鱼类外周血淋巴细胞的分离技术

通过对分离草鱼（ Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ ｉｄｅｌｌａ） 外周血淋巴细胞技术的探索，发现用相对体积质量为１ ．０８０ ～１ ．０８５ 的Ｆｉｃｏｌｌ－ Ｕｒｏｇｒａｆｉｎ 分层液可将草鱼外周血中淋巴细胞１００ ％ 地分离出来，这对进一步研究鱼类淋巴细胞的结构、功能具有重要意义。同时测得草鱼各类血细胞的相对体积质量：淋巴细胞为１ ．０７７ ±０ ．００２ ，粒细胞为１ ．０９６ ±０ ．００３ ，红细胞为１ ．１１１ ±０ ．００２ 。

牛蛙外周血液淋巴细胞的分离及观察

对牛蛙外周血液细胞进行了分离，结果表明相对密度1．060～1．065的Percoll分离液能有效分离出淋巴细胞，其分离率可达（94．50±1．87）％。

X射线低剂量多次辐射对小鼠外周血淋巴细胞的影响

为了评估低剂量多次辐射对健康机体产生的生物学风险。检测了X射线多次照射对BALB/c小鼠免疫系统的影响。采用X射线全身多次照射,第1天照射0.07 Gy,之后每天照射0.08 Gy共12d,剂量率0.2 Gy/min,累积剂量为0、0.07、0.23、0.39、0.55、0.71、0.87和1.03 Gy时取样。照射24 h后取血,用流式细胞仪检测外周血中免疫细胞周期和死亡的变化。结果表明。外周血淋巴细胞的周期在0.39和1.03 Gy时,被阻滞在G_2/M期,在0.07、0.23、0.71和0.87Gy时,被阻滞在G_0/G_1期;细胞的死亡随着累积剂量的增加而增加,在0.71Gy时达到峰值。经过X射线多次全身照射小鼠后,可引起外周血淋巴细胞周期和死亡比例发生变化,符合线性平方模型,造成其免疫系统一定的损伤。

地黄合剂对多发性硬化患者外周血及脑脊液中T淋巴细胞亚群的影响

目的 :观察地黄合剂对多发性硬化 (MS)患者外周血 (PB)及脑脊液 (CSF)中T淋巴细胞亚群的影响。方法 :采用流式细胞仪检测 45例MS患者在采用地黄合剂治疗前后PB及CSF中T淋巴细胞亚群 ,并进行神经功能障碍 (EDSS)评分以及复发次数的统计。 30例神经内科诊治的功能性疾病患者作为对照组。结果 :MS患者PB中CD+ 8细胞显著低于对照组 ,CD4 + /CD8+ 比值明显升高 ;CSF中CD3+ 、CD4 + 细胞明显高于对照组及PB ,CD8+ 细胞显著低于对照组及PB ,而CD4 + /CD8+ 比值明显高于对照组及PB。地黄合剂能升高PB及CSF中CD8+ 细胞 ,降低CSF中CD4 + 细胞以及CSF和PB中CD4 + /CD8+ 比值。在采用地黄合剂治疗后 ,EDSS评分降低。复发次数减少。结论 :地黄合剂对MS患者PB和中枢神经系统中异常的细胞免疫功能具有有效的调节作用。

镉、铅、锰和铬对小鼠免疫功能的影响

采用外周血淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)和血清溶血素测定法研究了镉、铅、锰和铬对小鼠体内免疫功能的影响。结果显示,小鼠连续自由饮用不同浓度的硫酸镉(0.02,0.09,0.45mmol/L),硝酸铅(0.15,0.77,3.86mmol/L),硫酸锰(0.06,0.28,1.42mmol/L)和重铬酸钾(0.01,0.04,0.23mmol/L)溶液7d后,T淋巴细胞ANAE阳性率比对照组明显降低,而血清溶血素水平无明显影响;但连续饮用15d后,血清溶血素水平比对照组降低。表明镉、铅、锰和铬对小鼠细胞和体液免疫功能均具有不同程度的免疫毒性作用,对细胞免疫功能的抑制早于对体液免疫功能的抑制。

外周血不同制备法对检测两种性病患者淋巴细胞免疫表型的影响

目的:探讨流式细胞术中的裂解全血法和分离淋巴细胞法对检测尖锐湿疣(CA)和复发性生殖器疱疹(RGH)患者外周血淋巴细胞免疫表型实验结果的影响。方法:采用单色、双色和三色荧光抗体染色技术经流式细胞仪分别检测20例RGH、CA患者的裂解全血及10例RGH、CA患者的分离淋巴细胞中的CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD40抗原、CD40L抗原、T细胞αβ链(Tαβ)和T细胞γδ链(Tγδ)染色阳性细胞百分率。结果:裂解全血法和分离淋巴细胞法分析淋巴细胞免疫表型结果,除CD40L(P=0.89)没有显著性差异以外,其余均有显著性差异(分别为CD3+T:P<0.01,CD4+T:P<0.05,CD8+T:P<0.05,CD40:P<0.05,Tαβ:P<0.001,Tγδ:P<0.05)。结论:CA和RGH患者外周血不同制备方法影响淋巴细胞免疫表型结果分析,裂解全血法优于分离淋巴细胞法。

