血清LncRNA TCF7、miR-29与支气管哮喘患儿气道炎症、气道重构及JAK/STAT信号通路的关系研究

目的探讨血清微小RNA(miR)-29、长链非编码RNA(LncRNA)TCF7与支气管哮喘患儿气道炎症、气道重构以及Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)/信号转录及转录激活因子(STAT)信号通路的关系。方法以73例支气管哮喘急性发作期患儿为发作期组,同期随机选取60例支气管哮喘临床缓解期患儿(缓解期组)和60例健康体检儿童(对照组)为对照。血清LncRNA TCF7、miR-29及JAK、STAT相对表达量采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性人基质裂解素2(sST2)、白细胞介素-17(IL-17)水平采用酶联免疫吸附法检测,并测定气道管腔面积(LA)、气道管壁面积(WA)、气道总面积(TA)。JAK、STAT、炎症因子、气道重构指标和血清LncRNA TCF7、miR-29的相关性采用Pearson积矩相关分析,血清miR-29、LncRNA TCF7相对表达量对支气管哮喘的诊断价值采用受试者工作特征(ROC)曲线评估。结果发作期组、缓解期组、对照组的血清miR-29、LncRNA TCF7、STAT、JAK相对表达量和血清TNF-α、sST2、IL-17水平依次下降,而LA、WA、TA依次升高(P<0.05)。支气管哮喘急性发作期患儿LncRNA TCF7、miR-29与LA、WA、TA呈负相关,JAK、STAT、TNF-α、sST2、IL-17呈正相关(P<0.05);JAK、STAT与LA、WA、TA呈负相关,与TNF-α、sST2、IL-17呈正相关(P<0.05)。血清LncRNA TCF7、miR-29及指标联合诊断价值大于单一指标(Z=2.034、2.246,P均<0.05)。支气管哮喘急性发作期重度和中度患儿血清LncRNA TCF7、miR-29相对表达量高于轻度患儿,且重度患儿高于中度患儿(P<0.05)。血清LncRNA TCF7、miR-29与病情呈正相关(r s=0.759、0.723,P均<0.05)。结论支气管哮喘患儿血清LncRNA TCF7、miR-29表达上调,LncRNA TCF7上调miR-29表达可激活JAK/STAT信号通路促进支气管哮喘气道炎症和气道重构,早期联合检测血清LncRNA TCF7和miR-29可辅助临床诊断儿童支气管哮喘。

老年心力衰竭患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与其心功能的关系

目的分析老年心力衰竭患者血微RNA(miRNA)-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与其心功能的关系。方法回顾性选取2022年1月至2023年11月三亚中心医院收治的老年心力衰竭患者68例作为观察组,选择同期收治的非心力衰竭老年患者20例作为对照组。对比两组临床资料[性别、年龄、体重指数、左心房内径(LAD)、左心室内径(LVD)、右心房内径(RAD)、右心室内径(RVD)、室间隔厚度(IVS)、左室射血分数(LVEF)、B型脑钠肽(BNP)、肌钙蛋白I(cTnI)、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、丙氨酸转氨酶(ALT)等]。经荧光聚合酶链反应定量分析法检测两组血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平;分析观察组中不同心功能分级患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平差异;Spearman相关分析法分析血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与心功能分级的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析各参数预测老年心力衰竭患者心功能分级Ⅲ~Ⅳ级的价值。结果两组的性别构成比、年龄、体重指数、RVD、总胆固醇、甘油三酯、LDL、HDL、WBC比较,差异均无统计学意义(P>0.05);观察组的LAD、LVD、RAD、IVS、BNP、cTnI、ALT均高于对照组,而LVEF、PLT均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组血miRNA-423-5p水平为1.08±0.12,高于对照组(0.54±0.06),而miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平分别为1.14±0.13、1.08±0.11,均低于对照组(1.26±0.15、1.15±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05)。随老年心力衰竭患者心功能分级升高,其血miRNA-423-5p水平升高,而miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。老年心力衰竭患者miRNA-423-5p与心功能分级呈正相关(P<0.05),miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p与心功能分级呈负相关(P<0.05)。ROC曲线显示,血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p联合预测老年心力衰竭心功能分级Ⅲ~Ⅳ级的敏感度、特异度、曲线下面积分别为82.43%、81.85%、0.864,高于单独预测结果。结论老年心力衰竭患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p呈异常表达,且与患者心功能分级有密切关系,联合检测三者对判断心功能分级有较高预测价值。

