Relationship between microRNA‑29c expression and clinicopathological features of gastric cancer

Objective:To explore the relationship between the expression of miR-29c and clinicopathological characteristics of gastric cancer and predict the biological functions of target genes of miR-29c.Methods:The expression and clinical data of microRNA of gastric cancer were downloaded from The Cancer Genome Atlas(TCGA)to analyze the expression of miR-29c in gastric cancer tissues and normal gastric mucosal tissues.Paraffin specimens of gastric cancer and normal tissues were collected to make tissue microarray.The expression of miR-29c in gastric cancer tissues and normal tissues were detected by miRNAscope technique.The relationship between the expression of miR-29c and clinicopathological characteristics of gastric cancer was analyzed by chi-square test.Target genes of miR-29c were predicted by TargetScan,Pictar,miRTarbase and Starbase databases,and enrichment analysis were performed on potential target genens.Results:TCGA analysis showed that the expression of miR-29c was significantly lower in gastric cancer tissue(n=434)than normal tissues(n=41,P<0.001).miRNAscope analysis showed that the expression of miR-29c was significantly lower in gastric cancer tissue than normal tissues(P<0.001),and was significantly associated with TNM staging,lymph node metastasis and histological type of gastric cancer patients(P<0.05).Database predicted 18 potential target genes that were enriched in DNA methyltransferase activity and cancer-associated miRNA signal pathways.Conclusion:miR-29c was expressed at a low level in gastric cancer tissue and associated with TNM staging,lymph node metastasis and histological type,and could become a potential prognosis marker of gastric cancer and a new target of molecular treatment.

感音神经性耳聋患者外周血miR-34c、miR-29b的表达及意义

目的探讨感音神经性耳聋(SNHL)患者外周血miR-34c、miR-29b的表达情况及临床意义。方法筛选2020年6月至2023年6月我院收治的神经性耳聋患者140例为观察组,同期选取体检健康者40例为对照组。根据听力损伤情况将SNHL患者分为轻度耳聋组63例,中度耳聋组42例,重度耳聋组35例。采用qRT-PCR检测miR-34c、miR-29b的表达,并检测VEGF、氧化应激水平(TAC、SOD、MDA)、NO和Cx26;采用Pearson检验进行相关性分析,采用logistic回归分析SNHL病情严重程度的独立危险因素,采用ROC曲线评估miR-34c、miR-29b对SNHL患者病情严重程度的预测价值。结果4组NO、TAC、SOD、Cx26水平比较,重度耳聋组<中度耳聋组<轻度耳聋组<对照组(P<0.05);VEGF和MDA水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。4组miR-34c mRNA和miR-29b mRNA表达水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,SNHL患者外周血miR-34c、miR-29b与VEGF、MDA呈正相关,与NO、TAC、SOD、Cx26呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,VEGF、MDA、NO、Cx26、TAC、SOD、miR-34c、miR-29b是影响SNHL病情严重程度的独立因素。结论miR-34c、miR-29b在SNHL患者中过表达,可作为预测评估SNHL患者病情严重程度的血清标志物。

尿外泌体miR-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌临床结局的预测价值

目的 探讨尿外泌体微小RNA(miR)-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌(BUC)临床结局的预测价值。方法 2017年1月~2022年3月,从我院泌尿外科选取152例BUC病人作为验证集。另外,从我院体检中心选择了126例非癌对照。采用实时荧光定量PCR法检测尿外泌体miR-29c表达水平。结果 验证集BUC病人尿外泌体miR-29c水平低于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而尿外泌体miR-17-5p水平和miR-590-5p水平比较无明显差异(P>0.05)。尿外泌体miR-29c水平诊断BUC的ROC曲线下面积为0.969(95%CI:0.953~0.986),相应的敏感性和特异性分别为92.1%和90.2%。亚型分析中,非器官局限性BUC病人尿外泌体miR-29c水平较器官局限性BUC病人进一步降低(P=0.009)。预后分析中,尿外泌体miR-29c高表达组病人总生存期、无病生存期和疾病特异性生存期均更长(P<0.05)。结论 尿外泌体miR-29c低水平是BUC病人不利的预后因子,有希望作为器官和非器官局限性BUC不良临床结局的预测标志物。

