微小RNA-181c-5p和Kruppel样因子6在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征关系研究

目的:检测子宫内膜样腺癌组织中微小RNA-181c-5p(miR-181c-5p)和Kruppel样因子6(KLF6)的表达,探讨其相关性及临床意义。方法:选择49例子宫内膜样腺癌行手术治疗的患者作为观察组,选择49例增生期子宫内膜组织作为对照组。应用实时荧光定量PCR法检测术后组织中miR-181c-5p的表达,应用免疫组化方法检测KLF6的表达。应用线性相关分析观察miR-181c-5p和KLF6的关系,应用K-M生存分析观察miR-181c-5p和KLF6与术后生存时间的关系。结果:观察组miR-181c-5p表达量明显低于对照组(P<0.05),KLF6的阳性率明显低于对照组(P<0.05)。观察组miR-181c-5p与KLF6表达与肿瘤肌层浸润深度、宫颈管累犯及病理分级密切相关(均P<0.05),且两者具有正相关性,两者的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。结论:子宫内膜样腺癌中miR-181c-5p和KLF6均异常表达且具有正相关性,联合检测miR-181c-5p和KLF6的表达对判断肿瘤预后可能有一定价值。

胃癌组织微小RNA-181d-5p和三基序蛋白22表达与患者术后5年内生存相关性研究

目的:探讨胃癌组织微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)和三基序蛋白22(TRIM22)表达与患者术后5年内生存的关系。方法:收集110例胃癌患者(均是胃腺癌)术中切除的胃癌组织标本及癌旁组织标本。荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测miR-181d-5p和TRIM22蛋白表达。患者术后随访5年,记录生存情况。Starbase数据库预测miR-181d-5p与TRIM22结合位点,并验证miR-181d-5p与TRIM22的靶向关系。比较癌旁和胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达,不同临床病理特征患者胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达差异。分析胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达与患者预后的关系,胃癌患者预后的影响因素,以及胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22及它们与不同临床病理特征的相关性。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低(均P<0.05)。肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期在miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者中的比例分别高于肿瘤高分化、黏膜或膜下层浸润、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期(均P<0.05)。miR-181d-5p与TRIM22具有靶向结合位点,miR-181d-5p可负向调控TRIM22表达。miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者5年总生存率分别低于miR-181d-5p低表达和TRIM22阳性表达患者(均P<0.05)。影响胃癌患者术后5年内生存的独立危险因素有miR-181d-5p高表达、TRIM22阴性表达、肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期(均P<0.05)。胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22、肿瘤分化程度呈负相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关(均P<0.05);TRIM22与肿瘤分化程度呈正相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(均P<0.05)。结论:胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低,两者与患者临床病理特征和术后5年内生存有密切关系。

血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法前瞻性选取NSCLC患者65例作为研究对象,为NSCLC组;另选取同期体检健康者60例为健康组。收集NSCLC患者的一般资料,包括年龄、性别、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度等。NSCLC患者治疗前、健康组体检时抽取空腹静脉血,血清中提取外泌体,RT-PCR法检测外泌体的miR-181c-5p和miR-142-5p的表达。结果NSCLC组血清中miR-181c-5p和miR-142-5p的表达明显低于健康组(t=7.358、8.613,P<0.001)。NSCLC患者miR-181c-5p和miR-142-5p表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度相关(P<0.05)。miR-181c-5p曲线下面积AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925,P<0.001),当截断值为0.673时,灵敏度为81.54%,特异度为71.67%;miR-142-5p曲线下面积AUC为0.878(95%CI:0.819~0.936,P<0.001),当截断值为0.752时,灵敏度为84.62%,特异度为72.30%;miR-181c-5p和miR-142-5p联合诊断的曲线下面积AUC为0.912(95%CI:0.863~0.961,P<0.001),灵敏度为86.15%,特异度为78.33%。结论miR-181c-5p和miR-142-5p在NSCLC患者血清中低表达,其有望成为临床NSCLC辅助诊断的分子标志物。