猪瘟基因疫苗免疫小鼠外周血细胞免疫动态变化研究

应用FACS、MTT法对猪瘟基因疫苗pcDST、pcDSW免疫鼠外围血中CD+4 和CD+8淋巴细胞数、淋巴细胞的转化功能等动态变化进行了观察。结果 :pcDST、pcDSW猪瘟基因疫苗免疫小鼠后 ,小鼠的外周血淋巴细胞对LPS有强烈的反应性 ,CD+4 细胞数量增加 ,外周血淋巴细胞CD8+ 细胞数量在一段时间内增加 ,。CD+4 和CD+8细胞数量在免疫后 32天达到高峰后开始下降。表明pcDST、pcDSW质粒免疫小鼠后诱发免疫反应。

关于毒氟磷安全性评价的彗星试验分析

为了研究毒氟磷致小鼠遗传毒性,试验将小鼠外周血淋巴细胞悬液随机分成5组,第1组为D-Hank’s阴性对照组;第2,3,4组为试验组,分别用30%毒氟磷可湿性粉剂按1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L剂量进行体外染毒;第5组为10μmol/L阿霉素阳性对照组。通过MTT法测定毒氟磷对细胞的增殖抑制作用,并对DNA损伤进行彗星试验(SCGE)分析。结果表明:1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L毒氟磷对细胞的抑制率分别为(6.751±0.021)%、(11.521±0.009)%、(16.254±0.022)%;5 mg/L毒氟磷可致小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤,随着染毒剂量的增加DNA受损程度加剧,呈现剂量-效应关系。

IL-2激活的正常人PBL裸鼠体内抗肿瘤作用的研究

给裸鼠尾静脉注射Anip973人肺腺癌细胞造成人工肺转移癌模型。应用IL-2激活的PBL细胞进行体外扩增,诱导出具有杀伤活性的淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞),对裸鼠体内抗肿瘤作用进行研究。结果表明注入新鲜淋巴细胞组和单纯注入IL-2组均不能明显抑制肿癌的肺转移,单纯注入LAK细胞组可抑制肿瘤的肺转移,LAK细胞与IL-2同时注射时抑制肺癌转移率比LAK细胞组明显提高。病理检查证实了经LAK细胞和IL-2同时治疗的裸鼠,肺转移癌结节明显减少。LAK细胞与rIL-2伍用亦可显著延长荷瘤裸鼠的生存期。

叶尔羌高原鳅外周血淋巴细胞的分离

以体质健康的叶尔羌高原鳅为研究对象,分离其外周血淋巴细胞。结果表明,采用浓度为1.085g/mL的淋巴细胞分离液在2000r/min离心35min的情况下,可将叶尔羌高原鳅外周血淋巴细胞有效地分离出来。该研究不仅为叶尔羌高原鳅淋巴细胞功能研究提供了依据,还可为叶尔羌高原鳅的疾病防治、人工养殖提供重要参考。

地黄合剂对多发性硬化患者外周血及脑脊液中T淋巴细胞亚群的影响

目的 :观察地黄合剂对多发性硬化 (MS)患者外周血 (PB)及脑脊液 (CSF)中T淋巴细胞亚群的影响。方法 :采用流式细胞仪检测 4 5例MS患者在采用地黄合剂治疗前后PB及CSF中T淋巴细胞亚群 ,并进行神经功能障碍 (EDSS)评分以及复发次数的统计。 30例神经内科诊治的功能性疾病患者作为对照组。结果 :MS患者PB中CD8+ 细胞显著低于对照组 ,CD4+ CD8+ 比值明显升高 ;CSF中CD3+ 、CD4+ 细胞明显高于对照组及PB ,CD8+ 细胞显著低于对照组及PB ,而CD4+ CD8+比值明显高于对照组及PB(以上P均 <0 0 1)。地黄合剂能升高PB及CSF中CD8+ 细胞 ,降低CSF中CD4+ 细胞以及CSF和PB中CD4+ CD8+ 比值 (以上P均 <0 0 5 )。在采用地黄合剂治疗后 ,EDSS评分降低 (P <0 0 1) ,复发次数减少 (P <0 0 1)。结论 :地黄合剂对MS患者PB和中枢神经系统中异常的细胞免疫功能具有有效的调节作用。

