miR-let-7d通过调控核受体PPARγ促进肺癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨miR-let-7d对肺癌细胞核受体过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的调控及对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:用生物信息学分析与PPARγ相关的microRNA,通过质粒报告基因验证miR-let-7d的作用靶点;利用Western blot法筛选出PPARγ表达水平低的肺癌细胞株;通过双萤光素酶标记和Western blot法验证miR-let-7d对肺癌细胞中PPARγ表达的调控作用;通过集落形成实验检测miR-let-7d对肺癌细胞增殖能力的调控作用;通过Transwell侵袭实验检测miR-let-7d对肺癌细胞侵袭能力的作用。结果:生物信息学的分析结果证明miR-let-7d可以调控核受体PPARγ的蛋白表达;在核受体PPARγ的3’UTR包含2个功能性的miR-let-7d结合位点;PPARγ是miR-let-7d的直接靶点,miR-let-7d可在蛋白和mRNA水平直接调控PPARγ的表达;miR-let-7d inhibitor通过升高PPARγ的表达促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力。结论:miR-let-7d能够通过靶向增加具有抑癌作用的核受体PPARγ的表达水平,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力。

Pre-let-7d转染卵巢癌细胞转染率的研究

目的研究Pre-let-7 d质粒在不同时间,以不同浓度转染人卵巢癌细胞的转染率。方法将构建的Pre-let-7 d质粒HmiR和连接随机序列的质粒CmiR转染人卵巢癌SKOV3、HO8910细胞,用荧光显微镜与流式细胞仪计数两种方法计算转染率。结果转染HmiR、CmiR后,荧光显微镜观察和流式细胞术计数结果显示SKOV3、HO8910细胞的转染率,以3μg质粒/孔转染SKOV3、HO8910人卵巢癌细胞比2μg、4μg质粒/孔的转染率高,24 h、48 h、72 h三个不同时间点用相同质量的质粒转染,转染率无显著差异。结论转染HmiR、CmiR后,荧光显微镜观察和流式细胞术计数结果显示以3μg质粒/孔转染SK-OV3 HO8910人卵巢癌细胞的转染率均在60%左右,符合实验要求。

高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p、HMGA1表达的相关性及临床意义

目的高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌中微小RNA(miR)-let-7d-5p、高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达的相关性及临床意义。方法选择2020年4月至2021年4月期间在山西省肿瘤医院接受根治性手术的104例宫颈癌患者作为研究对象,检测宫颈癌组织中高危型HPV(HPV16和HPV18)的感染情况,宫颈癌组织及癌旁组织中miR-let-7d-5p、HMGA1的表达水平,随访宫颈癌患者的无进展生存率和总生存率。结果宫颈癌组织中miR-let-7d-5p的表达水平低于癌旁组织,HMGA1的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=11.627/10.278,P<0.05)。高危型HPV阳性的宫颈癌组织中miR-let-7d-5p的表达水平低于高危型HPV阴性的宫颈癌组织,HMGA1的表达水平高于高危型HPV阴性的宫颈癌组织,差异有统计学意义(t=2.543、3.189,P<0.05)。高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p的表达水平与HMGA1的mRNA相对表达水平呈负相关(P<0.05)。FIGO分期ⅡA期高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p的表达水平低于FIGO分期Ⅰ期高危型HPV阳性宫颈癌,HMGA1的mRNA相对表达水平高于FIGO分期Ⅰ期高危型HPV阳性宫颈癌,差异有统计学意义(P<0.05)。高危型HPV阳性宫颈癌中miR-let-7d-5p表达≥中位数的患者累积无进展生存率高于miR-let-7d-5p表达<中位数的患者,高危型HPV阳性宫颈癌中HMGA1表达≥中位数的患者累积无进展生存率低于HMGA1表达<中位数的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高危型HPV感染的宫颈癌中miR-let-7d-5p表达降低、HMGA1表达增加,上述表达变化与FIGO分期进展、无进展生存率降低有关。

Let-7d*在增生性血管疾病中的表达及其作用机制

目的探究Let-7d*在增生性血管疾病中的表达及其相关作用机制。方法分别构建球囊损伤模型与平滑肌细胞增殖模型,研究Let-7d*在这两种模型中的表达趋势,并调控Let-7d*的表达,研究其相关生物学功能。结果在球囊损伤诱导新生内膜生长的模型中,Let-7d*的表达水平较在正常颈动脉中明显降低,同时在增殖的血管平滑肌细胞中的表达也明显下调。在体内动物模型中Let-7d*对球囊损伤大鼠颈动脉血管内膜的增殖具有抑制作用,在体外细胞模型中Let-7d*是血管平滑肌细胞生长的一个强有力的负性调控因子。结论Let-7d*在增殖的血管平滑肌细胞和内膜增生的血管壁中的表达下调,且Let-7d*对血管平滑肌细胞生长及大鼠颈动脉新生内膜增生均有明显的抑制作用。