LncRNA MEG3调控microRNA-181b-5p/TIMP3对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)调控微小RNA-181b-5p(microRNA-1816-5P,简称miR-181b-5p)/组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。方法收集2019年12月—2021年12月本院所收治的20例前列腺癌患者前列腺癌组织及其对应癌旁组织;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织MEG3、miR-181b-5p表达;将前列腺癌细胞(PC3细胞)随机分为对照组(未处理)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1-MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG)、pcDNA3.1-MEG3+miR-NC组(pcDNA3.1-MEG3与miR-NC共转染)、pcDNA3.1-MEG3+miR-181b-5p mimic组(pcDNA3.1-MEG3与miR-181b-5p mimic共转染);qRT-PCR检测细胞MEG3、miR-181b-5p表达;MTT实验、Transwell实验、划痕实验分别检测PC3细胞活力、侵袭及迁移能力;Western blot检测PC3细胞TIMP3、基质金属蛋白酶(MMP)9、MMP2蛋白表达;双荧光素酶实验检测MEG3、miR-181b-5p、TIMP3的靶向关系。结果与癌旁组织的表达相比,MEG3在前列腺癌组织(0.37±0.05 vs.1.00±0.04)及细胞(0.31±0.06 vs.1.00±0.01)中表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,pcDNA3.1-MEG3组miR-181b-5p表达(0.26±0.04 vs.1.00±0.02)、细胞存活率(53.60±5.22 vs.100.00±0.00)、侵袭细胞数(62.33±9.85 vs.162.34±21.30)、细胞迁移率(32.85±3.80 vs.75.22±5.96)、MMP9(0.61±0.08 vs.1.62±0.23)、MMP2(0.73±0.10 vs.1.20±0.16)表达显著降低,MEG3(2.31±0.36 vs.1.00±0.01)、TIMP3蛋白(1.32±0.24 vs.0.53±0.08)表达显著增加(P<0.05);miR-181b-5p过表达可逆转上述指标变化(P<0.05);miR-181b-5p与MEG3、TIMP3间均存在靶向关系。结论lncRNA MEG3过表达可通过抑制miR-181b-5p来促进TIMP3表达,从而抑制PC3细胞侵袭、迁移。

免疫性血小板减少症患儿 T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p 和微小RNA-181a-5p表达水平检测及临床意义

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)患儿T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)和微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及临床意义。方法:以158例ITP患儿为ITP组,依据临床分型不同分为慢性ITP组(34例)、持续性ITP组(60例)和新诊断ITP组(64例)。另选取同期健康儿童102例为对照组。所有患儿均给予静脉滴注人免疫球蛋白及口服醋酸泼尼松片等常规治疗,均治疗5 d。比较ITP组与对照组全血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))细胞及血清甲状腺自身抗体[甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较慢性ITP组、持续性ITP组和新诊断ITP组患儿全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较ITP患儿治疗前、治疗5 d后全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。结果:与对照组比较,ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平更低,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平更高(均P<0.05)。慢性ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平低于持续性ITP组和新诊断ITP组,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平高于持续性ITP组和新诊断ITP组(均P<0.05)。与治疗前比较,治疗5 d后ITP患儿全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平升高,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平降低(均P<0.05)。结论:ITP患儿存在T淋巴细胞亚群失衡、甲状腺自身抗体和miR-106b-5p高表达以及miR-181a-5p低表达情况。治疗期间积极检测患儿全血T淋巴细胞亚群及血清甲状腺自身抗体、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平,有助于患儿的疗效评估。

