微小RNA-223-3p调控Notch通路对屋尘螨所致过敏性鼻炎小鼠鼻腔炎症反应的影响实验研究

目的:探讨微小RNA(miR)-223-3p对屋尘螨(HDM)所致过敏性鼻炎(AR)小鼠鼻腔炎症反应的影响及相关机制。方法:80只BALB/c小鼠随机分为对照组、HDM致AR组(AR组)、miR-223-3p激动剂组(agomiR-223-3p组)、miR-223-3p抑制剂组(antagomiR-223-3p组)及miR-223-3p激动剂+敲低Notch1组(agomiR-223-3p+sh-Notch1组),每组各16只。利用HDM变应原提取物构建AR小鼠模型,并给予miR-223-3p激动剂(miR-223-3p agomir)、miR-223-3p抑制剂(miR-223-3p antagomir)及敲低Notch1的腺相关病毒(AAV-sh-Notch1)滴鼻治疗。末次激发后,对小鼠进行AR症状评估,并收集血清、鼻腔灌洗液(NALF)和鼻黏膜组织标本。HE染色检测鼻黏膜损伤。Diff-Quik染色检测NALF中嗜酸性粒细胞数量。ELISA检测血清HDM特异性免疫球蛋白E(HDM-sIgE)和NALF中炎症因子水平。RT-qPCR检测鼻黏膜miR-223-3p、炎症因子及Notch通路相关mRNA水平。Western blot检测鼻黏膜Notch1、Jagged1蛋白水平。结果:与对照组比较,AR组小鼠鼻痒、喷嚏、流鼻涕情况严重,鼻黏膜增厚,可见大量炎症浸润;AR症状评分、血清HDM-sIgE水平、鼻黏膜miR-223-3p水平升高;NALF中嗜酸性粒细胞增多,白介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平升高,IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)水平降低;鼻黏膜IL-4、IL-5、IL-13 mRNA和Notch1、Jagged1 mRNA及蛋白水平升高,IL-12、IFN-γmRNA水平降低(均P<0.05)。agomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组增强,并激活Notch通路;antagomiR-223-3p组上述炎症反应较AR组减轻,并阻断Notch通路(均P<0.05)。与agomiR-223-3p组比较,敲低Notch表达可逆转miR-223-3p对AR小鼠鼻腔炎症反应的激活作用。结论:miR-223-3p通过激活Notch通路增强HDM所致AR小鼠鼻腔炎症反应。

微RNA-223在慢性阻塞性肺疾病血清外泌体中的表达

目的探讨微RNA-223(miRNA-223)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)血清外泌体中表达情况及临床意义。方法选择2019年3月至2021年6月在济宁市第一人民医院呼吸科治疗的稳定期COPD病人113例作为观察对象(COPD组),根据肺功能将COPD病人分为轻度组40例、中度组31例、重度组25例和极重度组17例,另选取同期在济宁市第一人民医院体检的100例健康体检人员作为对照组。提取各研究对象血清外泌体,并进行鉴定;检测各研究对象血清外泌体miRNA-223水平,血清炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)水平及肺功能指标第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占预计值百分比(FEV1%pred)、FEV1占用力肺活量(FVC)百分比(FEV1/FVC);采用Pearson分析COPD病人血清外泌体miR⁃NA-223与TNF-α、IL-6、CRP、FEV1%pred、FEV1、FEV1/FVC相关性。结果COPD组病人肺功能指标FEV1%pred(62.05±11.38比101.87±12.45)、FEV1[(1.77±0.62)L比(2.83±0.44)L]、FEV1/FVC[(64.01±11.52)%比(86.47±8.08)%]显著低于对照组(P<0.05);电镜结果显示,血清外泌体为圆形或椭圆形囊泡状结构,直径约100 nm;蛋白质印迹法结果显示,对照组与COPD组外泌体均表达特异性蛋白CD63、CD9、TSG101,说明成功提取血清外泌体,可用于后续实验。COPD组血清外泌体miRNA-223水平及血清TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于对照组(P<0.05);轻度、中度、重度、极重度组COPD病人血清外泌体miRNA-223表达水平依次升高,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),重度、极重度COPD病人血清TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于轻、中度病人(P<0.05),轻度与中度、重度与极重度COPD病人之间血清TNF-α、IL-6、CRP水平差异无统计学意义(P>0.05);相关性分析显示,COPD病人血清外泌体miRNA-223水平与TNF-α、IL-6、CRP水平呈正相关,与FEV1%pred、FEV1、FEV1/FVC呈负相关(均P<0.05)。结论miRNA-223在COPD病人血清外泌体中表达水平升高,且与病人疾病严重程度有关,可能作为判断COPD病情严重程度的潜在标志物。