microRNA-29c对人胰腺癌细胞侵袭转移的抑制作用及机制

目的:探讨microRNA-29c对人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2)生物学特性的影响。方法:培养1种人正常胰腺上皮细胞(HPDE)及4种人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2),采用real-time PCR法观察5种细胞系中microRNA-29c的表达差异,以microRNA-29c过表达腺病毒感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为实验组,以空载体感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为阴性对照组,采用细胞划痕实验、Transwell法检测两组细胞体外侵袭能力,Western blot检测两组细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)及E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。结果:real-time-PCR显示各胰腺癌细胞系中microRNA-29c水平明显低于正常胰腺细胞系(P<0.05),细胞划痕实验发现感染腺病毒48 h后实验组PANC-1、MIA Pa Ca-2细胞的迁移距离明显短于阴性对照组(P<0.05),Transwell小室细胞侵袭实验发现实验组PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞侵袭数量明显低于阴性对照组(P<0.05);Western blot蛋白免疫印迹结果显示PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞过表达microRNA-29c后,Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加。结论:microRNA-29c的过表达可有效抑制胰腺癌细胞的体外侵袭与转移,可能与Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加有关,有望成为胰腺癌生物治疗的潜在靶点。

前列腺癌患者血清外泌体lncRNA-HOXA-AS3、miR-29a表达变化及其与患者临床特征和预后的关系

目的 观察前列腺癌(PCa)患者血清外泌体长链非编码RNA HOXA-AS3(lncRNA-HOXA-AS3)、微小RNA 29a(miR-29a)表达变化,并分析其与患者临床特征、预后的关系。方法 PCa患者115例(观察组),同期健康体检者115例(对照组),采用qRT-PCR法检测两组血清外泌体lncRNA-HOXA-AS3、miR-29a,Pearson相关分析法分析两指标间及其与患者临床特征的关系;观察组按照lncRNA-HOXA-AS3相对表达量的均数为临界值分为lncRNAHOXA-AS3高表达者(56例)和lncRNA-HOXA-AS3低表达者(59例),按照miR-29a相对表达量的均数为临界值分为miR-29a高表达者(58例)和miR-29a低表达者(57例),采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,应用Log-rank检验比较高表达者和低表达者的生存率;采用Cox回归分析法分析PCa患者不良预后的危险因素。结果 与对照组比较,观察组血清外泌体lncRNA-HOXA-AS3相对表达量升高,miR-29a相对表达量降低(P均<0.05)。观察组血清外泌体lncRNA-HOXA-AS3表达与miR-29a表达呈负相关(r=-0.689,P<0.05)。血清外泌体lncRNA-HOXA-AS3、miR-29a表达均与PCa患者Gleason评分、T分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。与lncRNA-HOXA-AS3低表达者比较,lncRNA-HOXA-AS3高表达者患者生存率低(P<0.05);与miR-29a高表达者比较,miR-29a低表达者患者生存率低(P<0.05)。单因素及多因素分析显示,lncRNA-HOXA-AS3、miR-29a是PCa患者不良预后的影响因素和独立危险因素(P均<0.05)。结论 PCa患者血清外泌体lncRNA-HOXA-AS3表达升高、miR-29a表达下调,两者表达呈负相关,两指标均与患者Gleason评分、T分期、淋巴结转移有关,lncRNA-HOXA-AS3高表达者及miR-29a低表达者生存率低,lncRNA-HOXA-AS3、miR-29a是PCa患者不良预后的独立危险因素。

