miR-548c-3p通过调控TRIM59表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究miR-548c-3p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测TRIM59 mRNA和miR-548c-3p的表达,Western blot检测TRIM59、增殖相关蛋白CyclinD1和p21,及迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达水平,MTT法测定HepG2细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-548c-3p与TRIM59的调控关系。结果与正常肝细胞L02相比,在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402组中TRIM59的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-548c-3p的表达量则均显著降低(P<0.05);过表达miR-548c-3p和抑制TRIM59表达均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-548c-3p靶向负调控TRIM59的表达;过表达TRIM59逆转了过表达miR-548c-3p对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-548c-3p通过靶向TRIM59基因抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-548c-3p是肝癌的潜在治疗靶点。

MiR-199b-3p、miR-373、miR-548c-3p及Lin28在肺癌中表达及其意义

探讨miR-199b-3p、miR-373、miR-548c-3p与Lin28在肺癌中的表达,以及它们与临床指标的相关关系.用溶液法提取46例肺癌患者的癌组织和癌旁组织中的总RNA,Q-PCR检测基因的相对表达量.经过两独立样本t检验,比较miR-373(t=3.28,P=0.0007)、lin28(t=3.94,P=0.0016)及miR-548c-3p(t=2.98,P=0.002)在肺癌组织和癌旁组织中的表达,基因表达均有显著性差异.使用Spearman肺癌组织中RNA与免疫组织化学指标发现MiR-b199b-3p与MRP(Rs=0.40,P=0.029),miR-548c-3p和Ki167呈正相关关系(Rs=0.52,P=0.0056),miR-373与K167呈正相关关系(Rs=0.43,P=0.029),Lin28与P53呈负相关关系(Rs=-0.43,P=0.022),还与PGP呈负相关关系(Rs=-0.38,P=0.034).miR-373在肺癌患者组织中基因表达显著下调,而miR-548c-3p与Lin28基因表达呈上调,3个基因的表达与肿瘤的发生发展关系密切.

肝细胞癌组织中miR-548c-3p、TRIM59的表达变化及其意义

目的分析肝细胞癌(HCC)组织中微小RNA 548c-3p(miR-548c-3p)、三基序蛋白59(TRIM59)mRNA的表达及意义。方法运用实时荧光定量PCR检测114例HCC组织及癌旁组织中的miR-548c-3p、TRIM59 mRNA;分析miR-548c-3p、TRIM59 mRNA表达与患者临床病理特征的关系;随访5年,采用Kaplan-Meier法分析不同miR-548c-3p、TRIM59 mRNA表达患者的生存差异。结果HCC组织中miR-548c-3p的相对表达量低于癌旁组织,而TRIM59 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05)。HCC组织中miR-548c-3p、TRIM59 mRNA表达与TNM分期、淋巴结转移和分化程度有关(P均<0.05)。HCC组织中miR-548c-3p与TRIM59 mRNA表达呈负相关(r=-0.735,P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,miR-548c-3p低表达者5年总体生存率(OS)低于miR-548c-3p高表达者;TRIM59 mRNA高表达者OS低于TRIM59低表达者(P均<0.05)。结论HCC组织中miR-548c-3p表达降低,TRIM59 mRNA表达升高,两者与TNM分期、淋巴结转移、分化程度及预后有关,有可能成为新的HCC诊治及预后的分子标志物。

