miR-1307-3p在不同猪种肌肉和脂肪中的差异表达研究与靶基因验证

为研究miR-1307-3p对不同猪种脂肪酸代谢的影响,试验采用RT-qPCR技术对中外7个猪种/类群(成华猪、藏猪、内江猪、青峪猪、丫杈猪、雅南猪和大约克夏猪)的肌肉和脂肪中miR-1307-3p的表达量进行比较分析,利用miRBase、Starbase和RNAhybrid等生物信息学网站对miR-1307-3p进行靶基因预测,并在细胞水平通过双荧光素酶报告系统对其进行靶标关系验证。结果表明:除藏猪以外的其他地方猪肌肉组织中miR-1307-3p的表达量均高于大约克夏猪,丫杈猪的表达量最高。miR-1307-3p在不同猪种脂肪组织中的表达水平相似。生物信息学预测显示硬脂酰辅酶A去饱和酶5(Stearoyl-CoA desaturase 5,SCD5)为miR-1307-3p的潜在靶基因。双荧光素酶活性检测显示,miR-1307-3p与SCD5基因存在极显著靶向调控关系,表明miR-1307-3p可能通过潜在靶基因SCD5调控不同猪种肌内脂肪酸代谢,SCD5可作为影响猪肉质的候选基因。本研究为猪重要经济性状的遗传改良提供了重要基因资源。

右美托咪定通过调控miR-1307表达对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-1307表达水平,分析右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对肺癌A549细胞生物学行为影响的可能机制。方法人肺癌A549细胞接种后培养24h,采用数字表法随机分为4组:肺癌A549细胞组、Dex20μg/ml组、Dex 40μg/ml组及Dex 80μg/ml组;每组每孔设6个平行样,各组细胞培养结束后,通过CCK-8法测定细胞增殖能力,应用Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,Matrigel膜及Transwell法测定细胞侵袭力及迁移水平,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-1307的表达水平。结果Dex能抑制肺癌A549细胞活力,且作用呈浓度依赖性及时间依赖性;Dex可诱导肺癌A549细胞凋亡,当Dex浓度达到80μg/ml,其凋亡率可升至22.23%;Dex可抑制肺癌A549细胞的迁移与侵袭能力,且呈浓度依赖性。此外,与对照组比较,Dex处理后A549细胞中miR-1307的相对表达量明显下降,且随着Dex浓度的增加下降更为明显。结论Dex能有效抑制肺癌A549细胞的增殖、侵袭、迁移,促进其凋亡,并呈剂量依赖性,其作用可能与其调控miR-1307的表达有关。

骨肉瘤外泌体miR-1307与骨肉瘤细胞的增殖和凋亡

背景:研究表明骨肉瘤的发生与多种miRNAs的异常表达有关,外泌体miRNA在细胞内通讯中受到越来越多的关注。目的:探讨骨肉瘤细胞来源外泌体miR-1307对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:购买人骨肉瘤细胞系(143B、MG63、U2OS、Saos-2和SW1353)和人正常成骨细胞系(hFOB 1.19)。通过qRT-PCR实验检测miR-1307在5种骨肉瘤细胞系和正常成骨细胞系中的表达水平,最终选择SW1353作为此次骨肉瘤细胞功能验证的细胞系。培养SW1353骨肉瘤细胞和正常成骨细胞,通过差速离心法提取骨肉瘤细胞外泌体和正常成骨细胞外泌体,然后将miR-1307 inhibitor、miR-NC mimic转染至SW1353骨肉瘤细胞和正常成骨细胞,再提取SW1353骨肉瘤细胞外泌体和正常成骨细胞外泌体。取25 mg/L上述外泌体加入SW1353骨肉瘤细胞中干预24 h,采用CCK-8实验和流式细胞术观察骨肉瘤细胞的增殖和凋亡情况,使用Targetscan、MiRBase和miRDIP数据库在线预测miR-1307的靶基因,通过荧光素酶报告基因实验测定荧光素酶活性。使用qRT-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞中AGAP1的mRNA和蛋白表达水平。结果与结论:①与hFOB 1.19成骨细胞外泌体相比,SW1353骨肉瘤细胞外泌体明显促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡(P<0.01);与SW1353骨肉瘤细胞外泌体相比,SW1353骨肉瘤细胞外泌体中miR-1307下调后,对SW1353骨肉瘤细胞的增殖作用明显降低而凋亡率明显升高(P<0.01);②AGAP1被验证为miR-1307的直接靶基因,过表达miR-1307骨肉瘤细胞的AGAP1 mRNA和蛋白表达水平均明显低于miR-NC组(P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-1307明显抑制野生型PGLO-AGAP1-WT 3'-UTR的荧光素酶活性(P<0.05);③结果表明,SW1353骨肉瘤细胞外泌体miR-1307通过靶向AGAP1促进SW1353骨肉瘤细胞的增殖并抑制凋亡。

