miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛耐药的分子机制

目的 探讨miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛(docetaxel, DTX)耐药的分子机制。方法 构建MCF-7/DTX细胞株,采用qRT-PCR检测MCF-7及MCF-7/DTX细胞株及乳腺癌患者癌组织中miR-101-3p的表达水平;向MCF-7/DTX细胞转染miR-101-3p mimics、siGALNT1、miR-101-3p inhibitor并用qRT-PCR实验评估转染效率;MTT实验用于检测调控miR-101-3p及GALNT1对MCF-7/DTX细胞DTX敏感性的影响;划痕实验用于分析转染后各组细胞迁移能力的变化;Transwell实验检测调控miR-101-3p及GALNT1后MCF-7/DTX细胞的垂直侵袭能力的改变;流式凋亡实验检测各组细胞在同一浓度DTX处理下的凋亡百分比;western blot实验检测调控miR-101-3p及GALNT1对凋亡关联蛋白及上皮间充质转化标志蛋白表达量的影响。结果 MCF-7/DTX细胞和DTX患者耐药组中miR-101-3p的相对表达量呈异常降低趋势。转染miR-101-3p mimics后,与miR-NC组相比miR-101-3p mimics组DTX敏感性明显升高,迁移和侵袭能力在高水平miR-101-3p下有所降低,同时凋亡百分比显著上升凋亡蛋白表达呈相同趋势,上皮间充质转化过程受到一定抑制。MCF-7/DTX细胞中GALNT1相对表达量较MCF-7细胞明显升高,双荧光素酶实验证实了miR-101-3p与GALNT1的靶向关系并且GALNT1表达量与miR-101-3p呈负相关。回复实验进一步分析GALNT1和miR-101-3p间的关系,低水平miR-101-3p能够逆转敲低GALNT1引起的DTX高敏感性,同时一定程度恢复敲低GALNT1引起的MCF-7/DTX细胞迁移、侵袭、凋亡及EMT的改变。结论 miR-101-3p介导MCF-7/DTX细胞的DTX敏感性可能是通过靶向GALNT1完成的。

miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系研究

目的 探究miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系。方法 将膀胱癌细胞分为对照组、下、上调miR-101-3p组,体外培养膀胱癌细胞。采用CCK-8实验来检测膀胱癌细胞增殖能力;通过划痕实验来检测膀胱癌细胞迁移能力;通过Transwell实验来检测膀胱癌细胞侵袭能力;3组细胞分别加入不同浓度的顺铂,观察对细胞的抑制率;Western blot法测定CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量。结果 在24 h、48 h、72 h的细胞增殖率方面,上调miR-101-3p组均低于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组低于下调miR-101-3p组(P<0.05);在24 h、48 h、72 h的细胞迁移数、侵袭数方面,上调miR-101-3p组均少于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组少于下调miR-101-3p组(P<0.05);在CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量方面,上调miR-101-3p组均低于对照组和下调miR-101-3p组(P<0.05);在顺铂敏感度方面,上调miR-101-3p组高于对照组、下调miR-101-3p组(P<0.05)。结论 上调miR-101-3p能够抑制CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达,调控细胞周期,阻止膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭,提高其顺铂敏感性。

LncRNA XIST和miR-101-3p在SLE患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值

目的分析长链非编码RNA(Lnc RNA)X染色体失活特异转录本(XIST)和微小RNA-101-3p(mi R-101-3p)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值。方法选取2019年4月至2021年10月在新乡市中心医院治疗的180例SLE患者作为观察组,选择同期180例健康体检者作为对照组。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将观察组分为稳定期组80例和活动期组100例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法对患者外周血单核细胞中Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的相对表达水平进行检测。分析Lnc RNA XIST与mi R-101-3p的相关性以及二者与SLEDAI评分的相关性;对影响SLE的因素进行logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的表达对SLE的诊断价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组患者较稳定期组外周血单核细胞中Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST与mi R-101-3p水平呈负相关(r=-0.410,P<0.05);Lnc RNA XIST水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.425,P<0.05),mi R-101-3p水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.454,P<0.05);logistic回归分析显示,Lnc RNA XIST是影响SLE的危险因素(P<0.05),mi R-101-3p是影响SLE的保护因素(P<0.05);Lnc RNA XIST、mi R-101-3p联合诊断SLE的ROC曲线下面积为0.960,均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Ln-c RNA XIST)=3.268,P=0.001;Z_(二者联合-mi R-101-3p)=2.584,P=0.005)。结论SLE患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,与SLE疾病活动性有关,对SLE具有一定的诊断价值。

