miR-129-2对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的调节作用

目的:检测miR-129-2在三阴性乳腺癌(TNBC)患者癌组织中的表达水平,分析miR-129-2的表达与患者临床资料的关系,并探究其对癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:荧光实时定量PCR(RT-qPCR)法检测TNBC癌组织、癌旁组织以及细胞株中miR-129-2的表达水平,统计学方法分析miR-129-2的表达水平与患者临床资料的相关性,采用划痕实验及Transwell实验研究miR-129-2对癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:miR-129-2在40例TNBC患者癌组织及MDA-MB-231细胞中表达下调(P<0.05,P<0.01),且miR-129-2的表达水平与年龄、是否绝经无关,与肿瘤大小、分期、淋巴结转移有关;划痕实验结果显示:过表达miR-129-2使细胞迁移距离减少,划痕愈合率均下降,迁移能力减弱(P<0.01);Transwell侵袭实验显示:过表达miR-129-2能减少穿过小室膜的细胞数量,明显抑制癌细胞的侵袭能力(P<0.01)。下调miR-129-2的水平使MDA-MB-231细胞迁移能力和侵袭能力增强。结论:miR-129-2在TNBC中低表达,miR-129-2的表达与病情严重程度相关,miR-129-2的表达水平影响TNBC癌细胞的迁移和侵袭能力。

lincRNA Cox2通过miR-129-5p/AMPK调控BCG感染的巨噬细胞糖酵解进程

[目的]探究lincRNA Cox2对BCG(Bacillus Calmette-Guérin)感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程的调控作用,阐明Mtb与巨噬细胞之间的相互作用,为结核病的诊断和治疗提供新的靶点。[方法]利用小干扰RNA敲减lincRNA Cox2的表达,以及使用miR-129-5p mimics过表达载体,结合BCG感染,通过实时荧光定量PCR检测lincRNA Cox2、miR-129-5p和促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达量;乳酸含量检测试剂盒检测乳酸(LD)的分泌情况;平板涂布法检测巨噬细胞菌载量情况;双荧光素酶报告基因系统验证lincRNA Cox2与miR-129-5p以及miR-129-5p与AMPK的互作关系;蛋白免疫印迹检测AMPK(AMP依赖蛋白激酶)及糖酵解途径中关键基因HK1(己糖激酶1)、PKM2(丙酮酸激酶2)和LDHA(乳酸脱氢酶)的表达变化。[结果]BCG感染12 h能够极显著上调RAW264.7巨噬细胞中lincRNA Cox2的表达(P=0.000013),与BCG组相比,siRNA+BCG组中AMPK(P=0.000771)、HK1(P=0.00323)、PKM2(P=0.000135)和LDHA(P=0.002532)的表达量以及乳酸的分泌量(P=0.020802)发生显著上调,而促炎因子IL-1β(P=0.000451)、TNF-α(P=0.000147)、IL-6(P=0.0001)的表达发生显著下调,菌载量试验表明siRNA+BCG组中的巨噬细胞菌载量显著下调(P=0.000127)。双荧光素酶报告基因系统表明lincRNA Cox2和miR-129-5p存在相互作用关系并以AMPK为靶基因。BCG感染RAW264.7巨噬细胞12 h后极显著下调miR-129-5p的表达(P=0.000156),与BCG组相比,miR-129-5p mimics+BCG组中AMPK(P=0.000262)、HK1(P=0.019524)、PKM2(P=0.001658)和LDHA(P=0.000887)表达量以及乳酸分泌量(P=0.044952)发生显著下调。[结论]lincRNA Cox2通过海绵吸附miR-129-5p并靶向AMPK,促进BCG感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程。