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的探讨Micro RNA-129-2(mi R-129-2)在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路。方法将mi R-129-2 mimics及mi R-129-2 mimics NC基因序列分别转染到食管癌NMC109细胞中,并设为mi R-129-2 mimics高表达组和mi R-129-2 mimics阴性对照组(mi R-129-2 mimics NC组),将非转染的NMC109细胞设为空白对照组。体外实验:运用MTT法检测3组细胞的增殖能力、Transwell法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达。采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力。结果 mi R-129-2 mimics组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较mi R-129-2 mimics NC组及空白对照组明显减弱(P<0.001),而空白对照组与mi R-129-2 mimics NC组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异(P>0.05);mi R-129-2 mimics组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调(P<0.001);mi R-129-2 mimics组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小(P<0.001),而mi R-129-2mimics NC组及空白对照组无明显差异(P>0.05)。结论 mi R-129-2具有抑制食管癌细胞NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调SOX4基因表达有关。

Micro RNA-1290 promotes esophageal squamous cell carcinoma cell proliferation and metastasis

AIM:To investigate the biological role of mi R-1290 in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC) progression and invasion and the underlying mechanism.METHODS:Quantitative real-time polymerase chain reaction(q RT-PCR) was performed to evaluate mi R-1290 expression in ESCC tissue samples.The roles of mi R-1290 in cell proliferation,migration and invasion were identified using mi R-1290 mimic-transfected cells.In addition,the regulatory effect of mi R-1290 on suppressor of cancer cell invasion(SCAI) was evaluated using q RT-PCR,Western blot analysis and a dual luciferase reporter assay.RESULTS:mi R-1290 was significantly upregulated in ESCC tissue samples compared with normal adjacent tissues(9.213 ± 1.150 vs 1.000 ± 0.0),(P < 0.01).Upregulation of mi R-1290 was associated with tumor differentiation(P = 0.021),N classification(P = 0.006) and tumor-node-metastasis stage(P = 0.021) in ESCC patients.Moreover,ectopic mi R-1290 expression potently promoted ESCC cell growth(P < 0.01),migration(P < 0.01) and invasion(P < 0.01) in vitro.mi R-1290 overexpression in ESCC cell lines decreased SCAI expression at the translational level and reduced SCAI-driven luciferase-reporter activity(P < 0.01).CONCLUSION:Our findings suggested that mi R-1290 may play an oncogenic role in cellular processes of ESCC.

Micro RNAs与急性心肌梗死关系的研究进展

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是冠状动脉疾病最严重的表现,其引起的心肌组织损伤可促进心力衰竭的发展。尽管近些年由于生活方式的改变、治疗方式(如经皮冠状动脉介入治疗)的发展使AMI的预后得到了改善,但是AMI依旧每年危害着全球700多万人的身心健康,AMI仍然是世界范围内高发病率和高死亡率的主要疾病之一[1]。微小RNA(micro RNAs,miRNAs)是在20世纪90年代被发现的,mi RNAs的研究已经迅速发展成为一个成熟而广阔的领域。mi RNAs存在于几乎所有类型的细胞和细胞的病理生理活动中,包括与心血管系统相关的细胞。本文将mi RNAs对AMI病理生理进程的影响进行综述,希望为临床治疗提供新思路。

microRNA-29c过表达对人胰腺癌AsPC-1、PANC-1细胞增殖的影响

目的:探讨microRNA-29c过表达对人胰腺癌As PC-1、PANC-1细胞增殖的影响。方法:构建含microRNA-29c过表达腺病毒并感染至胰腺癌As PC-1及PANC-1细胞(实验组),感染空载体作为阴性对照组,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测As PC-1和PANC-1感染microRNA-29c 24 h时的感染效率,CCK-8实验检测microRNA-29c感染48 h时人胰腺癌细胞的增殖能力,细胞平板克隆实验检测感染microRNA-29c24 h人胰腺癌细胞的单克隆形成能力。结果:与阴性对照组比较,microRNA-29c感染As PC-1及PANC-1细胞后microRNA-29c表达水平明显升高;过表达microRNA-29c后As PC-1和PANC-1细胞增殖能力明显受到抑制,细胞的克隆形成数明显减少(P<0.01)。结论:microRNA-29c过表达能有效抑制胰腺癌细胞的增殖能力,有望成为治疗胰腺癌的新靶标。

