前列腺癌患者血清miR-138-5p,miR-212-5p水平表达及与临床预后价值

目的 探究前列腺癌(prostate cancer)患者血清miR-138-5p,miR-212-5p水平表达及与临床预后价值。方法 选择2020年7月~2021年6月邯郸市第一医院收治的95例前列腺癌患者,根据术后两年的随访记录分为预后不良组(复发或死亡,n=52)和预后良好组(未复发或好转,n=43),另选同期48例健康体检志愿者为健康对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time fluorescence-PCR,qRT-PCR)检测血清miR-138-5p和miR-212-5p相对表达水平,收集并分析患者临床资料,多因素COX回归分析影响前列腺癌患者预后的因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-138-5p和miR-212-5p对前列腺癌患者预后情况的预测价值;Pearson分析miR-138-5p,miR-212-5p与Gleason评分的相关性。结果 与健康对照组相比较,预后良好组、预后不良组患者血清miR-138-5p(0.88±0.10,0.83±0.09 vs 1.01±0.10),miR-212-5p(0.75±0.09,0.71±0.08 vs 1.02±0.11)水平显著降低,差异具有统计学意义(t=14.021,22.275;9.825,18.063,均P <0.05);前列腺癌患者预后情况与TNM分期、骨转移、组织分化程度、术前PSA水平以及Gleason评分有关(χ^(2)=4.417~7.187,t=14.235,均P <0.05);血清mi R-138-5p[HR(95%CI):0.871(0.785~0.966)],miR-212-5p[HR(95%CI):0.822(0.725~0.932)]为预后不良的保护因素(均P <0.05)。Gleason评分[HR(95%CI):1.253(1.026~1.530)],TNM分期[HR(95%CI):1.224(1.024~1.463)],骨转移[HR(95%CI):1.398(1.036~1.887)],组织分化程度[HR(95%CI):1.520(1.146~2.016)]和PSA水平[HR(95%CI):1.426(1.094~1.858)]为预后不良的危险因素(均P <0.05);血清miR-138-5p,miR-212-5p预测的曲线下面积(95%置信区间)[AUC(95%CI)]分别为0.883(95%CI:0.801~0.940),0.863(95%CI:0.777~0.925);血清miR-138-5p,miR-212-5p与Gleason评分均呈负相关(r=-0.610,-0.420,均P <0.05)。结论 前列腺癌患者血清miR-138-5p和miR-212-5p水平显著降低,且对前列腺癌患者预后具有一定辅助预测价值。

结直肠癌组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白的表达变化及其意义

目的观察结直肠癌(CRC)组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DNA损伤结合蛋白1和CUL4相关因子7(DCAF7)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法CRC患者98例,均接受手术治疗,术中留取CRC组织和癌旁组织,采用Real-time PCR法检测CRC组织和癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p,采用蛋白印迹法检测CRC组织和癌旁组织中DCAF7蛋白,分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者临床病理参数的关系。以CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量的中位数为临界值,将CRC患者分为miR-138-5p高表达组和miR-138-5p低表达组、miR-876-5p高表达组和miR-876-5p低表达组、DCAF7蛋白高表达组和DCAF7蛋白低表达组,并分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者预后的关系。结果CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为1.36±0.29、1.41±0.36、0.59±0.19,癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为2.15±0.48、2.08±0.44、0.20±0.08,两者相比,P均<0.05。miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P均<0.05)。miR-138-5p低表达组3年总体生存率为67.3%,miR-138-5p高表达组3年总体生存率为86.6%,两组相比,P<0.05。miR-876-5p低表达组3年总体生存率为66.7%,miR-876-5p高表达组3年总体生存率为85.1%,两组相比,P<0.05。DCAF7蛋白高表达组3年总体生存率为67.2%,DCAF7蛋白低表达组3年总体生存率为87.5%,两组相比,P<0.05。结论CRC组织中miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达,miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关。与miR-138-5p高表达、miR-876-5p高表达、DCAF7蛋白低表达的CRC患者相比,miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达的CRC患者术后3年总体生存率低。

微小RNA-199a-5p保护大鼠脑缺血后血-脑屏障完整性

目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只。应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平。结果MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力。MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达。此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症。MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡。结论MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌SD细胞生物学行为的影响实验研究

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后检测细胞存活率。将GBC-SD细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养GBC-SD细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,GBC-SD细胞存活率逐渐降低(均P<0.05)。与对照组比较,PTS组细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均P<0.05)。沉默miR-340-5p可逆转PTS对GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均P<0.05)。miR-340-5p与MCL-1存在靶向调控关系。PTS能抑制裸鼠肿瘤生长和MCL-1 mRNA和蛋白表达,促进miR-340-5p表达(均P<0.05)。结论:PTS可通过上调miR-340-5p表达下调MCL-1表达,抑制GBC-SD细胞增殖、迁移和侵袭,促进GBC-SD细胞凋亡。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