溃疡性结肠炎患者血清miR-101-3p、PTX3水平变化及其与病情的关系

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者血清中微小RNA-101-3p(miR-101-3p)和正五聚蛋白3(PTX3)的水平变化及其与UC病情的关系。方法选取该院2020年3月至2023年7月收治的124例UC患者作为UC组,另选取同期124例体检健康者作为对照组。根据Mayo评分分为活动期71例、缓解期53例,并将活动期患者分为轻度组20例、中度组28例、重度组23例。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验检测血清PTX3水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-101-3p水平。采用Pearson相关分析血清miR-101-3p水平与PTX3水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响UC患者病情的因素;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-101-3p、PTX3对UC患者病情的诊断价值。结果UC组血清miR-101-3p水平低于对照组,PTX3水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,UC患者血清miR-101-3p水平与PTX3水平呈负相关(r=-0.482,P<0.05)。活动期患者血清miR-101-3p水平低于缓解期,PTX3水平高于缓解期,差异均有统计学意义(P<0.05)。在活动期UC患者中,血清miR-101-3p水平轻度组>中度组>重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);血清PTX3水平为轻度组<中度组<重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清miR-101-3p水平升高是UC患者病情处于活动期的保护因素(P<0.05),PTX 3水平升高是UC患者病情处于活动期的危险因素(P<0.05)。血清miR-101-3p、PTX3单项及联合检测诊断UC患者病情处于活动期的曲线下面积(AUC)分别为0.820(95%CI:0.741~0.884)、0.853(95%CI:0.778~0.910)、0.977(95%CI:0.933~0.996),联合检测诊断的AUC明显高于miR-101-3p、PTX3单项检测(Z=4.010、3.663,均P<0.05)。结论UC患者血清miR-101-3p水平明显降低,PTX3水平明显增加,二者与UC患者病情有关,并且2项指标联合检测诊断UC患者病情处于活动期的价值更佳。

LncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制研究

目的 探讨lncRNA NEAT1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用机制。方法 采用RT-qPCR法检测宫颈腺癌细胞系HeLa、宫颈鳞癌细胞系SiHa和人子宫内膜上皮细胞系EM中lncRNA NEAT1的表达;干扰或过表达lncRNA NEAT1后,通过CCK-8和Transwell观察宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,扫描电镜观察细胞侵袭性伪足的变化;采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1与miR-101-3p的靶向关系;通过免疫荧光、Transwell、CCK-8等方法检测lncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1对SiHa和HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 相比于EM细胞(0.99±0.04),宫颈癌SiHa(7.59±0.10,P<0.01)和HeLa(1.50±0.07,P<0.05)细胞中lncRNA NEAT1的表达明显升高。相比于sh-NC组,sh-NEAT1组(加入NEAT1敲低质粒)细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量明显减少(P<0.05);相比于OE-NC组,OE-NEAT1组(加入NEAT1过表达质粒)SiHa、HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量显著增加(P<0.05)。miR-101-3p与突变的NEAT1共转染后,相比于对照组(3.10±0.16)荧光素酶活性无显著变化(2.99±0.11,P>0.05),而与野生型NEAT1共转染后,相比于对照组(2.97±0.13)荧光素酶活性显著降低(1.15±0.05,P<0.01),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p靶向结合。RT-qPCR结果显示,与sh-NC组(SiHa,0.97±0.09;HeLa,1.07±0.06)相比,sh-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达明显升高(SiHa,3.86±0.39;HeLa,2.62±0.51,P<0.01);与OE-NC组(SiHa,0.98±0.20;HeLa,1.05±0.18)相比,OE-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达显著降低(SiHa,0.35±0.05;HeLa,0.14±0.03,P<0.05),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p的表达呈负相关。CCK-8、Transwell结果显示,siRNA-RAC1、miR-101-3p mimic使SiHa和HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制(P<0.05),上调lncRNA NEAT1可部分逆转以上现象,使细胞增殖、迁移和侵袭数目增加(P<0.05)。结论 宫颈癌细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,它作为miR-101-3p的竞争性内源RNA(ceRNA),通过竞争性结合miR-101-3p并部分控制其对RAC1的调控,进而调节宫颈癌细胞侵袭性伪足的形成并诱导细胞增殖、迁移和侵袭。