环状RNA SAMD8调控miR-223-3p/RHOB表达抑制胰腺导管腺癌进程的分子机制

目的探讨环状RNA SAMD8(circ-SAMD8)在胰腺导管腺癌(PDAC)进展中的潜在机制。方法基于Microarray数据(GSE79634)分析PDAC组织中circRNAs的表达谱。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证circ-SAMD8(hsa_circ_0006148)在PDAC组织和细胞(CFPAC-1和PANC-1)中的表达。采用生物信息学分析预测circ-SAMD8的靶微小RNA(miRNA)及其下游mRNA,并采用双荧光素酶报告基因实验进行鉴定。采用MTT法和集落形成法检测PDAC细胞的增殖能力。采用免疫印迹法(Western blot)检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达水平。采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果circ-SAMD8在PDAC组织和细胞中的表达水平低于癌旁组织和正常细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达circ-SAMD8能有效促进PDAC细胞凋亡,抑制PDAC细胞增殖。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p是circ-SAMD8的一个潜在相互作用分子,miR-223-3p的下游mRNA靶点是RHOB。miR-223-3p在PDAC组织和细胞中异常过表达,并伴有RHOB低表达。在转染miR-223-3p模拟物或sh-circ-SAMD8的PDAC细胞中,RHOB表达显著降低,增殖能力增强,凋亡率降低。结论circ-SAMD8通过海绵化miR-223-3p,调控下游RHOB的表达,有效抑制PDAC的发生发展。

转染miR-223模拟物的巨噬细胞结核分枝杆菌清除能力、凋亡、炎症反应变化及miR-223与NLRP3靶向关系

目的 观察肺结核患者血清微小RNA-223(miR-223)水平变化,以及转染miR-223模拟物的巨噬细胞结核分枝杆菌(MTB)H37Rv清除能力、凋亡、炎症反应变化,并分析miR-223与NLRP3靶向关系。方法 选取37例份活动性肺结核患者血清标本(肺结核组)和同期40例健康体检者血清标本(健康组),采用RT-PCR法检测两组血清标本中miR-223。体外培养人单核细胞株THP-1,经佛波脂刺激24 h后分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为健康组、MTB组、MTB+mimics-NC组、MTB+miR-223 mimics组,健康组细胞常规培养,MTB组、MTB+mimics-NC组、MTB+miR-223 mimics组均用MTB标准株H37Rv感染巨噬细胞,感染后MTB+mimics-NC组和MTB+miR-223 mimics组应用脂质体转染法分别将mimics-NC、miR-223 mimics转染至细胞中,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-223及NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA,流式细胞术测算各组细胞凋亡率,菌落形成单位(CFU)计数法检测各组H37Rv细菌负荷量。取对数生长期THP-1细胞,随机分为miR-223 mimics+NLRP3-WT组、mimics-NC+NLRP3-WT组、miR-223mimics+NLRP3-MUT组、mimics-NC+NLRP3-MUT组,用Lipofectamine 2000按照试剂盒说明书操作分别将miR-223mimics和NLRP3-WT、mimics-NC和NLRP3-WT、miR-223 mimics和NLRP3-MUT、mimics-NC和NLRP3-MUT共转染至各组细胞,转染后24 h检测各组细胞的相对荧光素酶活性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-223与NLRP3是否存在靶向关系。结果 与健康组比较,肺结核组血清miR-223表达降低(P<0.05)。与健康组比较,MTB组miR-223表达、细胞凋亡率降低,NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA表达及H37Rv细菌负荷量升高(P均<0.05);与MTB+mimics-NC组比较,MTB+miR-223 mimics组miR-223表达、细胞凋亡率升高,NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA表达及H37Rv细菌负荷量降低(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,NLRP3是miR-223的靶向基因。结论 肺结核患者血清miR-223表达降低,转染miR-223模拟物能够促进巨噬细胞凋亡,增强MTB感染的巨噬细胞的除菌能力,减轻炎症反应,其机制可能与靶向调控NLRP3有关。

