miR-25a-5p促进乳腺癌蒽环类药物治疗所致的心肌损伤

目的:探讨蒽环类药物诱导心肌毒性的机制和新的治疗靶点。方法:106例乳腺癌患者根据超声心动图检查鉴别出肿瘤治疗相关心功能障碍,分为心功能障碍组及对照组。通过微阵列技术高通量筛选两组患者差异表达miRNA。体外构建蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤模型,通过调控miR-25a-5p的表达,观察miR-25a-5p在蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。结果:乳腺癌患者中9例发生肿瘤治疗相关心功能障碍,并从两组患者中鉴定出9个差异表达的miRNA。其中8个miRNA在体外模型中进一步得到验证,尤其是miR-25a-5p。通过上调miR-25a-5p,可进一步加重蒽环类药物诱导心肌细胞氧化损伤。结论:miR-25a-5p促进蒽环类药物诱导的心肌损伤,可能是新的生物标志物及治疗靶点。

糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制研究

目的 探究糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制。方法 用小鼠单侧肾切除+腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)模型,选择糖尿病肾病小鼠模型组共45只小鼠,雌性CBA/J 30只,雄性DBA/2 15只,另选正常健康小鼠10只作为正常对照组。将造模的糖尿病肾病小鼠分为模型组、糖肾地黄汤高剂量组(TSDHDHD组)、糖肾地黄汤中剂量组(TSDHDMD组)、糖肾地黄汤低剂量组(TSDHDLD组),每组10只。HE染色检测小鼠的病理学变化,应用全自动生化分析仪对所获得小鼠血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG),甘油三酯(Triglyceride, TG),胆固醇(Cholesterol, TC)水平,RT-PCR法分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2mRNA的表达,免疫印迹法(Westernblot, Wb)分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2的蛋白表达。采用SPSS 23.0统计软件。结果 对照组中细胞排列致密整齐、完整,存在少量脂肪细胞(P>0.05);与对照组比较,模型组细胞结构较为散乱,且由稀疏变细,近端脂肪细胞数目增多,差异存在统计学意义(P<0.05);相比模型组,各剂量组糖肾地黄汤脂肪细胞数目下降,比较存在统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05)。治疗前与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平升高(P<0.05),模型组与不同剂量糖肾地黄汤组相比无统计学差异(P>0.05);与治疗前相比,治疗12周后不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平均降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平明显升高,Bax/Bcl-2mRNA水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2水平降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 糖肾地黄汤可能通过调节lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴,从而达到延缓糖尿病肾病进展的目的。

多层螺旋CT联合miR-527、miR-25检测对早期原发性肝癌诊断的临床价值

目的分析多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25检测对早期原发性肝癌诊断的临床价值。方法选取本院2022年1月至2023年5月收治的原发性肝癌患者78例,同期良性肝病患者50例,对患者进行多层螺旋CT扫描,qRT-PCR法检测血清miR-527、miR-25水平。ROC曲线分析血清miR-527、miR-25水平对原发性肝癌的诊断价值;四表格法分析多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25对原发性肝癌的诊断价值。结果原发性肝癌患者血清miR-527、miR-25水平显著高于良性肝病患者(P<0.05);ROC曲线结果表明,血清miR-527水平诊断原发性肝癌的AUC为0.753,敏感性为74.36%,特异性为70.00%;血清miR-25水平诊断发生原发性肝癌的AUC为0.722,敏感性为61.54%,特异性为72.00%。多层螺旋CT扫描诊断结果显示,原发性肝癌患者76例,其中弥漫型肝癌12例,结节型肝癌38例,巨块型肝癌26例;良性肝病患者52例。多层螺旋CT扫描诊断原发性肝癌的敏感性为78.21%(61/78),特异性为70.00%(35/50),准确度为75.00%(96/128);多层螺旋CT扫描对原发性肝癌的诊断结果与术后病理诊断结果具有一致性(Kappa值=0.479,P<0.05)。多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25水平诊断原发性肝癌的敏感性为96.15%(75/78)、特异性为68.00%(34/50),准确度为85.16%(109/128);三者联合对原发性肝癌的诊断结果与术后病理诊断结果具有较好一致性(Kappa值=0.673,P<0.05),且联合诊断的敏感性和准确度显著高于多层螺旋CT、miR-527、miR-25单独诊断(P<0.05)。结论多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25检测对早期原发性肝癌诊断准确度较高,具有重要的临床价值。