多发性骨髓瘤组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系。方法 选取75例MM患者作为病例组,另选取同期就诊的75例骨髓象检查为正常的非血液系统疾病患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测骨髓组织中miR-29c、miR-195表达水平,根据检测平均值将miR-29c、miR-195分为高水平组和低水平组,分析miR-29c、miR-195表达水平与临床病理特征及预后的相关性。结果 病例组骨髓组织miR-29c、miR-195表达水平低于对照组(P<0.05)。miR-29c低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-195低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-29c低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05),miR-195低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05)。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈负相关(P<0.05),与血清白蛋白、生存期呈正相关(P<0.05)。结论miR-29c、miR-195均在MM患者骨髓组织中低表达,且低表达miR-29c、miR-195患者的生存期较短。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈正相关,与血清白蛋白、生存期呈负相关。

基于miRNA-29c/白血病抑制因子轴探讨针刺调节脾虚大鼠肠道炎症机制研究

目的观察针刺调节miRNA-29c/白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)轴改善脾虚大鼠结肠炎症机制,探讨“健脾益气”针刺疗法改善脾虚便溏症状现代作用机理。方法将60只SD雄性大鼠以随机数字表法分为正常组、模型组、非经非穴组、针刺组,每组15只。除正常组外,其余3组采用劳倦过度和不规律饮食复合方法建立脾虚证大鼠模型。造模成功后,针刺组电针“足三里”穴及“脾俞”穴干预治疗,非经非穴组给予电针尾尖作为对照干预,每日1次/20 min,共治疗14 d。治疗结束后,取大鼠结肠组织及全血。qPCR检测大鼠结肠组织miRNA-29/LIF轴相关基因的表达;Western blot检测大鼠白介素-6(interleukin6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)的表达;ELISA检测结肠组织中白介素-1β(interleukin1β,IL-1β)、白介素-18(interleukin18,IL-18)的含量;HE染色法观察大鼠结肠组织病理形态变化;TUNEL染色观察各组结肠组织凋亡情况;流式细胞术观察外周血单个核细胞(PBMC)凋亡状况。结果与正常组相比,模型组大鼠结肠组织LIF的表达水平明显下降(P<0.05),miRNA-29、IL-1β、IL-6、白介素-8(interleukin18,IL-8)、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所升高(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织LIF表达水平明显升高(P<0.05),miRNA-29c、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所降低(P<0.05),非经非穴组差异无统计学意义(P>0.05);与正常组相比,模型组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18表达水平明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18的表达水平有所降低(P<0.05)。另外HE染色结果显示,针刺治疗可有效减轻结肠黏膜组织中炎症细胞浸润和杯状细胞的损失;TUNEL染色结果显示,针刺可以抑制miRNA-29c/LIF轴,改善脾虚大鼠结肠炎症,抑制结肠黏膜细胞凋亡;流式细胞术结果显示与正常组相比,模型组、非经非穴组大鼠PBMC凋亡率明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠PBMC细胞凋亡率有所降低(P<0.05)。结论电针“足三里”“脾俞”穴可以调节miRNA-29c/LIF轴,抑制肠道炎症和促炎症介质的表达,进而抑制血液、结肠黏膜细胞凋亡,提高机体免疫力,从而改善脾虚便溏症状。

MicroRNA-29c表达与胃癌临床病理特征的关系研究

目的:探讨miR-29c的表达与胃癌临床病理特征之间的关系,预测miR-29c靶基因生物学功能。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃癌微小RNA表达及临床数据,分析miR-29c在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达情况。收集胃癌及正常组织石蜡标本,制作成组织芯片,使用miRNAscope技术检测miR-29c在胃癌及正常组织中的表达情况,通过卡方检验分析miR-29c表达与胃癌临床病理特征的关系。TargetScan、Pictar、miRTarbase和Starbase数据库预测miR-29c的靶基因,并对潜在靶基因进行富集分析。结果:TCGA数据分析显示,与正常组织相比(n=41),miR-29c在胃癌组织(n=434)中表达显著下调(P<0.001)。miRNAscope检测结果显示,与正常组织相比,miR-29c在胃癌组织中表达下调(P<0.001),其表达水平与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、组织学分型显著相关(P<0.05)。数据库预测得到18个潜在靶基因,主要富集在DNA甲基化转移酶活性等生物学功能,以及癌症相关miRNAs等信号通路。结论:miR-29c在胃癌组织中低表达,与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、组织学分型相关,有望成为判断胃癌预后的潜在标记物及分子治疗的新靶点。