circ_0005230通过靶向miR-548c-3p影响胆管癌细胞增殖和凋亡的机制

目的:探讨环状RNA(circRNA)circ_0005230对miR-548c-3p的靶向调控和对胆管癌细胞增殖和凋亡的作用与机制。方法:实时定量PCR(qPCR)检测胆管癌组织中circ_0005230和miR-548c-3p表达。将人胆管癌细胞RBE分为si-NC组、si-circ_0005230组、pcDNA-NC组、pcDNA-circ_0005230组、miR-NC组、miR-548c-3p组、si-circ_0005230+anti-miR-NC组、si-circ_0005230+anti-miR-548c-3p组,分别通过Lipofectamine 2000转染si-NC、si-circ_0005230、pcDNA-NC、pcDNA-circ_0005230、miR-NC、miR-548c-3p mimic、si-circ_0005230和anti-miR-NC、si-circ_0005230和miR-548c-3p inhibitor。以CCK-8法、克隆形成实验、免疫印迹实验(Western blot)和流式细胞术分别进行细胞的增殖、克隆形成、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达及细胞凋亡测定。双荧光素酶报告实验分析circ_0005230与miR-548c-3p靶向关系。结果:30例胆管癌组织中circ_0005230表达量高于癌旁组织,miR-548c-3p表达量低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。si-circ_0005230组或miR-548c-3p组RBE细胞的活性、克隆形成数、增殖蛋白CyclinD1和p21表达量减少,凋亡蛋白Caspase-3、Bax表达量和凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。circ_0005230靶向调控miR-548c-3p的表达。pcDNA-circ_0005230组比pcDNA-NC组降低miR-548c-3p表达量,si-circ_0005230组较si-NC组提高miR-548c-3p表达量,差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-circ_0005230+anti-miR-NC组比较,si-circ_0005230+anti-miR-548c-3p组RBE细胞的活性、克隆形成数、增殖蛋白CyclinD1和p21表达量升高,凋亡蛋白Caspase-3、Bax表达量和凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:circ_0005230在胆管癌组织中高表达,抑制circ_0005230表达通过靶向miR-548c-3p减弱胆管癌细胞的增殖和诱导其凋亡。

hsa_circ_0000069通过靶向miR-548c-3p调控胃癌细胞增殖、细胞周期和凋亡

目的 研究hsa_circ_0000069靶向miR-548c-3p在胃癌进展中的功能。方法 RT-qPCR检测胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞(SNU-1、AGS、HS-746T)、人正常胃黏膜上皮细胞GES1中hsa_circ_0000069、miR-548c-3p表达情况。将SNU-1细胞分为对照(NC)组、si-NC组、si-hsa_circ_0000069组、miR-NC组、miR-548c-3p组、pcDNA组、pcDNA-hsa_circ_0000069组、si-hsa_circ_0000069+anti-miR-NC组、si-hsa_circ_0000069+anti-miR-548c-3p组。流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布;CCK-8法分析细胞活力。hsa_circ_0000069和miR-548c-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验来验证。结果 胃癌组织中hsa_circ_0000069表达水平显著高于癌旁组织,miR-548c-3p表达水平显著低于癌旁组织(均P<0.05)。SNU-1、AGS、HS-746T细胞中hsa_circ_0000069表达水平显著高于GES1细胞,miR-548c-3p表达水平显著低于GES1细胞(均P<0.05)。与NC组比较,si-hsa_circ_0000069组SNU-1细胞miR-548c-3p表达水平、凋亡率、G0/G1期比例显著升高,细胞活力、S期比例显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-548c-3p组SNU-1细胞凋亡率、G0/G1期比例显著升高,细胞活力、S期比例显著降低(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-hsa_circ_0000069组SNU-1细胞miR-548c-3p表达水平显著降低(均P<0.05)。与si-hsa_circ_0000069+anti-miR-NC组比较,si-hsa_circ_0000069+anti-miR-548c-3p组SNU-1细胞凋亡率、G0/G1期比例显著降低,细胞活力、S期比例显著升高(均P<0.05)。结论 干扰hsa_circ_0000069通过靶向miR-548c-3p诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖和周期进展。

MicroRNA-34c在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的：探讨miRNA-34c在人脑胶质瘤组织中的表达情况及临床意义。方法应用定量PCR方法对18例WHO分级Ⅱ～Ⅳ级的甲醛固定石蜡包埋的脑胶质瘤标本和外伤或脑出血患者内减压手术获得的5例脑组织标本分别进行miR-34c-3p和miR-34c-5p含量的检测，比较不同级别胶质瘤和正常脑组织中miR-34c-3p和miR-34c-5p的表达差异，分析miR-34c-3p和miR-34c-5p的表达和胶质瘤恶性程度的相关性。结果与正常脑组织相比，胶质瘤中miR-34c-3p和miR-34c-5p的表达皆显著减少（ P ＜0＊．05），而且miR-34c-3p和miR-34c-5p的表达随着胶质瘤级别或恶性程度的增加分别减少，呈显著的负相关（ miR-34c-3p的spearman相关系数＝－0．856， P ＜0．01；miR-34c-5p的spearman相关系数＝－0．767， P ＜0．01）。结论 MiR-34c在人脑胶质瘤细胞中的表达显著降低，而且表达随着肿瘤分级或恶性程度的增高而减少，与胶质瘤级别的升高呈显著的负相关。 MiR-34c在胶质瘤的进展中有重要的意义，可作为脑胶质瘤临床分级的重要指标。