血清miR-181c-5p和miR-582-5p水平在老年急性缺血性脑卒中早期诊断中的应用

目的探讨血清miR-181c-5p、miR-582-5p在老年急性缺血性脑卒中(AIS)早期诊断中的应用。方法选取2019年3月至2021年3月成都市第六人民医院神经内科治疗的89例老年AIS患者为AIS组,根据NIHSS评分将患者分为重度组24例、中度组34例、轻度组31例。另选取同期到本院就诊并确诊为无神经功能障碍、无梗死病灶的一般脑血管疾病患者60例为对照组。采用qRT-PCR检测血清miR-181c-5p、miR-582-5p表达水平;Spearman法分析老年AIS患者血清miR-181c-5p、miR-582-5p水平与NIHSS评分的相关性;Logistic回归分析老年AIS发生的影响因素;ROC曲线分析血清miR-181c-5p、miR-582-5p水平对老年AIS的诊断价值。结果与对照组相比,AIS组血清miR-181c-5p显著升高(P<0.05),血清miR-582-5p显著降低(P<0.05)。老年AIS患者血清miR-181c-5p水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.676,P<0.001),血清miR-582-5p水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.656,P<0.001);随病情程度增加,血清miR-181c-5p水平逐渐升高,miR-582-5p水平逐渐降低(P<0.05)。miR-181c-5p是影响老年AIS发生的危险因素,miR-582-5p是保护因素(P<0.05)。血清miR-181c-5p、miR-582-5p以及两者联合诊断老年AIS的AUC分别为0.893、0.803、0.938,联合诊断的敏感度为88.80%,特异性为85.00%,两者联合优于血清miR-181c-5p、miR-582-5p各自单独诊断(P=0.022、P<0.001)。结论老年AIS患者血清miR-181c-5p水平上调,miR-582-5p水平下调,为早期诊断老年AIS及判断病情严重程度的标志物,两者联合诊断老年AIS具有较高效能。

外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平对妊娠期糖尿病不良妊娠结局的预测价值

目的 探究外周血单个核细胞YY1转录因子(YY1)、微小RNA(miR)-181a-5p表达水平对妊娠期糖尿病(GDM)不良妊娠结局的预测价值。方法 纳入2020年6月至2022年6月该院收治的GDM患者200例作为GDM组,选取同期产检健康孕妇100例作为对照组。采用荧光定量PCR检测外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析YY1、miR-181a-5p表达水平对GDM患者不良妊娠结局的预测价值。结果 与对照组比较,GDM组外周血单个核细胞中YY1、miR-181a-5p表达水平均下降(P<0.05),GDM组产后出血、巨大儿、新生儿低血糖的发生率均上升(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、血糖控制不良是GDM患者妊娠不良结局的独立危险因素(P<0.05),外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平均是GDM患者妊娠不良结局的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.717、0.751、0.832,其中联合预测的AUC明显高于二者单独预测(P<0.05)。结论 GDM患者外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平降低可增加不良妊娠结局的风险,YY1、miR-181a-5p与GDM患者不良妊娠结局的关系密切,二者均可作为GDM患者不良妊娠结局的预测因子。

血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平对慢性肾小球肾炎患者预后的预测价值

目的探讨血清微小RNA(miR)-181a-5p、miR-132-5p水平与慢性肾小球肾炎患者3年内预后的关系。方法选取2018年1月—2020年4月中国人民解放军联勤保障部队第九〇一医院肾内科收治的慢性肾小球肾炎患者128例作为慢性肾小球肾炎组(肾炎组)和体检健康者130例作为健康对照组(对照组)。检测2组肾功能指标、血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平;分析血清miR-181a-5p、miR-132-5p与肾功能指标的相关性,影响慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的因素,血清miR-181a-5p、miR-132-5p及二者联合预测慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的价值。结果与对照组比较,肾炎组血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平显著降低(t/P=47.860/<0.001、75.095/<0.001),血清尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、胱抑素C(CysC)水平显著升高,肾小球滤过率(eGFR)水平显著降低(t=27.103、16.387、37.145、47.506、28.550,P均<0.001);血清miR-181a-5p与miR-132-5p水平呈正相关,血清miR-181a-5p和miR-132-5p均与UA、BUN、Scr、CysC水平呈负相关,与eGFR水平呈正相关(r=0.572、-0.506、-0.514、-0.493、-0.627、0.605、-0.498、-0.546、-0.481、-0.609、0.612,P均<0.001);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清UA、BUN、SCr、CysC水平显著升高,eGFR、血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平显著降低(t=6.730、3.596、10.629、7.760、12.657、8.881、13.932,P均<0.001);高水平UA、高水平BUN、高水平SCr、高水平CysC、低水平eGFR、低水平miR-181a-5p、低水平miR-132-5p是影响慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的危险因素[OR(95%CI)=2.239(1.256~3.992)、2.768(1.237~6.194)、2.173(1.195~3.950)、1.806(1.204~2.709)、3.022(1.620~5.637)、2.565(1.349~4.879)、3.350(1.226~9.157)];血清miR-181a-5p、miR-132-5p及二者联合预测慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.832、0.801、0.904,其中二者联合预测的AUC显著高于各自单独预测AUC(Z/P=1.714/0.043、2.050/0.020)。结论慢性肾小球肾炎患者血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平较低,二者与肾功能关系密切,二者联合有助于评估患者3年内预后情况。