长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞CNE1恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:以鼻咽癌细胞系CNE1为研究对象,将CNE1细胞分NC组、si-NC组、si-CircMATR3组、miR-NC组、miR-129-5p mimic组、si-CircMATR3+inhibitor NC组、si-CircMATR3+miR-129-5p inhibitor组、si-SOX2组。RT-qPCR检测细胞中CircMATR3、miR-129-5p、SOX2 mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间的靶向关系;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst33342实验观察细胞形态学变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果:CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间存在靶向关系;沉默CircMATR3或过表达miR-129-5p或沉默SOX2可以抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭和细胞周期转变,促进细胞凋亡和凋亡小体的形成;抑制miR-129-5p表达一定程度可以逆转沉默CircMATR3对于CNE1细胞的抑制作用。结论:沉默CircMATR3可以上调miR-129-5p表达,抑制SOX2表达,进而抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭,促进细胞凋亡。

miR-129-2靶向PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路减轻肺内皮细胞损伤

目的探讨miR-129-2在肺血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法SPF级小鼠40只随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、空载组、过表达组,给予气管滴注LPS诱导急性肺损伤(ALI),尾静脉注射高表达慢病毒来过表达miR-129-2,观察ALI小鼠呼吸频率、体质量等一般情况,检测miR-129-2及炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α表达水平和肺损伤程度。人肺微血管内皮细胞(HPMECs)分为Control组、LPS组、NC组和mimic组,LPS处理诱导细胞损伤,转染miR-129-2 mimic来上调miR-129-2的水平,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,检测各组细胞中miR-129-2、IL-6、IL-10、TNF-α及PIK3R1 mRNA的表达水平。双荧光素酶实验验证miR-129-2与PIK3R1的靶向关系,Western blot检测miR-129-2对PIK3R1及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果在小鼠中,miR-129-2过表达能使小鼠进食增加、呼吸频率减慢、体质量增加、肺组织损伤减轻,IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高(P<0.05)。在HPMECs中,mimic转染使miR-129-2表达水平上调,炎症因子表达水平降低,细胞迁移能力增强,PIK3R1表达降低(P<0.05);双荧光素酶报告显示miR-129-2与PIK3R1存在结合位点,miR-129-2下调使PIK3R1表达增加,PI3K/AKT信号通路被激活。结论miR-129-2过表达能够减轻小鼠炎症反应和肺损伤,并能介导PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路缓解肺内皮细胞损伤。

血清miR-129-5p水平与HER-2阳性晚期乳腺癌患者曲妥珠单抗敏感性的相关性分析

目的:探索HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗敏感性的预测价值。方法:入组HER-2阳性晚期乳腺癌患者107例,均接受曲妥珠单抗靶向治疗,依据实体瘤疗效评价标准(RECIST 1.0)将患者分为曲妥珠单抗敏感组(76例)和曲妥珠单抗耐药组(31例),实时荧光定量PCR法检测初次曲妥珠单抗治疗前患者血清miR-129-5p水平,并与同期35名健康体检女性人群的血清miR-129-5p水平比较;分析患者的血清miR-129-5p水平与其临床病理特征的关系;使用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定患者血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗治疗敏感性的预测价值和其阈值。结果:曲妥珠单抗敏感组患者的血清miR-129-5p水平显著低于健康对照组(0.627±0.058vs1.027±0.129,P=0.001),而曲妥珠单抗耐药组患者的血清miR-129-5p水平显著低于敏感组患者(0.276±0.031vs0.627±0.058,P=0.002)。HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平与年龄、月经情况、ECOG评分、肿瘤转移部位均无关,但与组织学分级及肿瘤转移部位数量有关,Ⅰ-Ⅱ级患者的miR-129-5p水平显著低于Ⅲ级患者,有一个或两个肿瘤转移部位的患者的血清miR-129-5p水平显著低于有三个或以上肿瘤转移部位的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析表明患者的血清miR-129-5p水平对区分曲妥珠单抗敏感与耐药患者的阈值为0.43,灵敏度为0.89,特异度为0.72,且曲妥珠单抗耐药组患者血清miR-129-5p≤0.43的患者比例显著高于敏感组患者(71.0%vs26.3%,P<0.05)。结论:HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平可有效预测其对曲妥珠单抗的疗效,有望成为预测患者曲妥珠单抗疗效的有效生物标记物。