呼吸机相关肺炎患者病原菌分布及血清miR-101-3p、斯钙素1的检测分析

目的 探究呼吸机相关肺炎(ventilator-associated pneumonia,VAP)患者病原菌分布及血清微小RNA-101-3p(microRNA-101-3p,miR-101-3p)、斯钙素1(stanniocalcin 1,STC1)表达水平在VAP诊断中的临床意义。方法 选取2020年1月至2023年4月在安徽医科大学附属六安医院进行机械通气治疗,发生VAP的患者121例作为VAP组,未发生VAP的患者87例为非VAP组,同期健康体检者83例为对照组。采集VAP组患者下呼吸道分泌物进行病原菌鉴定;测定所有研究对象的血清STC1、降钙素原(procalcitonin,PCT)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、miR-101-3p水平。采用Pearson法分析血清miR-101-3p、STC1与炎症因子PCT、CRP、TNF-α的相关性;采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析血清miR-101-3p、STC1对VAP的诊断价值。结果 121例VAP患者共检测分离出病原菌218株,其中革兰氏阴性菌124株(56.88%),革兰氏阳性菌86株(39.45%),真菌8株(3.67%);VAP组的血清miR-101-3p、PCT、CRP、TNF-α水平均显著高于非VAP组和对照组(P<0.05),STC1水平显著低于非VAP组和对照组(P<0.05);VAP患者的血清miR-101-3p水平与PCT、CRP、TNF-α呈正相关(P<0.05),STC1水平与PCT、CRP、TNF-α呈负相关(P<0.05);ROC曲线显示血清miR-101-3p、STC1单独及联合诊断VAP患者的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.766、0.750、0.841,联合诊断价值高于二者单独诊断(Z二者联合-miR-101-3p=2.275、P=0.023,Z二者联合-STC1=2.856、P=0.004)。结论 VAP患者以革兰氏阴性菌感染为主,血清miR-101-3p呈高表达、STC1呈低表达,血清miR-101-3p、STC1联合诊断对于VAP的发生具有一定的诊断价值。

CircPIP5K1A靶向调节miR-101-3p影响结直肠癌SW480细胞生长、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的探究CircPIP5K1A靶向调节miR-101-3p对结直肠癌(CRC)SW480细胞生长、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法qRT-PCR检测人CRC组织、邻近正常组织、CRC细胞株SW480、正常结肠上皮细胞FHC中CircPIP5K1A、miR-101-3p水平;将si-NC、si-CircPIP5K1A、si-CircPIP5K1A+inhibitor NC、si-CircPIP5K1A+miR-101-3p inhibitor分别转染至SW480细胞并命名为si-NC组、si-CircPIP5K1A组、si-CircPIP5K1A+inhibitor NC组、si-CircPIP5K1A+miR-101-3p inhibitor组,未做任何处理的SW480细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证CircPIP5K1A与miR-101-3p的关系;qRT-PCR检测SW480细胞中CircPIP5K1A、miR-101-3p表达;CCK-8法检测SW480细胞增殖情况;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测SW480细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平;小鼠异种移植检测肿瘤生长。结果与邻近正常组织[(1.00±0.03)、(1.00±0.02)]或FHC细胞(1.00±0.00)相比,CRC组织和SW480细胞CircPIP5K1A水平[(1.85±0.21)、(1.54±0.16)]显著上调(P<0.05),miR-101-3p表达[(0.31±0.02)、(0.36±0.04)]显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-CircPIP5K1A组SW480细胞A 450值、迁移、侵袭细胞数量、CircPIP5K1A表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),SW480细胞凋亡率、miR-101-3p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-101-3p表达减弱了沉默CircPIP5K1A抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭的效果;CircPIP5K1A负向调控miR-101-3p。与NC组、慢病毒空载(LV-NC)组相比,PIP5K1A慢病毒载体(LV-PIP5K1A)组肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05);与LV-PIP5K1A组、LV-PIP5K1A+拮抗剂对照(antiagomir)组相比较,LV-PIP5K1A+miR-101-3p拮抗剂(miR-101-3p antiagomir)组肿瘤体积、肿瘤质量显著升高(P<0.05)。结论沉默CircPIP5K1A可能通过上调miR-101-3p表达来对CRC细胞SW480增殖、迁移和侵袭产生影响。