miR-1307-3p通过靶向ISM1促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的探讨miR-1307-3p通过靶向ISM1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法 (1)利用TCGA数据库分析miR-1307-3p在乳腺癌患者中的表达水平及其与临床指标的关系。(2)利用qPCR、CCK-8实验、细胞划痕实验和流式细胞术检测过表达或沉默miR-1307-3p后乳腺癌MCF-7细胞miR-1307-3p表达、细胞增殖、迁移和凋亡水平变化。(3)生物信息学分析软件预测miR-1307-3p的靶基因,同时采用双荧光素酶实验进行验证。结果miR-1307-3p在乳腺癌细胞及乳腺癌组织中均显著上调。miR-1307-3p过表达可促进MCF-7细胞增殖和迁移;而miR-1307-3p inhibitor则抑制细胞迁移,并诱导凋亡。ISM1可能是miR-1307-3p的靶基因。乳腺癌组织中ISM1表达水平明显低于正常乳腺组织,且与临床病理分期有关。结论 miR-1307-3p可促进乳腺癌细胞增殖和迁移,可能通过调控ISM1基因而影响乳腺癌的发生发展。

乳腺癌患者血清miR-325、miR-641、miR-1307水平与临床病理特征、复发的关系

目的探讨乳腺癌(BC)患者血清微小RNA-325(miR-325)、miR-641、miR-1307表达水平及其与临床病理特征、复发的关系。方法选取西安交通大学第一附属医院2018年3月至2020年3月期间收治的198例BC初诊患者(BC组)作为研究对象;另选取同期于西安交通大学第一附属医院就诊的86例乳腺良性病变患者作为对照组。检测各组血清中miR-325、miR-641、miR-1307的表达情况;Cox回归分析影响BC患者术后复发的风险因素;绘制ROC曲线评估血清miR-325、miR-641、miR-1307表达水平对BC复发的预测价值。结果与对照组相比,BC患者血清miR-325、miR-641表达水平降低,miR-1307表达水平升高(均P<0.05),且三者表达水平与TNM分期、淋巴结转移具有相关性(P<0.05);复发组BC患者血清miR-325、miR-641表达水平低于未复发组,miR-1307表达水平高于未复发组(均P<0.05);miR-1307表达是BC患者术后复发的危险因素,miR-325、miR-641为保护因素(均P<0.05),三者联合预测BC复发的AUC为0.935,联合预测效果优于单独预测(P<0.05)。结论BC患者血清miR-325、miR-641、miR-1307表达水平与TNM分期、淋巴结转移有关,且其表达水平与BC复发密切相关。

血清miR-1307-5p在乳腺癌中的临床意义及生物信息学分析

目的探讨miR-1307-5p在乳腺癌(BC)的表达及对乳腺癌发生发展的影响,评估其作为诊治的血清生物标志物的依据。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载乳腺癌的癌组织及癌旁组织miRNA表达数据,筛选差异表达miRNA。利用TargetScan,miRWalk,miRDIP数据库预测靶基因,并进行GO功能和KEGG信号通路分析。STRING在线软件分析蛋白之间的相互作用;Cytoscape软件筛选关键基因。利用TIMER数据库分析肿瘤组织和正常组织中关键基因的表达水平、关键基因表达水平与肿瘤浸润免疫细胞的相关性。通过受试者工作特征(ROC)曲线评估miRNA的诊断效能。结果共发现158个差异表达miRNA,其中miR-1307-5p差异最明显(log FC>3),其靶基因功能富集于细胞内信号转导、大分子修饰、细胞蛋白修饰、蛋白质修饰等生物学过程。KEGG通路分析显示,miR-1307-5p显著富集在cGMP-PKG,NF-κB,VEGF等癌症相关信号转导通路。蛋白互作网络筛选得到5个关键基因:LYN,PRKCE,DICER1,PIP5K1C和MAPK13。这5个关键基因在乳腺癌组织及邻近组织中异常表达,差异均有统计学意义。乳腺癌中LYN表达与肿瘤浸润性免疫细胞相关。miR-1307-5p在乳腺癌患者血清中的表达水平明显升高(P<0.01),且与淋巴结转移密切相关(P<0.01),而与年龄、肿瘤大小、分期等无关(P>0.05)。miR-1307-5p水平诊断乳腺癌的AUC为0.904,灵敏度为0.90,特异度为0.76,其诊断效能优于传统肿瘤标志物。结论miR-1307-5p可能通过靶基因参与相关信号通路,在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用。它在乳腺癌中高表达且与淋巴结转移密切相关,有望成为乳腺癌诊治的生物标志物。

