MicroRNA-183基因簇对癌症诊断和调控机制的研究进展

MicroRNA-183基因簇是包括miR-183、miR-96和miR-182在内的一类非编码RNA中的microRNA基因簇。近年来,研究发现它们在一些癌症、神经紊乱和自身免疫失调等疾病中异常表达,尤其在一些肿瘤中高表达而促进癌症的发生发展。因此,microRNA-183基因簇能为癌症的治疗和诊断提供强有力的靶点和研究方向。现综述近年来microRNA-183基因簇在常见恶性肿瘤中作为肿瘤生物标志物,及其在癌症中调控机理的研究进展,为microRNA-183基因簇在癌症的临床应用提供方向。

microRNA-183调节 FOXO1 对听觉毛细胞再生作用机制研究

目的探讨microRNA-183(miR-183)对斑马鱼内耳生长发育的影响,及其在顺铂损伤内耳神经丘毛细胞及耳囊、耳石后的再生和生长发育中的作用。方法利用显微注射技术向斑马鱼受精卵内分别注入miRNA模拟物(agomir)或反义吗啉寡核苷酸(MOs),初步构建miR-183过表达或低表达模型,然后将受精后第72 h斑马鱼浸泡在50μmol/L顺铂溶液中24 h完成最终建模。利用miRNA微阵列分析、RT-qPCR等技术检测miR-183和FOXO1基因表达的改变;通过FM1-43FX荧光染色了解内耳神经丘毛细胞损伤及再生情况;使用正置显微镜观察耳囊、耳石生长发育变化。结果①顺铂作用后斑马鱼内耳毛细胞受损且耳囊、耳石生长发育受阻;移除顺铂后内耳毛细胞可再生,耳囊、耳石生长发育也逐渐恢复。②miR-183在移除顺铂后被激活,是斑马鱼幼体miRNA中最有表达差异的成员之一(P<0.001),且表达量持续上调至峰值后逐渐恢复至正常水平。③与对照组相比,移除顺铂后过表达miR-183组可促进内耳毛细胞数量和耳囊耳石面积的恢复(P<0.01);低表达miR-183组则使其恢复受到抑制(P<0.05)。④移除顺铂作用后FOXO1被激活,表达量上调(P<0.01);当过表达miR-183时FOXO1受到抑制,表达下调(P<0.01);低表达miR-183时FOXO1则表达量上升(P<0.01)。结论miR-183与移除顺铂作用后内耳毛细胞的再生、耳囊耳石面积生长发育的恢复呈正向调控关系,其机制可能与miR-183对FOXO1的负向调控有关。

MiR-183基因簇对动物感觉器官功能和发育及肿瘤发生的调控

MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约为22 nt的内源性非编码小RNA.它们在后生动物基因组中普遍存在,通过抑制靶基因mRNA的翻译或将其降解,在转录后水平调控基因的表达.越来越多的证据表明,miRNAs在动物发育和人类疾病发生中发挥重要作用.miR-183基因簇在后口动物和原口动物中高度保守,编码miR-182、miR-96和miR-183.miR-183基因簇在动物感觉器官中特异性表达,对动物感觉器官的发育和功能至关重要.miR-183基因簇还与人类的肺癌、肝癌、乳腺癌、胰腺癌和黑色素瘤等多种癌症相关.miR-183基因簇在多种肿瘤细胞中异常表达,它们通过调控与肿瘤细胞分裂和死亡相关基因,而起到促进或抑制肿瘤发生的作用.本文对miR-183基因簇miRNAs在动物感觉器官功能和发育及人类肿瘤发生中的作用进行论述.