MiR-29a/b/c对葡萄膜黑色素瘤细胞功能的影响及机制

目的:探索miR-29a/b/c对葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞功能的影响及其作用机制。方法:使用脂质体转染技术将hsa-miR-29a/b/c或基质金属蛋白酶2(MMP2)特异性siRNA转染进UM细胞。使用MTS实验和Matrigel Transwell实验分别检测UM细胞增殖和侵袭能力的变化。使用半定量PCR实验检测UM细胞中MMP2m RNA水平表达量的变化。使用ELISA实验检测UM细胞上清中MMP2蛋白分泌量的变化。结果:转染miR-29a/b/c抑制了UM细胞的增殖(P<0.05)和侵袭能力(P<0.05)。MiR-29a/b/c不影响MMP2 mRNA转录,但均能抑制UM细胞分泌MMP2(P<0.05)。在UM细胞中干扰MMP2抑制UM细胞的侵袭能力(P<0.05)。结论:Mi R-29a/b/c抑制UM细胞的增殖和侵袭。MiR-29a/b/c减少其下游靶蛋白MMP2的分泌,在UM细胞中干扰MMP2抑制细胞侵袭。

MicroRNA-29与纤维化疾病

小分子RNA(microRNA,miRNA,miR)是一类由21～23个核苷酸构成的功能性非编码小分子RNA。microRNA-29(miR-29)是新近发现的一类与纤维化疾病密切相关的小分子RNA家族,研究发现miR-29可通过直接抑制多种细胞外基质蛋白表达和调控多种与纤维化相关的信号通路参与纤维化过程,并且循环中miR-29的水平还可反映肝病患者肝硬化的严重程度。

MicroRNA-29抑制胰岛素刺激的大鼠L6细胞葡萄糖吸收

目的研究microRNA-29(miR-29)在糖尿病模型大鼠(GK)骨骼肌组织中的表达,并探讨其对大鼠骨骼肌细胞L6葡萄糖吸收的影响。方法利用real-time PCR方法检测miR-29家族,miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中的表达特征。L6骨骼肌细胞诱导分化为肌管细胞,经葡萄糖与胰岛素处理后,利用real-time PCR与Northern blot分析miR-29家族的表达情况。选择腺病毒表达系统在L6分化的肌管细胞中过表达或抑制内源miR-29的功能,利用葡萄糖吸收实验检测胰岛素刺激的葡萄糖吸收情况。结果 miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中表达上调。L6分化的肌管细胞经葡萄糖与胰岛素处理,miR-29b和miR-29c的表达上调,而miR-29a表达无明显变化。在L6分化的肌管细胞中过表达miR-29可以明显抑制胰岛素刺激的葡萄糖吸收。结论miR-29参与了GK大鼠骨骼肌细胞葡萄糖耐受及胰岛素抵抗的产生,抑制其表达可能是治疗Ⅱ型糖尿病的一种新策略。

MicroRNA-29在乙型肝炎病毒感染患者外周血中的表达

目的:研究microRNA-29在慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者外周血中的表达。方法:30例慢性乙型肝炎患者为慢性乙肝组、30例乙肝肝硬化失代偿期患者为肝硬化组,20例健康人群为对照组,利用荧光定量聚合酶链式反应法((FQ-PCR))测定3组人群外周血microRNA-29的表达情况。结果:microRNA-29在肝硬化组、慢性乙肝组及对照组含量分别为6.42±1.84、47.31±19.38,及77.56±32.36 ng/L,肝硬化组低于慢性乙肝组,差异有统计学意义(P<0.05),慢性乙肝组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),肝硬化组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:慢性乙型肝炎向肝硬化发展过程中,患者外周血microRNA-29含量明显下降。