微小RNA-223对急性脑梗死大鼠神经功能保护作用的研究

目的探讨微小RNA(miR)-223对急性脑梗死大鼠神经保护作用。方法清洁级雄性健康SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、对照序列组(NC组)和miR-223模拟物组(miR组),每组12只,构建缺血-再灌注大鼠模型,S组于缝皮后10 min时经侧脑室注入10μL的0.9%氯化钠注射液,M组、NC组和miR组于恢复血流灌注前15 min,以同样的方法分别将等量0.9%氯化钠注射液、含5 nmol对照序列或miR-223模拟物的0.9%氯化钠注射液注入。分别于建模后和建模7 d时,采用Zea-Longa评分标准对各组大鼠神经功能评分,酶联免疫吸附试验检测血清中炎症因子水平,TUNEL法检测脑组织中细胞凋亡,实时荧光定量PCR术检测脑组织中miR-223表达。结果M组、NC组和miR组大鼠建模后和建模7 d时神经功能评分均高于S组(F=83.943、87.410,P<0.01),miR组大鼠建模7 d时神经功能评分低于M组和NC组(P<0.01);与S组相比,M组、NC组和miR组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平升高(F=16.085、52.672、27.393,P<0.01),与M组和NC组相比,miR组大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05);M组、NC组和miR组大鼠脑组织中细胞凋亡指数均高于S组(F=461.821,P<0.01),miR组大鼠脑组织中细胞凋亡指数低于M组和NC组(P<0.05);M组和NC组大鼠脑组织中miR-223表达量低于S组,而miR组高于S组,差异有统计学意义(F=328.334,P<0.01)。结论miR-223可能对脑缺血-再灌注损伤大鼠神经功能有保护作用,机制可能与其抑制炎症反应而减少细胞凋亡有关。

老年性白内障患者泪液中miR-223和miR-143-3p水平表达与术后干眼症的相关性研究

目的探究老年性白内障患者术后干眼与泪液中miR-223,miR-143-3p水平表达的相关性。方法选取2022年5月~2023年2月于贵港东晖医院眼科行白内障术的92例老年性白内障患者作为研究对象,根据术后7天内有无发生干眼将其分为干眼症组(n=42)和无干眼症组(n=50),另选取同期体检的92例健康者作为健康对照组。采用Pearson法分析泪液miR-223,miR-143-3p表达水平与干眼诊断指标:泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、角膜荧光素染色(corneal fluorescein staining,FL)评分和泪液分泌试验(schirmers test,SIt)的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响白内障术后干眼发生的相关因素;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析泪液miR-223和miR-143-3p对白内障术后干眼的预测价值。结果无干眼症组患者BUT(12.27±1.69s)及SIt(9.17±1.66mm)高于干眼症组(8.95±1.02s,4.36±0.97mm),FL(0.74±0.11分)则低于干眼症组(2.52±0.37分),差异具有统计学意义(t=11.136,16.546,32.386,均P<0.05)。干眼症组患者泪液miR-223(0.87±0.08)表达水平低于健康对照组(1.02±0.03)和无干眼症组(0.92±0.13),泪液miR-143-3p(1.37±0.32)表达水平高于健康对照组和无干眼症组(1.01±0.02,1.15±0.26),差异具有统计学意义(t=15.772,2.170;10.793,3.638,均P<0.05)。泪液中miR-223表达水平与BUT,SIt呈正相关(r=0.587,0.503,均P<0.001),与FL呈负相关(r=-0.442,P<0.001),miR-143-3p与BUT,SIt呈负相关(r=-0.714,-0.549,均P<0.001),与FL呈正相关(r=0.667,P<0.001)。干眼症组有角结膜疾病史、手术切口长度≥3 mm的患者所占比例高于无干眼症组(χ2=12.583,6.505,均P<0.05),且干眼症组患者泪液miR-223表达水平低于无干眼症组,miR-143-3p表达水平则高于无干眼症组,差异具有统计学意义(t=2.170,3.638,均P<0.05)。角结膜疾病史(OR=1.982)、手术切口长度(OR=2.036)及miR-143-3p(OR=1.653)为白内障患者术后发生干眼的危险因素,miR-223(OR=0.574)则为保护因素(P<0.05);泪液miR-223和miR-143-3p单独检测预测白内障术后干眼发生的曲线下面积(area under the cure,AUC)分别为0.692,0.719,而二者联合检测的AUC为0.880,二者联合检测优于miR-223和miR-143-3p各自单独检测(Z=3.869,3.810,均P<0.001)。结论老年性白内障术后干眼的发生与泪液中miR-223和miR-143-3p表达水平有关。

