宫颈癌患者血清微小RNA-195、双皮质素样激酶1、鳞状细胞癌抗原表达水平与临床病理特征及预后相关性研究

目的:探讨宫颈癌患者血清微小RNA-195(miR-195)、双皮质素样激酶1(DCLK1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)水平与临床病理特征及预后的相关性。方法:选取宫颈癌患者72例为观察组,同期体检健康女性60例为对照组,比较两组血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag表达水平。采用Spearman法分析宫颈癌患者血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag与临床病理特征的相关性,随访3年,记录患者生存情况。采用Cox回归模型分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果:观察组血清DCLK1、SCC-Ag水平较对照组升高,miR-195水平较对照组下降(均P<0.05)。血清miR-195水平与淋巴结转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期、肿瘤分化程度呈负相关,DCLK1水平与FIGO分期、肿瘤分化程度呈正相关,SCC-Ag水平与肿瘤分化程度、肿瘤直径呈正相关(均P<0.05)。miR-195高表达患者3年生存率高于低表达患者,DCLK1、SCC-Ag高表达患者3年生存率低于低表达患者(均P<0.05)。FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径及血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag水平是宫颈癌患者预后的独立影响因素(均P<0.05)。结论:宫颈癌患者血清DCLK1、SCC-Ag水平升高,miR-195水平降低,三者与临床病理特征和预后有关,是宫颈癌患者预后的独立影响因素。

微小RNA-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤机制研究

目的:探究miR-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤的机制。方法:选择90只健康小鼠,均分为A、B、C三组,使用香烟烟雾暴露建立小鼠急性肺损伤模型,A组为正常对照组,B组为低剂量干预组,C组为高剂量干预组,干预后检测三组小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-8(IL-8)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,对比三组小鼠肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数,对比三组小鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)水平,最后检测三组小鼠肺组织中miR-195及PHLPP2蛋白表达量。结果:①肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8及MMP-9水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);②肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);③肺泡灌洗液中MPO、SOD、GSH水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);④肺组织中miR-195表达C组>B组>A组,PHLPP2蛋白表达C组<B组<A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:香烟烟雾能够诱导小鼠肺组织出现炎性改变,其机制可能与miR-195过表达并抑制PHLPP2蛋白表达有关。

糖尿病合并甲状腺功能亢进患者血清miR-122、miR-195表达及意义

目的分析糖尿病合并甲状腺功能亢进(甲亢)患者血清微小RNA-122(miR-122)和微小RNA-195(miR-195)的表达水平,并探讨其临床诊断价值。方法选取我院2020年3月至2023年3月98例糖尿病合并甲亢患者为糖尿病合并甲亢组,选取同期收治的98例甲状腺功能正常的糖尿病患者为糖尿病组,另选本院同期98例体检健康志愿者为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-122和miR-195表达水平。Pearson相关性分析糖尿病合并甲亢患者血清miR-122、miR-195水平与游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、游离四碘甲状腺原氨酸(FT_(4))、促甲状腺激素(TSH)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;血清miR-122、miR-195水平对糖尿病合并甲亢的临床诊断价值分析采用ROC曲线进行判断。结果健康对照组、糖尿病组、糖尿病合并甲亢组患者血清miR-122、miR-195表达水平逐渐增加(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,糖化血红蛋白、FT_(3)、FT_(4)、TSH、HOMA-IR及miR-122、miR-195表达是糖尿病合并甲亢的影响因素(P<0.05)。Pearson分析显示,糖尿病合并甲亢患者血清miR-122、miR-195水平与FT_(3)、FT_(4)、FBG、FINS及HOMA-IR呈正相关(P<0.05),与TSH呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-122和miR-195联合诊断糖尿病合并甲亢的AUC显著大于miR-122单独诊断的AUC(Z=2.245,P=0.025)及miR-195单独诊断的AUC(Z=2.182,P=0.029)。结论糖尿病合并甲亢患者血清miR-122、miR-195表达水平明显升高,二者联合检测对糖尿病合并甲亢具有较高的诊断价值。