miR-101-3p调控HMGB1影响甲状腺乳头状癌的体外转移活性

目的探讨miR-101-3p在甲状腺乳头状癌细胞发展中的作用机制,以期为甲状腺乳头状癌的预防和治疗提供一个新思路。方法采用q-PCR方法检测癌组织和癌旁组织中miR-101-3p和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平。用miR-101-3p mimic、miR NC、pcDNA3.1 HMGB1和pcDNA3.1 NC转染KAT-5细胞后,Western blotting检测HMGB1途径蛋白的表达。使用划痕实验检测细胞的迁移情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,通过集落形成实验分析细胞的生长能力。荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p和HMGB1的相互作用情况。结果miR-101-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达显著低于癌旁组织(分别为1.08±0.02、0.52±0.01,P<0.05);HMGB1在人PTC中表达显著高于癌旁组织(分别为0.88±0.03、1.29±0.02,P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-101-3p能够靶向抑制HMGB1表达(分别为0.98±0.02、0.03±0.0l,P<0.05)。miR-101-3p过表达能够明显抑制KAT-5细胞的增殖与侵袭和迁移。然而,过表达HMGB1能够逆转miR-101-3p对KAT-5细胞的抑制作用。结论miR-101-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达降低,HMGB1在甲状腺乳头状癌组织中的表达升高。miR-101-3p可靶向调控HMGB1进而抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡。

CircPRKCI通过miR-101-3p/TGFBR3轴调节食管鳞状细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探索环状RNA PRKCI(circular ribonucleic acid PRKCI,CircPRKCI)通过miR-101-3p/转化生长因子βⅢ型受体(transforming growth factor beta typeⅢreceptor,TGFBR3)轴对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞恶性行为学的影响。方法将si-NC、si-CircPRKCI、miRNC、miR-101-3p mimics、vector+miR-101-3p mimics、CircPRKCI+miR-101-3p mimics转染至KYSE150细胞中,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测细胞CircPRKCI、miR-101-3p、TGFBR3 mRNA表达。并采用RT-qPCR、细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法、Transwell法、流式细胞术、蛋白质印迹法检测各组细胞恶性行为情况。结果CircPRKCI和TGFBR3 mRNA在KYSE150细胞中上调,miR-101-3p表达下调(P<0.05);沉默CircPRKCI能够靶向上调miR-101-3p,抑制TGFBR3表达以及细胞活力、侵袭与迁移能力,增强细胞凋亡(P<0.05);上调miR-101-3p能够显著抑制KYSE150细胞恶性行为,而过表达CircPRKCI会减弱上调miR-101-3p对KYSE150细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论CircPRKCI可通过靶向负调节miR-101-3p/TGFBR3轴,影响ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭与凋亡等恶性生物学行为。

miR-101-3p通过靶向抑制斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)促进巨噬细胞对人肝癌细胞的吞噬作用

目的 探究miR-101-3p能否促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3人肝癌细胞的吞噬作用及其机制。方法 通过慢病毒包装、感染和抗性筛选,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记并过表达miR-101-3p的HCCLM3人肝癌细胞稳转系(HCCLM3^(GFP)-miR-101-3p),同时使用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞贴壁分化为M0型巨噬细胞。将两者共培养24 h后收集细胞,运用荧光激活细胞分选法(FACS)检测巨噬细胞吞噬效率。实时定量PCR检测斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)、钙网蛋白(CRT)的mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测CRT的表达和分布,Western blot法检测STC1、 CRT的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p与靶基因的靶向调控关系。结果 过表达miR-101-3p促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3肝癌细胞的吞噬作用,miR-101-3p通过靶向STC1进而上调HCCLM3细胞膜表面CRT的表达。结论 miR-101-3p通过靶向抑制STC1进而促进HCCLM3细胞膜表面CRT的表达,增强巨噬细胞对肝癌细胞的吞噬作用。