血清miR-25-3p和IBSP表达在乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的应用价值

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清微小RNA(miR)-25-3p和整合素结合唾液酸蛋白(IBSP)表达的应用价值。方法回顾性选取2021年11月至2023年12月大庆龙南医院收治的乙型肝炎肝硬化患者150例、慢性乙型肝炎患者50例、健康体检人员50名分别作为肝硬化组、肝炎组、健康组。统计分析3组研究对象的血清miR-25-3p和IBSP表达水平;分析不同临床参数与血清miR-25-3p和IBSP表达水平关系;分析肝硬化患者肝功能评分与血清miR-25-3p和IBSP表达水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响肝硬化失代偿并发腹腔积液的因素;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-25-3p和IBSP表达水平单独与联合检测在肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的价值。结果肝硬化组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平分别为5.21±0.40、(9.33±1.27)ng/mL,均明显高于肝炎组[1.15±0.33、(3.14±0.36)ng/mL]、健康组[0.91±0.11、(1.01±0.30)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);肝炎组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均明显高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。中、重度肝纤维化、有消化道出血、有腹腔积液患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均分别高于轻度肝纤维化、无消化道出血、无腹腔积液患者,差异均有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组患者的Child-Pugh评分、血清蛋白胆红素评分(ALBI)、终末期肝病模型评分(MELD)与血清miR-25-3p和IBSP表达水平均呈显著正相关(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液影响因素包括miR-25-3p、IBSP(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清miR-25-3p和IBSP表达水平联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度和约登指数均明显高于单独检测(P<0.05)。结论乙型肝炎肝硬化患者病情越重,血清miR-25-3p和IBSP表达水平越高。检测血清miR-25-3p和IBSP表达水平能够为乙型肝炎肝硬化病情的判断及肝硬化失代偿并发腹腔积液的诊断提供有效依据。

急性脑梗死病人血清miR-25表达水平及其对近期预后的预测价值

目的:探讨急性脑梗死病人血清miR-25表达及其对近期预后不良的预测价值。方法:将2020年5月—2022年1月本院收治的179例急性脑梗死病人设为研究组,另将同期在本院体检的163例健康体检者设为对照组,均行血清miR-25表达水平检测并对比。随访3个月,根据改良Rankin量表(mRS)评分将研究组分为预后良好组(mRS评分≤2分)和预后不良组(mRS评分>2分),对比预后良好组与预后不良组血清miR-25表达水平。采用Logistic回归分析法分析急性脑梗死病人近期预后不良的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-25表达水平对急性脑梗死病人近期预后不良的预测价值。结果:研究组血清miR-25表达水平低于对照组(P<0.05)。急性脑梗死病人近期预后不良的发生率为42.46%,预后不良组年龄、心房颤动比例、入院美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、梗死体积、发病至治疗时间、血清胱抑素C(CysC)水平均高于预后良好组,血清miR-25表达水平低于预后良好组(P<0.05)。年龄、心房颤动、入院NIHSS评分、梗死体积、发病至治疗时间、血清CysC水平、血清miR-25表达水平均是急性脑梗死病人近期预后不良的影响因素(P<0.05)。血清miR-25表达水平预测急性脑梗死病人近期预后不良的最佳截断值、敏感度、特异度、ROC曲线下面积(AUC)分别是0.640、72.37%、65.05%、0.731。结论:急性脑梗死病人血清miR-25表达水平降低,且为急性脑梗死病人近期预后不良的影响因素,对近期预后不良有一定的预测价值。

