LncRNA CBR3-AS1调节miR-448/TFAM轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)CBR3-AS1对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 收集济南市第五人民医院2021年1月至2022年6月获取的40对CRC组织和邻近癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人CRC组织、癌旁组织和CRC细胞系、正常结直肠上皮细胞中LncRNA CBR3-AS1、微小RNA-448(miR-448)及线粒体转录因子A(TFAM)mRNA表达。根据不同CRC细胞系中LncRNA CBR3-AS1的表达水平筛选后续实验使用的细胞系。验证miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM的靶向关系。在目标细胞中转染靶向LncRNA CBR3-AS1的小干扰RNA(si-CBR3-AS1)、miR-448抑制物(miR-448 inhibitor),采用qRT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LncRNA CBR3-AS1、miR-448及TFAM mRNA和蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验和Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡率、迁移及侵袭能力。结果 CRC组织和细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA呈高表达,miR-448呈低表达,且HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1的表达最高,故选择HCT116细胞进行后续靶向验证和转染实验。经验证,HCT116细胞中miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM均存在靶向关系。转染si-CBR3-AS1可降低HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA和蛋白表达水平,同时降低细胞活力、划痕愈合率、迁移细胞数、侵袭细胞数,升高miR-448表达水平及凋亡率;转染si-CBR3-AS1基础上转染miR-448 inhibitor可减弱干扰LncRNA CBR3-AS1表达对HCT116细胞的影响。结论 干扰LncRNA CBR3-AS1可抑制CRC细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向miR-448/TFAM轴有关。

结肠癌病人血清miR-448和miR-153表达对肠道菌群及免疫功能的影响

目的探讨结肠癌病人血清微小RNA-448(miR-448)和微小RNA-153(miR-153)表达对肠道菌群及免疫功能的影响。方法2020年2月~2023年2月期间收治的127例结肠癌病人作为研究组,89例结肠良性病变病人作为结肠良性病变组,同期本院体检的127例健康者作为对照组。以血清miR-448(1.12)和miR-153(0.98)表达水平的中位数为临界值将研究组病人分为miR-448高表达组(63例)、miR-448低表达组(64例),miR-153高表达组(64例)、miR-153低表达组(63例)。Pearson法分析血清miR-448和miR-153表达水平与结肠癌病人肠道菌群、免疫功能指标的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-448和miR-153对结肠癌的诊断价值。结果研究组、结肠良性病变组、对照组大肠杆菌、双歧杆菌、双歧杆菌/大肠杆菌比值以及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA比较,差异有统计学意义(P<0.05);研究组血清miR-448表达水平为(1.25±0.22),高于对照组的(1.09±0.03)和结肠良性病变组的(1.18±0.15),血清miR-153表达水平为(0.89±0.12)低于对照组的(1.03±0.17)和结肠良性病变组的(0.96±0.16);血清miR-448、miR-153高表达和低表达组大肠杆菌、双歧杆菌、双歧杆菌/大肠杆菌比值、IgG、IgM、IgA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-448、miR-153与大肠杆菌、双歧杆菌、双歧杆菌/大肠杆菌比值有相关性(r=0.657,-0.742,-0.753;r=-0.711,0.813,0.771,P<0.05);IgG、IgM、IgA与血清miR-448呈正相关(r=0.686,0.709,0.744),与miR-153呈负相关(r=-0.690,-0.841,-0.769,P<0.05);血清miR-448和miR-153联合检测诊断结肠癌的AUC为0.845,优于各自单独检测(Z二者联合-miR-448=4.561、Z二者联合-miR-153=2.426,P=0.000、0.015)。结论结肠癌病人血清miR-448和miR-153表达水平与肠道菌群及免疫功能有相关性,二者联合对结肠癌具有较高的诊断价值。

糖尿病肾病患者血清microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清micro RNA-21(mi R-21)含量及其与氧化应激指标的相关性。方法选择在该院接受治疗的DN患者82例作为观察组,根据病情严重程度分为轻度DN组(47例)、中重度DN组(35例),另取同期体检健康人60例作为对照组。检测各组患者的血清mi R-21含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、晚期蛋白氧化产物(AOPP)等氧化应激指标水平,进一步分析两者之间的相关性。结果 1早期DN组、中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于对照组,中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于早期DN组;2早期DN组、中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于对照组,中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于早期DN组;3血清mi R-21含量与SOD、MDA、AOPP等氧化应激指标水平呈负相关。结论 DN患者的血清mi R-21含量降低,且与患者的氧化应激指标水平相关,有望成为诊断及指导疾病治疗的有效指标之一。