血清miR-145和miR-195在OSCC患者中的表达及其与颈部淋巴结转移的关系分析

目的 分析血清微小RNA(miR)-145和miR-195在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者中的表达及其与颈部淋巴结转移的关系。方法 选取2020年1月至2022年6月在该院确诊的102例OSCC患者为OSCC组,收集整理OSCC患者临床病理参数,根据是否发生颈部淋巴结转移将患者分为颈部淋巴结转移组43例和无颈部淋巴结转移组59例;同期选取79例癌前病变患者为癌前病变组,86例无口腔病变的体检健康者为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-145、miR-195相对表达水平;采用受试者工作特征曲线分析检验血清miR-145、miR-195相对表达水平对OSCC患者颈部淋巴结转移的评估价值。结果 OSCC组血清miR-145、miR-195相对表达水平低于癌前病变组、健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。癌前病变组血清miR-145、miR-195相对表达水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤低分化、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的OSCC患者血清miR-145、miR-195相对表达水平低于肿瘤中/高分化、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期的OSCC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。颈部淋巴结转移组血清miR-145、miR-195相对表达水平低于无颈部淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-145、miR-195相对表达水平单独及二者联合评估OSCC患者颈部淋巴结转移的曲线下面积分别为0.840(95%CI:0.765~0.915)、0.832(95%CI:0.754~0.910)、0.898(95%CI:0.841~0.956),特异度分别为79.1%、88.4%、77.5%,灵敏度分别为74.6%、67.8%、87.4%。结论 血清miR-145、miR-195在OSCC患者中低表达,且与OSCC患者颈部淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期有关,可作为评估OSCC患者颈部淋巴结转移的重要指标。

LncRNA CASC9靶向调节miR-195-5p/VEGFA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因(LncRNA CASC)9对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人OSCC组织与细胞中LncRNA CASC9表达,筛选最佳细胞系。体外培养OSCC细胞SCC15,将细胞分为空白对照(Control)组、si-CASC9组、si-NC组、miR-195-5p mimic组、miR-NC组、si-CASC9+NC inhibitor组、si-CASC9+miR-195-5p inhibitor组、miR-195-5p mimics+pcDNA组、miR-195-5p mimics+VEGFA组,qRT-PCR检测LncRNA CASC9、miR-195-5p表达,CCK-8法检测SCC15细胞增殖,流式细胞仪检测SCC15细胞凋亡,Transwell实验检测SCC15细胞迁移;Western印迹法检测SCC15细胞中血管内皮生长因子(VEGF)A、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195-5p与LncRNA CASC9、VEGFA的靶向关系。结果LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中表达较癌旁组织显著上调(P<0.05);抑制LncRNA CASC9表达或过表达miR-195-5p可显著抑制SCC15细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,LncRNA CASC9、VEGFA与miR-195-5p存在靶向关系(P<0.05);抑制miR-195-5p表达可显著逆转抑制LncRNA CASC9表达对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05);上调VEGFA表达可显著逆转过表达miR-195-5p对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05)。结论LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制LncRNA CASC9表达可通过调节miR-195-5p/VEGFA轴抑制OSCC细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

