PIK3R2的靶向关系。结果人肝癌细胞株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7中micRNA-126表达水平显著低于人肝细胞株L02,且差异有统计学意义(P<0.05);micRNA-126 mimics组HepG2、MHCC97-L细胞中micRNA-126表达水平显著高于control组和micRNA-126 NC组,且差异有统计学意义(P<0.05);MTT法检测结果显示,在24 h、48 h、72 h以及96 h时,micRNA-126 mimics组HepG2、MHCC97-L细胞增殖率显著高低于control组和micRNA-126 NC组,且差异均有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,micRNA-126 mimics组HepG2、MHCC97-L细胞凋亡率显著高于control组和micRNA-126 NC组,且差异均有统计学意义(P<0.05);过表达组裸鼠肿瘤体积显著小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);micRNA-126 mimics组PIK3R2、p-PI3K/PI3K、p-PDK1/PDK1、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著低于control组和micRNA-126 NC组(P<0.05);PIK3R2为肝癌细胞中micRNA-126的靶基因,与转染WT荧光素酶质粒mimic NC组相比,共转染WT荧光素酶质粒micRNA-126 mimic组荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而转染MUT荧光素酶质粒mimic NC组和共转染MUT荧光素酶质粒micRNA-126 mimic组荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝癌细胞中micRNA-126下调表达,肝癌细胞中PIK3R2可能是micRNA-126的潜在靶基因,micRNA-126可能靶向负调控PIK3R2表达,抑制肝癌细胞增殖及促进其凋亡。

MicRNA-124可能通过PI3K/Akt通路调节缺血脑组织细胞凋亡

目的探讨脑缺血环境下对micRNA-124表达的影响。方法采用Western blot、荧光定量PCR技术检测脑缺血后缺血皮质区不同时间点bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1、micRNA-124蛋白或基因的表达水平。结果缺血脑组织细胞micRNA-124基因表达量与调控细胞凋亡指标bax、bcl-2、caspase-3增高一致;bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1活化片段蛋白表达量逐渐升高,在随后观察的时点内持续处于高表达状态(P<0.01)。结论 micRNA-124可能参与缺氧致脑组织细胞凋亡的过程,其机制可能是通过PI3K/Akt通路,激活或抑制bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1其中一个或是多个基因调节缺氧脑组织细胞凋亡。

肺泡灌洗液中MicRNA表达谱分析在重症肺炎中的应用

目的探讨ICU中重症肺炎患者肺泡灌洗液中微小RNA(MicRNA)表达与重症肺炎的关系。方法采用MicRNA芯片技术对5例重症肺炎患者和5例非呼吸道感染术后患者的肺泡灌洗液MicRNA进行筛选,最终筛选出其中上调表达、下调表达的MicRNA;再通过RT-PCR的方法,验证上述芯片检测的结果。结果建立重症肺炎患者肺泡灌洗液的MicRNA异常表达谱,从中筛选出40个上调表达的MicRNA和113个下调表达的MicRNA。通过与非呼吸道感染患者对比,重症肺炎组上调表达基因miR-3686、miR-4455及下调表达基因miR-1323、miR-127-5p差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-3686、miR-4455、miR-1323、miR-127-5p在重症肺炎患者的肺泡灌洗液中明显表达,提示其与重症肺炎的发生有一定的相关性。

micRNA和siRNA基因调控技术研究进展

micRNA和siRNA基因调控技术不仅改变了基因的调控只有通过蛋白质与核酸的相互作用才能实现的认识 ,而且可以作为一种简单有效替代基因敲除的技术 ,在功能基因组研究、基因治疗等领域得到了越来越多的重视。本文就micRNA和siRNA基因调控技术的概念、原理与方法、应用的最新进展等方面进行综述。