血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的关系及其诊断价值分析

目的:探讨卵巢癌患者血浆外泌体中微小RNA(miR)-1290和miR-1307的表达,分析两者与临床病理参数的关系及诊断价值。方法:选取2019年1月至2021年1月于靖江市人民医院诊治的60例卵巢癌患者为卵巢癌组,另分别选取同期52例良性卵巢肿瘤患者和50例女性健康体检者为良性肿瘤组和健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-1290、miR-1307在各组血浆外泌体中的表达,分析miR-1290、miR-1307与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆外泌体miR-1290、miR-1307对卵巢癌的诊断效能。结果:与良性肿瘤组和健康对照组相比,卵巢癌组的血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平较高(P<0.05)。卵巢癌组的miR-1290表达水平与FIGO分期、分化程度及淋巴结转移有关,miR-1307表达水平与FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05);卵巢癌患者血浆外泌体miR-1307表达与miR-1290表达呈显著正相关(r=0.478,P<0.05)。血浆外泌体miR-1290、miR-1307联合应用诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)(0.95CI)为0.726(0.526~0.926),高于两指标单独应用的0.724(0.466~0.987)、0.845(0.750~0.933)。结论:卵巢癌患者血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平升高,两者联合检测对卵巢癌的早期诊断具有较高的价值,有望成为新的卵巢癌的分子标志物。

miR-1307在猪卵巢颗粒细胞周期中的作用

为了解猪miR-1307序列和结构特征,阐明其在猪卵巢颗粒细胞周期中的作用,利用生物信息学方法分析猪miR-1307的序列特征、染色体定位和潜在的生物学功能;在体外培养的猪卵巢颗粒细胞中转染miR-1307模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor),利用流式细胞术检测细胞周期。结果显示:猪miR-1307前体序列长度为80 bp,其核苷酸序列(包括成熟序列和种子序列)和基因组定位等与哺乳动物其他物种高度一致;功能富集分析发现miR-1307靶基因富集在rRNA分解代谢进程和蛋白酪氨酸磷酸酶活性等多个重要的生物学进程和分子功能中;在猪卵巢颗粒细胞中,过表达miR-1307可使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例显著降低(P<0.05);抑制miR-1307可使G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例显著增加(P<0.05)。结果表明:miR-1307是猪卵巢颗粒细胞周期的重要调节因子。

耐药及敏感卵巢癌组织与细胞系中microRNA的表达及意义

[目的]探讨miR-1307的差异表达对卵巢癌紫杉醇耐药性的影响。[方法]Realtime PCR方法研究20例化疗耐药卵巢癌与20例化疗敏感卵巢癌组织及耐药与敏感卵巢癌细胞系(SKOV3-TR30和SKOV3)中miR-1307的表达情况;生物信息学方法预测miR-1307可能的靶基因及其靶基因的GO功能分析及通路分析。[结果]miR-1307在化疗耐药卵巢癌组织及细胞系中表达水平显著高于敏感组织及细胞系中,并且具有显著性(P<0.05,P<0.0001),其表达与卵巢癌患者绝经与否、手术病理分期、组织学分级及有无淋巴结转移无明显相关性(P>0.05);通过生物信息学分析,miR-1307的预测靶基因共124个,可能参与的生物学过程461个,分子功能80个,参与的信号通路15个。[结论]miR-1307与卵巢癌化疗耐药有关,可能通过相关的靶基因及其参与的生物学过程调节卵巢癌耐药。