妊娠糖尿病患者血清miR130b-3-p、miR181a-5-p表达与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病患者血清微小RNA(miRNA)miR-130b-3p、miR-181a-5p表达与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年8月在北京航天总医院及北京妇产医院诊治的124例妊娠糖尿病患者作为研究组,根据妊娠结局分为良好组和不良组;采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130b-3p、miR-181a-5p表达;采用Pearson法分析血清miR-130b-3p、miR-181a-5p及二者与血脂和血糖的相关性;采用Logistic回归分析妊娠糖尿病患者不良妊娠结局的影响因素。结果 研究组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、miR-130b-3p相对表达水平高于对照组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于对照组(P<0.05)。不良组TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR、miR-130b-3p相对表达水平高于良好组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于良好组(P<0.05)。根据Pearson相关性分析可知,血清miR-130b-3p与miR-181a-5p相对表达水平呈负相关(P<0.05),血清miR-130b-3p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(P<0.05),miR-181a-5p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈负相关(P<0.05)。根据Logistic回归分析得知,miR-130b-3p、TC、TG、LDL-C、FBG、FINS高水平,miR-181a-5p低相对表达水平均为妊娠糖尿病不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论 妊娠糖尿病患者血清miR-130b-3p相对表达水平升高,miR-181a-5p相对表达水平降低,二者与妊娠结局密切相关。

miR-181a-5p在ACS患者血清中表达及对人HCASMC细胞增殖迁移的调控作用、与ADAMTS1靶向关系

目的观察微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)在急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清中的表达及对人冠状动脉平滑肌细胞(human coronary artery smooth muscle cell,HCASMC)增殖和迁移的调控作用,探讨miR-181a-5p与血小板反应蛋白解整合素金属肽酶1(ADAMTS1)的靶向关系。方法采集100例ACS患者[ACS组,其中急性心肌梗死(AMI)患者55例、不稳定心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)患者44例]、40例冠脉造影结果阴性者(对照组)的外周静脉血,采用实时荧光定量PCR法检测两组血清miR-181a-5p。取对数生长期HCASMC细胞,分为一、二、三、四组,采用脂质体转染法分别转染miR-181a-5p模拟物(miR-181a-5p mimics)、模拟物阴性对照(mimics-NC)、miR-181a-5p抑制物(miR-181a-5p inhibitor)及抑制物阴性对照(inhibitor-NC),培养48 h时采用CCK-8法测算细胞增殖能力、采用Transwell迁移实验测算细胞迁移能力,培养24 h时采用采用Western Blotting法检测各组细胞ADAMTS1蛋白。取对数生长期HCASMC细胞分为A、B、C、D四组,A组先后转染突变型ADAMTS1荧光素酶报告基因质粒(ADAMTS1-MUT)、miR-181a-5p mimics;B组先后转染ADAMTS1-MUT、mimics-NC;C组先后转染野生型ADAMTS1荧光素酶报告基因质粒(ADAMTS1-WT)、miR-181a-5p mimics;D组先后转染ADAMTS1-WT、mimics-NC,培养24 h时取各组细胞采用双荧光素酶报告基因实验检测各组细胞相对荧光素酶活性。结果与对照组相比,ACS组患者血清miR-181a-5p相对表达量低(P<0.01);与UAP患者相比,AMI患者血清miR-181a-5p相对表达量低(P<0.01)。与二组相比,培养48 h时一组细胞增殖能力和迁移能力降低,培养24 h时一组细胞ADAMTS1蛋白相对表达量低(P均<0.01);与四组相比,培养48 h时三组细胞增殖能力和迁移能力高,培养24 h时三组细胞ADAMTS1蛋白相对表达量高(P均<0.01)。A、B、C、D组细胞荧光素酶活性分别为1.03±0.03、1.01±0.04、0.45±0.06、1.02±0.05;与B组相比,A组细胞荧光素酶活性明显低(P<0.05)。结论miR-181a-5p在ACS患者血清中低表达。miR-181a-5p可抑制HCASMC细胞的增殖、迁移,其机制可能为miR-181a-5p靶向促进细胞ADAMTS1蛋白表达。