结直肠癌肿瘤组织中IncRNA-MVIH和micRNA的表达及早期诊断意义

目的探讨结直肠癌患者肿瘤组织中IncRNA-MVIH、micRNA-141和micRNA-363的表达及早期诊断的意义。方法选取2015年1月至2017年9月间上海市第二军医大学附属公利医院普外科收治的67例结直肠癌患者,取患者术后病理肿瘤组织和肿瘤旁正常组织(距癌组织5cm外),检测IncRNA-MVIH、micRNA-141和micRNA-363的表达水平。结果肿瘤组织中的micRNA-141和micRNA-363表达水平显著低于肿瘤旁正常组织,肿瘤组织中的IncRNA-MVIH水平显著高于肿瘤旁正常组织,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。Spearman相关性分析显示,micRNA-141和mi NA-363的水平与肿瘤组织呈负相关,IncRNA-MVIH的水平与肿瘤组织呈正相关,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。Logistic回归分析结果表明,IncRNA-MVIH、micRNA-141和micRNA-363是肿瘤组织的独立危险因素,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。IncRNA-MVIH、micRNA-141和micRNA-363单独诊断的ROC曲线下面积分别为0. 799、0. 765和0. 733,三者联合检测的曲线下面积为0. 906,具有较高的诊断价值,敏感度和特异度分别为89. 9%和71. 1%。结论 IncRNA-MVIH、micRNA-141和micRNA-363水平均与结直肠癌有较大的关系,可作为早期诊断的标志物,联合检测的诊断率和敏感度更高,可在临床上应用。

C-myc与肺鳞癌中miRNA-21表达的关系

目的：检测肺鳞癌组织中miRNA-21和癌基因C-myc的表达,探讨两者的相关性及其临床意义.方法：采用实时荧光定量PCR（RQ-PCR）和免疫印迹检测25例肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中miRNA-21及C-myc蛋白的表达水平,分析两者与临床病理指标的关系.结果：肺鳞癌组织中miRNA-21的表达及C-myc的表达均高于癌旁正常组织,在低分化肺鳞癌组织中的表达水平与高分化肺鳞癌组织相比,差异无统计学意义.miRNA-21及C-myc在转移癌组织中表达水平显著高于非转移癌组织.肺鳞癌组织中miRNA-21表达量与C-myc阳性表达存在正相关.结论：miRNA-21和C-myc在肺鳞癌中表达上调,可能与肺癌的发生与演进相关.

血小板微粒释放及对肿瘤作用的研究进展

随着单采血小板保存时间的延长,血小板活化增加,血小板微粒释放增多。血小板微粒是直径为100 nm-1μm的活化的血小板膜脱落的囊泡,具有细胞间信息传递的作用,是血小板功能的延伸,具有促凝、促进炎症反应和促进肿瘤浸润和转移,影响肿瘤细胞生长等作用。血小板微粒中含有微粒内有蛋白、线粒体、mRNA、miRNA和其他非编码RNA等物质调节自身的功能。血小板微粒能释放和运输生长因子、细胞受体、micRNA和促进炎性细胞因子,促进肿瘤的浸润和转移,影响肿瘤的增值。血小板微粒通过MAPK、MMPs和EMT等途径影响肿瘤细胞释放外泌体。研究表明血小板微粒中多种miRNA参与肿瘤增值和转移的调控作用。

植物发育生物学研究与展望

植物个体的发育是受多基因精细调控的复杂过程,从胚胎发育开始到植株衰老死亡,每一步都包含了许多的发育事件,利用生物科学中其他学科的理论基础和先进的生物学技术,从分子水平对植物发育过程进行研究,将有助于人类更加深入地了解和揭示植物界各个发育事件的发生机理,从而为生产实践创造更广阔的应用前景。本文从胚胎发育、器官发育、生殖生长的调控、衰老与死亡几个方面总结了植物发育生物学的研究进展,并提出了一些尚待解决的问题。