circ_0101145通过miR-548c-3p/PD-L1轴促进胃癌细胞的免疫逃逸

目的:探究circ_0101145通过miR-548c-3p/程序性死亡受体配体1(PD-L1)轴对胃癌(GC)细胞免疫逃逸的影响。方法:RT-qPCR、Western blot检测GC组织和细胞系中circ_0101145、miR-548c-3p、PD-L1 mRNA和蛋白水平,并分析circ_0101145水平与患者临床病理参数的关系;双荧光素酶实验验证circ_0101145对miR-548c-3p以及miR-548c-3p对PD-L1的调控关系;采用脂质体转染法构建BGC-823转染细胞株,分为circ-NC组、circ_0101145组、si-circ-NC组、si-circ_0101145组、circ_0101145+NC组、circ_0101145+miR-548c-3p组、miR-548c-3p+NC组、miR-548c-3p+PD-L1组。从人外周血中分离CD8+T细胞,将其与BGC-823细胞共培养;流式细胞术检测CD8+T细胞凋亡率;ELISA检测共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、侵袭能力。裸鼠皮下注射敲低circ_0101145的BGC-823细胞悬液,30 d后检测移植瘤生长情况。结果:与癌旁组织或正常细胞相比,GC组织和细胞系中miR-548c-3p水平降低,circ_0101145、PD-L1 mRNA和蛋白水平升高,且circ_0101145水平越高,患者TNM分期越高,肿瘤分化程度越低,微血管越容易浸润,淋巴结越容易转移(P<0.05)。circ_0101145靶向调控miR-548c-3p,miR-548c-3p靶向调控PD-L1。在共培养体系中,过表达circ_0101145能够提高CD8+T细胞凋亡率,降低共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平,提高细胞培养1 d、2 d、3 d后的A值、EdU阳性率和细胞侵袭数(P<0.05);敲低circ_0101145能够降低CD8+T细胞凋亡率,提高共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平,降低细胞培养1 d、2 d、3 d后的A值、EdU阳性率和细胞侵袭数(P<0.05);过表达miR-548c-3p能部分逆转过表达circ_0101145对上述指标的影响(P<0.05);过表达PD-1能部分逆转过表达miR-548c-3p对上述指标的影响(P<0.05)。敲低circ_0101145能够抑制小鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论:circ_0101145通过miR-548c-3p/PD-1轴促进GC细胞的免疫逃逸。

HIF1A-AS2靶向miR-548c-3p对肝癌HepG2生长、运动的调节作用

目的 研究敲除HIF1A-AS2靶向miR-548c-3p对肝癌HepG2生长、运动的调节作用.方法 RT-PCR与荧光素酶实验验证HIF1A-AS2与miR-548c-3p的靶向关系;sh-HIF1A-AS2和miR-548c inhibitor转染HepG2细胞, EDU染色检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;构建HepG2裸鼠移植瘤模型, 检测肿瘤重量, 通过western印迹和免疫组化检测分析组织和细胞中VEGF、 Vimentin、 N-cadherin、 E-cadherin及Ki67、PCNA的表达.结果 sh-HIF1A-AS2能够靶向促进miR-548c-3p的表达 ( P<0.05);sh-HIF1A-AS2能显著抑制HepG2细胞增殖、侵袭 (P<0.05), 抑制肿瘤生长 (P<0.05), 下调细胞和组织中VEGF、 Vimentin、N-cadherin、 Ki67及PCNA表达量, 增加E-cadherin的蛋白水平 ( P<0.05), miR-548c inhibitor能减弱sh-HIF1A-AS2对HepG2细胞增殖、侵袭 (P<0.05).结论 敲除HIF1A-AS2可以靶向上调miR-548c-3p的表达, 抑制HepG2细胞的增殖和侵袭.