血清miR-134-5p、miR-181a-5p联合检测对良恶性肺结节的鉴别价值

目的 探究血清微小RNA-134-5p(miR-134-5p)、微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)联合检测对良恶性肺结节的鉴别价值。方法 2021年1月~2021年12月本院就诊治疗的肺结节病人124例,根据病理结果分为良性组62例、恶性组62例;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平;采用Pearson分析血清miR-134-5p与miR-181a-5p相关性;采用多因素Logistic回归分析病人肺结节为恶性的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miR-134-5p、miR-181a-5p在鉴别肺结节病人为良恶性中的价值。结果 恶性组肺结节病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平较良性组显著降低(P<0.05);肺结节病人血清miR-134-5p水平与miR-181a-5p呈正相关(r=0.547,P<0.05);恶性肺结节病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平与淋巴结是否转移、结节直径相关(P<0.05);miR-134-5p、miR-181a-5p为病人肺结节为恶性的独立保护因素,结节直径为独立危险因素(P<0.05);ROC分析显示,血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平联合诊断的AUC为0.931,均优于两者单独鉴别(P<0.05)。结论 恶性肺结节病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平较良性病人均显著降低,两者联合检测对良恶性肺结节的鉴别具有重要价值。

lncRNA SNHG14通过miR-181c-5p/SOX6信号轴调控缺血性脑卒中神经元细胞凋亡

目的通过IS体外模型探究lncRNA SNHG14在神经元细胞凋亡中的作用机制。方法通过氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的神经元细胞损伤来模拟IS。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG14、miR-181c-5p、SOX6基因表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Caspase-3检测试剂盒测定Caspase-3活性,RNA免疫沉淀实验和萤光素酶报告分析实验验证miR-181c-5p与SNHG14、SOX6的相互作用。结果sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于sh-NC组(P<0.05),OGD+sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于OGD+sh-NC组低(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞活性率较OGD+sh-NC组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞凋亡率、Caspase-3相对表达量较OGD+sh-NC组低(P<0.05)。miR-NC组miR-181c-5p相对表达量较miR-181c-5p mimics组低(P<0.05),inhibitor NC组较miR-181c-5p inhibitor组高(P<0.05)。SNHG14-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SNHG14-WT+miR-NC组低(P<0.05),SNHG14-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SNHG14-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。SOX6-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SOX6-WT+miR-NC组低(P<0.05),SOX6-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SOX6-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。miR-NC组SOX6 mRNA相对表达量较miR-181c-5p mimics组高(P<0.05),miR-181c-5p inhibitor组较inhibitor NC组高(P<0.05)。对照组细胞活性率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05),OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组较OGD组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组细胞凋亡率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组Caspase-3相对表达量较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。结论SNHG14可调节IS模型中神经元细胞凋亡,作用机制可能是通过靶向miR-181c-5p/SOX6信号通路实现的。

上皮性卵巢癌组织中linc-ROR、miR-181c-5p的表达及临床意义

目的研究长链非编码RNA(linc-ROR)及微小RNA(miR)-181c-5p在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达及临床意义。方法选取2018年2月至2019年2月无锡市妇幼保健院诊治的97例EOC患者作为研究对象,另纳入同期同一医院诊治的60例经病理学检查明确诊断为良性卵巢囊肿患者的正常卵巢组织作为对照。应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测组织中linc-ROR、miR-181c-5p水平;分析linc-ROR与miR-181c-5p表达的相关性,比较不同临床特征EOC患者linc-ROR及miR-181c-5p表达差异;分析影响EOC患者预后的因素。结果EOC组织中linc-ROR的相对表达量高于正常卵巢组织(P<0.05),而miR-181c-5p的相对表达量低于正常卵巢组织(P<0.05)。EOC癌组织中linc-ROR与miR-181c-5p的表达呈显著负相关(r=-0.619,P<0.05)。不同肿瘤国际妇产科联盟(FIGO)分期、有无淋巴结转移EOC癌组织中linc-ROR、miR-181c-5p比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。linc-ROR高表达组3年累计生存率低于linc-ROR低表达组(P<0.05),miR-181c-5p低表达组3年累计生存率低于miR-181c-5p高表达组(P<0.05)。EOC癌组织中linc-ROR升高、miR-181c-5p降低、肿瘤FIGO分期Ⅲ期及淋巴结转移是EC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论卵巢癌组织中linc-ROR表达升高,miR-181c-5p表达降低,两者表达与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移及预后有关。