血浆miR-30a、miR-29c联合FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎肝纤维化及早期肝硬化的预测价值

目的探讨血浆miR-30a、miR-29c联合FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎患者不同程度肝纤维化及早期肝硬化的预测价值。方法收集2019年12月1日至2021年12月31日河北省人民医院收治的慢性乙型肝炎患者,根据瞬时弹性成像(transient elastorgraphy,TE)结果选取轻中度(F_(0)~F_(2))、重度肝纤维化(F_(3))及早期肝硬化(F_(4))各40例,健康志愿者40名作为对照组。收集一般临床资料,检测血浆miR-30a、miR-29c在各组中的表达量,计算FIB-4、APRI评分。经Logistic多因素回归分析建立联合模型。用ROC曲线分析其对早期肝硬化的预测价值。结果血浆miR-30a、miR-29c表达和FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎患者不同程度肝纤维化及早期肝硬化有一定的预测价值。将四者纳入Logistic多因素回归分析,提示miR-29c表达和FIB-4、APRI评分是预测早期肝硬化发生的独立影响因素,建立早期肝硬化的联合预测模型Y=2.717×FIB-4+2.043×APRI-0.86×miR-29c,该模型在预测早期肝硬化患者的AUC为0.950。结论血浆miR-30a、miR-29c和FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎不同程度肝纤维化及早期肝硬化有一定的预测作用。miR-29c表达、FIB-4、APRI评分联合模型能更好地预测早期肝硬化。

MicroRNA570通过Wnt/β-catenin通路抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖及调控机制

目的:探讨microRNA570(miR-570)对人结肠癌细胞株HT-29生物学特性的影响,并阐明其对Wnt/β-catenin通路的影响机制.方法:将miR-570 mimics转染人结肠癌细胞株HT-29后,采用cell counting(CCK-8)法检测细胞增殖变化,应用实时定量PCR技术检测转染后HT-29细胞中miR-570的表达,Western blot技术及实时定量PCR技术检测各组中胞核及胞浆内β-catenin的变化,及对Wnt/β-catenin通路下游基因c-myc、cyclinD1和survivin表达的影响.结果:HT-29细胞转染miR-570 mimics后,HT-29细胞增殖能力下降,72 h细胞增殖抑制率最为明显,约为53.23%±1.22%(P<0.05).实时定量PCR结果显示miR-570表达上调20倍(20.01±0.32)(P<0.05).Western blot技术及实时定量PCR技术检测显示,β-catenin、c-myc、cyclinD1和survivin蛋白表达和mRNA表达均下降(P<0.05),而空白对照组与阴性对照差异无统计学意义.Western blot结果进一步证实胞核内β-catenin的蛋白表达量下降明显,而胞浆内,β-catenin的蛋白表达量无明显变化.结论:miR-570能明显抑制人结肠癌细胞株HT-29的增殖,并下调Wnt相关基因的表达,其可能作为抑癌基因参与Wnt/β-catenin信号通路的调节.

MicroRNA-29c靶向CDC42调控MCF-7细胞的增殖与侵袭

目的:研究MicroRNA-29c(miR-29c)在乳腺癌中的表达及对乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭的影响。方法:收集20例乳腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织,利用qPCR检测miR-29c的表达情况;构建miR-29c过表达载体,转染MCF-7细胞,设立miR-29c组,NC组(转染空病毒)和control组,CCK8检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭能力,同时利用双荧光素酶报告基因验证miR-29c靶基因。结果:乳腺癌组织中的miR-29c相对表达量明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),MCF-7细胞过表达miR-29c后,细胞增殖能力显著低于NC组和control组,细胞侵袭能力显著低于NC组和control组(P<0.05),双荧光素酶报告系统显示miR-29c能够抑制靶基因CDC42载体荧光素酶活性。结论:miR-29c通过靶向CDC42蛋白抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖与侵袭,为乳腺癌的治疗提供候选分子靶点和理论依据。