血浆miR-155、miR-195水平诊断首发精神分裂症执行功能障碍的价值及交互作用

目的探讨血浆微小RNA-155(miR-155)、微小RNA-195(miR-195)水平诊断首发精神分裂症执行功能障碍的诊断价值及交互作用。方法选取2020年6月至2023年6月商丘市第二人民医院收治的105例首发精神分裂症患者作为观察组,按照1∶1配对原则,另选取同期无精神分裂症体检志愿者105例作为对照组。比较两组受检者的血浆miR-155、miR-195水平,同时比较观察组有无执行功能障碍患者的执行缺陷综合征行为评价(BADS)评分及血浆miR-155、miR-195水平,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miR-155、miR-195水平对执行功能障碍的诊断价值,采用Pearson法分析血浆miR-155、miR-195水平与BADS评分的相关性,通过交互作用分析上述指标对首发精神分裂症执行功能障碍发生的影响。结果观察组患者的血浆miR-155、miR-195水平分别为1.88±0.54、1.93±0.37,明显高于对照组的0.98±0.30、1.06±0.15,差异均有统计学意义(P<0.05);有执行功能障碍患者的卡片测验、动作计划测验、找钥匙测验、时间判断、动物园路线、修订六元素测试评分、BADS总分分别为(2.02±0.25)分、(1.21±0.14)分、(1.13±0.10)分、(1.54±0.19)分、(0.86±0.22)分、(1.40±0.28)分、(8.16±0.41)分,明显低于无执行功能障碍患者的(3.55±0.14)分、(3.36±0.18)分、(3.43±0.15)分、(3.48±0.16)分、(3.29±0.20)分、(3.40±0.12)分、(20.51±1.03)分,血浆miR-155、miR-195水平分别为2.07±0.31、2.15±0.33,明显高于无执行功能障碍患者的1.78±0.24、1.81±0.20,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,血浆miR-155、miR-195与卡片测验、动作计划测验、找钥匙测验、时间判断、动物园路线、修订六元素测试评分、BADS总分均呈负相关(P<0.05);经ROC分析结果显示,血浆miR-155、miR-195联合诊断首发精神分裂症患者执行功能障碍的AUC为0.911(95%CI:0.839~0.957),约登指数为0.742,敏感度为91.89%,特异度为82.35%;经交互作用分析结果显示,miR-155阳性表达与miR-195阳性表达在首发精神分裂症患者执行功能障碍中呈正向交互作用(32.178<7.572×11.357,为次相乘模型)(P<0.05)。结论血浆miR-155、miR-195水平与首发精神分裂症执行功能障碍发生密切相关,且两指标阳性在执行功能障碍发生过程中呈正向交互作用,联合检测对执行功能障碍具有一定诊断价值。

血浆miR-379、miR-195、Gas6水平早期检测在AMI患者中的应用价值

目的分析血浆微小RNA-379(miR-379)、微小RNA-195(miR-195)、生长停滞特异性蛋白6(Gas6)水平早期检测在急性心肌梗死(AMI)患者中的应用价值。方法选取2021年5至2022年7月于首都医科大学附属北京世纪坛医院心内科住院治疗的265例患者,分为AMI组(n=127)和非AMI组(n=138),选取同期120名健康体检者设为对照组。比较三组入组时的血浆miR-379、miR-195表达量及Gas6水平;采用Pearson相关系数分析AMI患者入组时的血浆Gas6水平与miR-379、miR-195表达量的关系;采用受试者工作曲线(ROC)分析入组时的血浆Gas6水平及miR-379、miR-195表达量对早期AMI的诊断价值。结果三组入组时的血浆miR-379、miR-195、Gas6水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血浆miR-379水平比较:AMI组<非AMI组<对照组,miR-195、Gas6水平比较:AMI组>非AMI组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关系数分析显示,Gas6与miR-379水平呈负相关(P<0.05),与miR-195水平呈正相关(P<0.05)。ROC结果显示,血浆miR-379、miR-195、Gas6水平单独诊断早期AMI具有一定局限性(AUC=0.808、0.718、0.752),三者联合诊断的效能更佳(AUC=0.879)。结论血浆miR-379、miR-195、Gas6水平在AMI患者中异常表达,三指标可作为AMI早期疾病诊断的参考指标。

糖尿病肾病患者血清microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清micro RNA-21(mi R-21)含量及其与氧化应激指标的相关性。方法选择在该院接受治疗的DN患者82例作为观察组,根据病情严重程度分为轻度DN组(47例)、中重度DN组(35例),另取同期体检健康人60例作为对照组。检测各组患者的血清mi R-21含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、晚期蛋白氧化产物(AOPP)等氧化应激指标水平,进一步分析两者之间的相关性。结果 1早期DN组、中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于对照组,中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于早期DN组;2早期DN组、中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于对照组,中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于早期DN组;3血清mi R-21含量与SOD、MDA、AOPP等氧化应激指标水平呈负相关。结论 DN患者的血清mi R-21含量降低,且与患者的氧化应激指标水平相关,有望成为诊断及指导疾病治疗的有效指标之一。