MiR-183/182/96基因簇在食管鳞癌组织中的表达变化及意义

目的观察miR-183/182/96基因簇在食管鳞癌组织中的表达变化并探讨其意义。方法取32例食管鳞癌组织、21例食管高级别上皮内瘤变组织、9例食管低级别上皮内瘤变组织,每例患者均取其病变组织及距病变组织5 cm外的正常食管组织各1份。采用Taq-Man qRT-PCR法检测组织中miR-183、miR-182、miR-96的表达。结果miR-183、miR-182在食管鳞癌及正常食管组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05),miR-183在食管高级别上皮内瘤变及正常食管组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05),而miR-182在食管高级别上皮内瘤变及正常食管组织中的表达差异无统计学意义,miR-183、miR-182在食管高级别上皮内瘤变、低级别上皮内瘤变组织间的表达差异无统计学意义,在食管低级别上皮内瘤变及正常食管组织中的表达差异无统计学意义;miR-96在食管鳞癌组织、食管高级别上皮内瘤变组织、食管低级别上皮内瘤变组织中的表达差异均无统计学意义。结论 miR-183/182/96基因簇中miR-183在食管鳞癌组织、食管高级别上皮内瘤变组织中的表达上调,检测miR-183/182/96基因簇表达有助于食管鳞癌的早期筛查。

MicroRNA-183-5p在动脉粥样硬化患者中的表达及其临床意义

目的分析microRNA-183-5p(miR-183-5p)在动脉粥样硬化患者中的表达及其临床意义。方法选取2021年1月—2022年8月四川省人民医院收治的经血管造影确诊的103例动脉粥样硬化患者为研究组,选取同期该院年龄相当的90例健康体检者为健康组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组患者血清miR-183-5p的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-183-5p在动脉粥样硬化中的诊断价值。结果研究组血清miR-183-5p mRNA相对表达量高于健康组(P<0.05);研究组中高Gensini积分组患者血清miR-183-5p mRNA相对表达量高于低Gensini积分组(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,miR-183-5p与C反应蛋白、颈动脉内中膜厚度及Gensini积分呈正相关(r=0.664、0.571和0.712,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-183-5p诊断动脉粥样硬化的截断值为2.08,敏感性和特异性分别为87.8%(95%CI:0.832,0.924)和91.6%(95%CI:0.877,0.955)。结论动脉粥样硬化患者血清miR-183-5p高表达,能够辅助区分冠状动脉狭窄程度,可作为动脉粥样硬化临床诊断的重要生物标志物。

MicroRNA-183对急性主动脉夹层细胞外基质重塑的作用及其机制研究

目的探讨microRNA-183(miR-183)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在急性主动脉夹层(AAD)中的表达水平及其参与调节平滑肌细胞细胞外基质(ECM)的机制。方法收集20例确诊为AAD的组织标本作为AAD组,20例无主动脉病变的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者的组织标本作为NC组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测检测miR-183、MMP-9蛋白相对表达量。将人主动脉平滑肌细胞(HASMC)分为3组:Mimic组、Inhibitor组和对照组;Mimic组用miRNA-183 mimic转染HASMC;Inhibitor组用miRNA-183 inhibitor转染HASMC,对照组未做处理。采用qRT-PCR和Western blotting检测miR-183、MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白及其底物弹性蛋白(Elastin)的表达。结果AAD组miRNA-183相对表达量低于NC组(P<0.05),而MMP-9蛋白相对表达量高于NC组(P<0.05)。与对照组比较,Mimic组miRNA-183、Elastin升高(P<0.05),MMP-9 mRNA和蛋白降低(P<0.05);Inhibitor组miRNA-183、Elastin降低(P<0.05),MMP-9 mRNA和蛋白升高(P<0.05)。结论miR-183可能通过调控平滑肌细胞中MMP-9的表达,参与平滑肌细胞ECM的重塑过程,促进AAD的发生、发展。

MicroRNA-183家族在肿瘤中的异常表达及其机制研究进展

MicroRNA-183(miRNA-183,miR-183)家族基因位于人类7号染色体,作为高度保守的miRNA家族成员,已有多项研究证实其与肿瘤的发生存在关联。该文总结了miR-183家族在不同肿瘤中表达变化的机制,以及其对肿瘤增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的调控机制,为miR-183家族作为肿瘤标志物单独及联合其他指标检测对肿瘤的诊断及预后价值提供依据。