miRNA-21在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义

目的检测人甲状腺乳头状癌标本中微小RNA（miRNA）-21的表达，并探讨其意义。方法采用miRNA芯片技术和TaqMan探针荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法，分别检测miRNA-21在3例和20例甲状腺乳头状癌和癌旁组织标本中的表达。结果应用miRNAs芯片技术，对甲状腺乳头状癌标本进行检测，与癌旁组织比较，甲状腺乳头状癌筛选出的miRNA-21表达上调有统计学意义（P〈0．01）；应用荧光定量PCR技术，检测出甲状腺乳头状癌标本中miRNA-21的平均表达水平较癌旁组织上调（3．97±1．29）倍，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miRNA-21显著高表达可能在甲状腺乳头状癌发生发展过程中起着重要的作用；miRNA芯片技术和TaqMan探针荧光定量PCR方法对minRNA21的检测结果具有一致性。

微小RNA-132对体内外肝癌细胞侵袭和转移的影响

目的观察微小RNA-132（miR-132）对体内外人肝癌细胞侵袭和转移的影响，初步探讨其作用机制。方法实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（实时-qPCR）检测miR-132在4种肝癌细胞株（MHCC97H、HCCLYH、MHCC97L和SMMC-7721）、人正常肝细胞株HL-7702以及20例发生转移的肝癌组织和25例未发生转移肝癌组织中的表达。采用划痕实验、Transwell小室实验和经裸鼠尾静脉注射肝癌细胞形成的肝癌肺转移模型检验转染miR-132后对体内外肝癌MHCC97H细胞侵袭和转移的影响。蛋白印迹检测体外MHCC97H细胞中钙黏蛋白E（E-cadherin）、钙黏蛋白α（α-eadhefin）、波形蛋白（vimentin）、纤连蛋白（fibronectin）和锌指E盒结合同源盒蛋白2（zincfingerE-boxbindingho-meoboxprotein2，ZEB2）蛋白的表达。免疫组织化学法检测肝癌肺转移灶组织中ZEB2的表达。结果miR．132在4种肝癌细胞株中的表达均明显低于人正常肝细胞（P〈0．05），在伴转移肝癌组织中miR-132的表达明显低于未转移肝癌组织，差异有统计学意义（P〈0．05）。在体外实验，转染组细胞中miR-132的表达明显升高，细胞迁移和侵袭明显抑制，与对照组相比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。转染组细胞中E-cadherin和α-eadhefin蛋白表达上调，而vimentin、fibronectin和ZEB2蛋白的表达下调，与对照组相比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在体内实验中，转染组裸鼠肺转移灶数目明显减少，ZEB2蛋白表达下调。结论miR-132对体内外肝癌细胞侵袭和转移有明显抑制作用，有望成为肝癌治疗的新靶点。

猪传染性胃肠炎病毒感染相关猪源miRNA的筛选及表达差异分析

经生物信息学预测发现猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)3′UTR可能是ssc-miR-182的潜在作用位点,本研究以猪传染性胃肠炎病毒为研究对象,构建TGEV 3′UTR双荧光素酶报告基因载体,并将其与合成的ssc-miR-182模拟体瞬时共转染至猪小肠上皮细胞,通过荧光监测仪测定荧光素酶活性;同时通过荧光定量PCR方法检测TGEV感染猪小肠上皮细胞后在不同时间段ssc-miR-182的表达变化情况。研究结果显示,ssc-miR-182对TGEV 3′UTR有一定的抑制作用,并且TGEV在感染小肠上皮细胞以后ssc-miR-182的表达明显上调。结果表明,宿主ssc-miR-182与TGEV的感染和复制增殖相关。

miRNA在前列腺癌骨转移中的研究进展

骨转移是前列腺癌(PCa)最常见的远处转移位点之一,近年来对于PCa骨转移方面的临床诊断以及治疗的研究已经取得了巨大的成果,但其仍是影响PCa患者生活质量的重大因素之一,同时也给患者带来了巨大的经济负担。近年来,MicroRNA(miRNA)已成为肿瘤扣关研究的热点,越來越多的证据表明其在调控基因表达中起到重要作用,是肿瘤发生和发展的关键参与者本文就近年来miRNA在PCa骨转移相关领域的研究进展作一综述。