超声内镜弹性成像联合血清miR-101-3p,PTX3在胰腺占位性病变中的诊断价值研究

目的 探究超声内镜弹性成像联合血清微小RNA-101-3p(miR-101-3p),正五聚蛋白3(PTX3)在胰腺占位性病变中的诊断价值。方法 选取2020年1月至2023年5月于本院就诊的193例胰腺占位性病变患者为研究对象,对患者进行超声内镜弹性成像检查。qRT-PCR法测定患者血清miR-101-3p水平;酶联免疫吸附法检测血清PTX3水平。ROC曲线分析血清miR-101-3p、PTX3水平对胰腺占位性病变的诊断价值,采用四表格法分析超声内镜弹性成像联合血清miR-101-3p,PTX3在胰腺占位性病变中的诊断价值。结果 组织病理学诊断结果显示,193例胰腺占位性病变患者中胰腺癌患者121例和胰腺良性病变患者72例。胰腺癌患者血清miR-101-3p显著低于良性胰腺占位性病变患者,PTX3水平显著高于良性胰腺占位性病变患者(P<0.05)。ROC曲线结果表明,血清miR-101-3p水平诊断胰腺占位性病变的AUC为0.782,敏感性为63.64%,特异性为86.11%;血清PTX3水平诊断胰腺占位性病变的AUC为0.705,敏感性为45.45%,特异性为87.50%。超声内镜弹性成像检查诊断结果显示,胰腺癌患者95例,良性胰腺占位性病变患者98例。其诊断胰腺占位性病变的敏感性为70.25%,特异性为86.11%,准确度为76.17%;其诊断胰腺占位性病变结果与组织病理学诊断结果具有一致性(Kappa值=0.525,P<0.05)。超声内镜弹性成像联合血清miR-101-3p、PTX3诊断胰腺占位性病变的敏感性为86.78%,特异性为84.72%,准确度为86.01%。三者联合诊断胰腺占位性病变结果与组织病理学诊断结果具有较好一致性(Kappa值=0.705,P<0.05)。三者联合诊断胰腺占位性病变的敏感性和准确度显著较高(P<0.05)。结论 超声内镜弹性成像联合血清miR-101-3p、PTX3检测可提高胰腺占位性病变诊断准确度,对胰腺占位性病变的诊断具有重要意义。

miR-101-3p靶向TGFβR1/Smad抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移

目的探索miR-101-3p对视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法RT-PCR检测miR-101-3p及转化生长因子β受体1(transforming growth factor beta receptor 1,TGFβR1)表达水平;生物信息学预测miR-101-3p与TGFβR1的靶向关系并通过荧光素酶报告实验进行验证。将Y79细胞分为Control组、miR-101-3p mimic组(转染miR-101-3p mimic)、pcDNA-TGFβR1组(转染pc-TGFβR1)及miR-101-3p mimic+pc-TGFβR1组(共转染miR-101-3p mimic和pc-TGFβR1),MTT检测细胞增殖速率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测TGFβR1、Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-9、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子、p-Smad2及p-Smad3的表达水平。结果在视网膜母细胞瘤组织中,miR-101-3p的表达为0.35±0.05,明显低于正常视网膜组织(P<0.01);视网膜母细胞瘤细胞株Y79中miR-101-3p的表达为0.24±0.04,明显低于视网膜上皮细胞株ARPE-19(P<0.01);与Control组相比,miR-101-3p mimic组miR-101-3p mRNA水平显著升高、TGFβR1 mRNA水平显著降低(均为P<0.01);miR-101-3p与TGFβR1之间存在连续结合片段。与Control组相比,miR-101-3p mimic组TGFβR1的表达水平显著降低,增殖速率及细胞中Ki67表达均显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax及cleaved Caspase-9表达显著升高、Bcl-2表达显著降低,侵袭细胞数目和划痕闭合率显著降低,MMP-2、MMP-9、血管内皮生长因子、TGFβR1、p-Smad2和p-Smad3的表达水平显著降低(均为P<0.01)。结论miR-101-3p通过靶向下调TGFβR1抑制视网膜母细胞瘤细胞的侵袭和迁移。

