肿瘤组织微小RNA-542-3p、血管细胞黏附分子-1表达特征与脑胶质瘤术后复发的关系及预测价值

目的:探讨肿瘤组织中微小RNA-542-3p(miR-542-3p)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达与脑胶质瘤手术后复发的关系及其预测价值。方法:选取实施手术治疗的脑胶质瘤患者91例进行临床研究,其中43例患者于术后1年出现术后复发(复发组)、48例患者手术后1年检查未出现复发病灶(非复发组),对比两组第一次手术后病灶组织标本中的miR-542-3p、VCAM-1蛋白表达差异,并分析miR-542-3p、VCAM-1蛋白表达与胶质瘤术后复发的关系及其预测复发的价值。结果:复发组患者脑胶质瘤组织中miR-542-3p表达水平低于非复发组,复发组患者脑胶质瘤组织中VCAM-1蛋白阳性表达率高于非复发组,差异具有统计学意义(均P<0.05);复发组患者脑胶质瘤组织病理学分级≥Ⅲ级患者占比、低分化患者占比、非全切手术方式患者占比、肿瘤浸润率均高于非复发组,复发组患者术后放化疗患者占比低于非复发组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。miR-542-3p表达降低、VCAM-1蛋白阳性表达、手术范围非全切是脑胶质瘤手术后复发的独立危险因素(均P<0.05);miR-542-3p表达、VCAM-1蛋白预测脑胶质瘤手术后复发的曲线下面积AUC值分别为0.784(95%CI:0.690~0.877)、0.725(95%CI:0.621~0.829)。结论:脑胶质瘤组织中miR-542-3p表达、VCAM-1蛋白表达与肿瘤手术后复发有密切关系,用于临床预测有一定的参考价值。

血清微小RNA-199a-3p、E盒结合锌指蛋白1水平对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入术后预后的预测价值

目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)对急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后预后的预测价值。方法选取2021年5月至2022年5月秦皇岛市第二医院接收的行PCI术治疗的113例ACS患者为观察组,根据观察组患者PCI术后1年内是否发生主要不良心血管事件(MACE),分为MACE组26例和非MACE组87例,同期健康体检者106例为对照组。检测血清miR-199a-3p、ZEB1水平,比较MACE组和非MACE组临床资料,Pearson分析患者血清miR-199a-3p和ZEB1水平相关性,多因素Logistic分析影响ACS患者PCI术后发生MACE的影响因素,ROC曲线分析血清miR-199a-3p、ZEB1对ACS患者PCI术后发生MACE的预测价值。结果与对照组相比,观察组血清miR-199a-3p水平较低,ZEB1水平较高(t=13.709、25.641,P<0.05);在ACS患者中miR-199a-3p与ZEB1呈负相关(r=-0.421,P<0.05);ACS患者PCI术后较PCI术前血清miR-199a-3p水平高,ZEB1水平低(t=4.820、6.040,P<0.05);MACE组与非MACE组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、左心室射血分数、miR-199a-3p、ZEB1比较,差异有统计学意义(t=3.310、2.717、3.947、7.068、6.544,P<0.05);LDL-C、ZEB1水平是ACS患者PCI术后MACE的危险因素,左心室射血分数、HDL-C、miR-199a-3p水平是ACS患者PCI术后MACE的保护因素;miR-199a-3p、ZEB1联合预测ACS患者PCI术后MACE的曲线下面积为0.947,优于单独预测(Z=1.970、2.791,P<0.05)。结论ACS患者血清中miR-199a-3p、ZEB1水平呈负相关,两者均对ACS患者PCI术后MACE有预测价值,两者联合的预测价值更高。

微小RNA-199a-5p保护大鼠脑缺血后血-脑屏障完整性

目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只。应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平。结果MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力。MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达。此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症。MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡。结论MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

