微小RNA let-7a下调黑素瘤A375细胞系BRAF蛋白的表达

目的:评价微小RNA let-7a对黑素瘤A375细胞系BRAF蛋白表达的影响。方法:采用蛋白印迹法检测BRAF蛋白在A375细胞及黑素细胞的表达;用微小RNA let-7a的模拟物及阴性对照分别转染A375细胞,CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果:与黑素细胞相比,BRAF蛋白在黑素瘤A375细胞表达升高;与阴性对照相比,微小RNA let-7a的模拟物转染A375细胞后,抑制细胞增殖,BRAF蛋白表达下降。结论:微小RNA let-7a可抑制黑素瘤A375细胞增殖,下调BRAF蛋白表达。

菖蒲郁金汤对抽动-秽语综合征模型大鼠小胶质细胞的异常活化和神经炎症的影响

目的探讨菖蒲郁金汤通过调节非编码小分子RNA Let7i(microRNA Let7i,Let7i)对3,3′-亚氨基二丙腈(3,3′-Lminodipropionitrile,IDPN)诱导的抽动-秽语综合征(TS)模型大鼠中小胶质细胞(microglia,MG)的异常活化及神经炎症的影响。方法将40只SPF级Sprague-Dawley 3周龄雄性大鼠随机分为空白组、模型组、硫必利组和菖蒲郁金汤组,每组10只。腹腔注射IDPN制备TS模型,硫必利组给予硫必利混悬液,菖蒲郁金汤组给予菖蒲郁金汤药液,空白组和模型组给予等体积生理盐水,按15 mL/(kg·d)灌胃。干预28 d后,采用免疫荧光法检测MG活化情况,FISH检测Let7i的表达,免疫组织化学法(IHC)、WB法和Rt-PCR法检测纹状体Toll样受体4(Toll-Like receptor4,TLR4)、髓样分化初次应答因子88(myeloid differentiation factor 88,MYD88)、转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白和mRNA的表达。结果干预前,空白组大鼠纹状体中MG多呈静息状态,氧化还原性异丁醛(Iba1)受体表达很少,荧光强度较弱;模型组、硫必利组和菖蒲郁金汤组纹状体活化MG数量较空白组明显增加,荧光强度增强,差异有统计学意义(P<0.05)。干预后,与空白组比较,模型组Iba1表达仍较高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,菖蒲郁金汤组Iba1表达减少,荧光面积减少,差异有统计学意义(P<0.05)。干预前,与空白组比较,模型组、硫必利组和菖蒲郁金汤组大鼠纹状体Let7i表达减少,差异有统计学意义(P<0.05);干预后,与模型组比较,硫必利组和菖蒲郁金汤组Let7i表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),但2组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预前,模型组、硫必利组和菖蒲郁金汤组TLR4、MYD88、NF-κB表达及其蛋白水平较高,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预后,模型组TLR4、MYD88、NF-κB表达及其蛋白水平较高,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,硫必利组和菖蒲郁金汤组TLR4、MYD88、NF-κB表达及其蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);但2组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预前,与空白组比较,模型组、硫必利组和菖蒲郁金汤组TLR4、MYD88、NF-κB mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预后,与空白组比较,模型组TLR4、MYD88、NF-κB mRNA仍表达较高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,硫必利组和菖蒲郁金汤组TLR4、MYD88、NF-κB mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与同组干预前比较,硫必利组和菖蒲郁金汤组TLR4、MYD88、NF-κB mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论菖蒲郁金汤对IDPN诱导的TS大鼠刻板行为及过度运动有明显的抑制作用,其可能是通过调控纹状体中Let7i表达,抑制MG异常活化和TLR4/MYD88/NF-κB信号通路,调控神经炎症发展进程,减轻MG相关的神经炎症,发挥抗抽动的作用机制,从而达到治疗TS的目的。