萎缩性胃炎患者血清PGⅠ、PGⅡ、IL-2、Hp-IgG抗体、hEGF及miR-129表达水平及其临床意义研究

目的:探讨慢性萎缩性胃炎患者血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ、白细胞介素-2(IL-2)、幽门螺杆菌(Hp)-IgG抗体、人表皮生长因子(hEGF)及miR-129表达水平的临床意义。方法:选取2021年1月至2022年12月在我院治疗的慢性萎缩性胃炎患者72例,胃癌患者50例,同时选取健康志愿者50例,检测血清PGⅠ、PGⅡ、IL-2、Hp-IgG抗体、hEGF和miR-129水平。结果:萎缩性胃炎组患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平分别为(70.55±19.42)μg·L^(-1)、(15.71±1.89)μg·L^(-1)和(1.02±0.20),均低于对照组(P<0.05),但均高于胃癌组(P<0.05)。萎缩性胃炎组患者血清IL-2、Hp-IgG抗体阳性率及hEGF水平分别为(15.58±4.32)ng·mL^(-1)、62.50%和(1.49±0.61)ng·mL^(-1),均高于对照组(P<0.05),但均低于胃癌组(P<0.05)。萎缩性胃炎组Hp-IgG抗体阳性患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平分别为(68.45±14.23)μg·L^(-1)、(14.68±4.03)μg·L^(-1)和(0.99±0.13),均低于Hp-IgG抗体阴性患者(P<0.05),而IL-2和hEGF水平分别为(16.20±2.24)ng·mL^(-1)和(1.61±0.37)ng·mL^(-1),均高于Hp-IgG抗体阴性患者(P<0.05)。萎缩性胃炎组OLGIM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平分别为(67.11±12.62)μg·L^(-1)、(14.20±3.10)μg·L^(-1)和(0.96±0.12),均低于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);OLGIM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血清IL-2和hEGF水平分别为(15.90±2.12)ng·mL^(-1)和(1.65±0.34)ng·mL^(-1),均高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。相关性分析显示,萎缩性胃炎组患者血清PGⅠ、PGⅡ水平与hEGF水平呈负相关(r=-0.584和-0.640,P<0.05)。结论:萎缩性胃炎患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平均降低,IL-2、Hp-IgG抗体及hEGF水平均升高,且血清PGⅠ、PGⅡ水平与hEGF水平存在负相关关系。

LncRNA NR2F2-AS1靶向抑制miR-129-5p调控胶质瘤细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究lncRNA NR2F2-AS1和miR-129-5p在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法qRT-PCR检测lncRNANR2F2-AS1和miR-129-5p在胶质瘤组织和细胞中表达水平,MTT法和流式细胞术检测U251细胞增殖和凋亡,Westernblot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平,双荧光素酶报告系统验证NR2F2-AS1和miR-129-5p的调控关系。结果与正常脑组织相比,在胶质瘤组织中lncRNA NR2F2-AS1的含量显著升高(P<0.05),miR-129-5p的含量则显著下降(P<0.05);干扰NR2F2-AS1表达和过表达miR-129-5p均可抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞中CyclinD1和Bcl-2含量降低(P<0.05),p21和Bax含量升高(P<0.05);lncRNA NR2F2-AS1靶向负调控miR-129-5p的表达;抑制miR-129-5p表达逆转了干扰NR2F2-AS1表达对U251细胞增殖、凋亡的作用。结论干扰lnc RNANR2F2-AS1通过靶向促进miR-129-5p表达抑制胶质瘤U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。LncRNA NR2F2-AS1可能是胶质瘤的分子靶点。