外泌体微小RNA-877-5p通过调控Nrf2/HO-1轴诱导铁死亡对肝癌细胞的影响

目的分析外泌体微小RNA-877-5p(miR-877-5p)通过调控转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)轴诱导铁死亡对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。方法检测正常肝细胞与肝癌细胞株中miR-877-5p表达量,并对MHCC97H细胞进行转染,分为空白组、miR-877-5p抑制剂组、miR-877-5p模拟物组,检测各组铁死亡相关因子Nrf2、HO-1表达量,观察并分析各组MHCC97H细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡情况。结果与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞株中HEP3B、HCCLM3、HepG2、MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与肝癌细胞HEP3B、HCCLM3、HepG2相比,肝癌细胞MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与空白组相比,miR-877-5p抑制剂组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率降低(P<0.05),溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量升高(P<0.05),miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量降低(P<0.05);与miR-877-5p抑制剂组相比,miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1的表达量降低(P<0.05)。结论上调外泌体miR-877-5p可抑制Nrf2/HO-1轴的激活,促使铁死亡,抑制肝癌细胞增殖,加快癌细胞的凋亡速度。

孕早期孕妇促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体及微小RNA-873-5p水平与妊娠期糖尿病相关性研究

目的:分析研究孕早期促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)及微小RNA-873-5p(miR-873-5p)水平与妊娠期糖尿病(GDM)的相关性。方法:选取定期产检的GDM孕妇命名为GDM组(n=109),另选同期在本院产检的糖耐量正常孕妇为对照组(n=60)。收集两组孕妇的一般资料及孕早期实验室检测指标(TSH、TPOAb、miR-873-5p),采用单因素、多因素分析TSH、TPOAb、miR-873-5p水平与GDM的关系;并绘制ROC曲线分析血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平对GDM的预测价值。结果:GDM组的血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平均高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄>30岁(OR=1.982)、孕前BMI≥24 kg/m^(2)(OR=2.020)、TSH升高(OR=2.113)、TPOAb升高(OR=2.307)及miR-873-5p水平升高(OR=2.059)是发生GDM的独立危险因素(均P<0.05);ROC曲线分析显示,血清TSH、TPOAb、miR-873-5p及联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.830、0.829、0.762、0.936,联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论:TSH、TPOAb及miR-873-5p在GDM孕妇体内呈高表达,可能成为GDM发生的辅助预测指标。

小儿急性复杂性阑尾炎血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p水平及其诊断价值

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)-分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)和miR-214-5p对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。方法 本研究选取2019年1月—2022年1月宝鸡市中医医院收治的急性阑尾炎患儿102例作为研究组,根据病理结果分为单纯性阑尾炎组和复杂性阑尾炎组,另选同期本院健康体检儿童50例作为对照组;实时荧光定量PCR检测血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p水平;采用全自动化学发光免疫分析仪检测C反应蛋白(CRP)以及降钙素原(PCT);Pearson法分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p以及二者与CRP、PCT的相关性;Logistic回归分析小儿急性复杂性阑尾炎的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p、CRP和PCT水平对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。结果 复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清lncRNA-DANCR、CRP和PCT水平显著升高(P<0.05),复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清miR-214-5p显著降低(P<0.05)。Pearson相关性分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p呈负相关(P<0.05),血清lncRNA-DANCR与CRP和PCT呈正相关(P<0.05),miR-214-5p与CRP和PCT呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,lncRNA-DANCR、CRP和PCT高表达和miR-214-5p低表达是影响小儿急性复杂性阑尾炎的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析四者联合优于lncRNA-DANCR和miR-214-5p各自单独诊断(Z_(联合vs. lncRNA-DANCR=2.647)、Z_(联合vs. miR-214-5p=4.256)、Z_(联合vs. CRP=3.245)、Z_(联合vs. PCT=3.267),均P<0.05)。结论 在急性复杂性阑尾炎患儿血清中lncRNA-DANCR高表达,miR-214-5p低表达,二者联合可诊断小儿急性复杂性阑尾炎。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

circ_0114427靶向微小RNA-330-5p调控脂多糖诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症反应