miR-101-3p靶向调控Rac1对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-101-3p靶向调控Rac1对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法体外培养乳腺癌细胞MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-435及正常乳腺细胞HBL-100,采用qRT-PCR法检测各细胞miR-101-3p表达。选择miR-101-3p表达最低的乳腺癌细胞进行后续实验。将miR-101-3p表达最低的乳腺癌细胞随机分为对照组、miR-101-3p抑制物组和miR-101-3p mimics组,miR-101-3p抑制物组和miR-101-3p mimics组分别转染miR-101-3p抑制物、miR-101-3p mimics。转染24 h,收集细胞,采用Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力。将miR-101-3p表达最低的乳腺癌细胞随机分为野生型Rac1+miR-101-3p mimics组、突变型Rac1+miR-101-3p mimics组、野生型Rac1+阴性对照物组、突变型Rac1+阴性对照物组,分别加入相应的转染物和转染试剂。转染24 h,收集细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组荧光素酶活性。结果乳腺癌MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-435细胞miR-101-3p相对表达量均明显低于正常乳腺HBL-100细胞(P均<0.05),且以MDA-MB-435细胞miR-101-3p相对表达量最低。miR-101-3p抑制物组细胞侵袭和迁移能力均明显高于对照组,而miR-101-3p mimics组细胞侵袭和迁移能力均明显低于对照组(P均<0.05)。野生型Rac1+miR-101-3p mimics组荧光素酶活性明显低于其他三组(P均<0.05),其他三组两两比较P均>0.05。结论 miR-101-3p可能通过靶向调控Rac1抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。

宫颈癌组织长链非编码RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表达变化及其意义

目的观察宫颈癌组织长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录子(XIST)、小分子RNA miR-101-3p表达变化,并探讨其临床意义。方法选取91例宫颈癌患者的宫颈癌组织标本为观察组,癌旁正常组织(距离宫颈癌组织>5cm且经病例检查证实为正常组织)标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组标本中的XIST、miR-101-3p表达,并分析其与宫颈癌临床病理参数的关系。结果观察组、对照组XIST表达量分别为8.97±3.56、7.01±3.82,miR-101-3p表达量分别为8.24±4.22、10.15±3.97。观察组XIST表达量高于对照组(P<0.05),miR-101-3p表达量低于对照组(P<0.05)。Pearson积矩相关分析结果显示宫颈癌组织miR-101-3p、XIST表达量呈负相关性(r=-0.716,P<0.05)。肿瘤最大径≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-101-3p表达量分别低于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的宫颈癌组织(P均<0.05),XIST表达量分别高于于肿瘤最大径<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移宫颈癌组织(P均<0.05)。结论宫颈癌组织XIST表达升高、miR-101-3p表达降低。检测宫颈组织XIST、miR-101-3p有助于宫颈癌的病情判断。

MiR-101-3p通过靶向抑制斯钙素1减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的:探究微小RNA-101-3p(microRNA-101-3p,miR-101-3p)对IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤的影响及其潜在的机制。方法:将骨关节软骨细胞随机分为对照组(NC组)、IL-1β组、阴性对照组(IL-1β+miR-NC组),miR-101-3p组(IL-1β+miR-101-3p组),细胞转染后再用IL-1β(10ng/mL)诱导软骨细胞。Real-timePCR和蛋白质印迹法检测不同浓度的IL-1β(0,1,5,10ng/mL)诱导的细胞中miR-101-3p和斯钙素1(stanniocalcin 1,STC1)的表达;采用MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;caspases检测试剂盒检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3/9(caspase-3/9)的表达;蛋白质印迹法检测炎性和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)和II型胶原的表达。另外,将野生型STC1的3'-非编码区(untranslated regions,UTR)(STC1-3'-UTR-WT)或者突变型STC1的3'-UTR(STC1-3'-UTR-MUT)分别与miR-101-3p模拟物(miR-101-3p mimic)和对照物(miR-NC)共转染细胞,采用荧光素酶报告实验检测miR-101-3p对STC1的调控作用。在miR-NC(miR-NC组),miR-101-3p(miR-101-3p组),anti-NC(anti-NC组)和anti-miR-101-3p(anti-miR-101-3p组)分别转染细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞中STC1蛋白的表达。为检测STC1是否参与miR-101-3p对软骨细胞的作用,将细胞随机分为miR-101-3p组(IL-1β+miR-101-3p组)、过表达对照组(IL-1β+miR-101-3p+ad-GFP组)、过表达STC1组(IL-1β+miR-101-3p+ad-STC1组)。同样分别用MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;caspases检测试剂盒检测caspase-3/9的表达;蛋白印迹法检测炎性和ECM相关蛋白的表达。结果:与0ng/mLIL-1β相比,不同浓度IL-1β诱导的软骨细胞中miR-101-3p水平显著下降(均P<0.05),STC1的水平则显著上升(均P<0.05)。与NC组相比,IL-1β组软骨细胞增殖率下降(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),caspase-3/9,IL-6和TNF-α的水平均显著上升(均P<0.05),MMP9的表达显著上调(P<0.05),II型胶原表达显著下调(P<0.05)。与IL-1β+miR-NC组相比,IL-1β+miR-101-3p组软骨细胞增殖率上升(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);caspases,IL-6和TNF-α的水平均显著下降(均P<0.05);MMP9的表达下降(P<0.05),II型胶原表达上调(P<0.05)。荧光素酶报告检测结果表明:与miR-NC组相比,miR-101-3p组可靶向抑制STC1的水平(P<0.05)。蛋白质印迹法结果表明:与miR-NC组相比,miR-101-3p组STC1水平下降(P<0.05);与anti-NC组相比,anti-miR-101-3p组STC1水平上升(P<0.05)。与miR-101-3p+ad-GFP组相比,miR-101-3p+ad-STC1组STC1反转了miR-101-3p对IL-1β诱导的软骨细胞增殖、凋亡、炎性反应及ECM相关蛋白的影响。结论:调节miR-101-3p/STC1通路能够保护IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤。