血脂剩留风险、microRNA与发生ISR的相关性研究进展

经皮冠状动脉介入治疗术后冠状动脉支架内再狭窄是目前亟待解决的临床问题,严重时甚至危及患者生命。PCI术后发生ISR的机制尚不明确,因此,探究PCI后ISR发生的风险尤为重要。目前研究表明,血脂剩留风险、microRNA参与了PCI术后内皮损伤、炎症反应、血管平滑肌细胞过度增殖和内膜增生以及新的动脉粥样硬化形成过程,对ISR起到积极作用。本文就心血管剩留风险、microRNA与ISR相关性的研究进展进行分析、综述,以期对临床研究冠状动脉支架内再狭窄提供理论依据和指导意义。

microRNA-138通过调控FBLN5/IL-1β途径缓解大鼠盆腔器官脱垂

目的:分析microRNA-138通过调控FBLN5/IL-1β途径缓解大鼠盆腔器官脱垂的机制研究。方法:选取40只自然分娩过3次的SPF级SD雌性大鼠,其中10只作为对照组,另外30只构建盆腔器官脱垂模型,麻醉后撑开大鼠阴道将导尿管缝合于阴道口,使其下垂,2周进行双侧卵巢切除术,共有27只大鼠建模成功,分为模型组9只、miRNA-138 inhibitor组9只、miRNA-138 inhibitor+FBLN5抑制剂组9只,对照组、模型组注射生理盐水,miRNA-138 inhibitor组注射10μL miR-138inhibitor慢病毒悬液,miRNA-138 inhibitor+FBLN5抑制剂组注射10μL miR-138inhibitor+10μL FBLN5抑制剂。观察各组大鼠病理组织学、成纤维细胞数量、尿动力学、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达量、FBLN5/IL-1β相关mRNA表达量、FBLN5/IL-1β表达量。结果:与对照组相比,模型组成纤维细胞数量减少,膀胱基础压、膀胱排尿量、膀胱排尿压、膀胱峰值压、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达量、FBLN5相关mRNA表达量、FBLN5表达量降低,IL-1β相关mRNA表达量、IL-1β表达量升高,与模型组相比,miRNA-138 inhibitor组、miRNA-138 inhibitor+FBLN5抑制剂组成纤维细胞数量增加,膀胱基础压、膀胱排尿量、膀胱排尿压、膀胱峰值压、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达量、FBLN5相关mRNA表达量、FBLN5表达量升高,IL-1β相关mRNA表达量、IL-1β表达量降低,且miRNA-138 inhibitor组成纤维细胞数量较多,膀胱基础压、膀胱排尿量、膀胱排尿压、膀胱峰值压、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达量、FBLN5相关mRNA表达量、FBLN5表达量较高,IL-1β相关mRNA表达量、IL-1β表达量较低(P<0.05)。结论:抑制microRNA-138表达,可调控FBLN5/IL-1β途径,促使成纤维细胞、胶原蛋白的表达,并改善大鼠尿动力学,缓解盆腔器官脱垂。