MicroRNA-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤的抑制及其可能的机制

目的:探讨microRNA-129-2(miR-129-2)对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其可能的机制。方法:建立人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,按皮下注射的药剂将32只模型小鼠用随机数字表法分为4组:对照组(皮下注射生理盐水0.2 ml/d)、空白质粒组[(50μg/只,0.2 ml/次,1次/d]、顺铂(cisplatin,DDP)阳性对照组(1 mg/kg,0.2ml/次,1次/d)、miR-129-2组[(50μg/只,0.2 ml/次,1次/d],共治疗5周,记录裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量。流式细胞术检测各组移植瘤组织S+G2-M期细胞比例,免疫组化和Western blotting方法检测miR-129-2对移植瘤组织中转录因子SOX4表达的影响。结果:成功建立CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,治疗第22天起,miR-129-2组移植瘤的体积和质量均显著低于对照组和空白质粒组(P<0.01),而与DDP组始终无明显差异(P>0.05);5周后,miR-129-2组荷瘤小鼠的体质量显著高于其他3组(均P<0.01)。miR-129-2组移植瘤组织S+G2-M期细胞比例显著低于与对照组和空白质粒组(P<0.01),与DDP组无显著差异(P>0.05)。移植瘤组织SOX4表达显著高于瘤旁组织,miR-129-2组和DDP组移植瘤组织内SOX4蛋白表达均较对照组显著降低(均P<0.01),且miR-129-2组SOX4蛋白表达显著低于DDP组(P<0.05)。结论:miR-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下裸移植瘤的生长有明显的抑制作用,其机制可能与SOX4表达下调有关。

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的探讨Micro RNA-129-2(mi R-129-2)在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路。方法将mi R-129-2 mimics及mi R-129-2 mimics NC基因序列分别转染到食管癌NMC109细胞中,并设为mi R-129-2 mimics高表达组和mi R-129-2 mimics阴性对照组(mi R-129-2 mimics NC组),将非转染的NMC109细胞设为空白对照组。体外实验:运用MTT法检测3组细胞的增殖能力、Transwell法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达。采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力。结果 mi R-129-2 mimics组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较mi R-129-2 mimics NC组及空白对照组明显减弱(P<0.001),而空白对照组与mi R-129-2 mimics NC组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异(P>0.05);mi R-129-2 mimics组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调(P<0.001);mi R-129-2 mimics组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小(P<0.001),而mi R-129-2mimics NC组及空白对照组无明显差异(P>0.05)。结论 mi R-129-2具有抑制食管癌细胞NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调SOX4基因表达有关。

长链非编码RNA NRSN2-AS1通过miR-129-5p/Wnt5a轴靶向调控Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞状细胞癌发生、发展的影响

目的探讨NRSN2-AS1对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其相关分子机制。方法应用qRT-PCR法检测96例ESCC和癌旁组织及ESCC细胞系中NRSN2-AS1的表达水平。通过体外细胞功能实验分析NRSN2-AS1过表达对ESCC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;应用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验,验证NRSN2-AS1和miR-129-5p的靶向关系及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。应用qRT-PCR法分别检测NRSN2-AS1/miR-129-5p/Wnt5a分子轴的表达。结果NRSN2-AS1在ESCC组织中(2.48±0.90)的表达显著高于癌旁组织(1.02±0.73,t=4.480,P<0.01)。NRSN2-AS1在食管癌细胞系Eca109(1.99±0.04)、TE1(2.43±0.09)、TE13(3.68±0.21)和KYSE150(4.44±0.26)中的表达显著高于对照组(1.00±0.08,P均<0.01)。NRSN2-AS1过表达可促进Eca109细胞的增殖能力(P<0.01);上调NRSN2-AS1可促进Eca109细胞的迁移及侵袭能力(P均<0.01)。NRSN2-AS1可通过竞争性结合miR-129-5p,上调Wnt5a的表达,进而激活Wnt/β-catenin信号通路。结论NRSN2-AS1可通过miR-129-5p/Wnt5a轴激活Wnt/β-catenin信号通路,促进ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭,其有望成为ESCC治疗的潜在靶点。