二陈汤及其不同组方对Lewis肺癌小鼠免疫功能的影响

目的探讨二陈汤其不同组方对Lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。方法60只C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌小鼠模型,随机分为模型组、二陈汤组、二陈汤益气养阴组(二陈汤加生黄芪、知母)、二陈汤解毒散结组(二陈汤加山慈菇、姜黄)、二陈汤破血逐瘀组(二陈汤加三棱、莪术)、顺铂组,每组各10只。模型组灌胃生理盐水,二陈汤及其组方分别灌胃二陈汤及相应组方溶液,顺铂组腹腔注射顺铂溶液,每日1次,连用3天,同时灌胃生理盐水,每日1次,连续12天。测量小鼠重、脾重和胸腺重,计算脾指数和胸腺指数;全自动血液流变测试仪测定外周血细胞数量;流式细胞术测定小鼠脾脏T淋巴细胞亚群水平;CCK-8法测定脾淋巴细胞增殖能力。结果与模型组相比,二陈汤及其组方脾淋巴细胞刺激指数均显著升高,顺铂组明显下降,二陈汤组脾指数、胸腺指数、外周血细胞及CD3^+、CD4^+、CD8^+显著增高,益气养阴组脾指数、白细胞、血小板及CD4^+升高,解毒散结组外周血细胞及CD3^+、CD4^+显著增高,破血逐瘀组胸腺指数、外周血细胞及CD3^+、CD4^+增高,顺铂组红细胞、血小板及CD4^+/CD8^+增高;与顺铂组相比,二陈汤及其组方脾指数、刺激指数及白细胞均显著升高,二陈汤组红细胞及CD3^+、CD4^+、CD8^+显著升高,破血逐瘀组CD8^+升高,CD4^+/CD8^+方面,二陈汤组、益气养阴组、破血逐瘀组均降低;二陈汤及其组方间比较,二陈汤组胸腺指数及CD3^+、CD4^+均显著高于益气养阴组,二陈汤组CD3^+高于解毒散结组,二陈汤组CD3^+、CD4^+高于破血逐瘀组,破血逐瘀组胸腺指数高于益气养阴组,解毒散结组CD4^+/CD8^+高于破血逐瘀组。以上差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论二陈汤及其不同组方均对Lewis肺癌小鼠的免疫功能指标有不同程度的提高,均可增加机体免疫功能,其中,以二陈汤增强免疫功能的作用最为明显。

机化性肺炎患者T淋巴细胞亚群分析的临床意义

目的检测机化性肺炎患者支气管肺泡灌洗液(BALF)及外周血中T淋巴细胞亚群,探讨其在机化性肺炎诊断中的价值。方法选择2013—2019年武警特色医学中心收治的45例机化性肺炎患者及同期30名健康体检者作为研究对象,分别纳入观察组和对照组。使用流式细胞术检测所有研究对象BALF及外周血中T细胞亚群(包括CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)),比较两组上述指标差异。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)并计算ROC曲线下面积(AUC),考察T淋巴细胞亚群对机化性肺炎的诊断效能。结果观察组BALF和外周血中CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比值均明显低于对照组,CD3^(+)CD8^(+)明显高于对照组[BALF中:CD3^(+)CD4^(+):(29.86±1.44)%比(36.17±0.87)%,CD4^(+)/CD8^(+):0.670±0.053比1.242±0.066,CD3^(+)CD8^(+):(51.69±2.02)%比(30.55±1.22)%;外周血中:CD3^(+)CD4^(+):(29.23±1.49)%比(35.17±1.38)%,CD4^(+)/CD8^(+):0.810±0.067比1.279±0.104,CD3^(+)CD8^(+):(36.64±1.76)%比(30.31±1.03)%;均P<0.05];观察组BALF中CD3^(+)和CD3^(+)CD8^(+)明显高于PB[观察组CD3^(+):(84.61±1.54)%比(71.91±1.41)%,CD3^(+)CD8^(+):(51.69±2.02)%比(36.64±1.76)%,均P<0.05]。BALF中T细胞亚群诊断机化性肺炎的AUC为0.892[95%可信区间(95%CI)为0.808~0.963],明显高于外周血(AUC为0.747,95%CI为0.628~0.866),差异有统计学意义(P<0.05)。结论BALF及外周血中T淋巴细胞亚群分析对诊断机化性肺炎有一定意义。