血清微小RNA-1-3p及微小RNA-182-5p联合检测对原发性肝癌诊断及预后的预测价值研究

目的:探讨血清微小RNA-1-3p(miRNA-1-3p)及微小RNA-182-5p(miRNA-182-5p)联合检测对原发性肝癌(PHC)诊断及预后的预测价值。方法:选取2021年9月—2022年9月吉林省肿瘤医院收治的PHC患者78例作为PHC组,另选取同期健康体检者50名作为对照组;另根据随访3年后患者转归将PHC组患者分为存活组(n=56)和死亡组(n=22)。分别比较各组患者的血清miRNA-1-3p、miRNA-182-5p水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p联合检测对PHC预后的预测价值。结果:PHC组血清miRNA-1-3p水平低于对照组,miRNA-182-5p水平高于对照组(P<0.05)。死亡组血清miRNA-1-3p水平低于存活组,miRNA-182-5p水平高于存活组(P<0.05);死亡组、存活组miRNA-1-3p水平低于对照组,miRNA-182-5p水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p联合检测预测PHC预后的ROC曲线下面积为0.923,特异度为94.6%。结论:血清miRNA-1-3p及miRNA-182-5p与PHC密切相关,且联合检测对PHC预后的预测价值较高。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

芒果苷通过调节miRNA-483-3p减轻良性前列腺增生腺体纤维化

目的研究芒果苷对良性前列腺增生(BPH)腺体纤维化的改善作用和调节微小RNA(miRNA)-483-3p的作用机制。方法雄性小鼠随机分为5组:正常对照组、BPH模型对照组、非那雄胺组、芒果苷组和芒果苷+miRNA-483-3p拮抗剂组。通过摘除睾丸和皮下注射丙酸睾酮建立BPH模型。30 d后通过前列腺组织切片行masson和天狼猩红染色,以及检测组织中羟脯氨酸含量评价胶原沉积,实时荧光定量PCR检测前列腺转化生长因子-β1(TGF-β1)、丝裂原活化蛋白激酶2(MK2)和丝裂原活化蛋白激酶6(MKK6)的mRNA水平以及miRNA-483-3p的水平,Western blotting检测前列腺TGF-β1、MK2、磷酸化MK2(p-MK2)、MKK6和磷酸化MKK6(p-MKK6)的蛋白水平,并采用荧光素酶报告评估miRNA-483-3p与MK2的靶向结合能力。结果与正常对照组比较,BPH模型对照组小鼠的前列腺胶原沉积明显,且TGF-β1、MK2和MKK6的mRNA水平,以及TGF-β1、p-MK2和p-MKK6的蛋白水平均显著性升高(P<0.01),而miRNA-483-3p水平显著性下降(P<0.01)。与BPH模型对照组比较,芒果苷组能够上调前列腺miRNA-483-3p的水平,降低TGF-β1、MK2和MKK6的mRNA水平,以及TGF-β1、p-MK2和p-MKK6的蛋白水平,减轻胶原沉积。与芒果苷组比较,联合使用芒果苷和miRNA-483-3p拮抗组显著性降低miRNA-483-3p水平,升高TGF-β1、MK2和MKK6的mRNA水平,以及TGF-β1、p-MK2和p-MKK6的蛋白水平(P<0.01)。荧光素酶报告显示miRNA-483-3p能够靶向结合MK2。结论芒果苷能够通过调节miRNA-483-3p,抑制MK2减轻前列腺纤维化。