miR-129-3p通过E2F5下调BIM表达在结直肠癌中所起的促癌作用研究

目的探讨miR-129-3p通过E2F5下调BIM表达在结直肠癌中所起的促癌作用。方法收集郑州大学第二附属医院消化内科30例结直肠癌组织和10例癌旁组织样本,生物信息学分析miR-129-3p在样本中的表达差异。qRT-PCR评估miR-129-3p在样本中的表达情况。CCK8实验检测细胞活力。转染mimic和inhibitor改变miR-129-3p表达,探讨miRNA的生物学功能。荧光素酶报告基因检测miRNA靶基因。通过转染siRNA,抑制E2F5的表达。Western blotting检测细胞蛋白表达含量。结果miR-129-3p在结直肠癌组织样本中呈低表达。通过转染mimic和inhibitor发现,提高miR-129-3p表达可以抑制细胞活力。反之,抑制miR-129-3p促进细胞增殖。荧光素酶报告基因和Western blotting检测E2F5可作为miR-129-3p靶基因。敲除miR-129-3p靶基因E2F5同样抑制结直肠癌的增殖。结论miR-129-3p可以通过下调E2F5的表达抑制结直肠癌细胞增殖。miR-129-3p有望成为治疗结直肠癌的新靶点,我们的研究为结直肠癌的靶向治疗提供新思路。

5-Aza-CdR对人脑胶质瘤细胞miR-129-2表达水平及其生物学行为的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)对人脑胶质瘤细胞U87和U373中mi R-129-2表达水平及细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法:以0.5 mmol/L的5-Aza-Cd R处理人脑胶质瘤细胞U87和U373 72 h,采用RT-PCR法检测mi R-129-2的表达水平,CCK-8法观察胶质瘤细胞增殖能力,Transwell试验检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:经5-AzaCd R处理后人脑胶质瘤细胞U87和U373的mi R-129-2表达水平显著上调,细胞增殖能力、侵袭迁移能力受到抑制。结论:5-Aza-Cd R能使mi R-129-2启动子去甲基化,使其表达上调,并能抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移能力。

miR-129-2靶向调节SOX4表达对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-129-2靶向调节SOX4表达对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及其对子宫内膜癌的早期诊断价值。方法将miR-129-2 mimics及miR-129-2 mimics NC基因序列分别转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞内,分别为miR-129-2 mimics高表达组、miR-129-2 mimics阴性对照组,并设置非转染子宫内膜癌Ishikawa细胞为空白对照组。使用甲基化敏感性特异性聚合酶链反应(MSRE-qPCR)测定子宫内膜癌Ishikawa细胞和子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中miR-129-2基因的甲基化水平,采用荧光定量PCR法测定患者癌组织及匹配癌旁组织miR-129-2基因的mRNA表达水平。并通过MTT法检测各组细胞的增殖能力,通过蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达,采用裸鼠体内移植瘤形成实验对细胞的增殖能力进行检测。结果 Ishikawa细胞系中miR-129-2启动子区甲基化强度为74.47%。本研究中所选取的66例子宫内膜癌组织中38例存在miR-129-2启动子区高甲基化(占57.58%),且癌旁组织内无甲基化。高表达组的Ishikawa细胞中SOX4蛋白表达量显著低于阴性对照组和空白对照组(t值分别为2.436、3.786,均P<0.05),阴性对照组则显著低于空白对照组(t=2.897,P<0.05)。miR-129-2在子宫内膜癌组织中的表达显著低于正常子宫内膜组织(t=6.020,P=0.000)。3组Ishikawa细胞培养24h、48h、72h、96h和120h细胞增殖能力比较均有显著性差异(F值分别为4.663、3.089、5.955、6.719、8.510,均P<0.05),其中miR-129-2高表达组细胞增殖能力最低。进一步每两组之间比较显示miR-129-2高表达组在48h、72h、96h、120h时间点细胞增殖能力均显著低于阴性对照组和空白对照组(t值为2.356~10.987,均P<0.05),而阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(t值为0.980~1.235,均P>0.05)。3组裸鼠瘤体湿重、终体积、肿瘤相对体积比较均有显著性差异(F值分别为8.256、17.854、14.771,均P<0.05),其中miR-129-2上述指标最低。进一步每两组之间比较显示miR-129-2高表达组瘤体湿重、终体积、肿瘤相对体积均显著低于阴性对照组和空白对照组(t值为3.124~19.446,均P<0.05),而阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(t值为0.884~1.459,均P>0.05)。miR-129-2对子宫内膜癌具有较高的诊断价值,AUC为0.768,理论阈值点为0.002,对应的敏感度和特异度分别为0.772、0.745。结论 miR-129-2在子宫内膜癌组织和细胞系内均存在明显甲基化,因基因启动子区miR-129-2在子宫内膜癌组织中表达降低,miR-129-2可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,促进凋亡,其作用可能与靶向下调SOX4基因表达相关。