红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制

目的观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制。方法采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用。分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制。结果与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义。细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05)。结论红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的通过研究micro RNA-155(mi R-155)在类风湿关节炎(RA)患者外周血的表达水平,分析mi R-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC(外周血单个核细胞),提取和纯化mi RNA,实时定量PCR检测mi R-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对mi R-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析mi R-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤(MTX)单药治疗组,肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血mi R-155的表达水平变化。结果RA患者中PBMC中mi R-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者mi R-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,mi R-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 mi R-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示mi R-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。mi R-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

microRNA-21通过促进成纤维细胞的增殖和分化调节心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型(心肌梗死组),以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR检测各组心肌组织miR-21的表达。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞(miR-21 mimic组),使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达,并与随机对照组及空白对照组比较。结果与假手术组比较,心肌梗死组梗死交界区的miR-21的表达量明显上调[(6.043±0.231)×10-4vs(1.620±0.451)×10-4,P<0.01],miR-21 mimic组成纤维细胞miR-21基因表达较随机对照组和空白对照组显著上调[(4.839±0.705)×10-4vs(1.143±0.064)×10-4vs(1.017±0.201)×10-4,P<0.01],miR-21mimic组成纤维细胞EdU染色阳性率较随机对照组和空白对照组显著增加[(27.892±1.645)%vs(12.553±1.227)%vs(13.946±1.550)%,P<0.01];同时,miR-21 mimic组成纤维细胞Smad7蛋白的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

微小RNA-195通过靶向BIRC5调控肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:探讨微小RNA-195(miR-195)对肝癌Hep3B细胞凋亡的影响,并探索其下游靶基因。方法:采用MTT实验、流式细胞仪检测miR-195对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。构建双荧光素酶报告基因质粒,采用双荧光素酶报告基因实验验证靶标分子。采用RNA干扰技术检测沉默BIRC5对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。结果:与miR-ctrl组相比,miR-195过表达可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-195可靶向作用BIRC5,沉默BIRC5可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。结论:miR-195可通过靶向调控BIRC5抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。BIRC5可能是肝癌靶向治疗的重要靶标。

抑制microRNA-21表达降低HCT-116细胞侵袭转移能力的实验研究

目的:探讨抑制人结肠癌细胞HCT-116 micro RNA-21表达降低结肠癌细胞侵袭转移能力作用机制。方法:应用表达反义micro RNA-21的质粒mi RZip21转染HCT-116细胞,检测micro RNA-21的变化,Target Scan和Pic Tar等工具筛选与侵袭转移相关的靶基因,实时定量PCR方法检测转染前后靶基因m RNA的变化,Western blot检测靶基因蛋白表达变化,平皿划痕和Transwell实验观察抑制micro RNA-21与否HCT-116细胞转移和侵袭能力。结果:筛选出4种与侵袭转移相关的micro RNA-21靶基因:TIMP-3,RECK,BMPRⅡ和PCDH17;mi RZip21质粒转染HCT-116后,micro-RNA 21表达水平下降约40%,靶基因TIMP-3和RECK的m RNA及靶蛋白表达上升明显,有统计学意义(P<0.05);平皿划痕和Transwell实验结果表明抑制micro RNA-21后,HCT-116细胞转移侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制micro RNA-21的表达能够减弱HCT-116细胞的侵袭和转移能力。