目的探讨circ_0114427对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的影响及其机制。方法体外培养人肺泡上皮细胞,分别转染si-circ_0114427、微小RNA(miR)-330-5p mimics或共转染si-circ_0114427与anti-miR-330-5p后,用10 mg/L LPS处理24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中circ_0114427和miR-330-5p表达量;采用蛋白免疫印迹评估活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase3)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(Cleaved-caspase9)蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;采用流式细胞术分析细胞凋亡。采用双荧光素酶报告实验验证circ_0114427和miR-330-5p的互作关系。结果肺泡上皮细胞经LPS处理后,细胞中circ_0114427表达升高,miR-330-5p表达降低(P<0.05)。敲减circ_0114427或上调miR-330-5p可以抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡、Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9表达以及IL-6和TNF-α水平(P<0.05)。circ_0114427靶向结合并负调控miR-330-5p。miR-330-5p下调可以逆转circ_0114427敲低对LPS诱导的细胞凋亡和炎症的抑制作用。结论敲减circ_0114427可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症,这可能与miR-330-5p上调有关。

尿液前列腺特异性抗原联合微小RNA-21-5p对前列腺癌的早期诊断价值

目的探讨尿液前列腺特异性抗原(PSA)联合微小RNA-21-5p(miR-21-5p)对前列腺癌(PCa)的早期诊断价值。方法选取2020年1月至2022年12月重庆市合川区人民医院收治的73例PCa患者为病例组,75例良性前列腺增生(BPH)患者为对照组。检测两组尿PSA、miR-21-5p水平,分析PSA和miR-21-5p对PCa早期诊断价值。结果病例组患者尿液PSA、miR-21-5p水平明显高于对照组(P<0.05)。随着Gleason分级、TNM分期的升高,PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平逐渐升高(P<0.05);存在转移的PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平高于未转移患者(P<0.05)。PSA、miR-21-5p及串联联合试验诊断PCa的受试者操作特征曲线下面积为0.841、0.878、0.947,其中联合诊断的特异度显著高于单独检测(P<0.05)。结论PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平明显升高,PSA、miR-21-5p可作为PCa诊断和病理分级的参考指标,联合检测对PCa具有更高诊断效能。

沉默lncRNA MCF2L-AS1通过miR-138-5p/AnxA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究lncRNA MCF2L-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法:qRT-PCR检测正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A、乳腺癌细胞系(MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231)中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p水平;将si-NC、si-MCF2L-AS1、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor分别转染至MDA-MB-415细胞并命名为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor组,未做任何处理的MDA-MB-415细胞记为NC组。qRT-PCR检测MDA-MB-415细胞中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p表达;MTT法检测MDA-MB-415细胞增殖情况;流式细胞术检测MDA-MB-415细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-415细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测MDA-MB-415细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、AnxA2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p、AnxA2的关系;小鼠异种移植实验检测肿瘤生长。结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞中lncRNA MCF2L-AS1、AnxA2水平显著上调(P<0.05),miR-138-5p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-MCF2L-AS1组MDA-MB-415细胞OD 560 nm值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA MCF2L-AS1表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、小鼠肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05),MDA-MB-415细胞凋亡率、miR-138-5p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-138-5p表达减弱了沉默lncRNA MCF2L-AS1抑制MDA-MB-415细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的效果;lncRNA MCF2L-AS1负向调控miR-138-5p/AnxA2轴。结论:沉默lncRNA MCF2L-AS1可能通过上调miR-138-5p来下调AnxA2的表达,进而抑制乳腺癌MDA-MB-415细胞增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA NEAT1、miRNA-182-5p与2型糖尿病合并代谢性脂肪性肝病患者肝纤维化风险的相关性研究