MicroRNA-129-5p在糖尿病性心肌病中的作用

目的探究微小RNA(miRNA)miR-129-5p在糖尿病心肌病中的表达及生物学功能。方法采用浓度为5.5 mmol/L葡萄糖(对照组)和50.0 mmol/L葡萄糖(高糖组)干预H9C2心肌细胞0、24、48、72、96 h后,采用实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测H9C2心肌细胞中miR-129-5p的表达;分别将miR-129-5p模拟物(HG+miR-129-5p模拟物组)及其模拟物阴性对照物(HG+mimics-NC组)转染至高糖诱导下的H9C2细胞中,并设置对照组和高糖组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的相对水平,采用CCK-8检测各组细胞存活率,采用流式细胞仪检测H9C2心肌细胞的凋亡,采用免疫印迹检测各组细胞Ki67、Bax、酶切-caspase-3蛋白表达。结果与对照组相比,miR-129-5p在高糖组的H9C2心肌细胞中表达显著下调(P<0.05),且呈时间依赖关系。与对照组相比,高糖组H9C2心肌细胞中IL-1β、TNF-α和MDA的相对含量显著升高(P<0.01),而SOD相对含量显著降低(P<0.01);与高糖+mimics-NC组相比,高糖+miR-129-5p模拟物组H9C2心肌细胞中IL-1β、TNF-α和MDA相对含量显著降低(P<0.05),而SOD相对含量显著升高(P<0.01)。与对照组相比,高糖组H9C2心肌细胞凋亡率、Bax和酶切-caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.001),而细胞存活率和Ki67蛋白显著降低(P<0.01);与高糖+mimics-NC组相比,高糖+miR-129-5p模拟物组中H9C2心肌细胞凋亡率、Bax和酶切-caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.001),而细胞存活率和Ki67蛋白显著增加(P<0.01)。结论 miR-129-5p抑制高糖诱导的H9C2心肌细胞的炎症反应、氧化应激及凋亡,并促进增殖。

miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测人支气管上皮细胞HBE、喉鳞状细胞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p、DIAPH2的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-129-5p组(转染miR-129-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-129-5p组(转染anti-miR-129-5p)、si-NC组(转染si-NC)、si-DIAPH2(果蝇形态同系物2,Drosophila Homologue of Diaphanous2,DIAPH2)组(转染si-DIAPH2)、miR-129-5p+pc DNA组(共转染miR-129-5p和pc DNA)、miR-129-5p+pc DNA-DIAPH2组(共转染miR-129-5p和pc DNA-DIAPH2),用脂质体法转染HN4、TU177细胞;Western blot检测细胞中DIAPH2、细胞周期蛋白依赖激酶1(cyclinD1)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cleaved-caspase-9)的蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-129-5p与DIAPH2的结合力。结果与人支气管上皮HBE相比,喉鳞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p表达均显著降低,DIAPH2表达显著升高(P<0.05);过表达miR-129-5p、敲减DIAPH2均可显著抑制HN4、TU177细胞增殖、促进凋亡、下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9;miR-129-5p可抑制野生型DIAPH2细胞的荧光活性,并负向调控DIAPH2的表达;过表达DIAPH2可逆转miR-129-5p对Hep-2细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论 miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向DIAPH2相关,将可为miR-129-5p靶向治疗喉鳞状细胞癌提供新的依据。