血清miR-25-3p、CXCL12水平与非小细胞肺癌患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系分析

目的:分析血清miR-25-3p、脊髓趋化因子CXC配体12(CXCL12)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系。方法:选择2017年02月至2020年07月医院收治的175例NSCLC患者,所有患者均接受胸腔镜肺叶切除术治疗。术前检测患者血清miR-25-3p、CXCL12水平,术后随访3年,根据患者预后情况分为预后不良组(复发转移)与预后良好组(非复发转移)。对比预后不良组与预后良好组血清miR-25-3p、CXCL12水平,对比预后不良组与预后良好组的临床资料,分析NSCLC患者术后预后不良的影响因素,分析血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合对NSCLC患者术后预后不良的预测价值。结果:随访3年,175例患者失访6例,随访率为96.57%,其中复发转移31例,复发转移率为18.34%,剩余138例均未发生复发转移,中位复发转移时间为24.75个月(95%CI:18.32~28.47)。预后不良组血清miR-25-3p、CXCL12水平高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组Ⅱ期、低分化例数占比高于预后良好组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,Ⅱ期(HR=3.827,95%CI:1.682~8.705)、低分化(HR=3.466,95%CI:1.524~7.884)、血清miR-25-3p(HR=2.732,95%CI:1.201~6.215)、血清CXCL12(HR=3.152,95%CI:1.386~7.170)为NSCLC患者术后预后不良的影响因素(P<0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线结果显示,血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合预测NSCLC患者术后预后不良的灵敏度分别为80.65%(95%CI:0.627~0.853)、83.87%(95%CI:0.641~0.869)、93.55%(95%CI:0.782~0.973),特异度分别为78.26%(95%CI:0.602~0.835)、76.09%(95%CI:0.584~0.791)、91.30%(95%CI:0.769~0.934),曲线下面积(area under curve,AUC)值分别为0.767、0.755、0.908(P<0.05),且二者联合的AUC值更高(P<0.05)。结论:术前检测血清miR-25-3p、CXCL12水平可用于预测NSCLC患者胸腔镜肺叶切除术后预后,且二者联合的预测价值更高。

IL-18 sTLT-1及miR-25对脑梗死复发风险的预测价值

目的探讨miR-25、白细胞介素18(IL-18)、可溶性髓样细胞触发受体样转录因子-1(sTLT-1)在脑梗死患者复发中的预测价值。方法 选取三二〇一医院收治的154例脑梗死患者为脑梗死组,对脑梗死组患者随访1 a,根据是否复发分为复发组和非复发组,比较2组临床资料及血清miR-25、IL-18及s TLT-1表达情况。单因素和Logistic回归分析影响患者复发的独立危险因素。采用ROC曲线分析miR-25、IL-18、sTLT-1在预测患者复发中的临床价值。结果 脑梗死组共46例患者出现复发,相较于未复发组,复发组miR-25[32.00(23.31,34.68)比11.89(7.67,19.39)]、IL-18[(44.75±12.38)ng/L比(23.36±10.49)ng/L]及sTLT-1[(484.61±83.90)ng/L比(325.72±99.17)ng/L]水平更高(P<0.05)。单因素及多因素Logistic回归分析显示,吸烟史、高血压史、miR-25≥11.89、IL-18≥23.36 ng/L、sTLT-1≥325.72 ng/L是影响患者复发的独立危险因素。ROC曲线显示,当miR-25截断值为20.97、IL-18截断值为28.92 ng/L、sTLT-1截断值为388.03 ng/L时预测患者复发的AUC均>0.700。结论 脑梗死复发患者血清miR-25、IL-18及sTLT-1水平显著上升,且miR-25、IL-18及sTLT-1水平在预测脑梗死患者复发中具有一定临床价值。

血清circCOL1A2和miR-25-3p水平与T2DM合并DR的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组。分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血4~6 mL。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测3组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标。分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值。结果(1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000)。NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000)。3组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000)。NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000)。DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000)。(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000)。2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027)。Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045)。(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000)。(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000)。(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素。结论T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值。