背景随着慢性代谢性疾病的发病率逐年增加,已威胁全民健康,目前非编码RNA与内分泌代谢相关疾病的研究已成为国内外研究热点,其中长链非编码RNA核富集转录体(lncRNA NEAT1)及微小RNA(miRNA)-182-5p在2型糖尿病(T2DM)合并代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)中的研究鲜有报道。目的探讨T2DM合并MAFLD患者lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p在肝纤维化发生、发展中的机制及临床意义。方法纳入2021年10月—2022年6月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院内分泌科就诊的T2DM患者236例为研究对象,同时纳入49名健康志愿者为健康对照组。收集研究对象一般资料与实验室检测结果。测定内脏脂肪面积(VFA)、皮下脂肪面积(SFA)。采集外周血,测定lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p。将T2DM患者其分为T2DM合并非MAFLD组(n=82)与T2DM合并MAFLD组(n=154)。进一步根据肝纤维化指数(FIB-4)将T2DM合并MAFLD组分为肝纤维化低危亚组(n=55)、肝纤维化中危亚组(n=69)、肝纤维化高危亚组(n=30)。采用Spearman秩相关分析探究肝纤维化高危亚组lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p表达水平的相关性,采用多因素有序Logistic回归分析探究T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结果健康对照组年龄、颈围(NC)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)低于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组,白蛋白(Alb)高于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组(P<0.05);T2DM合并MAFLD组BMI、腰围(WC)、VFA、SFA、稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、三酰甘油(TG)、血尿酸(SUA)、lncRNA NEAT1高于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,血小板计数(PLT)低于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,总胆固醇(TC)低于健康对照组(P<0.05);T2DM合并非MAFLD组HOMA-IR、lncRNA NEAT1高于健康对照组,miRNA-182-5p高于健康对照组、T2DM合并MAFLD组,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)低于健康对照组、T2DM合并MAFLD组(P<0.05)。肝纤维化低危亚组VFA、SFA、AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,BMI、WC、NC低于肝纤维化高危亚组,TC高于肝纤维化高危亚组(P<0.05);肝纤维化中危亚组PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化高危亚组,AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化高危亚组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,肝纤维化高危亚组患者lncRNA NEAT1与miRNA-182-5p呈负相关(r_(s)=-0.438,P<0.05)。多因素有序Logistic回归分析结果显示,lncRNA NEAT1(OR=1.326,95%CI=1.087~1.616)、VFA(OR=1.019,95%CI=1.006~1.033)、miRNA-182-5p(OR=0.083,95%CI=0.027~0.257)、PLT(OR=0.956,95%CI=0.942~0.970)、AST(OR=1.048,95%CI=1.022~1.075)是T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结论外周血lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p与T2DM合并MAFLD患者并发肝纤维化密切相关,为该病的早期预测及诊治提供依据。

长链非编码RNA SLCO4A1-AS1靶向微小RNA-615-5p对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析LncRNA SLCO4A1-AS1和miR-615-5p在食管癌组织、细胞系中表达情况。将si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞。CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系。结果食管癌组织、细胞系中LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡。

老年急性脑梗死患者血清circTTC3和miR-138-5p水平变化及意义

目的探究老年急性脑梗死(ACI)患者血清环状RNA TTC3(circTTC3)和微小RNA-138-5p(miR-138-5p)水平变化及意义。方法选取2021年9月—2023年9月四川大学华西医院老年医学中心/干部医疗科诊治老年ACI患者128例(ACI组),根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)分为轻度亚组42例、中度亚组49例和重度亚组37例,同期医院门诊体检的健康人员120例作为健康对照组;采用实时荧光定量PCR法测定血清circTTC3和miR-138-5p表达水平,Pearson法分析老年ACI患者血清circTTC3和miR-138-5p的相关性,Spearman法分析老年ACI患者血清circTTC3和miR-138-5p表达水平与NIHSS评分相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清circTTC3和miR-138-5p表达水平对老年ACI患者神经缺损程度的诊断价值。结果与健康对照组比较,ACI组血清circTTC3表达水平升高,miR-138-5p降低(t/P=17.207/<0.001、16.239/<0.001)。血清circTTC3水平比较,轻度亚组<中度亚组<重度亚组,miR-138-5p表达水平比较,轻度亚组>中度亚组>重度亚组(F/P=26.579/<0.001、105.935/<0.001)。老年ACI患者血清circTTC3表达水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.521,P<0.001),与大脑中动脉(MCA)、大脑前动脉(ACA)血流速度呈负相关(r=-0.425、-0.392,P均<0.001);miR-138-5p表达水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.785,P<0.001),与MCA、ACA血流速度呈正相关(r=0.571、0.635,P均<0.001)。circTTC3、miR-138-5p及二者联合诊断ACI神经缺损程度的AUC分别为0.817、0.810、0.878,二者联合诊断价值优于单独诊断(Z/P=2.106/0.035、2.406/0.016)。结论老年ACI患者血清circTTC3表达水平升高,miR-138-5p表达水平降低,二者与患者病情的严重程度密切相关,可能作为ACI病情诊断、治疗相关的作用靶点。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