MicroRNA-21对结直肠癌诊断价值的Meta分析

目的应用Meta分析评价血液(血清、血浆)及粪便标本中micro RNA-21(mi R-21)表达用于结直肠癌诊断的临床价值。方法联合应用Cochrane library、Pub Med、EMbase、Google学术、CNKI等检索micro RNA-21用于结直肠癌诊断的文献,按PRISMA声明的标准筛选文献以及进行QUADAS-2质量评价后,用固定效应模型或随机效应模型合并得到汇总的灵敏度(SEN)、特异度(SPE)、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)和诊断优势比(DOR),受试者工作特征曲线(SROC)及曲线下面积(AUC)用于评价整体诊断效能。结果最终纳入14篇文献,包括1199例结直肠癌患者和784例正常对照者。Meta分析结果显示:血清mi R-21的汇总DOR、SEN和SPE分别为13.97(95%CI:8.56-22.81)、0.73(95%CI:0.69-0.77)、0.83(95%CI:0.76-0.89);血浆mi R-21的汇总DOR、SEN和SPE分别为8.03(95%CI:3.30-19.52)、0.67(95%CI:0.60-0.73)、0.76(95%CI:0.69-0.81);粪便mi R-21的汇总DOR、SEN和SPE分别为4.78(95%CI:1.46-15.69)、0.31(95%CI:0.27-0.36)、0.88(95%CI:0.84-0.91)。除此之外,血清、血浆和粪便mi R-21诊断结直肠癌的AUC分别为0.8701、0.8295和0.6991。结论血液标本mi R-21用于结直肠癌诊断具有良好的灵敏度和特异度,且血清标本的检测结果优于血浆标本;粪便mi R-21诊断结直肠癌灵敏度较差但特异性好。

胃癌组织中microRNA-224阳性表达与患者预后相关性分析

目的:探讨micro RNA-224于胃癌组织中的阳性表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法:应用原位杂交技术检测micro RNA-224在50例石蜡固定癌旁非肿瘤胃黏膜组织及112例石蜡胃肿瘤组织切片中的表达情况,分析其与肿瘤患者各病理参数及预后的相关性。原位杂交按照原位杂交试剂盒的说明书进行。结果:micro RNA-224在胃癌组织中阳性表达率49.1%(55/112),癌旁非肿瘤胃黏膜组织中阴性表达。其阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度存在相关性(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤的部位、分化程度、Lauren分型无关(P>0.05)。micro RNA-224阴性表达比阳性表达者5年生存率高,差异有统计学意义(P<0.001)。经COX多因素分析显示:micro RNA-224的表达是影响胃癌患者预后的独立因素之一(P<0.05)。结论:micro RNA-224在肿瘤组织中阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度密切相关,是影响胃癌患者预后的独立因素之一。

微小RNA-195对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭的影响

目的研究微小RNA(miR)-195通过Toll样受体4/核转录因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路对结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭的影响,并探讨相关机制。方法取对数期结直肠癌HCT116细胞,随机分为Control组(不处理)、NC组(转染NC mimic)、miR-195 mimic组(转染miR-195 mimic)、miR-195 mimic+脂多糖(LPS)(TLR4/NF-κB信号通路激活剂)组(转染miR-195 mimic,并加入LPS 100μg/mL)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-195表达量;Transwell实验、划痕实验观察侵袭、迁移能力;Western blot法检测细胞波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达量;双荧光素酶实验验证miR-195与TLR4的靶向关系;Western blot法检测细胞TLR4、髓样细胞分化因子88(MyD88)、核转录因子κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65蛋白表达量。结果与Control组、NC组比较,miR-195 mimic组miR-195表达量、E-cadherin蛋白表达量显著升高,每个视野平均穿膜细胞数量显著减少,迁移率、Vimentin蛋白表达量显著降低(P<0.05);与miR-195 mimic组比较,miR-195 mimic+LPS组miR-195表达量、E-cadherin蛋白表达量降低,每个视野平均穿膜细胞数量显著增加,迁移率显著升高,Vimentin蛋白表达量显著升高(P<0.05);双荧光素酶结果显示,与仅转染pmir-RB-REPORTTM的293T细胞比较,共转染pmir-RB-REPORTTMTLR4-3'-UTR与miR-195 mimic的293T细胞荧光素酶活性值显著升高(P<0.05);与Control组、NC组比较,miR-195 mimic组TLR4、MyD88蛋白表达量、p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(P<0.05);与miR-195 mimic组比较,miR-195 mimic+LPS组TLR4、MyD88蛋白表达量、p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(P<0.05)。结论过表达miR-195可通过靶向抑制TLR4/NF-κB信号通路,发挥对结直肠癌细胞EMT及侵袭的抑制作用。