红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制

目的观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制。方法采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用。分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制。结果与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义。细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05)。结论红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的通过研究micro RNA-155(mi R-155)在类风湿关节炎(RA)患者外周血的表达水平,分析mi R-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC(外周血单个核细胞),提取和纯化mi RNA,实时定量PCR检测mi R-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对mi R-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析mi R-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤(MTX)单药治疗组,肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血mi R-155的表达水平变化。结果RA患者中PBMC中mi R-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者mi R-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,mi R-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 mi R-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示mi R-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。mi R-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

microRNA-21通过促进成纤维细胞的增殖和分化调节心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型(心肌梗死组),以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR检测各组心肌组织miR-21的表达。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞(miR-21 mimic组),使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达,并与随机对照组及空白对照组比较。结果与假手术组比较,心肌梗死组梗死交界区的miR-21的表达量明显上调[(6.043±0.231)×10-4vs(1.620±0.451)×10-4,P<0.01],miR-21 mimic组成纤维细胞miR-21基因表达较随机对照组和空白对照组显著上调[(4.839±0.705)×10-4vs(1.143±0.064)×10-4vs(1.017±0.201)×10-4,P<0.01],miR-21mimic组成纤维细胞EdU染色阳性率较随机对照组和空白对照组显著增加[(27.892±1.645)%vs(12.553±1.227)%vs(13.946±1.550)%,P<0.01];同时,miR-21 mimic组成纤维细胞Smad7蛋白的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。

微小RNA-448对非小细胞肺癌细胞侵袭迁移和ZEB2表达的影响

目的探讨微小RNA-448(miR-448)对锌指E盒结合的同源盒蛋白2(ZEB2)的靶向调控作用及非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人正常支气管上皮细胞16HBE和NSCLC细胞A549的miR-448水平;脂质体Lipofectamine 3000向A549细胞转染miR-448模拟物(过表达组)和阴性对照序列(NC组)并设仅行脂质体处理的细胞为对照组,采用QPCR、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验、Transwell实验和Western blotting检测A549细胞的miR-448水平、增殖活力、凋亡率、划痕愈合率、穿膜细胞数和ZEB2水平;TargetScan在线预测miR-448的可能靶点并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-448对ZEB2的靶向调控作用。结果A549细胞的miR-448水平为0.214±0.019,低于16HBE细胞的1.146±0.183(P<0.05)。与其余两组相比,过表达组转染24、48 h后的增殖活力降低(P<0.05)。过表达组的miR-448水平、凋亡率、划痕愈合率、穿膜细胞数和ZEB2水平分别为8.256±1.306、(31.152±2.675)%、(40.262±3.964)%、(196.021±19.626)个和0.482±0.073,均优于NC组的1.083±0.375、(12.327±2.642)%、(58.611±6.514)%、(346.926±24.892)个和0.667±0.079及对照组的1.064±0.203、(13.452±1.904)%、(60.767±5.125)%和(339.568±25.927)个和0.683±0.061(P<0.05)。NC组和对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。经miR-448模拟物处理后,转染野生型ZEB23’端非翻译区质粒细胞的相对荧光强度低于转染突变型质粒(P<0.05)。结论miR-448在NSCLC细胞中低表达且上调其水平可抑制增殖和侵袭迁移能力并诱导凋亡,可能通过靶向ZEB2来发挥抑癌作用。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

抑制microRNA-21表达降低HCT-116细胞侵袭转移能力的实验研究

目的:探讨抑制人结肠癌细胞HCT-116 micro RNA-21表达降低结肠癌细胞侵袭转移能力作用机制。方法:应用表达反义micro RNA-21的质粒mi RZip21转染HCT-116细胞,检测micro RNA-21的变化,Target Scan和Pic Tar等工具筛选与侵袭转移相关的靶基因,实时定量PCR方法检测转染前后靶基因m RNA的变化,Western blot检测靶基因蛋白表达变化,平皿划痕和Transwell实验观察抑制micro RNA-21与否HCT-116细胞转移和侵袭能力。结果:筛选出4种与侵袭转移相关的micro RNA-21靶基因:TIMP-3,RECK,BMPRⅡ和PCDH17;mi RZip21质粒转染HCT-116后,micro-RNA 21表达水平下降约40%,靶基因TIMP-3和RECK的m RNA及靶蛋白表达上升明显,有统计学意义(P<0.05);平皿划痕和Transwell实验结果表明抑制micro RNA-21后,HCT-116细胞转移侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制micro RNA-21的表达能够减弱HCT-116细胞的侵袭和转移能力。