热性惊厥患儿血清miR-148a-3p HMGB125(OH)D水平与癫痫发作的相关性

目的探讨热性惊厥患儿血清微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、25-羟维生素D(25(OH)D)水平与癫痫发作的相关性。方法回顾性分析2018-01—2022-03南阳市中心医院收治的122例热性惊厥患儿,根据热性惊厥患儿预后结局是否发生癫痫,分为热性惊厥癫痫组36例和热性惊厥非癫痫组86例,同期选择55例未发生惊厥的呼吸道感染仅发热的患儿为对照组,比较3组患儿的血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平。收集3组患儿临床资料进行多因素Logistic回归分析,绘制ROC曲线分析miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D对热性惊厥患儿癫痫发作的预测价值。结果热性惊厥癫痫组的血清miR-148a-3p表达量、HMGB1水平高于热性惊厥非癫痫组、对照组[(2.26±0.57)vs(1.71±0.43)vs(1.50±0.38);(7.45±1.87)μg/L vs(6.70±1.58)μg/L vs(5.33±1.29)μg/L;均P<0.05],血清25(OH)D水平低于热性惊厥非癫痫组、对照组[(26.83±6.79)μg/L vs(34.24±8.56)μg/L vs(42.16±4.15)μg/L;P<0.05]。惊厥类型、惊厥持续时间、退热后脑电图结果、miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D与癫痫发作存在相关关系(P<0.05)。miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D预测热性惊厥患儿癫痫发作的灵敏度为83.33%、77.78%、72.22%,特异度为74.42%、68.60%、63.95%。结论血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平与热性惊厥患儿癫痫发作有一定相关性,可作为临床辅助诊断标志物。

miR-25调控Notch信号通路对中枢神经系统感染小鼠记忆容量和脑损伤的影响

目的探讨miR-25调控Notch信号通路对中枢神经系统(CNS)感染小鼠记忆容量和脑损伤的影响。方法采用生物学预测网站(www.targetscan.org)分析微小RNA-25(miR-25)和Notch1的结合位点,将1个Rellina质粒和2个报告质粒分别与miR-25质粒、空载体质粒共同转染入人类胚肾细胞HEK293T细胞,采用双萤光素酶报告基因系统验证miR-25和Notch1的关联;70只健康雄性C57BL/6小鼠分为正常对照组(不作处理,n=10)和实验组(建立CNS感染模型,n=60),实验组小鼠造模成功后随机均分为模型组(无处理)、空载体组(注射空载体)、miR-25模拟物组(注射miR-25模拟物)、miR-25抑制剂组(注射miR-25抑制剂)、(2S)-N-[N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)组(注射DAPT)及miR-25抑制剂+DAPT组(注射miR-25抑制剂+DAPT);采用莫里斯水迷宫检测各组小鼠的学习、记忆容量(逃生潜伏期、平台停留时间及经过次数);麻醉处死各组小鼠后取脑组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组小鼠大脑海马CA1区miR-25、Notch1及Hes家族BHLH转录因子5(Hes5)的表达,采用Western blot检测各组小鼠大脑海马CA1区Notch1、Hes5、环加氧酶2(COX-2)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,采用水溶性四氮唑(WST-1)法和硫代巴比妥酸实验检测各组小鼠海马组织中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。结果miR-25与Notch1的3′UTR结合序列为UGCAAU,双萤光素酶报告基因结果提示miR-25可以负调控Notch1的表达;和正常对照组比较,实验组小鼠大脑海马CA1区miR-25、COX-2及iNOS的表达升高,Notch1和Hes5表达下降,海马组织中SOD水平降低、MDA水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-25模拟物组和DAPT组小鼠大脑海马组织中Notch1和Hes5表达下降,学习、记忆容量降低,海马组织中SOD水平降低、MDA水平升高,COX-2和iNOS表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-25下调可靶向激活调控CNS感染小鼠的Notch信号通路,从而起到增强记忆容量和保护脑损伤神经的作用。