肿瘤相关成纤维细胞中微小RNA-214-3p表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中微小RNA-214-3p(miR-214-3p)表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法选取64例卵巢癌患者作为研究对象,根据化疗后无进展生存期分为铂部分敏感组和铂敏感组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组患者卵巢癌组织中miR-214-3p相对表达量,比较不同临床特征患者的2年生存率;原代培养CAFs及正常卵巢成纤维细胞(NFs),采用qRT-PCR、免疫荧光实验检测CAFs和NFs中miR-214-3p、p62蛋白表达;通过CSIOVDB数据库检索SQSTM1基因在不同种类卵巢细胞中的表达水平;向CAFs瞬时转染miR-214-3p mimic(mimic组)和miR-214-3p mimic NC(NC组),将未转染CAFs设为对照组;留取各组细胞培养上清,建立卵巢癌细胞SKOV3与各组CAFs间接共培养模型,采用CCK-8法、DCFH-DA法、qRT-PCR及免疫印迹法分别检测不同培养条件下SKOV3细胞增殖率、顺铂半数抑制浓度(IC 50)、细胞活性氧(ROS)含量和miR-214-3p、顺铂耐药基因CCND1、自噬蛋白p62相对表达量。结果铂部分敏感组患者的miR-214-3p相对表达量低于铂敏感组,差异有统计学意义(P<0.01);不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、铂部分敏感情况、miR-214-3p低表达情况患者的2年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.01);卵巢CAFs中miR-214-3p相对表达量低于NFs,p62蛋白表达水平高于NFs,差异有统计学意义(P<0.01);CSIOVDB数据库在线分析显示,卵巢癌CAFs中的SQSTM1基因表达水平高于卵巢癌上皮细胞、NFs,差异有统计学意义(P<0.01);相较于与对照组CAFs、NC组CAFs间接共培养的SKOV3细胞,与mimic组CAFs间接共培养的SKOV3细胞的增殖率、顺铂IC 50、ROS含量降低,miR-214-3p相对表达量升高,CCND1mRNA和p62蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CAFs中miR-214-3p表达与卵巢癌细胞对顺铂的敏感性相关,CAFs中miR-214-3p低表达可促进卵巢癌细胞增殖及ROS介导的自噬,进而降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。

MicroRNA-144-3p在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌侵袭转移的影响

目的检测胰腺癌患者组织及胰腺癌细胞系中microRNA-144-3p(miR-144-3p)的表达及其对胰腺癌侵袭转移的影响。方法收集13对手术切除的胰腺癌及对应癌旁组织标本,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证临床标本与4种人胰腺癌细胞系中miR-144-3p的表达;应用划痕和Transwell实验检测转染miR-144-3p模拟物(mimic)及阴性对照(mimic NC)后胰腺癌细胞PANC-1的迁移及侵袭能力;数据库预测miR-144-3p的靶基因,并用Western blotting检测miR-144-3p对E26转录因子-1(E26 transformation specific-1,ETS1)蛋白表达的影响。结果胰腺癌组织miR-144-3p的表达显著低于癌旁组织(P<0.05),胰腺癌细胞系miR-144-3p的表达较正常胰腺细胞明显降低(P<0.05)。划痕实验显示,mimic组划痕愈合速度明显慢于mimic NC组。Transwell迁移及侵袭实验显示,mimic组细胞迁移和侵袭能力较mimic NC组明显减弱(P<0.05)。过表达miR-144-3p抑制ETS1的蛋白水平。结论 miR-144-3p在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系中均呈低表达,上调miR-144-3p可能通过靶向抑制ETS1减弱胰腺癌细胞的侵袭转移能力。

微RNA-454-3p、FERM结构域蛋白6在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨微RNA(miR)-454-3p、FERM结构域蛋白6(FRMD6)在乳腺癌组织中的表达水平以及临床意义。方法选取唐山市人民医院2016年12月至2018年12月住院手术的150例乳腺癌病人术中切除的乳腺癌组织标本及癌旁组织标本;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-454-3p、FRMD6在组织中的水平;采用Kaplan-Meier法分析miR-454-3p、FRMD6水平与乳腺癌病人预后的关系,并用log-rank法进行检验;Cox回归分析影响乳腺癌病人预后的因素。结果乳腺癌组织miR-454-3p水平(1.25±0.24)高于癌旁组织(0.99±0.22),FRMD6水平(0.79±0.19)低于癌旁组织(1.01±0.24),差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中miR-454-3p、FRMD6水平与淋巴结转移、组织分化以及TNM分期有关(P<0.05);miR-454-3p高表达组和FRMD6低表达组病人3年累积生存率分别低于miR-454-3p低表达组和FRMD6高表达组病人(均P<0.05);miR-454-3p高表达、FRMD6低表达、TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移是影响乳腺癌病人预后的危险因素(P<0.05)。结论miR-454-3p在乳腺癌组织中表达上调,FRMD6在乳腺癌组织中表达降低,二者与乳腺癌病人预后密切相关,有望成为临床上预测乳腺癌病人预后的生物性标志物。