miR-101-3p 负向调控EZH2表达逆转子宫内膜癌细胞顺铂耐药的作用及机制

目的探讨子宫内膜癌中miR-101-3p的表达情况,并进一步验证miR-101-3p与EZH2之间的靶向调控关系,探究miR-101-3p与EZH2在子宫内膜癌顺铂耐药中的作用及其机制。方法采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-101-3p在子宫内膜癌原始细胞株Ishikawa以及顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中的表达,在Ishikawa细胞株中转染miR-101-3p抑制剂,在Ishikawa/DDP细胞株中转染miR-101-3p mimics后,MTS法检测miR-101-3p对半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。TargetScan软件预测结果表明EZH2为miR-101-3p的靶基因,构建野生型或突变型含有EZH23'-非翻译区域的荧光素酶报告基因,检测荧光素酶活性变化,westernblot检测转染miR-101-3p抑制物的Ishikawa细胞株以及转染了miR-101-3p mimics的Ishikawa/DDP细胞中EZH2以及Bcl-2蛋白表达情况。结果miR-101-3p在Ishikawa细胞株中相对高表达,miR-101-3p抑制剂转染Ishikawa细胞后,其对顺铂的IC50值明显升高,对顺铂的敏感性显著降低,流式细胞检测术发现细胞凋亡率明显降低,western-blot检测发现EZH2表达升高、Bcl-2表达明显降低。miR-101-3p在Ishikawa/DDP细胞株中明显低表达,miR-101-3p mimics转染Ishikawa/DDP细胞株后,MTS检测发现其对顺铂的IC50值明显降低,对顺铂的敏感性显著升高,流式细胞检测技术发现细胞凋亡率显著增加,western-blot检测发现EZH2表达降低、Bcl-2表达明显升高。结论miR-101-3p可通过靶向调控EZH2,逆转子宫内膜癌细胞株Ishikawa对顺铂的耐药。

长链非编码RNA XIST和miR-101-3p在子宫颈癌组织中的表达及关系

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)XIST和miR-101-3p在子宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:收集58例子宫颈癌和配对的癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测组织中LncRNA XIST和miR-101-3p的表达,分析其与子宫颈癌临床病理因素的相关性,并评价其临床意义。结果:与癌旁组织比较,qPCR显示宫颈癌组织中LncRNA XIST的表达明显上调(P<0.05),miR-101-3p的表达明显下调(P<0.05);且二者在表达水平上呈负相关(r=-0.68,P=0.000)。Lnc RNA XIST和mi R-101-3p的表达均与宫颈癌淋巴结转移、组织大小及临床分期之间存在相关性(P均<0.05)。结论:LncRNA XIST与mi R-101-3p的表达呈负相关,可能成为早期筛选宫颈癌的生物标志物和治疗靶点。