miR-25通过调节TGF-β信号传导通路促进胃癌细胞增殖和转移

目的:探究miR-25对人胃癌细胞SGC-7901增殖、侵袭、迁移、凋亡的作用及其分子机制。方法:构建miR-25干扰慢病毒,并将研究目的细胞分为正常组、miR-25干扰慢病毒组和miR-25干扰慢病毒空载组,利用现代医学生物学技术,检测转染效果、细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力、细胞凋亡情况,以及各组细胞中转化生长因子-β(TGF-β)蛋白的表达情况。结果:与正常组相比,miR-25在miR-25干扰慢病毒组中的表达明显更低(P<0.05);与正常组相比,miR-25干扰慢病毒组的细胞存活率、迁移率、增殖率、侵袭能力均显著降低,凋亡率明显更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,TGF-β蛋白在miR-25干扰慢病毒组中的表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-25在人胃癌细胞SGC-7901中的表达被抑制后,TGF-β蛋白在胃癌细胞中的表达显著增加,且明显降低了胃癌细胞的侵袭转移能力,并促进了肿瘤细胞的凋亡。

miR-141-3p靶向CDC25B调节VEGF通路对三阴性乳腺癌血管生成的机制研究

目的:血管生成是肿瘤生长和转移的关键介质,CDC25B在包括三阴性乳腺癌(Triple-Negative Breast Cancer,TNBC)等恶性肿瘤作为肿瘤癌基因,但其对血管生成的生物学作用知之甚少,本研究旨在探讨CDC25B在TNBC血管生成中的确切功能和作用机制。方法:生信数据库分析CDC25B及其上游调控分子miR-141-3p在TNBC肿瘤组织中的表达,采用qRT-PCR分析CDC25B和miR-141-3p在TNBC细胞系中的表达。利用CCK-8和血管形成实验分析HUVEC细胞的增殖和血管形成能力,并通过Western blot检测VEGFA、VEGFR-2和VEGFR-3蛋白的表达。双荧光素酶报告实验被用于探索CDC25B和miR-141-3p之间的特异性相互作用。结果:本研究发现CDC25B在TNBC中表达上调,其高表达可以激活VEGF信号通路,沉默CDC25B后显著抑制了HUVEC细胞的增殖和血管生成,并降低了VEGFA、VEGFR-2和VEGFR-3蛋白的表达。此外,miR-141-3p在TNBC中表达下调,可以靶向抑制CDC25B的表达。过表达CDC25B可以逆转miR-141-3p过表达对HUVEC细胞增殖和血管生成的抑制作用。结论:miR-141-3p靶向CDC25B抑制VEGF通路抑制TNBC血管生成,为miR-141-3p/CDC25B/VEGF通路可能作为TNBC抗血管生成治疗的新选择提供理论依据。

LncRNA OIP5-AS1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、HG+si-NC组、HG+si-OIP5-AS1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-OIP5-AS1+inhibitor-NC组、HG+si-OIP5-AS1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA OIP5-AS1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和裂解的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验确认miR-25-3p与lncRNA OIP5-AS1和SOX4的靶向关系。结果 与NG组相比,HG组细胞中lncRNA OIP5-AS1和SOX4 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-25-3p水平降低(P<0.05);敲低lncRNA OIP5-AS1可显著下调SOX m RNA和蛋白水平,上调miR-25-3p水平,增加HK-2细胞活力和SOD、CAT活性以及Bcl-2蛋白水平,降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA、ROS水平、Bax蛋白水平及Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(P<0.05);上调miR-25-3p表达与敲低lncRNA OIP5-AS1的作用一致;在敲低lncRNA OIP5-AS1的基础上,下调miR-25-3p可明显减弱lncRNA OIP5-AS1敲低对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示lncRNA OIP5-AS1和miR-25-3p,以及miR-25-3p和SOX4之间存在结合位点。结论 lncRNA OIP5-AS1可能通过miR-25-3p/SOX4轴促进高糖诱导的HK-2细胞损伤。