抗富亮氨酸胶质瘤失活蛋白1抗体脑炎复发的影响因素

目的探究影响抗富亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI1)抗体脑炎复发的因素。方法回顾性收集郑州大学第一附属医院2017年5月至2021年10月确诊为抗LGI1抗体脑炎的40例患者的临床资料,出院后随访至少7个月,根据患者随访期间是否复发将选入病例分为复发组和未复发组,其中复发组12例,未复发组28例。收集所有患者的一般资料、临床特征、检查检验结果,对两组之间各项指标进行单因素分析,根据统计结果进行多因素logistic回归分析筛选抗LGI1抗体脑炎复发的影响因素。结果单因素分析结果示,复发组脑脊液淋巴细胞、血清免疫球蛋白、外周血淋巴细胞和嗜碱性粒细胞低于未复发组,且差异具有统计学意义(P<0.05),复发组脑脊液单核细胞、外周血中性粒细胞高于未复发组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者的性别、年龄、起病方式、是否重症以及基础疾病之间的差异无统计学意义(P>0.05)。多因素logistic回归分析示脑脊液单核细胞、外周血淋巴细胞(OR=1.231,0.800,P<0.05)是抗LGI1抗体脑炎复发的独立危险因素。结论脑脊液单核细胞偏高及外周血淋巴细胞偏低是抗LGI1抗体脑炎复发的独立危险因素。

两种不同淋巴细胞分离液对脐带血单核细胞的提取及后期诱导培养CIK细胞的影响

目的:研究两种不同的淋巴细胞分离液对脐带血单核细胞的分离效果及后期对CIK细胞的诱导培养的影响。方法:分别使用国产TBD以及进口GE healthcare牌淋巴细胞分离液分离提取脐带血单核细胞,用悬浮细胞培养法诱导培养脐带血单核细胞形成CIK细胞,再用血球计数板及台盼兰染色法检测细胞密度及活率。结果:国产的TBD牌所分离的单核细胞分层较清楚,并且方便提取,而使用进口GE healthcare的淋巴细胞分离液提取的单核细胞数量较多,但经过后期诱导培养CIK细胞发现两种分离液提取的细胞培养到后期数量逐渐接近。结论:国产TBD牌淋巴细胞分离液在用于脐带血淋巴细胞分离提取时较进口GE healthcare牌经济,并且细胞提取方便,后期培养效果无明显差别。

抗DON单克隆抗体制备工艺优化研究

本研究通过优化离心条件,利用小鼠外周血淋巴细胞分离液成功分离出小鼠腹水中的抗呕吐毒素(DON)杂交瘤细胞SW-3H_(2),并考察不同周龄和性别小鼠的腹水产量及SW-3H_(2)在腹腔传代中的稳定性。结果表明,2000 r/min、20 min的离心条件可获得最佳分离效果。分离获得的杂交瘤细胞可再次接种10~15只小鼠,且在14周龄雄性小鼠中腹水产量显著高于雌性小鼠。此外,杂交瘤细胞在小鼠腹腔中可连续稳定传代3代,平均腹水产量为5.95 mL/只,抗体效价超过1∶4.9×10^(4)。本研究的成果将有助于提高抗DON单克隆抗体的制备效率。

肺结核患者肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群水平检测意义

本研究的目的是采用流式细胞仪检测肺结核(TB)患者肺泡灌洗液(BALF)T淋巴细胞亚群,探讨其临床意义。我们选取2016年1月至2016年8月我院收治的59例TB患者作为观察组,选取同期在我院健康体检者20例作为对照组。采集两组的外周血和BALF,采用流式细胞仪检测T细胞亚群水平。绘制ROC曲线,计算曲线下面积(AUC),评价CD4/CD8水平对肺结核的诊断价值。本研究结果显示观察组患者血清中和BALF中的CD4及CD4/CD8水平均低于对照组,差异具有统计学意义(p<0.05);观察组患者BALF中的CD8水平高于对照组(p<0.05);在治疗2个月后,观察组患者血清和BALF中的CD4和CD4/CD8水平均较治疗前明显升高,BALF中的CD8水平较治疗前明显降低(p<0.05);ROC曲线显示,BALF和血清中CD4/CD8诊断TB的AUC分别为0.934和0.715(p<0.05)。本研究认为检测血清和BALF中的T淋巴细胞亚群对TB的诊断和疗效观察具有一定的临床意义,其中BALF中CD4/CD8水平对TB的诊断价值较高。

CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞在类风湿性关节炎及骨关节炎患者外周血和关节液中含量的变化

目的分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)在类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)及骨关节炎(Osteoarthritis,OA)患者外周血和关节液中含量的变化,探讨其在RA中可能的意义。方法以肝素抗凝负压采血管分别抽取36例RA患者、30例OA患者和33名健康人外周静脉血,常规关节穿刺术抽取RA和OA患者膝关节腔积液,采用流式细胞术分别检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量。结果 RA组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量显著低于OA组和健康对照组(P<0.05),OA组与健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);RA组关节液中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量显著高于OA组(P<0.01);RA组和OA组关节液中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分含量均显著高于自身外周血(P<0.01)。结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在RA患者中的负性调控作用降低,可能是促进疾病发生发展的一个不可缺少的因素,但在关节液中,可能更主要是表现为炎症发生后的继发性反应。