原发性肺癌放疗后肺部感染患者miR-129和miR-146a与lncRNA NEAT1表达水平及与Th1/Th2细胞因子水平的关系

目的探讨原发性肺癌放疗后肺部感染患者微小核糖核酸(miR)-129、miR-146a、长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本(NEATI)及与辅助性T细胞(Th)1/Th2细胞因子水平的关系。方法选取2019年7月-2023年7月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的原发性肺癌放疗患者109例,根据合并肺部感染情况分为感染组/未感染组(28例/81例);比较两组血清miR-129、lncRNA NEAT1、白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IFN-γ/IL-4及外周血miR-146a水平;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析其单独及联合检测对原发性肺癌放疗后肺部感染预测价值;采用Pearson法分析原发性肺癌放疗后肺部感染患者miR-129、miR-146a、lncRNA NEAT1水平与Th1/Th2细胞因子水平的相关性。结果感染组血清lncRNA NEAT1、IL-4和外周血miR-146a水平较未感染组高(P<0.05),血清miR-129、IL-2、IFN-γ、IFN-γ/IL-4水平较未感染组低(P<0.05);绘制ROC曲线获得miR-129、miR-146a、lncRNA NEAT1联合检测对原发性肺癌放疗后肺部感染的曲线下面积(AUC)高于各项单独检测(P<0.05),敏感度和特异度高;Pearson相关性分析结果发现IL-2、IFN-γ/IL-4与miR-146a、lncRNA NEAT1呈负相关(P<0.05),与miR-129呈正相关(P<0.05)。结论原发性肺癌放疗后发生肺部感染miR-129、miR-146a、lncRNA NEAT1水平表达异常,三者联合检测对其诊断价值较高,且miR-129、miR-146a、lncRNA NEAT1表达水平与Th1/Th2因子有关。

微小RNA-129-5p在喉鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的研究微小RNA-129-5p在喉鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法采用实时定量实时荧光定量PCR仪(RT-qPCR)检测喉鳞状细胞癌、癌旁组织及喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中miR-129-5p表达水平,转染miR-129-5p模拟物(mimics)喉鳞状细胞癌Hep-2细胞设为mimics组,转染miR-129-5p mimics空白对照组(NC)喉鳞状细胞癌Hep-2细胞设为mimics-NC组,将未转染喉鳞状细胞癌Hep-2细胞设为NC组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、平板克隆试验检测各组喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖情况;采用Transwell各组喉鳞状细胞癌Hep-2细胞侵袭情况;采用蛋白质印迹法试验检测各组喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、侵袭相关蛋白表达水平。结果与癌旁组织(1.03±0.14)比较,喉鳞状细胞癌组织中miR-129-5p(0.48±0.08)表达水平显著降低(P<0.05)。同一时间和不同时间NC组、mimic-NC组miR-129-5p表达水平、喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖抑制率、平板克隆形成率、侵袭细胞数、一抗鼠源原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。同一时间与NC组、mimics-NC组比较,mimics组miR-129-5p表达水平、喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖抑制显著增加(P<0.05),与24 h比较,48 h mimics组miR-129-5p表达水平、喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖抑制显著增加(P<0.05)。平板克隆形成率为(98.96±10.60)%、(97.57±10.82)%、(46.91±9.03)%、侵袭细胞数为(235.62±36.18)、(227.31±35.90)、(94.38±19.86)个、c-Myc(3.92±0.71)、(3.89±0.60)、(2.18±0.46)、Cyclin D1(1.54±0.27)、(1.52±0.30)、(0.39±0.08)、MMP-2(1.12±0.28)、(1.11±0.25)、(0.36±0.07)、MMP-9(1.03±0.14)、(0.98±0.13)、(0.29±0.05)蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。结论miR-129-5p在喉鳞状细胞癌组织中低表达,上调miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖及侵袭。