急性脑梗死患者血清miR⁃29c⁃3p、MDM2水平与预后的关系

目的分析微小RNA⁃29c⁃3p(miR⁃29c⁃3p)和鼠双微体2(MDM2)在急性脑梗死(ACI)患者血清中的水平及二者预测患者预后的临床价值。方法选择2021年7月—2022年7月在华北理工大学附属医院就诊的ACI患者90例为ACI组,并根据出院后3个月改良Rankin量表(mRS)评分分为预后良好亚组55例(mRS评分≤2分)和预后不良亚组35例(mRS评分>2分);同期医院健康体检者90例为健康对照组。比较所有受试者临床资料及血清miR⁃29c⁃3p、MDM2水平;Pearson法分析ACI患者血清miR⁃29c⁃3p和MDM2的相关性;多因素Logistic回归分析影响ACI患者预后不良的因素;受试者工作特征曲线评价血清miR⁃29c⁃3p、MDM2水平预测ACI患者预后不良的价值。结果与健康对照组比较,ACI组饮酒史比例、总胆固醇(TC)、高敏C反应蛋白(hs⁃CRP)、MDM2水平升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C)、尿酸(UA)、miR⁃29c⁃3p水平降低(χ^(2)/t/P=4.472/0.034、13.357/<0.001、32.246/<0.001、9.948/<0.001、9.435/<0.001、3.254/0.001、9.467/<0.001);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清miR⁃29c⁃3p水平降低,MDM2水平升高(t/P=9.480/<0.001、8.599/<0.001);ACI患者血清miR⁃29c⁃3p与MDM2水平呈负相关(r/P=-0.442/<0.001)。Logistic回归分析结果表明,血清hs⁃CRP高水平、MDM2高水平是ACI患者预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=1.563(1.181~2.069)、3.122(1.365~7.139)],血清miR⁃29c⁃3p高水平是其保护因素[OR(95%CI)=0.735(0.569~0.950)];血清miR⁃29c⁃3p、MDM2及二者联合预测ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.825、0.831、0.909,二者联合预测价值高于单项检测(Z/P=2.222/0.026、2.063/0.039)。结论ACI患者血清miR⁃29c⁃3p呈低表达,MDM2呈高表达,且预后不良ACI患者二者水平变化更明显,二者联合对ACI患者预后有较高预测价值。

microRNA-29c对人胰腺癌细胞侵袭转移的抑制作用及机制

目的:探讨microRNA-29c对人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2)生物学特性的影响。方法:培养1种人正常胰腺上皮细胞(HPDE)及4种人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2),采用real-time PCR法观察5种细胞系中microRNA-29c的表达差异,以microRNA-29c过表达腺病毒感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为实验组,以空载体感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为阴性对照组,采用细胞划痕实验、Transwell法检测两组细胞体外侵袭能力,Western blot检测两组细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)及E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。结果:real-time-PCR显示各胰腺癌细胞系中microRNA-29c水平明显低于正常胰腺细胞系(P<0.05),细胞划痕实验发现感染腺病毒48 h后实验组PANC-1、MIA Pa Ca-2细胞的迁移距离明显短于阴性对照组(P<0.05),Transwell小室细胞侵袭实验发现实验组PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞侵袭数量明显低于阴性对照组(P<0.05);Western blot蛋白免疫印迹结果显示PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞过表达microRNA-29c后,Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加。结论:microRNA-29c的过表达可有效抑制胰腺癌细胞的体外侵袭与转移,可能与Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加有关,有望成为胰腺癌生物治疗的潜在靶点。