慢性阻塞性肺疾病患者血清微小RNA-218、微小RNA-29b水平变化及对急性加重期的预测价值

目的探究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清微小RNA-218(miR-218)、微小RNA-29b(miR-29b)水平的变化及其对COPD急性加重期的预测价值。方法选取2022年5月至2023年5月于湖北民族大学附属民大医院治疗的116例COPD患者为病例组,根据入院后28 d的病情分为加重组(68例)和稳定组(48例);另选取同期116例体检健康者为对照组。采用荧光定量PCR法测定血清中miR-218、miR-29b的水平,采用多因素logistic回归分析COPD急性加重期的影响因素,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-218、miR-29b水平对COPD急性加重期的预测价值。结果病例组血清miR-218、miR-29b水平明显低于对照组(P<0.05)。加重组患者的年龄、性别、体重指数以及合并高血压、糖尿病、高脂血症的比例与稳定组比较差异无统计学意义(P>0.05),病程及吸烟史比例高于稳定组(P<0.05),miR-218、miR-29b水平均低于稳定组(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,miR-218、miR-29b为COPD急性加重期的独立保护因素(P<0.05),病程、吸烟史为COPD急性加重期的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-218、miR-29b水平预测COPD急性加重期的曲线下面积(AUC)分别为0.797、0.775,二者联合预测的AUC为0.876,优于单独预测(Z二者联合-miR-218=2.162、Z二者联合-miR-29b=2.296,P=0.031、0.022),二者联合预测的敏感度为95.59%,特异性为64.58%。结论COPD患者血清miR-218、miR-29b水平明显下调,且为COPD急性加重期的独立保护因素,二者联合应用对COPD急性加重期具有更高的预测价值。

MicroRNA-33b通过靶向调控SALL4的表达抑制肝细胞癌细胞增殖

目的:探索微小RNA-33b(micro RNA-33b,mi R-33b)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及调控HCC细胞增殖的相关分子机制。方法:收集配对的HCC及癌旁组织32对,分别采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测人类婆罗双树样基因4(Sal-like 4,SALL4)RNA和蛋白表达,MTT实验检测HCC细胞增殖,萤光素酶报告基因检测验证mi R-33b与SALL4基因的靶点关系。结果:Mi R-33b在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.001)。过表达mi R-33b能显著降低HCC LH86细胞的增殖。SALL4是mi R-33b的靶基因,其蛋白表达被mi R-33b负调控。过表达SALL4能逆转mi R-33b对LH86细胞增殖的抑制作用。SALL4在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。结论:Mi R-33b对HCC细胞增殖的抑制作用是通过负调控SALL4的表达而实现。

microRNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控及其在白内障中的作用

目的探讨micro RNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用及其在白内障中的作用。方法利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜、人晶状体上皮细胞凋亡模型和正常人晶状体上皮细胞系let-7a的表达情况;利用Lipofectamine 2000瞬时转染let-7a mimic和let-7a inhibitor,分别上调和下调人晶状体上皮细胞中let-7a的表达,并利用Real time q-PCR方法验证转染效率,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组let-7a的表达显著低于正常对照组;人晶状体上皮细胞凋亡模型组let-7a的表达显著低于正常对照组;let-7a mimic转染组let-7a的表达显著高于对照组,let-7a inhibitor转染组let-7a的表达显著低于对照组;let-7a mimic转染组细胞凋亡率显著低于对照组,let-7a inhibitor转染组细胞凋亡率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 micro RNA let-7a能够调控人晶状体上皮细胞凋亡,从而在白内障发病过程中发挥重要作用,micro RNA let-7a可能成为白内障非手术治疗的新靶点。

脊索瘤中microRNA的差异性表达及其RNA编辑

目的 :检测脊索瘤组织中micro RNA(mi RNA)的差异性表达情况,探讨其RNA编辑。方法 :使用RTq PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技术检测骶骨脊索瘤组织11种候选mi RNA的表达水平,将其与髓核组织中的表达水平进行比较,对表达异常的mi RNA前体(pri-mi RNAs)的DNA和c DNA序列进行对比,检测是否存在RNA编辑。使用蛋白印迹法(Western blot)检测脊索瘤组织中RNA编辑的关键酶RNA腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)的表达。构建ADAR的表达载体,同时构建ERBB2和HOXA1的3′-非翻译区报告载体并转染mi RNA模拟物和抑制物,将其和ADAR的表达载体共转染至人胚肾细胞293T(HEK293T细胞),用q RT-PCR检测mi RNA的表达水平,并通过荧光素酶报告基因活性分析法对已测得异常表达的mi RNA的靶基因ERBB2和HOXA1进行活性分析,检测ADAR与测得异常表达的mi RNA的靶基因的关系。结果:与髓核组织相比,脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的相对表达程度明显下调(P<0.05)。脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的前体c DNA序列中出现了腺苷酸向鸟苷酸(A-G)突变,而在髓核组织中mi R-10a和mi R-125a前体的c DNA序列中无此改变,mi R-10a和mi R-125a在成熟过程中出现了A-I RNA编辑。4组脊索瘤组织中有3组存在ADAR1过度表达,2组存在ADAR2过度表达。转染了mi RNA抑制物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现上调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现下调,mi R-10a的靶基因ERBB2和mi R-125a的靶基因HOXA1的荧光素酶活性显著增高;相反,转染了mi RNA模拟物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现下调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现上调,ERBB2和HOXA1的荧光素酶活性显著降低。结论:ADAR1的过度表达可能通过介导A-I RNA编辑影响mi R-10a和mi R-125a的成熟和表达,参与脊索瘤发生中的细胞异常增殖调控。