microRNA-490-3p负调控Smad2对人结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响

目的研究miR-490-3p调控转录因子Smad2对结肠癌的侵袭和迁移的影响。方法运用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测30对结直肠癌组织和正常肠黏膜miR-490-3p的表达水平。将miR-490-3p的模拟物通过瞬时转染的方法转染结肠癌细胞SW620,然后用transwell基质胶侵袭实验、transwell迁移实验检测结肠癌细胞的侵袭、迁移能力的改变,进一步Western blot检测miR-490-3p改变对Smad2蛋白的影响。结果 real-time PCR结果显示miR-490-3p在结直肠癌组织中明显低表达,淋巴结转移组比无淋巴结转移组miR-490-3p表达明显下调。与阴性对照相比较,miR-490-3p mimic转染结肠癌细胞SW620后,转录因子Smad2的蛋白明显减少,结肠癌细胞的transwell侵袭、迁移实验显示miR-490-3p上调后穿膜细胞数量明显减少。结论 miR-490-3p可能通过与转录因子Smad2作用发挥抑制结直肠癌细胞的侵袭、迁移的功能,miR-490-3p作为抑癌因子,可能在结直肠癌的进展中发挥重要作用。

微小RNA-199b-3p靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-199b-3p(miR-199b-3p)靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响。方法采用Lipofectamine脂质体法将miR-199b-3p抑制剂及阴性对照(NC)转染至SW620细胞并分为抑制剂组和NC组,同时以未转染的SW620细胞作对照。采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测3组miR-199b-3p的表达以评价转染效果,MTT法和AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测转染后的增殖活性及凋亡率,QPCR和Western blotting检测各组凋亡相关基因(Bax和caspase-3)及SOX6的mRNA和蛋白水平,构建含有野生型及突变型SOX6-3’UTR的荧光报告基因质粒并采用双荧光素酶报告实验验证miR-199b-3p对SOX6的靶向调控作用。结果 QPCR检测显示,转染48 h后抑制剂组的miR-199b-3p的表达水平为0.526±0.034,低于未转染组的1.009±0.064和NC组的0.960±0.057,差异有统计学意义(P<0.05);与其余两组相比,抑制剂组转染24、48、72 h后的SW620细胞的增殖活性均降低(P<0.05);抑制剂组的凋亡率为(37.533±1.459)%,高于未转染组的(6.101±0.663)%和NC组的(8.753±1.061)%,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制剂组SW620细胞的SOX6、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均高于未转染组和NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明miR-199b-3p可显著抑制野生型SOX6-3’UTR的荧光荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-199b-3p可靶向调控SOX6的表达,且下调miR-199b-3p表达可抑制SW620细胞的增殖并诱导凋亡,为结肠癌的治疗提供潜在的分子治疗靶点。