动态心电图参数、微小RNA-187-5p、嘌呤能离子通道型受体7与急性心肌梗死患者并发主要不良心血管事件的相关性

目的分析动态心电图参数、微小RNA-187-5p(miR-187-5p)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)与急性心肌梗死(AMI)患者并发主要不良心血管事件(MACE)的相关性。方法选取2020年9月至2022年9月河北北方学院附属第一医院收治的142例AMI患者为观察组,同时选取在河北北方学院附属第一医院进行体检的130例健康志愿者为对照组。根据是否并发MACE将观察组患者分为无MACE组(未并发MACE,96例)和MACE组(并发MACE,46例)。比较分析对照组与观察组患者的动态心电图参数、miR-187-5p、P2X7R以及MACE组与无MACE组患者的临床特征。采用多因素logistic回归方法分析AMI患者并发MACE的影响因素。结果观察组患者的QT离散度(QTd)、校正QT间期离散度、震荡初始、P2X7R均高于对照组,NN间期标准差(SDNN)、震荡斜率、miR-187-5p均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。MACE组患者的合并高血压比例、QTd、P2X7R均高于无MACE组,SDNN、miR-187-5p均低于无MACE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,QTd、P2X7R均为AMI患者并发MACE的独立危险因素(P<0.05),SDNN、miR-187-5p均为AMI患者并发MACE的独立保护因素(P<0.05)。结论AMI患者的QTd、P2X7R、SDNN、miR-187-5p均与MACE的发生显著相关。

血浆外泌体微RNA-126-5p在儿童注意缺陷多动障碍中的表达及临床意义

目的探究血浆外泌体微RNA-126-5p(miR-126-5p)在儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)中的表达及临床意义。方法选取2021年7月至2022年7月在江苏省人民医院确诊的ADHD病儿70例为ADHD组,同时纳入同期江苏省人民医院健康体检的志愿者70例为对照组,采用韦氏幼儿智力量表第4版(WISC-Ⅳ)和家长评定行为量表(SNAP-Ⅳ)评估研究对象的临床症状,采用miRNA测序绘制研究对象的差异miRNA表达谱后寻找关键的miRNA,并利用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价miRNA诊断ADHD的价值,分析miRNA与临床症状的相关性,同时分析miRNA的生物学功能。结果与对照组比较,ADHD病儿WISC-Ⅳ的计算言语理解指数(VCI)[(76.99±6.93)分比(95.30±5.94)分]、知觉推理指数(PRI)[(75.38±4.49)分比(94.69±6.33)分]、工作记忆指数(WMI)[(76.35±7.01)分比(94.11±5.87)分]、加工速度指数(PSI)[(81.36±6.90)分比(89.49±6.20)分]以及总智商(FSIQ)[(79.18±9.30)分比(90.19±5.22)分]的分值显著降低,而SNAP-Ⅳ中注意缺陷和多动/冲动评分明显增高。同时miRNA测序筛选出11个差异miRNAs,其中miR-126-5p在ADHD病儿的血浆外泌体表达升高,并与病儿临床症状存在相关性,且ROC曲线显示miR-126-5p的AUC为0.817,灵敏度为78.6%,特异度为91.4%。此外miR-126-5p主要涉及突触囊泡循环、轴突导向、炎症介质以及长时程增强等生物学功能有关。结论ADHD病儿血浆外泌体miR-126-5p升高,具有诊断ADHD的临床应用价值,同时具有调控突触可塑性和炎症介质参与ADHD的病理机制。

微小RNA-452-5p及SRY盒相关基因7在食管癌组织中的表达水平及与临床病理参数和预后的关系研究

目的 探讨微小RNA-452-5p(miR-452-5p)及SRY盒相关基因7(SOX7)在食管癌组织中的表达水平以及临床病理参数和预后的关系。方法 选取2017年6月至2019年5月期间我院收治的106例食管癌患者作为研究对象。检测食管癌患者miR-452-5p、SOX7 mRNA的表达,分析癌组织中miR-452-5p、SOX7 mRNA表达与临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并采用COX单因素和多因素分析影响食管癌预后的危险因素。结果 相比于癌旁组织,癌组织中的miR-452-5p表达水平更高(P<0.05),SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。相比于肿瘤Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度(Tis~T2)食管癌患者,miR-452-5p在有淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ期、浸润深度(T3~T4)癌组织中有更高的表达水平,SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,患者3年总生存率miR-452-5p高表达组为30.4%(17/56),miR-452-5p低表达组为54.0%(27/50),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=6.082,P=0.014);SOX7 mRNA高表达组和SOX7 mRNA低表达组患者患者3年总生存率分别为53.7%(29/54)、28.8%(15/52),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=6.742,P=0.009)。COX单因素回归分析结果显示,miR-452-5p、SOX7 mRNA、肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移与食管癌预后有关。COX多因素回归分析结果显示,影响食管癌预后的独立因素有淋巴结转移、SOX7 mRNA低表达、肿瘤分期Ⅲ期、miR-452-5p高表达、浸润深度(T3~T4)。结论 miR-452-5p在食管癌组织中呈高表达、SOX7 mRNA在食管癌组织中呈低表达,其水平与淋巴结转移、肿瘤分期、浸润深度有关,且密切关联食管癌患者预后。