MicroRNA-183抑制结直肠癌肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移

目的:探讨microRNA183 (miRNA-183)对结直肠癌肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:使用慢病毒技术,分别转染HT29细胞株,建立稳定过表达细胞株miRNA-183 mimics,抑制miRNA-183表达的稳定细胞株miRNA-183 inhibitor以及阴性对照组negative control。qRT-PCR检测各组细胞miRNA-183的表达,Western blot检测miRNA-183下游靶基因PDCD4蛋白水平表达变化,CCK8增殖实验检测各组细胞的增殖情况,同时以划痕实验和Transwell实验分析转染miRNA-183 mimics和miRNA-183 inhibitor对HT29细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:与阴性对照组相比,miRNA-183 mimics组细胞增殖速度明显下降,其迁移和侵袭能力也显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-183下游靶基因PDCD4蛋白水平表达明显增加。结论:miRNA-183可有效地抑制结直肠癌肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移。

microRNA-183通过调控心肌细胞线粒体凋亡改善心力衰竭的作用和机制的研究

研究microRNA-183对盐酸阿霉溶液诱导的大鼠心衰模型的改善作用及机制,为其临床应用提供药理学依据。方法:比较健康志愿者和心力衰竭患者血清中microRNA-183表达水平;以盐酸阿霉溶液为诱导剂,建立大鼠心衰模型,测定心衰相关指标,判定microRNA-183对心衰的改善作用;比较正常组、模型组和microRNA-183模拟物组SD大鼠血清中microRNA-183表达水平;比较心肌细胞microRNA-183过度表达后凋亡比例和ROS水平。此外,通过荧光素酶报告基因法检测microRNA-183与激活转录因子2(activates transcription factor 2, ATF2)在心肌细胞中的结合水平;比较正常组、模型组和microRNA-183过表达、ATF2敲低组心肌细胞凋亡比例和ROS水平,初步揭示microRNA-18发挥作用的可能机制。结果:健康志愿者和正常组SD大鼠血清中microRNA-183表达较模型组显著降低;microRNA-183过表达显著降低心肌细胞凋亡比例和ROS水平;microRNA-183可与ATF2结合,microRNA-183过表达而ATF2敲低组较microRNA-183过表达组心肌细胞凋亡比例和ROS水平显著增加。结论:microRNA183可以与ATF2结合,减少ROS生成,保护线粒体,减少心肌细胞凋亡从而改善患者心力衰竭。

microRNA-183通过下调Bcl-2诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的研究

目的研究microRNA-183对神经母细胞瘤细胞的调控作用,为神经母细胞瘤的治疗提供新策略。方法购买microRNA-183和对照microRNA,转染至人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞,再使用MTT实验,Caspase-3活性测定试剂盒和流式检测细胞生长和凋亡的影响。合成Bcl-2siRNA,检测Bcl-2对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的影响。转染Bcl-2质粒后,再转染microRNA-183至人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞,分析Bcl-2的表达水平和人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞的凋亡。结果转染microRNA-183降低SK-N-SH细胞的生长(P=0.005 9),发生磷脂酰丝氨酸膜表面表达(P=0.008)和Caspase-3的激活(P=0.014),Bcl-2的表达降低(P=0.015)。干扰SK-N-SH细胞中Bcl-2增强了microRNA-183诱导的细胞凋亡(P=0.005 8),而过表达Bcl-2抑制了microRNA-183诱导的细胞凋亡(P=0.007 3)。结论转染microRNA-183抑制SK-N-SH细胞的生长和增殖。microRNA-183通过下调Bcl-2而诱导SK-N-SH细胞的凋亡,提示Bcl-2可能是神经母细胞瘤潜在的候选治疗靶点。

MiR-183抑制胶质母细胞瘤放射抵抗等恶性行为

目的:探讨miR-183对胶质母细胞瘤放射抵抗等恶性行为的调控作用及其机制。方法:利用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测15例胶质母细胞瘤及瘤周正常脑组织及4株胶质母细胞瘤细胞株(U87、U251、M059J、M059K)中miR-183表达水平;采用阳离子脂质体法瞬时转染构建miR-183过表达的细胞体系;应用MTT细胞增殖实验检测细胞增殖能力;利用平板克隆形成实验检测辐射敏感性;采用划痕实验和Transwell实验检测miR-183对胶质母细胞瘤细胞侵袭及迁移能力的调控作用;利用蛋白印迹(Western blot)实验检测miR-183对上皮间质转化(EMT)相关基因表达水平的调控作用。结果 :miR-183在胶质母细胞瘤及胶质母细胞瘤细胞株中低表达。随后通过构建过表达miR-183的细胞系,发现miR-183高表达状态的胶质母细胞瘤细胞对射线的敏感程度增加,增殖能力、迁移能力和侵袭能力都有所下降,而且上调了上皮细胞表型相关E-钙黏蛋白的表达,下调了间质细胞表型相关波形蛋白的表达。结论:miR-183可能通过抑制EMT过程从而影响胶质母细胞瘤的恶性行为。