非小细胞肺癌患者血清细胞外囊泡测let-7d-3p水平检的临床价值

目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)患者血清细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)中let-7d-3p水平的变化,评估其作为NSCLC患者辅助筛查液体活检分子标志物的临床应用价值。方法 选取2020年9月至2021年5月于东部战区总医院确诊的NSCLC患者102例及同期年龄、性别匹配的体检健康者70例,收集患者组及健康人对照组血清标本并分离EVs,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测各组血清EVs中let-7d-3p表达水平变化,ROC曲线分析血清EVs let-7d-3p测定对于NSCLC患者的辅助筛查价值。结果 与健康人对照组相比,NSCLC患者血清EVs中let-7d-3p水平显著降低[69.75(25.64,154.70)fmol/L vs 26.09(13.74,45.56)fmol/L],差异有统计学意义(U=1 830,P<0.001);同时,NSCLCⅠ期患者[26.07(11.15,45.30)fmol/L]血清EVs let-7d-3p水平亦显著降低(U=1 201,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清EVs let-7d-3p水平用于筛查NSCLC患者及Ⅰ期患者的ROC曲线下面积(the area under the ROC curve, AUC^(ROC))分别为0.744(95%CI:0.667~0.821)和0.736(95%CI:0.653~0.819);当cut-off值为45.07 fmol/L时,血清EVs let-7d-3p筛查NSCLC及NSCLCⅠ期患者的敏感性和特异性分别为74.5%和60%,75.4%和60%。此外,NSCLC患者血清EVs let-7d-3p水平不受年龄、性别、吸烟史及病理类型的影响,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 NSCLC患者尤其是早期患者血清EVs中let-7d-3p水平与健康人对照相比显著降低,具备作为NSCLC辅助筛查液体活检分子标志物的潜能。

12种microRNA在卵巢癌中的表达及临床意义

目的利用公共数据库分析卵巢癌组织中12种micro RNA(mi R)的表达及其临床意义。方法筛选在GSE14407数据集和TCGA数据库中均具有表达信息的micro RNA,得到mi R-10B、mi R-1244、mi R-622、mi R-21、mi R-503、Let-7D、mi R-155、mi R-30C、mi R-17、mi R-101-1、mi R-186以及mi R-770共12种micro RNA,在这12种micro RNA中寻找在卵巢癌(卵巢癌组)和癌旁组织(癌旁组)中表达有差异的基因。利用在TCGA数据库中筛选得到的505例卵巢癌患者数据,年龄按照中位数分为高年龄(≥59岁)组和低年龄(<59岁)组;临床分期分为早期组(Ⅰ期+Ⅱ期)、晚期组(Ⅲ期+Ⅳ期)及未知;肿瘤分级分为低级别(G1+G2)组和高级别(G3+G4)组;病发位置分为单侧组、双侧组;肿瘤残余分为<10 mm组、≥10 mm组;micro RNA按照表达量的中位数分为高表达组和低表达组,进行Kaplan-Meier单因素生存分析和多因素Cox回归分析。结果癌旁组Let-7D和mi R-101-1表达水平高于卵巢癌组,而mi R-155和mi R-770表达水平低于卵巢癌组(均P<0.05)。生存分析显示,年龄≥59岁、临床分期(Ⅲ+Ⅳ)期和Let-7D低表达的患者生存情况较差(P<0.05)。Let-7D低表达是卵巢癌患者生存的独立危险因素。结论 Let-7D的表达与卵巢癌预后相关,可能是卵巢癌预后的独立影响指标。

索拉菲尼对骨肉瘤细胞的抑制作用及分子机制研究

目的研究索拉菲尼对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及其分子机制。方法将人骨肉瘤细胞(HOS细胞)分为对照组及索拉菲尼组,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法观察索拉菲尼对HOS细胞活力的影响,用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白变化,用Real-time PCR检测let-7d变化情况。结果索拉菲尼可抑制HOS细胞活力,并呈剂量和浓度依赖性;同时,索拉菲尼可以抑制Lin28表达,同时促进let-7d表达;过表达Lin28可以逆转索拉菲尼的促凋亡作用。结论索拉菲尼通过调控Lin28/le-7d环路来促进骨肉瘤细胞凋亡。