过表达miR-101-3p可下调TOP2A基因表达抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移

目的发现并确认膀胱癌致癌基因TOP2A的上游miRNA,并探讨其在膀胱癌中发挥的具体作用及可能机制。方法starBase数据库用于预测膀胱癌中潜在和TOP2A结合的miRNAs,并运用TCGA数据库挖掘对所有预测的miRNAs与靶基因的相关性和生存分析进行排序;根据预测的结合位点情况构建双荧光素酶报告基因实验和干扰实验,以确认候选基因miR-101-3p和TOP2A基因的结合情况;qRT-PCR用于分析两基因在临床组织水平表达相关性;运用细胞转染技术在膀胱癌细胞中分别转染miR-101-3p mimics和inhibitor及各自的阴性对照,随后采用CCK8,细胞划痕愈合实验和Transwell实验测定细胞的增殖及迁移能力变化情况;细胞共转染技术和细胞功能回复实验以明确miR-101-3p/TOP2A信号轴在肿瘤细胞恶性表型中的调控作用。结果starBase数据库预测获得147个miRNAs;TCGA数据库分析显示,miR-101-3p和TOP2A基因相关系数最高,且与膀胱癌患者不良预后密相关,作为后续实验候选基因;双荧光素酶报告基因实验和干扰实验证实两者在膀胱癌中的结合能力,miR-101-3p可以下调TOP2A基因的表达;临床组织标本中,miR-101-3p和TOP2A基因的表达具有负相关性;此外,体外实验显示,miR-101-3p可以抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移能力;过表达TOP2A基因,可以恢复膀胱癌细胞的增殖和迁移能力。结论过表达miR-101-3p可以下调TOP2A基因表达抑制膀胱癌细胞增殖和迁移。

miR-101-3p在胃癌中的表达及其靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路对癌细胞侵袭转移和血管生成的影响

目的探究miR-101-3p在胃癌中的表达及其靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路对癌细胞侵袭转移、血管生成的作用机制。方法qRT-PCR检测胃癌组织及BGC-823细胞中miR-101-3p和STC-1 mRNA的表达,并分析miR-101-3p表达与患者临床病理因素的关系;通过LipofectamineTM 2000将miRNA模拟物和质粒分别或者联合转染细胞;TargetScanHuman预测及双荧光素酶报告验证miR-101-3p对STC-1的靶向调控关系;划痕实验、Transwell小室实验、Matrigel体外成管实验及Westernblot检测验证miR-101-3p靶向STC-1基因对癌细胞的侵袭转移和血管生成的影响及可能的机制,并通过裸鼠致瘤实验检测移植瘤的发展。结果胃癌组织中STC-1的表达水平高于正常组织。与正常胃组织和GES-1细胞相比,胃癌组织和BGC-823细胞中miR-101-3p下调,STC-1 mRNA上调,且miR-101-3p水平与STC-1水平负相关,miR-101-3p水平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移显著相关(P<0.05);过表达miR-101-3p可抑制STC-1的表达,下调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、MMP-2、MMP-9、VEGF、Ang2水平,抑制肿瘤细胞的侵袭转移和血管生成,降低移植瘤体积和重量(P<0.05)。结论miR-101-3p在胃癌中表达下调,能够靶向STC-1基因调控PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞BGC-823的侵袭转移和血管生成及体内移植瘤的进展。

lncRNA MALAT1/miR-101-3p/SMAD2分子轴调控胶质瘤细胞上皮间质转化的机制研究

目的:探讨lncRNA MALAT1(MALAT1)/miR-101-3p/SMAD2分子轴调控胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法:采用qRT-PCR检测胶质瘤组织和细胞中MALAT1和miR-101-3p的表达水平;CCK-8和Transwell检测U251细胞增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测EMT相关蛋白和SMAD2表达;双荧光素酶报告基因检测MALAT1、miR-101-3p和SMAD2的靶向关系。结果:MALAT1在胶质瘤组织和细胞中高表达;敲低MALAT1可以抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭和EMT;进一步实验证明,MALAT1与SMAD2均可结合miR-101-3p的作用位点,MALAT1下调miR-101-3p对SMAD2的抑制作用;过表达MALAT1或SMAD2均能回复过表达miR-101-3p对U215细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用。结论:MALAT1在胶质瘤组织和细胞系中高表达,其通过靶向下调miR-101-3p、上调SMAD2的表达水平,进而促进U251细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。