肾透明细胞癌组织中微小RNA-3680-3p、FOX蛋白家族因子1在肾透明细胞癌中的表达及其与预后相关性分析

目的:探讨肾透明细胞癌组织中微小RNA-3680-3p(miR-3680-3p)、FOX蛋白家族因子1(FOXD1)基因表达的特点及与患者预后结局的关系。方法:采取自身病例对照研究方法,选择80例肾透明细胞癌患者的原发病灶组织及其癌旁组织进行实时荧光定量(qRT-PCR)检测,比较两组患者的miR-3680-3p、FOXD1 mRNA表达情况,并按照患者的临床病理学特点分别进行比较分析,采用生存分析方法分析miR-3680-3p、FOXD1 mRNA高表达与低表达患者的生存时间差异。结果:肾透明细胞癌患者癌组织miR-3680-3p表达低于癌旁组织,癌组织FOXD1 mRNA表达高于癌旁组织,有统计学差异(均P<0.05);在不同肿瘤直径、是否发生肿瘤病灶坏死、不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、不同Fuhrman分级的肾透明细胞癌组织miR-3680-3p表达水平比较有统计学差异(均P<0.05);不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、不同Fuhrman分级的肾透明细胞癌组织FOXD1 mRNA表达水平相比较有统计学差异(均P<0.05)。miR-3680-3p高表达肾透明细胞癌患者5年生存率77.14%与低表达组的62.22%比较,差异无统计学意义(P>0.05);miR-3680-3p高表达肾透明细胞癌患者生存时间长于低表达组,相比较有统计学差异(χ^(2)=4.771,P<0.05)。FOXD1 mRNA高表达肾透明细胞癌患者5年生存率59.57%低于低表达组81.82%,有统计学差异(P<0.05);miR-3680-3p高表达肾透明细胞癌患者的生存时间短于低表达组,有统计学差异(χ^(2)=5.155,P<0.05)。结论:肾透明细胞癌组织中miR-3680-3p低表达、FOXD1 mRNA高表达,并且与疾病进展、患者预后结局有关。

电针关元穴经微RNA-199a-3p调控c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用

目的探讨电针关元穴经miRNA-199a-3p调控酪氨酸激酶受体c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用。方法采用改良脊髓横断法建立神经源性尿潴留大鼠模型60只,按随机数字表法平均分为5组:模型组、电针组、miRNA-199a-3p抑制剂组、miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组,另选取SD大鼠12只作为假手术组。使用药物分组干预处理后,检测大鼠尿动力学,比较各组大鼠膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力;采用肌条实验检测大鼠逼尿肌兴奋性,比较各组肌条自发性收缩频率;采用H-E染色观察各组大鼠膀胱组织病理形态改变;用试剂盒测定各组大鼠血清炎症细胞因子环氧化酶2(COX-2)、IL-18、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;采用qPCR检测各组大鼠膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组大鼠膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠膀胱组织呈现严重病理损伤改变,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织磷酸化(p)-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组相比,电针组大鼠膀胱组织病理损伤减轻,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均降低(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均升高(P均<0.05);miRNA-199a-3p抑制剂组大鼠膀胱组织病理损伤均加重,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平及膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论电针关元穴可通过上调miRNA-199a-3p表达激活c-kit/ERK通路,减轻神经源性尿潴留大鼠膀胱组织炎症损伤,增强逼尿肌兴奋性,修复膀胱功能,改善尿潴留症状。

血清微小RNA-1-3p、转录激活因子4在老年慢性心力衰竭患者中的表达水平及其与认知功能损伤的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清微小RNA-1-3p(miR-1-3p)、转录激活因子4(ATF4)的表达水平及其与认知功能损伤的关系。方法选取老年CHF患者150例为研究对象。根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分将患者分为认知功能损伤组(n=75)和认知功能正常组(n=75)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测2组血清miR-1-3p水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2组血清ATF4水平。采用Pearson相关性分析法分析老年CHF伴认知功能损伤患者血清miR-1-3p与ATF4水平的相关性。采用Logistic回归分析法分析老年CHF患者发生认知功能损伤的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-1-3p、ATF4水平对CHF患者发生认知功能损伤的预测价值。结果认知功能损伤组的左心室射血分数(LVEF)、MoCA评分、血清miR-1-3p水平低于认知功能正常组,N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平、血清ATF4水平高于认知功能正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。老年CHF伴认知功能损伤患者血清miR-1-3p水平与血清ATF4水平呈负相关(r=-0.523,P<0.001)。miR-1-3p、ATF4是老年CHF患者发生认知功能损伤的影响因素(P<0.05)。血清miR-1-3p、ATF4联合预测老年CHF患者发生认知功能损伤的曲线下面积(AUC)大于血清miR-1-3p、ATF4单独预测的AUC,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。结论血清miR-1-3p表达水平与老年CHF患者认知功能呈正相关,血清ATF4表达与老年CHF患者认知功能呈负相关。血清miR-1-3p、ATF4可能是评估老年CHF患者认知功能损伤的潜在标志物。