血清miR-29c、miR-17与老年急性脑梗死后血管性认知障碍的相关性

目的探讨血清miR-29c、miR-17与老年急性脑梗死后血管性认知障碍(VCI)的相关性。方法选取2021年1月至2022年6月收治的老年急性脑梗死患者126例,均予以MoCA认知量表及Hachinski缺血指数量表评估,并根据VCI评估结果将患者分为VCI组(n=87)和非VCI组(n=39)。采用实时荧光定量聚合链式反应(qRT-PCR)法检测比较两组血清miR-29c、miR-17水平,分析血清miR-29c、miR-17水平对老年急性脑梗死后VCI的影响,并分析老年急性脑梗死患者血清miR-29c、miR-17水平与其MoCA评分和Hachinski评分的关系。绘制ROC曲线分析血清miR-29c、miR-17水平联合检测的老年急性脑梗死后VCI评估价值。结果VCI组血清miR-29c、年龄、饮酒率和既往脑梗死合并率均高于非VCI组(t/χ^(2)=6.435,6.134,4.171,4.469,P<0.05);血清miR-17水平则低于非VCI组(t=4.328,P<0.001)。Logistics回归分析显示,血清miR-29c、miR-17水平均为老年急性脑梗后VCI的影响因素(P<0.05)。Pearson相关分析显示,老年急性脑梗死患者血清miR-29c、miR-17水平与其MoCA评分和Hachinski评分均密切相关(r=-0.859,0.904,0.893,-0.866,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-29c、miR-17水平对老年急性脑梗死后VCI均具有显著的预测价值,其中两者联合检测的老年急性脑梗死后VCI预测效能更高(P<0.05)。结论老年急性脑梗死患者血清miR-29c表达上调和miR-17表达下调与其VCI的发生和严重程度均相关,两者联合检测可用于老年急性脑梗死后VCI早期评估。

lnc⁃NEAT1通过miR⁃29c⁃3p/CSPG4信号轴调节黑色素瘤B16细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA⁃核富集转录本1(long non⁃coding RNA⁃nuclear enriched abundant transcript 1,lnc⁃NEAT1)对黑色素瘤(melanoma,MM)细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法:体外培养MM细胞系(A375、A875、M14、B16)和人表皮黑色素细胞(HEMa⁃LP),采用实时荧光定量PCR(real⁃time quantitative PCR,RT⁃qPCR)检测细胞中lnc⁃NEAT1、microRNA⁃29c⁃3p(miR⁃29c⁃3p)、硫酸软骨素蛋白多糖4(chondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4)mRNA表达。取对数生长期B16细胞,分为对照组(control组)、si⁃NC组、si⁃NEAT1组、si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组、si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor组,用Lipofectamine 3000将相应质粒转染到细胞中。RT⁃qPCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞CSPG4及增殖、迁移与侵袭相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测miR⁃29c⁃3p与lnc⁃NEAT1、CSPG4的靶向关系。裸鼠移植瘤实验探究lnc⁃NEAT1敲低对MM细胞体内生长的影响。结果:MM细胞系中lnc⁃NEAT1和CSPG4 mRNA水平显著高于HEMa⁃LP细胞,miR⁃29c⁃3p水平显著低于HEMa⁃LP细胞(P均<0.05)。敲低lnc⁃NEAT1可显著升高miR⁃29c⁃3p表达,降低CSPG4 mRNA和蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并降低Ki⁃67、N⁃cadherin与Vimentin蛋白水平,升高E⁃cadherin蛋白水平(P均<0.05);下调miR⁃29c⁃3p表达可显著升高CSPG4 mRNA和蛋白水平,减弱lnc⁃NEAT1敲低对MM细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR⁃29c⁃3p mimic后,细胞中NEAT1⁃WT和CSPG4⁃WT的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验结果显示,敲低lnc⁃NEAT1可显著抑制体内移植瘤生长,而抑制miR⁃29c⁃3p可显著减弱lnc⁃NEAT1敲低对移植瘤生长的抑制作用(P均<0.05)。结论:lnc⁃NEAT1可能通过调节miR⁃29c⁃3p/CSPG4轴促进MM细胞增殖、迁移和侵袭。

MicroRNA-29c在单侧输尿管梗阻大鼠中的表达及意义

目的 :观察microRNA-29c(miR-29c)在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的表达变化,探讨其是否参与肾间质纤维化及其可能机制。方法:高通量测序技术和实时荧光定量PCR检测miR-29c在UUO大鼠术后1 d和3 d肾脏组织中的表达情况。使用生物信息学预测miR-29c靶mRNA,对其靶mRNA进行Gene Ontology和pathway分析。结果:UUO大鼠术后1 d和术后3 d手术侧肾组织miR-29c表达下调,Col I mRNA和FN mRNA的表达升高。预测靶mRNA经分析后获得miR-29c有统计学意义的10个靶mRNA,其中6个编码细胞外基质蛋白。结论:miR-29c在大鼠UUO模型早期的肾组织中表达下调,可能通过促进细胞外基质堆积参与肾间质纤维化的发生发展。