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。

外周血微RNA-223、Nod样受体蛋白3水平与心绞痛病人冠状动脉钙化的关系

目的检测心绞痛病人外周血微RNA-223(miR-223)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)水平并探究其与冠状动脉钙化及严重程度的关系。方法回顾性选取2019年12月至2021年12月在河北中石油中心医院接受治疗286例心绞痛病人,入院进行CT心脏冠状动脉成像检查,根据有无冠状动脉钙化将其分为非钙化组(70例)及钙化组(216例)。再根据病人冠状动脉钙化积分为轻度钙化组、中度钙化组及重度钙化组。以荧光定量PCR方法检测外周血miR-223水平。以酶联免疫吸附法检测外周血NLRP3水平。Pearson相关性分析外周血miR-223、NLRP3水平及二者与高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的相关性。Spearman相关分析miR-223、NLRP3与冠脉狭窄程度(Gensini)积分的相关性。多因素logistic回归分析影响冠状动脉钙化发生的危险因素。结果钙化组NLRP3、hs-CRP、Gensini积分水平[(74.12±7.36)ng/L、(3.67±1.35)mg/L、(40.95±5.23)分]明显高于非钙化组[(55.12±6.78)ng/L、(3.15±1.12)mg/L、(13.05±2.59)分](P<0.05),miR-223水平(0.52±0.11)低于非钙化组(0.98±0.32)(P<0.05);轻度、中度、重度钙化组NLRP3水平[(65.42±6.45)ng/L、(72.49±7.23)ng/L、(87.79±8.75)ng/L]、Gensini积分[(31.33±4.42)分、(41.82±5.63)分、(52.69±5.80)分]依次升高(P<0.05),miR-223水平[(0.72±0.15)、(0.51±0.12)、(0.28±0.06)]依次降低(P<0.05);Pearson相关性分析显示,NLRP3与hs-CRP水平、Gensini积分呈正相关(P<0.05),miR-223与NLRP3、hs-CRP、Gensini积分水平呈负相关;行多因素logistic回归分析显示,NLRP3、hs-CRP、合并糖尿病、miR-223为影响冠状动脉钙化的独立危险因素(P<0.05)。结论心绞痛病人外周血NLRP3呈高表达,miR-223呈低表达,与疾病严重程度及炎症反应关系密切,为影响冠状动脉钙化发生的危险因素。

PBMCs中miR-21、miR-223表达与HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗效果的相关性

目的探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者抗逆转录病毒治疗效果与外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA(miR)-21、miR-223表达水平的关系。方法选取2020年3月至2022年3月期间南通市第三人民医院门诊就诊行抗逆转录病毒治疗的142例HIV/AIDS患者为观察组,根据其治疗效果分为有效组(n=110)和无效组(n=32);选取同期体检健康者139例为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PBMCs中miR-21、miR-223表达水平;采用多因素Logistic回归分析HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗无效的影响因素。结果观察组PBMCs中miR-21、miR-223表达水平高于对照组(P<0.05)。无效组治疗后3个月、治疗后6个月、治疗后12个月的PBMCs中miR-21、miR-223表达水平均高于有效组(P<0.05)。有效组随治疗时间延长,PBMCs中miR-21、miR-223表达水平逐渐降低(P<0.05)。无效组治疗前世界卫生组织(WHO)分期3期患者比例高于有效组(P<0.05)。miR-21、miR-223、治疗前WHO分期3期是影响HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗无效的独立危险因素(P<0.05)。结论miR-21、miR-223在一定程度上可反映HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗效果,治疗无效患者PBMCs中miR-21、miR-223表达水平相对较高。