miR-129-5p在脓毒症诱导的心脏炎症和功能障碍中的作用

目的:探讨miR-129-5p在脓毒症诱导的心脏炎症和功能障碍中的作用。方法:24只8周龄的C57/BL6雄性小鼠按随机数字表法随机分为正常(Normal)组、脂多糖(LPS)组、LPS+空病毒对照(minic-NC)组、LPS+miR-129-5p慢病毒(miR-129-5p minic)组,每组6只,采用腹腔注射LPS建立脓毒症小鼠模型。采用免疫组织化学染色检测配对盒基因6(PAX6),全自动生化分析仪检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB),TUNEL分析检测心肌凋亡情况。体外采用LPS诱导原代心肌细胞,模拟脓毒症引起的心功能不全。将细胞分为对照(Control)组、LPS+inhibitor-NC+si-NC组、LPS+inhibitor-NC+si-PAX6组、LPS+si-NC+miR-129-5p inhibitor组、LPS+miR-129-5p inhibitor+si-PAX6组。采用TUNEL分析检测心肌细胞凋亡情况,Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、PAX6和人锌指E盒结合同源盒2(ZEB2)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平。结果:动物实验结果表明,与Normal组相比,LPS组小鼠血清CK、CK-MB水平,心肌细胞横截面积,TUNEL阳性细胞、PAX6阳性细胞比例和PAX6 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+miR-129-5p minic组CK、CK-MB水平,心肌细胞横截面积,TUNEL阳性细胞、PAX6阳性细胞比例和PAX6 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。体外细胞实验结果表明,与Control组相比,LPS+inhibitor-NC+si-NC组TUNEL阳性细胞比例,PAX6、ZEB2蛋白表达水平,TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与LPS+si-NC+miR-129-5p inhibitor组相比,LPS+miR-129-5p inhibitor+si-PAX6组TUNEL阳性细胞比例,PAX6、ZEB2蛋白表达水平,TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:miR-129-5p可能通过调控PAX6/ZEB2信号通路控制心肌炎症反应,并参与调节脓毒症诱导的心脏功能障碍。

老年心力衰竭患者肺部感染危险因素及MIP-2与miR-21和miR-129的预测价值

目的研究老年心力衰竭患者肺部感染的危险因素及巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)、微小核糖核酸-21(miR-21)、miR-129的预测价值.方法回顾性收集2020年1月-2022年7月湖北省大别山区域医疗中心黄冈市中心医院收治的229例老年心力衰竭患者临床资料,根据患者是否发生肺部感染分为感染组(n=103)和未感染组(n=126例),归纳老年心力衰竭患者肺部感染的危险因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清MIP-2、miR-21、miR-129对老年心力衰竭患者肺部感染的预测价值.结果年龄、合并糖尿病、侵入性操作、miR-21、miR-129是老年心力衰竭患者肺部感染的危险因素(P<0.05);感染组白细胞计数、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、MIP-2、降钙素原(PCT)高于对照组(P<0.05);血清MIP-2、miR-21、miR-129水平联合预测老年心力衰竭患者肺部感染的曲线下面积(AUC)值均高于三者单独预测(P<0.05),血清miR-129及联合预测老年心力衰竭患者肺部感染的敏感度高于血清MIP-2、miR-21(P<0.05),血清MIP-2、miR-21及联合预测老年心力衰竭患者肺部感染的特异度高于血清miR-129(P<0.05).结论老年心力衰竭患者肺部感染的影响因素与年龄、合并糖尿病、侵入性操作、外周血免疫细胞及血清因子水平有关,临床可据此对有以上特征的老年心力衰竭患者进行针对性干预或治疗,降低患者肺部感染发生的风险,同时,血清MIP-2、miR-21、miR-129联合对老年心力衰竭患者肺部感染具有较好的预测价值,因此临床可采用血清MIP-2、miR-21、miR-129对患者发生肺部感染的风险进行预测.