MicroRNA Let-7a在小鼠变应性鼻炎中的作用

目的探讨micro RNA Let-7a在小鼠变应性鼻炎中的作用。方法选取32只8周龄成熟雌性C57BL/6小鼠随机分成4组:Let-7a组、Let-7a对照组、OVA组和PBS组,每组8只。Let-7a组、Let-7a对照组及OVA组采用卵清蛋白(OVA)致敏激发,建立小鼠变应性鼻炎模型。Let-7a组于第1、2、3次激发前半小时给予Let-7a和脂质体2000混合物,而Let-7a对照组给予Let-7a对照和脂质体2000混合物。PBS组以PBS代替OVA。造模成功后计数小鼠搔鼻次数、鼻腔灌洗液中炎性细胞情况,取小鼠鼻腔黏膜固定后染色评估鼻黏膜杯状细胞增生病理学变化,检测小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13及IFN-γ水平。结果与Let-7a对照组小鼠相比,Let-7a组小鼠搔鼻次数明显增加,鼻腔黏膜嗜酸性粒细胞浸润及杯状细胞增生显著,具有明显统计学差异(P<0.05),鼻黏膜中IL-4及IL-13显著增高(P<0.05),而IFN-γ无明显差异(P>0.05)。结论 Let-7a促进变应性鼻炎的发生及发展。

单纯疱疹Ⅱ型病毒UL29基因shRNA表达载体的干扰效应

目的:应用RNA干扰技术,针对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)UL29基因构建短发夹RNA重组表达载体,观察其对HSV-2的干扰效应。方法:针对HSV-2 UL29基因筛选出4条拟干扰靶位点序列,分别设计、合成4组靶向UL29基因shRNA的基因真核表达载体。通过脂质体转染到HEK293细胞。再将HSV-2接种到HEK293细胞中。采用终点滴定法检测病毒滴度,RT-PCR检测shRNA对转录水平的影响,Western-blot检测shRNA对蛋白质表达水平的影响。结果:终点滴定法结果显示UL29shRNA各组均可不同程度降低病毒感染滴度,与空白组(未转染重组表达载体)比较差异显著(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,4组抑制率分别为28.80%、59.95%、66.08%、36.27%,差异均具有显著性(P<0.05),shRNANC(不针对任何基因的序列)与空白组相比差异无显著性,其中以UL29shRNA1461组效果为最佳。Western-blot检测表明UL29shRNA各组ICP8蛋白表达水平比阴性对照组明显降低。结论:UL29shRNA能有效干扰HSV-2UL29基因的表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。

MicroRNA在强直性脊柱炎成骨、破骨机制中的作用

炎性骨破坏和新骨形成是强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的典型病理改变,AS早期以炎症为主,晚期出现异位骨化和骨破坏,异位骨化和骨破坏两种矛盾的表现反映了强直性脊柱炎患者成骨与破骨过程之间的动态平衡被打破。其发病机制尚不完全清楚,目前研究认为,AS复杂的新骨形成机制与Wnt/β-catenin信号通路及BMP/Smads通路密切相关,而破骨细胞则在骨破坏过程中起重要作用,RANKL/RANK/OPG系统中的细胞因子是调控破骨细胞分化成熟的关键因子。Micro RNA可调节成骨细胞、软骨细胞和破骨细胞的分化与功能,是骨形成、骨吸收、骨重塑和修复过程中的关键调节因子。研究MicroRNA在强直性脊柱炎成骨、破骨机制中的作用,可为AS的诊断和治疗提供新的依据。