miR-223在炎症性肠病患者肠黏膜组织中的表达及与Th17/Treg细胞平衡的关系

目的 探究微小RNA-223(miR-223)在炎症性肠病(IBD)患者肠黏膜组织中的表达及与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)的关系。方法 选择2021年1月—2023年11月本院收治的96例IBD患者作为研究对象,根据病情划分为活动期组(54例)和缓解期组(42例)两组;另选择同期51例结肠息肉者为对照组。比较三组miR-223、Th17细胞、Treg细胞水平及Th17/Treg细胞因子[白介素-17(IL-17)、IL-23、转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-10]水平;Pearson相关分析miR-223与Th17/Treg细胞及细胞因子的相关性。结果 miR-223水平活动期组(3.26±0.61)>缓解期组(2.41±0.52)>对照组(1.02±0.18)(P<0.05)。Th17细胞、Th17/Treg水平活动期组>缓解期组>对照组,Treg细胞水平活动期组<缓解期组<对照组,均P<0.05。IL-17、IL-23水平活动期组>缓解期组>对照组,TGF-β1、IL-10水平活动期组<缓解期组<对照组,均P<0.05。Pearson相关分析显示,miR-223与Th17、Th17/Treg、IL-17、IL-23呈正相关(r=0.711、0.742、0.760、0.751,均P<0.05);miR-223与Treg、TGF-β1、IL-10呈负相关(r=-0.685、-0.308、-0.850,均P<0.05)。结论 IBD患者肠黏膜组织中miR-223表达呈相对高水平,反映病情活动性,且与Th17/Treg细胞平衡有关。

miR-637、miR-223-3p、PARP14在甲状腺癌中的表达及与临床特征的相关性

目的 探究miR-637、miR-223-3p、多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶14(PARP14)在甲状腺癌中的表达及与临床特征相关性。方法 选取2018年5月至2020年5月衡水市人民医院73例甲状腺癌患者。采用PCR法检测患者癌组织及癌旁组织miR-637、miR-223-3p、PARP14表达;所有患者随访3年,根据生存情况将其分为死亡组及生存组,分析患者癌组织miR-637、miR-223-3p、PARP14表达与预后的关系及对预后的预测价值。结果 甲状腺癌组织miR-637 mRNA表达量低于癌旁组织,miR-223-3p、PARP14 mRNA表达量高于癌旁组织(P<0.05)。miR-637 mRNA在临床分期Ⅲ~Ⅳ期、包膜浸润及淋巴结转移患者中均为低表达(P<0.05),PARP14 mRNA在临床分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径≥2 cm、包膜浸润及淋巴结转移患者中均为高表达(P<0.05),miR-223-3p mRNA在肿瘤直径≥2 cm、包膜浸润及淋巴结转移患者中均为高表达(P<0.05)。死亡组癌组织miR-637mRNA表达量低于生存组,miR-223-3p、PARP14表达mRNA表达量高于生存组(P<0.05)。多因素Cox回归显示,癌组织miR-637 mRNA表达量升高为影响甲状腺癌患者预后的危险因素,miR-223-3p、PARP14 mRNA表达量升高为保护因素(P<0.05)。癌组织miR-637、miR-223-3p、PARP14表达联合检测预测甲状腺癌患者预后的AUC值大于各指标单独检测(P<0.05)。癌组织miR-637低表达患者的累积生存率低于高表达患者(P<0.05);癌组织miR-223-3p、PARP14高表达患者的累积生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论 甲状腺患者癌组织miR-637、miR-223-3p、PARP14 mRNA呈异常表达现象,上述指标mRNA表达量与临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移等临床特征及预后有关,且miR-637、miR-223-3p、PARP14联合可用于评估患者预后。

慢性乙型肝炎患者HBV DNA载量与血清miR-122、miR-223水平的关系

目的分析慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒脱氧核糖酸(HBV DNA)载量与血清微小RNA-122(miR-122)、微小RNA-223(miR-223)水平的关系。方法回顾性分析郑州市第七人民医院2022年6月—2023年3月收治的540例CHB患者的临床资料。依据血清HBV DNA载量分为低载量(<10^(5)拷贝/mL)组(n=230)、中载量(10^(5)~10^(7)拷贝/mL)组(n=180)、高载量(>10^(7)拷贝/mL)组(n=130),另选取同期于我院体检中心体检的健康者300名设为对照组。比较不同HBV DNA载量组血清miR-122、miR-223水平,绘制ROC曲线评价血清miR-122、miR-223诊断CHB的效能,采用多因素Logistic回归分析CHB的危险因素,采用Pearson相关性分析HBV DNA载量与血清miR-122、miR-223水平的关系。结果三组血清miR-122(1.45±0.37、2.84±0.72、4.11±0.90)、miR-223(1.34±0.33、1.69±0.37、1.91±0.45)比较差异有统计学意义(F=716.128、104.744,P<0.05);CHB组患者的血清miR-122(2.56±0.49)、miR-223(1.79±0.42)及HBV DNA载量>10^(5)拷贝/mL的人数占比(310/540)显著高于对照组(1.07±0.21、1.05±0.30、75/300)(t=51.844、26.935,χ^(2)=81.585,P<0.05);经ROC分析证实,血清miR-122、miR-223水平均可用于预测CHB,曲线下面积分别为miR-122(AUC=0.794,95%CI:0.690~0.898)、miR-223(AUC=0.813,95%CI:0.720~0.906),均有P<0.05;多因素logistic回归分析显示,miR-122≥1.528、miR-223≥1.210及HBV DNA载量>105拷贝/mL是CHB的危险因素,OR值分别为2.011(95%CI:1.211~3.339)、1.696(95%CI:1.026~2.804)、2.117(95%CI:1.974~3.987)均有P<0.05;相关性分析显示,血清miR-122、miR-223水平与HBV DNA载量呈正相关(r=0.753、0.712,P<0.05)。结论血清miR-122、miR-223水平与HBV DNA载量呈正相关,且miR-122≥1.528、miR-223≥1.210及HBV DNA载量>10^(5)拷贝/mL是CHB的危险因素,可将以上指标作为诊断CHB的生物学标志物,从而为临床病情评估和治疗提供参考。