MicroRNA-21对结直肠癌诊断价值的Meta分析

目的应用Meta分析评价血液(血清、血浆)及粪便标本中micro RNA-21(mi R-21)表达用于结直肠癌诊断的临床价值。方法联合应用Cochrane library、Pub Med、EMbase、Google学术、CNKI等检索micro RNA-21用于结直肠癌诊断的文献,按PRISMA声明的标准筛选文献以及进行QUADAS-2质量评价后,用固定效应模型或随机效应模型合并得到汇总的灵敏度(SEN)、特异度(SPE)、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)和诊断优势比(DOR),受试者工作特征曲线(SROC)及曲线下面积(AUC)用于评价整体诊断效能。结果最终纳入14篇文献,包括1199例结直肠癌患者和784例正常对照者。Meta分析结果显示:血清mi R-21的汇总DOR、SEN和SPE分别为13.97(95%CI:8.56-22.81)、0.73(95%CI:0.69-0.77)、0.83(95%CI:0.76-0.89);血浆mi R-21的汇总DOR、SEN和SPE分别为8.03(95%CI:3.30-19.52)、0.67(95%CI:0.60-0.73)、0.76(95%CI:0.69-0.81);粪便mi R-21的汇总DOR、SEN和SPE分别为4.78(95%CI:1.46-15.69)、0.31(95%CI:0.27-0.36)、0.88(95%CI:0.84-0.91)。除此之外,血清、血浆和粪便mi R-21诊断结直肠癌的AUC分别为0.8701、0.8295和0.6991。结论血液标本mi R-21用于结直肠癌诊断具有良好的灵敏度和特异度,且血清标本的检测结果优于血浆标本;粪便mi R-21诊断结直肠癌灵敏度较差但特异性好。

胃癌组织中microRNA-224阳性表达与患者预后相关性分析

目的:探讨micro RNA-224于胃癌组织中的阳性表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法:应用原位杂交技术检测micro RNA-224在50例石蜡固定癌旁非肿瘤胃黏膜组织及112例石蜡胃肿瘤组织切片中的表达情况,分析其与肿瘤患者各病理参数及预后的相关性。原位杂交按照原位杂交试剂盒的说明书进行。结果:micro RNA-224在胃癌组织中阳性表达率49.1%(55/112),癌旁非肿瘤胃黏膜组织中阴性表达。其阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度存在相关性(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤的部位、分化程度、Lauren分型无关(P>0.05)。micro RNA-224阴性表达比阳性表达者5年生存率高,差异有统计学意义(P<0.001)。经COX多因素分析显示:micro RNA-224的表达是影响胃癌患者预后的独立因素之一(P<0.05)。结论:micro RNA-224在肿瘤组织中阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度密切相关,是影响胃癌患者预后的独立因素之一。

老年COPD急性加重期患者血清miR-448-5p、Six1水平及其临床意义

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者血清同源异形盒基因1(Six1)、微小RNA-448-5p(miR-448-5p)表达水平及其临床意义。方法将2021年3月到2022年3月本院住院部收治的老年COPD急性加重期患者110例(COPD急性加重组)、COPD稳定期患者60例(COPD稳定组)纳入研究。另外,选取同期于该院体检的健康者60例作为对照组。收集受试者基本资料。COPD急性加重期患者血清Six1、miR-448-5p水平与临床指标间的相关性采用Pearson法分析;多因素Logistic回归分析影响COPD患者急性加重的可能因素;miR-448-5p、Six1表达与生存资料采用Kaplan-Meier生存曲线进行分析;多因素Cox回归分析影响COPD急性加重患者预后的因素。结果COPD急性加重组、稳定组及对照组Six1水平依次降低(P<0.05),miR-448-5p水平依次显著升高(P<0.05);相关性分析显示,COPD急性加重期患者血清miR-448-5p、Six1水平均与氧分压(PaO_(2))、第1秒用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV_(1)/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%pred)、年龄、二氧化碳分压(PaCO_(2))呈显著相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,miR-448-5p、年龄、Six1是COPD发生急性加重的影响因素(P<0.05);死亡组miR-448-5p水平显著低于存活组,Six1水平显著高于存活组(P<0.05);Kaplan-Meier结果显示miR-448-5p高表达患者30 d生存率(80.00%)高于miR-582-5p低表达患者(56.36%),Six1高表达患者30 d生存率(47.27%)低于Six1低表达患者(89.09%);miR-448-5p、Six1是COPD急性加重患者死亡的影响因素(P<0.05)。结论miR-448-5p水平在老年COPD急性加重期患者血清中显著下调、Six1在老年COPD急性加重期患者血清中显著上调,检测血清miR-448-5p、Six1的表达有利于对老年COPD患者病情的评估。