急性缺血性脑卒中患者血清miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a水平表达检测的诊断价值研究

目的探究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a水平表达检测的诊断价值。方法选取西安医学院第一附属医院急诊科2019年5月~2020年3月收治的65例AIS患者为病例组,另选同期50例体检健康者为对照组。比较两组的糖尿病史、高血压史和高血脂史,采用实时灾光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a的水平。采用美国国立卫生院卒中量表(NIH stroke scale,NIHSS)评估AIS患者的神经功能缺损程度。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)计算miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a的AIS诊断价值。结果两组的糖尿病史、高血压史和高血脂史比较差异无统计学意义(P>0.05)。相比于对照组,病例组血清中miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a水平均升高,其差异具有统计学意义(t=20.700,25.997,23.629,均P=0.000)。Pearson相关性分析结果显示,血清中miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a水平与NIHSS评分均呈显著正相关,其差异具有统计学意义(r=0.272,P<0.001;r=0.142,P=0.005;r=0.171,P=0.013)。miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a联合检测诊断AIS的灵敏度和特异度分别为71.2%和76.4%,高于三项单独和两两联合检测。结论miRNA-181c-5p,miRNA-340-5p和miRNA146a三者联合检测可进一步提高AIS患者的诊断率,为临床应用提供了可靠的理论基础。

miR-181c-5p通过靶向N-myc下游调控基因2调控人胶质母细胞瘤生物学行为机制研究

目的探讨miR-181c-5p通过靶向N-myc下游调控基因2(NDRG2)调控人胶质母细胞瘤生物学行为的机制。方法选取2021年4月至2022年4月海南省第二人民医院收治的30例非功能区胶质瘤患者术中的胶质母细胞瘤(GBM)组织标本及邻近正常脑组织标本进行研究。应用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测GBM组织标本、正常脑组织标本中miR-181c-5p的表达水平;荧光素酶检测miR-181c-5p靶向调控NDRG2基因情况;应用qRT-PCR及免疫印迹试验(Western Blot)检测GBM组织标本中NDRG2的基因及蛋白表达水平;检测GBM细胞增殖、迁移和侵袭情况。结果GBM组织中NDRG2 mRNA相对表达量高于正常组织标本(P<0.05);双荧光素酶实验显示,miR-181c-5p模拟物(miR-181c-5p mimics)组NDRG2野生型(NDRG2 WT)的相对荧光素酶活性低于模拟物对照(NCmimics)组(P<0.05);miR-181c-5p抑制剂(miR-181c-5p inhibitor)组U87细胞中NDRG2 mRNA表达和蛋白表达高于抑制剂对照(NCinhibitor)组(P<0.05);miR-181c-5p mimics组U87细胞中NDRG2 mRNA表达和蛋白表达显著低于NC mimics组(P<0.05);细胞增殖-毒性试验(CCK-8)检测结果显示,转染sh-NDRG2(sh-NDRG2)组U87细胞增殖率低于转染sh-NC(sh-NC)组(P<0.05);miR-181c-5p inhibitor+sh-NDRG2组U87细胞增殖率低于miR-181c-5p inhibitor+sh-NC组(P<0.05)。Transwell实验显示,sh-NDRG2组U87细胞迁移数量及侵袭数量低于sh-NC组(P<0.05);miR-181c-5p inhibitor+sh-NDRG2组U87细胞迁移数量及侵袭数量低于miR-181c-5p inhibitor+sh-NC组(P<0.05)。结论miR-181c-5p能够通过调节NDRG2的表达,进而调节人胶质母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