PBMCs miR-29c在肺炎支原体肺炎患儿中的表达及与Th17/Treg失衡的关系

目的探究外周血单个核细胞(PBMCs)miR-29c在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿中的表达及Th17/Treg失衡的关系。方法2019年8月至2021年4月在我院儿科共纳入108例MPP患儿,包括58例大环内酯类抗菌药物敏感的MPP患儿(MSMP组)和50例难治性MPP(RMPP组)患儿。另外选择50例健康体检儿童作为对照组。采集入院时的血液样本。采用流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞百分比,酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平。实时荧光定量PCR法检测PBMCs miR-29c表达。结果与对照组相比,MSMP组和RMPP组CD4^(+)Th17细胞百分比、CD4^(+)Treg细胞百分比、Th17/Treg比值以及血清IL-17水平升高,同时PBMCs miR-29c相对表达量降低(P<0.05);而且RMPP组患儿CD4^(+)Th17细胞百分比、CD4^(+)Treg细胞百分比、Th17/Treg比值以及血清IL-17水平高于MSMP组,PBMCs miR-29c相对表达量低于MSMP组(P<0.05)。对于所有MPP患儿,无论是MSMP组还是RMPP组,PBMCs miR-29c相对表达量与循环Th17细胞%、Th17/Treg比值、血清IL-17水平均呈负相关性(P<0.05)。经受试者工作特征曲线分析,PBMCs miR-29c预测RMPP的AUC为0.932(95%CI:0.888~0.976),最佳临界值为0.67。经多因素Logistic回归分析,PBMCs miR-29c是影响RMPP进展的独立影响因子,PBMCs miR-29c≥0.67患儿进展为RMPP风险较低(P<0.05)。结论MPP患儿中PBMCs miR-29c低表达可诱导Th17细胞分化,进而促进Th17/Treg失衡,这可能是导致RMPP进展的重要机制之一。

microRNA-29c在雷公藤内酯醇抗克唑替尼耐药H3122肺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨microRNA-29c在雷公藤内酯醇(TP)抗克唑替尼耐药肺癌细胞增殖的作用及机制研究。方法将克唑替尼耐药H3122分为miRNA-29c inhibitor+TP组、阴性对照miRNA(miRNA-NC)+TP组、TP组和对照组。采用MTT检测细胞存活率,AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3、DNMT3a表达,RT-qPCR检测DNA甲基转移酶3(DNMT3)mRNA、miRNA-29c表达,定量甲基化特异性PCR(QM‐SP)法检测视黄酸受体(RARb)、RAS域家族蛋白1(RASSF1)、死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和p16 mRNA表达和甲基化状态。结果与对照组比较,TP组中,TP浓度为10 nmol/L、25 nmol/L和50 nmol/L时,miRNA-29c表达增加(t分别=43.12、61.65、83.50,P均<0.05),DNMT3a表达下降(t分别=146.56、628.05、653.16,P均<0.05)。与对照组比较,TP组细胞存活率、p16、RASSF1、DAPK1、RARb甲基化降低(t分别=14.76、94.52、103.08、67.15、72.22,P均<0.05)、细胞凋亡率增加(t=-9.32,P<0.05),Western blot结果显示DNMT3a、Bcl-2表达明显降低,Bax、cleaved-ca‐spase3表达明显增高。与miRNA-NC+TP组比较,miRNA-29c inhibitor+TP组细胞存活率、p16、RASSF1、DAPK1、RARb甲基化明显增加(t分别=-4.08、-7.77、-67.84、-59.66、-46.79,P均<0.05),细胞凋亡率明显下降(t=5.40,P<0.05)。Western blot结果显示DNMT3a、Bcl-2表达明显增加,Bax、cleaved-caspase3表达明显降低。结论 TP能够增加miRNA-29c表达,下调DNMT3表达和活性,降低抑癌基因的甲基化水平,抑制H3122CR细胞增殖,发挥抗肺癌作用。