MicroRNA-599对静脉曲张中血管平滑肌细胞去分化的影响及其机制研究

目的研究micro RNA-599(miR-599)在曲张静脉中的表达,探讨miR-599是否通过下调血小板源性生长因子B(PDGF-BB),抑制曲张静脉中血管平滑肌细胞(VSMCs)去分化。方法收集大隐静脉移植术患者中曲张静脉和正常静脉标本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测42例曲张静脉组织及39例正常静脉组织中miR-599、miR-200、miR-145、miR-146b、miR-155的表达;Western blot检测两组标本中SMactin、SM-22、SM-MCH、OPN的表达;在细胞实验中,转染miR-599mimic和miR-NC至离体培养的VSMCs中,Western blot检测VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH、OPN、PDGF-BB的表达,噻唑蓝法测细胞增殖、划痕实验观察细胞迁移,利用荧光素酶试验验证PDGF是miR-599的靶基因。结果相比于正常静脉组织,miR-599在曲张静脉中的表达降低(F=73.012,P=0.001)。两组miR-146b、miR-200、miR-30、miR-155的表达量比较,差异无统计学意义。相比于正常静脉组织,曲张静脉组织中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达降低(P<0.05),OPN的表达升高(F=56.414,P=0.009);在细胞实验中,相比于对照组,miR-599组VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达升高(P<0.05),OPN的表达降低(F=27.353,P=0.022),细胞增殖减少(F=37.824,P=0.016),迁移减少(F=69.365,P=0.001),PDGF表达量减少(F=55.345,P=0.004)。荧光素酶试验结果显示,miR-599能够降低PDGF-3'-UTR质粒的荧光素活性(F=21.429,P=0.036)。结论在曲张静脉组织中,miR-599低表达。在VSMCs中,miR-599可以通过下调PDGF-BB而抑制VSMCs去分化。

稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株构建的试验研究

目的研究构建可以稳定表达HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法。方法采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株(LE/6),以质粒Pc DNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板,PCR法扩增得到目的基因片段A。将HBx目的基因片段和质粒载体p EGFP-Nl进行双酶切,线性化得到重组质粒命名为p EGFP-HBx。重组质粒转化感受态大肠埃希菌DH5a,并进行筛选培养。用脂质体法将质粒转染卵圆细胞,作为p EGFP-HBx组;用脂质体法将质粒转染质粒载体p EGFP-Nl,作为p EGFP-NI质粒组。最后将Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养,培养24 h后用荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况。结果 p EGFP-HBx中GFP表达量经荧光定量PCR仪器确定为92.28%,且表达程度强;Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养完成后,p EGFP-HBx组内MicroRNA-21的转录水平经仪器测量为1.77±0.24,显著高于p EGFP-NI质粒组内的0.36±0.21,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功地构建了稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株,为进一步研究HBx蛋白、mi RNA-21、肝卵圆细胞与肝癌之间的关系提供了实验基础。

microRNA-21、microRNAlet-7a在三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌血清中的表达差异

目的:探讨micro RNA-21、micro RNAlet-7a在三阴性乳腺癌与Luminal A型乳腺癌中的差异及与临床参数间相关性,为三阴性乳腺癌的治疗提供分子靶点。方法:收集三阴性、Luminal A型乳腺癌各33例以及健康者血清29例,通过q PCR检测血清中micro RNA-21、let-7a的表达情况。结果:micro RNA-21在三阴组血清中表达高于Luminal A组(P<0.05)及正常组(P<0.05)。Let-7a在三阴组血清中表达低于正常组(P<0.05)。三阴组血清中micro RNA-21高表达与临床分期晚呈正相关(P>0.05)。结论:micro RNA-21在Luminal A型与三阴性乳腺癌中的表达差异可作为三阴性乳腺癌特异性治疗的候选靶点。

胃癌中microRNA-218调控BMI1基因表达的作用及机制

目的探讨胃癌中microRNA-218(mi R-218)调控BMI1基因表达的作用及机制。方法应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测胃癌及癌旁组织中miR-218及BMI1基因的表达。将miR-218的前体(mi R-218 precursor)转染胃癌BGC823细胞,Western blot检测BMI1蛋白的表达。应用荧光素酶实验分析miR-218是否与BMI1基因3’非翻译区(3’-UTR)结合。结果 RT-PCR结果显示,相对癌旁组织,胃癌组织中miR-218的表达下调显著,而BMI1在胃癌组织中的表达则呈现明显的上调,miR-218与BMI1在胃癌及癌旁组织中的表达均为明显的负相关。在转染miR-218 precursor的胃癌BGC823细胞中,BMI1的蛋白表达显著下调。荧光素酶实验结果证实miR-218能够特异性地结合BMI1基因的3’-UTR,并与其表达呈负相关。结论 miR-218与BMI1基因的表达异常与胃癌的发生相关,BMI1基因是miR-218的靶基因,miR-218在胃癌细胞中能够靶向沉默BMI1基因。

MicroRNA-24的研究进展

Micro RNA(mi RNA,mi R)是一种内源性、非编码蛋白质的小分子单链RNA,长度为18-24个核苷酸,与组织器官发育、细胞增殖、分化和凋亡以及肿瘤的发生发展有关.本文主要对mi R-24的生物学特性与其在肿瘤及非肿瘤性疾病中可能发挥的调节作用作一综述,可为临床诊断和治疗方面提供新的线索,以降低患者的病死率.