miR-223通过调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路对前列腺癌细胞损伤的影响

目的探究微小RNA-223(miR-223)通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对前列腺癌细胞损伤的影响。方法培养前列腺癌细胞株PC3,且随机将其分为对照组、下调miR-223组、上调miR-223组。探究miR-223表达、细胞增殖率、细胞迁移数、细胞侵袭数、凋亡率、Keap1/Nrf2/ARE信号通路表达量的变化。结果与对照组比较,下调miR-223组的细胞侵袭数、细胞迁移数、24、48、72 h细胞增殖率、Nrf2、ARE表达上升,miR-223、Keap1、凋亡率表达降低(P<0.05);与下调miR-223组比较,上调miR-223组的24、48、72 h细胞增殖率、细胞侵袭数、细胞迁移数、ARE、Nrf2表达下降,miR-223、凋亡率、Keap1表达升高(P<0.05)。结论调节miR-223可有效改善前列腺细胞损伤,其机制可能与Keap1/Nrf2/ARE信号通路有关。

糖尿病肾病患者血清microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清micro RNA-21(mi R-21)含量及其与氧化应激指标的相关性。方法选择在该院接受治疗的DN患者82例作为观察组,根据病情严重程度分为轻度DN组(47例)、中重度DN组(35例),另取同期体检健康人60例作为对照组。检测各组患者的血清mi R-21含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、晚期蛋白氧化产物(AOPP)等氧化应激指标水平,进一步分析两者之间的相关性。结果 1早期DN组、中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于对照组,中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于早期DN组;2早期DN组、中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于对照组,中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于早期DN组;3血清mi R-21含量与SOD、MDA、AOPP等氧化应激指标水平呈负相关。结论 DN患者的血清mi R-21含量降低,且与患者的氧化应激指标水平相关,有望成为诊断及指导疾病治疗的有效指标之一。

红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制

目的观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制。方法采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用。分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制。结果与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义。细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05)。结论红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的通过研究micro RNA-155(mi R-155)在类风湿关节炎(RA)患者外周血的表达水平,分析mi R-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC(外周血单个核细胞),提取和纯化mi RNA,实时定量PCR检测mi R-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对mi R-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析mi R-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤(MTX)单药治疗组,肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血mi R-155的表达水平变化。结果RA患者中PBMC中mi R-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者mi R-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,mi R-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 mi R-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示mi R-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。mi R-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

microRNA-21通过促进成纤维细胞的增殖和分化调节心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型(心肌梗死组),以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR检测各组心肌组织miR-21的表达。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞(miR-21 mimic组),使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达,并与随机对照组及空白对照组比较。结果与假手术组比较,心肌梗死组梗死交界区的miR-21的表达量明显上调[(6.043±0.231)×10-4vs(1.620±0.451)×10-4,P<0.01],miR-21 mimic组成纤维细胞miR-21基因表达较随机对照组和空白对照组显著上调[(4.839±0.705)×10-4vs(1.143±0.064)×10-4vs(1.017±0.201)×10-4,P<0.01],miR-21mimic组成纤维细胞EdU染色阳性率较随机对照组和空白对照组显著增加[(27.892±1.645)%vs(12.553±1.227)%vs(13.946±1.550)%,P<0.01];同时,miR-21 mimic组成纤维细胞Smad7蛋白的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。