槐角黄酮调控miR-199a-3p/p38MAPK/NF-κB对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响

目的 探讨槐角黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌的影响。方法 将乳腺癌细胞BT549分为正常对照(NC)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、miR-NC组、miR-199a-3p组、高剂量+anti-miR-NC组、高剂量+anti-miR-199a-3p组。采用CCK-8、克隆形成实验评估细胞增殖;采用Transwell法评估细胞迁移和侵袭。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及白细胞介素-1β(IL-1β)水平。采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-p38MAPK和p-p65蛋白表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,miR-199a-3p表达升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数降低,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞活力、克隆形成数、迁移数、侵袭数升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6以及IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,高剂量组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-199a-3p组BT549细胞p-p38MAPK和p-p65蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 槐角黄酮可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症反应,其机制可能是通过上调miR-199a-3p表达、抑制p38MAPK/NF-κB通路实现的。

血清微小RNA-325-3p和成纤维细胞生长因子10表达水平对急性胰腺炎病情及预后评估的价值

目的 探讨急性胰腺炎血清微小RNA-325-3p(miR-325-3p)和成纤维细胞生长因子10(FGF10)表达水平对病情严重程度及预后的评估价值。方法 2021年6月~2022年10月我院诊治的急性胰腺炎病人265例,分为轻症急性胰腺炎组(100例)、中重症急性胰腺炎组(70例)和重症急性胰腺炎组(95例);同期260例健康体检志愿者为对照A组,260例慢性胰腺炎病人为对照B组。根据重症病人入院28天的生存情况,将病人分为生存组(68例)和死亡组(27例)。比较各组病人miR-325-3p和FGF10水平。分析急性胰腺炎病人血清miR-325-3p、FGF10水平与急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分的相关性以及miR-325-3p与FGF10的相关性;对影响重症急性胰腺炎病人预后的因素进行Logistic回归分析;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-325-3p、FGF10水平对重症急性胰腺炎病人预后的预测价值。结果 与对照A、B组相比,轻症、中重症、重症急性胰腺炎组病人血清miR-325-3p水平依次显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),FGF10水平依次明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);急性胰腺炎病人血清miR-325-3p与FGF10水平、APACHEⅡ评分均呈负相关(APACHEⅡ:r=-0.664,P<0.05;FGF10:r=-0.687,P<0.05)。FGF10与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.676,P<0.05)。与生存组相比,死亡组身体质量指数(BMI)、APACHEⅡ评分、FGF10水平均明显升高(P<0.05),miR-325-3p水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析发现,BMI、APACHEⅡ评分、FGF10是影响重症急性胰腺炎病人预后的危险因素(P<0.05),miR-325-3p是影响重症病人预后的保护因素(P<0.05);miR-325-3p、FGF10联合预测重症急性胰腺炎病人预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.972,均优于其各自单独预测(Z二者联合-miR-325-3P=1.984,P=0.047;Z二者联合-FGF10=2.219,P=0.027)。结论 急性胰腺炎病人血清miR-325-3p水平降低,FGF10水平升高,与病人病情严重程度及预后相关。