宫颈鳞癌组织中miR-590-3P、FoxM1及Cdc25B细胞核内蛋白水平与高危型HPV感染的相关性研究

目的:研究宫颈鳞癌组织中微小RNA-590-3P(miR-590-3P)、叉头盆蛋白质M1(FoxM1)及细胞分裂周期因子25B(Cdc25B)细胞核内蛋白水平与高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法:将2014年2月—2019年12月医院通过宫颈活检、锥切以及子宫切除获取的宫颈组织标本300份纳入研究。将其分为正常组织59例,宫颈上皮内瘤变(CIN)1组织62例,CIN2/3组织101例,宫颈鳞癌组织78例。采用实时荧光定量PCR检测不同组织中的miR-590-3P表达水平,以免疫组织化学法检测FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况,并进行23种基因型HPV DNA的检测。比较不同宫颈组织中的miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况,高危型HPV感染情况,并以Spearman相关性分析明确宫颈鳞癌组织中的miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况与高危型HPV感染的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线明确miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白诊断CIN2+的效能。结果:CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的miR-590-3P表达水平均高于正常组织、CIN1组织,且CIN1组织中的miR-590-3P表达水平均高于正常组织(F=46.873,P=0.000);CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的FoxM1蛋白阳性率及Cdc25B蛋白阳性率均高于正常组织及CIN1组织,且CIN1组织中的FoxM1、Cdc25B蛋白阳性率均高于正常组织(χ^(2)=47.293、51.041,P=0.000、0.000)。CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的高危型HPV感染率明显高于正常组织、CIN1组织,且CIN1组织中的高危型HPV感染率明显高于正常组织(χ^(2)=67.293,P=0.000)。经Spearman相关性分析可得:宫颈鳞癌组织中miR-590-3、FoxM1、Cdc25B蛋白表达率均和高危型HPV感染呈正相关。经ROC曲线分析发现:miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白联合检测诊断CIN2+的曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.884、0.90、0.88,均高于上述三项指标单独检测。结论:宫颈鳞癌组织中miR-590-3P、FoxM1及Cdc25B细胞核内蛋白水平与高危型HPV感染密切相关,有望成为早期诊断CIN2+的潜在生物学指标,值得临床重点关注。

miR-192、Cys C、25(OH)D联合检测在糖尿病早期肾损害诊断中的价值

目的 探讨糖尿病早期肾损害(diabetes early kidney damage, DEKD)患者血清miR-192、胱抑素C(Cys C)、25羟维生素D[25(OH)D]联合检测的诊断价值。方法 选取132例糖尿病患者作为研究对象,按照尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)水平分组,分为DEKD组(n=74,UACR 30~300 mg·g^(-1))、糖尿病组(n=58,UACR<30 mg·g^(-1))。比较2组患者一般资料,比较2组患者血清miR-192、Cys C、25(OH)D水平,Pearson分析血清miR-192、Cys C、25(OH)D与血糖、肾功能指标的相关性,偏相关性分析miR-192、Cys C、25(OH)D水平与DEKD的关系;分析血清miR-192、Cys C、25(OH)D联合检测对糖尿病早期肾损伤的诊断价值;分析不同水平miR-192、Cys C、25(OH)D发生早期肾损害的危险度。结果 DEKD组FPG、FINS、BUN、UA、Scr低于糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05);DEKD组血清miR-192、25(OH)D水平低于糖尿病组,Cys C水平高于糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-192、25(OH)D水平与血糖、肾功能指标呈负相关,血清Cys C与血糖、肾功能指标呈正相关(P<0.05);logistic分析发现,血清miR-192、Cys C、25(OH)D水平与DEKD显著相关(P<0.05);血清miR-192、Cys C、25(OH)D水平单独诊断DEKD的曲线下面积(AUC)分别为0.739、0.725、0.766,对以上各指标进行综合回归,得到联合诊断DEKD的AUC为0.908;血清miR-192、Cys C、25(OH)高水平患者发生早期肾损害的危险度是低水平的2.713、2.463、2.631倍(P<0.05)。结论 血清miR-192、Cys C、25(OH)D异常表达与DEKD发展有关,联合检测有助于提高DEKD诊断效能。