上调miR-181a-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡能力的影响及相关机制

目的研究上调微小RNA(miR)-181a-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡能力的影响及相关机制。方法宫颈癌细胞株经过培养、转染后,分为miR-181a-5p上调组、miR-181a-5p下调组、宫颈癌组,miR-181a-5p及细胞增殖相关基因的表达采用荧光定量-聚合酶链反应(PCR)进行检测,观察3组细胞增殖、凋亡能力,凋亡相关蛋白表达及信号通路相关蛋白表达采用Western印迹进行检测。结果miR-181a-5p上调组miR-181a-5p、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关蛋白(Bax)表达明显高于宫颈癌组和miR-181a-5p下调组,增殖细胞核抗原(PCNA)、肿瘤增殖抗原(Ki)67、Bcl-2、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)表达明显低于宫颈癌组和miR-181a-5p下调组(P<0.05);miR-181a-5p下调组miR-181a-5p、Caspase-3、Bax表达明显低于宫颈癌组,PCNA、Ki67、Bcl-2、PI3K、Akt表达明显高于宫颈癌组(P<0.05)。在24、48、72 h,miR-181a-5p上调组细胞吸光密度值均明显低于miR-181a-5p下调组和宫颈癌组,凋亡率明显高于miR-181a-5p下调组和宫颈癌组(P<0.05);miR-181a-5p下调组细胞吸光密度值均明显高于宫颈癌组,凋亡率明显低于宫颈癌组(P<0.05),其中在72 h吸光密度值差异表现最为明显。结论上调miR-181a-5p可以影响PI3K/Akt信号通路的活性,参与宫颈癌细胞增殖、凋亡的过程,在宫颈癌中起到重要作用。

仙茅苷调节lncRNA MEG3/miR-181a-5p通路对骨质疏松大鼠成骨细胞自噬的影响

目的探讨仙茅苷(Curculigoside,CUR)对骨质疏松症(osteoporosis,OP)大鼠成骨细胞自噬的影响以及对lncRNA MEG3/miR-181a-5p信号轴的调节作用。方法体外培养骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)诱导成骨细胞分化,CCK-8法筛选CUR浓度;数据库预测lncRNA MEG3与miR-181a-5p结合位点;利用转染技术将BM-MSCs细胞分为NC组、CUR组、CUR+3-MA组、CUR+pc-NC组和CUR+pc-LncRNA MEG3组,qRT-PCR检测lncRNA MEG3、miR-181a-5p的表达水平,碱性磷酸酶(ALP)染色法检测细胞ALP活性,MDC法检测细胞自噬体数量,免疫荧光检测细胞微管相关蛋白1-轻链3(LC3)、自噬效应蛋白(Beclin1)的表达。肌肉注射地塞米松磷酸钠建立OP大鼠,大鼠分为对照组(CT组)、模型组(OP组)、OP+CUR组(灌胃15 mg/kg CUR),CT检测大鼠胫骨骨形态学,Western blot和qRT-PCR分别检测LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1与lncRNA MEG3、miR-181a-5的表达。结果25μg/m L以上浓度的CUR显著提高BM-MSCs细胞增殖活力(P<0.05);lncRNA MEG3与miR-181a-5p具有靶向结合位点;与NC组相比,CUR组细胞ALP活性、自噬体数量以及LC3、Beclin1表达增加(P<0.05);与CUR组相比,CUR+3-MA组细胞ALP活性、自噬体数量以及LC3、Beclin1表达减少(P<0.05);与CUR+pc-NC组相比,CUR+pc-LncRNA MEG3组细胞ALP活性、自噬体数量以及LC3、Beclin1表达减少(P<0.05)。OP组大鼠骨形态学评价以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、miR-181a-5p表达较CT组下降,lncRNA MEG3表达增加(P<0.05);OP+CUR组大鼠骨形态学评价以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、miR-181a-5p表达较OP组增加,lncRNA MEG3表达降低(P<0.05)。结论CUR可能通过调节LncRNA MEG3/miR-181a-5p信号轴促进OP大鼠成骨细胞自噬活性。

微小RNA-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制

目的探讨微小RNA(miR)-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制。方法临床收集宫颈癌患者86例,通过Real-time PCR检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-513c-5p水平,分析其与宫颈癌病理特征的关系。通过双荧光素酶报告验证miR-513c-5p靶向HDAC1。将宫颈癌HeLa细胞系分为4组:对照组、类似物(mimic)组、mimic+HDAC1组和HDAC1组。通过质粒转染技术过表达miR-513c-5p和(或)HDAC1。Real-time PCR和Western blotting分别用于检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组的细胞生长、迁移和侵袭能力。结果宫颈癌组织中miR-513c-5p水平显著低于癌旁组织。低水平的miR-513c-5p与更高的局部侵袭、淋巴转移和远端转移有关(P<0.05)。miR-513-5p靶向抑制HDAC1表达。过表达miR-513c-5p显著抑制宫颈癌细胞生长、迁移和侵袭(P<0.05)。过表达HDAC1促进细胞生长、迁移和侵袭(P<0.05),并且可以逆转miR-513c-5p的抑制作用(P<0.05)。结论低水平的miR-513c-5p可能与宫颈癌转移有关,并且miR-513c-5p可通过靶向抑制HDAC1蛋白的表达抑制宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和侵袭。