微小RNA-223-3p调控Notch通路对屋尘螨所致过敏性鼻炎小鼠鼻腔炎症反应的影响实验研究

目的:探讨微小RNA(miR)-223-3p对屋尘螨(HDM)所致过敏性鼻炎(AR)小鼠鼻腔炎症反应的影响及相关机制。方法:80只BALB/c小鼠随机分为对照组、HDM致AR组(AR组)、miR-223-3p激动剂组(agomiR-223-3p组)、miR-223-3p抑制剂组(antagomiR-223-3p组)及miR-223-3p激动剂+敲低Notch1组(agomiR-223-3p+sh-Notch1组),每组各16只。利用HDM变应原提取物构建AR小鼠模型,并给予miR-223-3p激动剂(miR-223-3p agomir)、miR-223-3p抑制剂(miR-223-3p antagomir)及敲低Notch1的腺相关病毒(AAV-sh-Notch1)滴鼻治疗。末次激发后,对小鼠进行AR症状评估,并收集血清、鼻腔灌洗液(NALF)和鼻黏膜组织标本。HE染色检测鼻黏膜损伤。Diff-Quik染色检测NALF中嗜酸性粒细胞数量。ELISA检测血清HDM特异性免疫球蛋白E(HDM-sIgE)和NALF中炎症因子水平。RT-qPCR检测鼻黏膜miR-223-3p、炎症因子及Notch通路相关mRNA水平。Western blot检测鼻黏膜Notch1、Jagged1蛋白水平。结果:与对照组比较,AR组小鼠鼻痒、喷嚏、流鼻涕情况严重,鼻黏膜增厚,可见大量炎症浸润;AR症状评分、血清HDM-sIgE水平、鼻黏膜miR-223-3p水平升高;NALF中嗜酸性粒细胞增多,白介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平升高,IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)水平降低;鼻黏膜IL-4、IL-5、IL-13 mRNA和Notch1、Jagged1 mRNA及蛋白水平升高,IL-12、IFN-γmRNA水平降低(均P<0.05)。agomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组增强,并激活Notch通路;antagomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组减轻,并阻断Notch通路(均P<0.05)。与agomiR-223-3p组比较,敲低Notch表达可逆转miR-223-3p对AR小鼠鼻腔炎症反应的激活作用。结论:miR-223-3p通过激活Notch通路增强HDM所致AR小鼠鼻腔炎症反应。

微小RNA-483-3p调控细胞自噬减轻大鼠心肌纤维化的机制研究

目的研究微小RNA(miR)-483-3p减轻大鼠心肌纤维化的作用,探讨其机制与细胞自噬的关系。方法选取24只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、空白转染组和高表达组,每组6只,通过尾静脉注射异丙肾上腺素建立心肌纤维化模型。空白转染组及高表达组通过尾静脉分别单次注射腺相关病毒(AAV)-空白转染、AAV-miR-483-3p(5×10^(11)vg)进行预处理。14 d后,假手术组经尾静脉注射0.9%的氯化钠溶液[2.5 ml/(kg·d)],持续14 d;模型组、空白转染组和高表达组通过尾静脉注射异丙肾上腺素[2.5 ml/(kg·d),2 mg/ml],持续14 d。检测大鼠心肌病理损伤程度、心肌纤维化程度、胶原蛋白Ⅰ(Collagen-Ⅰ)表达量以及心肌细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)、细胞自噬相关蛋白5(Atg5)和自噬降解底物(P62)的表达。结果与假手术组比较,模型组心肌纤维化面积、Collagen-Ⅰ阳性表达量、Atg5及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加,P62蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,高表达组心肌纤维化面积、Collagen-Ⅰ阳性表达量、Atg5及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低[(13.64±1.51)%vs(27.47±1.55)%,(13.48±3.07)%vs(30.91±2.45)%,0.98±0.17 vs 1.24±0.28,0.66±0.05 vs 1.26±0.09,P<0.05],P62蛋白表达水平显著增高(0.91±0.11 vs 0.74±0.06,P<0.05)。结论miR-483-3p可减轻大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制心肌细胞自噬有关。