鳜miR-25的时空表达特征及其靶向核心生物钟基因的预测分析

目的研究miR-25在鳜的时空表达特征,预测其靶向核心生物钟基因,对其可能存在的生物学意义进行探讨。方法采用实时荧光定量PCR分析miR-25在鳜各组织以及不同阶段胚胎中的表达特征,并利用TargetScan对其靶向核心生物钟基因进行预测分析。结果miR-25在鳜红肌和心肌中的表达量较高(P<0.05),而在鳜脾、肾、肠以及肝中的表达量较低,且这4个组织中的表达量,差异无统计学意义(P>0.05);miR-25在鳜胚胎的2细胞期表达量较高(P<0.05),随着胚胎发育,其表达水平逐渐降低。靶基因预测结果显示,节律基因Arntl2、Nr1d2b mRNA的3’UTR区域存在miR-25的靶位点。结论miR-25在胚胎发育过程中呈母源性表达,并且可能在鳜红肌和心肌中具有重要的调控意义,此外miR-25可能通过靶向调节Arntl2、Nr1d2b的表达来调控鳜生物节律,为后续研究miR-25的生理作用以及调控昼夜节律从而预防相关疾病提供参考依据。

血清miR-25和miR-100作为食管鳞状细胞癌诊断和预后标志物研究

目的 探讨血清miR-25和miR-100对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）的诊断和预后价值.方法 收集2011年6月～2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院63例ESCC患者术前、术后及随访血清,并收集63例年龄、性别匹配的非癌健康人血清作为对照;实时荧光定量PCR法检测血清miR-25和miR-100含量.用非参数Mann-Whitney U检验ESCC患者组和对照组血清miR-25和miR-100表达水平的差异,配对t检验分析ESCC患者术前术后血清中miR-25和miR-100的表达量变化,受试者工作特征曲线（ROC）评估血清miR-25和miR-100对ES-CC的诊断价值,单因素Kaplan-Meier法分析对ESCC患者生存的影响.结果 与健康对照相比,ESCC患者血清miR-25（0.40±0.20 vs 0.02±0.01）和miR-100的相对含量（0.10±0.02 vs 0.04±0.00）显著升高,差异具有统计学意义（U值分别为885.0和1 006.0,P值均＜0.01）;血清miR-25和miR-100的ROC曲线下面积AUC均明显大于癌胚抗原;ESCC患者术后血清miR-100含量较术前明显降低（0.07±0.01 vs 0.10±0.02）,差异具有统计学意义（t=2.367,P=0.021）;单因素Kaplan-Meier法分析显示血清miR-25和miR-100表达阴性的ESCC患者的生存期明显高于阳性患者（P＜0.05）.结论 血清miR-25和miR-100可作为ESCC诊断及预后评估的潜在标志物.