外泌体源性microRNA在疾病诊疗中的研究进展

外泌体是一种纳米级别的生物膜结构,由机体的多种细胞分泌,广泛分布于唾液、血浆、乳汁等体液中。外泌体中有蛋白质、m RNA、microRNA、细胞因子、转录因子受体等多种生物活性物质。microRNA是短链非编码RNA,在转录后水平调节基因的表达,广泛参与个体发育、细胞增殖凋亡等生命活动。外泌体源性microRNA具有生物学特性和靶向特异性,不仅可作为肿瘤、神经退行性病变、重大精神疾病的分子诊断标志物,甚至有潜力成为上述疾病的新治疗靶点。

糖尿病心肌病患者血清差异表达microRNA及作用的研究

目的筛选糖尿病心肌病患者血清差异表达的micro RNA(mi RNA),明确mi R-186-5p和mi R-516a-5p在DCM发生发展中的作用和机制。方法选择30例DCM患者为实验组,60例年龄相当的身体健康者为正常对照组,分别从两组随机选取3例作为研究对象行micro RNA芯片初筛差异表达mi RNA,然后荧光定量q PCR验证这些mi RNA的差异表达;在高糖诱导人AC16心肌细胞损伤模型中,mi R-186-5p和mi R-516-5p的mimics和inhibitors分别干预,观察对高糖引起的心肌细胞毒性的影响。结果 micro RNA芯片检测发现,糖尿病心肌病患者血清有51个差异表达的mi RNA,经荧光定量q PCR验证为mi R-186-5p、mi R-516a-5p等8个差异表达mi RNA;显著高表达的mi R-516-5p和明显低表达的mi R-186-5p介导了高糖所致心肌细胞毒性损伤。结论糖尿病心肌病患者血清mi RNA表达谱发生改变,有8个差异表达mi RNA,mi R-516a-5p和mi R-186-5p可能参与糖尿病心肌病的心肌损伤发病过程。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对结直肠癌细胞HT-29增殖凋亡的影响及机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)SPRY4-IT1对结直肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制。方法采用qRT-PCR方法检测LncRNA SPRY4-IT1在结直肠癌细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)和正常肠上皮细胞(FHC)的表达。选择其相对表达最高的HT-29细胞,以慢病毒载体介导构建SPRY4-IT1过表达(上调组)和干扰的(下调组)稳转细胞株,并设立无义转染组和空白对照组;qRT-PCR检测各组HT-29细胞中SPRY4-IT1 mRNA的表达量;CCK-8法检测细胞增殖活力;克隆试验检测细胞的克隆形成率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。Western blotting法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达量。结果 LncRNA SPRY4-IT1在结直肠细胞株(HT-29、HCT-116、SW-480、SW-620、Caco-2)相对FHC的表达增高,以HT-29细胞株中的表达最高(P均<0.05)。相对于空白对照组、无义转染组,上调组SPRY4-IT1 mRNA表达量升高,HT-29细胞增殖活力增强,克隆形成率升高,凋亡率降低(P<0.05或<0.01);而下调组SPRY4-IT1 mRNA表达量下降,细胞增殖活力减弱,克隆形成率降低,凋亡率升高(P<0.05或<0.01);在各组细胞间,细胞周期分布比较,P均>0.05。相对于空白对照组、无义转染组,上调组细胞Bcl-2蛋白表达量增多,Bax蛋白表达量减少(P<0.05或<0.01);下调组Bcl-2蛋白表达量减少,Bax蛋白表达量增多(P均<0.01)。结论 LncRNA SPRY4-IT1可能通过促进Bcl-2表达,抑制Bax表达而促进结直肠癌细胞增殖、抑制其凋亡。