急性胰腺炎患者血清miR-181a-5p表达及与Th17/Treg免疫平衡的关系

目的:探讨急性胰腺炎(AP)患者血清微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)的表达及与辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)免疫平衡的关系。方法:选取2020年1月至2021年12月我院收治的110例AP患者(AP组),根据病情严重程度分为轻症AP组41例、中度重症AP组37例、重症AP组32例,另选取同期58名体检健康者(对照组)。采用酶联免疫吸附法检测外周血白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、IL-17、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,流式细胞术检测外周血Th17、Treg百分比,qPCR检测血清miR-181a-5p表达。通过Pearson/Spearman相关性分析AP患者血清miR-181a-5p表达与Th17/Treg的相关性。结果:与对照组比较,AP组血清miR-181a-5p表达和外周血Treg百分比降低,Th17百分比和Th17/Treg升高(P均<0.001)。与对照组比较,AP组外周血IL-6、IL-17水平升高,IL-10、TGF-β1水平降低(P均<0.001)。轻症、中度重症、重症AP组血清miR-181a-5p表达和外周血IL-10、TGF-β1、Treg百分比依次降低,外周血IL-6、IL-17、Th17百分比、Th17/Treg依次升高(P均<0.001)。Pearson/Spearman相关性分析显示,AP患者血清miR-181a-5p表达与IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg呈负相关(r/rs=-0.688、-0.652、-0.782、-0.825,P均<0.001),与IL-10、TGF-β1、Treg呈正相关(r/rs=0.743、0.667、0.739,P均<0.001)。结论:AP患者血清miR-181a-5p低表达,Th17/Treg免疫失衡,miR-181a-5p可能通过Th17/Treg免疫失衡参与AP发生发展。

TPT1-AS1靶向调控微小RNA-30c-5p及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1(TPT1-AS1)对微小RNA-30c-5p(miR-30c-5p)的靶向调控作用及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测结直肠癌组织相较于癌旁组织及结直肠癌细胞(DLD-1、HCT116、SW480和LoVo)相较于人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的TPT1-AS1水平。脂质体法向LoVo细胞转染TPT1-AS1特异性siRNA(si-TPT1-AS1组)并设转染si-NC的阴性对照组和未转染的空白对照组,qPCR检测TPT1-AS1和miR-30c-5p水平,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活性、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)及其磷酸化形式p-STAT3的水平,在线预测并结合双荧光素酶报告实验验证miR-30c-5p与TPT1-AS1的相互作用关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织的TPT1-AS1水平升高至2.020±0.080,而miR-30c-5p水平降低至0.597±0.044(P<0.05),且结直肠癌组织的TPT1-AS1水平与miR-30c-5p水平呈负相关(r=-0.801,P<0.001)。4株结直肠癌细胞的TPT1-AS1水平均表现为异常高表达(P<0.05),功能验证实验选择TPT1-AS1表达最高的LoVo细胞。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组LoVo细胞活力减弱,TPT1-AS1水平降低而miR-30c-5p水平升高(P<0.05)。si-TPT1-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18.650±3.346)%和(108.326±17.383)个,均低于空白对照组的(90.963±4.328)%和(275.675±21.078)个及阴性对照组的(93.165±4.317)%和(281.431±23.880)个(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组的STAT3水平无显著变化,而p-STAT3和MMP-3水平降低(P<0.05)。MiR-30c-5p模拟物降低了野生型TPT1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型TPT1-AS1的荧光素酶活性。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌中TPT1-AS1高表达,且增强了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,TPT1-AS1可能通过靶向miR-30c-5p来发挥促癌作用。TPT1-AS1的发现为结直肠癌的诊治和预后评估及下一步的转化研究提供了新的思路。