人脑胶质瘤中miR-106b^25基因簇表达的研究

目的:检测胶质瘤细胞系及组织中miR-106b^25基因簇成员miR-106b、miR-93、miR-25的表达情况。方法:运用实时定量PCR的方法检测不同人脑胶质母细胞瘤细胞系及不同病理级别胶质瘤标本中miR-106b^25基因簇成员miR-106b、miR-93和miR-25的表达水平。原位杂交技术检测含不同病理级别及瘤旁正常脑组织的胶质瘤组织芯片中miR-106b^25基因簇成员的表达情况,进而分析该簇miRNAs的表达与胶质瘤病理级别的相关性。结果:以正常脑组织表达量为基准,3种miRNA在所有检测细胞系中均有增高的趋势。收集43例胶质瘤标本中,RT-PCR结果显示,随着肿瘤病理级别的升高,3种miRNA在各组中的平均表达量也逐步升高。其中,miR-106b(F=4.479,P=0.018)和miR-93(F=3.493,P=0.040)各组间的表达差异均有统计学意义。而miR-25表达无明显的统计学差异(F=2.766,P=0.075)。原位杂交结果显示3种miRNA的表达在高级别胶质瘤中的表达量明显高于低级别肿瘤。Spearman等级相关分析表明3种miRNA的表达信号强度分布均与胶质瘤的WHO病理分级呈正相关,在miR-106b、-93、-25中的相关系数分别为rs=0.617(P<0.001)、rs=0.438(P<0.001)、rs=0.463(P<0.001)。结论:miR-106b^25在胶质瘤中表达呈不同程度增高,并与肿瘤分级呈正相关。

miR-25靶向RECK促进宫颈癌HeLa细胞的增殖

目的探讨微小RNA-25(miR-25)对宫颈癌He La细胞增殖活性的影响及其与逆向诱导的带Kazal基序的富含半胱氨酸蛋白(RECK)的靶向关系。方法构建pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-野生型RECK(RECK-WT)和突变型RECK(RECK-MT)真核表达载体及miR-25抑制剂(anti-miR-25),采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-25和anti-miR-25在He La细胞中的转染效率,并采用MTT法分析miR-25对He La细胞增殖活性的影响,双萤光素酶报告基因、qRT-PCR和Western blot法检测miR-25与RECK靶向关系。结果测序结果显示pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-RECK-WT和pmir GLO-RECK-MT重组载体构建成功,qRT-PCR提示pre-miR-25与anti-miR-25在He La细胞中具有良好的转染效率。MTT结果显示miR-25能够明显促进He La细胞的增殖。双萤光素酶报告基因检测显示共转染pre-miR-25与RECK-WT的He La细胞其萤光活性显著下降,同时qRT-PCR及Western blot也显示anti-miR-25在转录和转录后水平均能够显著增加He La细胞中RECK的表达。结论miR-25能够靶向RECK,促进宫颈癌He La细胞的增殖。

外周血miR-25表达与急性脑梗死患者凋亡分子含量及90天预后的相关性

目的探讨急性脑梗死患者外周血miR-25表达与凋亡分子含量及90天预后的相关性。方法选取急性脑梗死患者162例为急性脑梗死组,体检健康者150例为正常对照组。测定两组外周血miR-25及凋亡分子含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)的水平。根据改良Rankin量表(mRS)评分将随访90天的预后情况分为预后良好(mRS评分≤2分)和预后不良(mRS评分>2分)。比较不同预后急性脑梗死患者的临床资料,并进一步行Logistic回归分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估急性脑梗死患者外周血miR-25表达水平对90天不良预后的预测价值。结果急性脑梗死组患者外周血miR-25、Bcl-2表达水平低于正常对照组,Caspase-3水平高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析发现,急性脑梗死患者外周血miR-25表达水平与Bcl-2表达水平呈正相关,与Caspase-3表达水平呈负相关(P<0.05)。急性脑梗死患者随访90天预后良好119例、预后不良43例。不同预后急性脑梗死患者的年龄、发病至治疗时间、入院当天NIHSS评分的差异有统计学意义(P<0.05),其余临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析发现,年龄较大、入院当天NIHSS评分较高、外周血miR-25表达水平较低是急性脑梗死患者90天预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线发现,外周血miR-25表达水平预测急性脑梗死患者90天预后不良的截断值为0.635,AUC为0.699(95%CI 0.609~0.789),对应的敏感度、特异度分别为72.09%、65.55%。结论急性脑梗死患者外周血miR-25表达水平降低,可能参与凋亡分子的表达调控。低水平miR-25是急性脑梗死患者预后不良的危险因素,且具有一定早期预测价值。