食管鳞状细胞癌患者血清miRNA-183的表达及其诊断价值

目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophagealsquamouscellcarcinoma,ESCC)患者血清的microRNA-183(miRNA-183)水平变化、临床意义及其对ESCC的诊断价值。方法:选择中南大学湘雅二医院胸外科住院治疗的51例ESCC患者及55例健康体检者血清标本作为研究对象。采用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定血清标本miRNA-183表达水平;采用χ2检验及相关分析检测血清miRNA-183水平与ESCC临床及病理指标间的关联;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析miRNA-183及其联合癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)对ESCC的诊断效率。结果:1)MiR-183在健康体检者和ESCC患者中的相对表达量为(2.03±0.96)和(4.47±1.54),两者之间差异有统计学意义(t=9.700,P<0.01)。2)ESCC患者血清miR-183相对表达量在不同的肿瘤恶性程度分期中的差异有统计学意义(χ2=4.049;P<0.01);在不同性别、年龄、吸烟与否、饮酒与否、肿瘤部位、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度、分化程度上差异均无统计学意义(均P>0.05);miR-183的相对表达量与血清CEA表达无关(P>0.05)。3)采用ROC曲线分析,以miR-183相对表达量4.502为诊断ESCC的最佳临界值,灵敏度为78.9%,特异度为76.2%,ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.762,95%置信区间为0.830～0.922。联合检测血清miR-183与CEA诊断ESCC,灵敏度为82.3%,特异性为92.6%,AUC为0.877,95%置信区间为0.814～0.935。结论:ESCC患者血清miRNA-183水平出现上调,血清miRNA-183与CEA联合测定可提高对ESCC的诊断效率。血清miRNA-183水平与肿瘤TNM分期有关,这有助于肿瘤病情进展判断和疗效预测。

microRNA-93-5p联合在早期糖尿病肾病诊断中的研究

目的 研究尿视黄醇结合蛋白(RBP)、血微小RNA-183(microRNA-183)、微小RNA-93-5p(microRNA-93-5p)联合应用在诊断早期糖尿病肾病(DN)中的价值。方法 将医院2019.01-2021.01间收治的133例2型糖尿病(T2DM)患者纳为研究对象,根据其24 h尿蛋白排泄率(UAER)将其分为单纯糖尿病组(T2DM组,UAER≤30 mg/24 h,n=38)与早期DN组(30 mg/24 h300 mg/24h,n=49),并将同期50例健康体检合格者纳为对照组。检测所有被研究对象尿RBP、血microRNA-183、microRNA-93-5p水平,绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析尿RBP、血microRNA-183、microRNA-93-5p联合应用在诊断早期DN中的价值。结果对照组、T2DM组、早期DN组患者尿白蛋白/尿肌酐(UACR)水平均低于临床DN组。对照组、T2DM组患者UACR水平均低于早期DN组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。对照组及T2DM组尿RBP、血microRNA-183及microRNA-93-5p水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组尿RBP水平均低于早期DN组及临床DN组,血microRNA-183及microRNA-93-5p水平均高于早期DN组及临床DN组,且早期DN组尿RBP水平均低于临床组,血microRNA-183及microRNA-93-5p水平均高于临床DN组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析提示,尿RBP水平与UACR水平之间呈正相关,血microRNA-183、microRNA-93-5p水平与UACR呈负相关(P<0.05)。绘制ROC曲线发现,尿RBP、血microRNA-183及microRNA-93-5p在诊断早期DN中的AUC均超过0.75,其诊断价值均高于UACR,且尿RBP、血microRNA-183及microRNA-93-5p三者联合应用可有效提高各指标单独应用时的效能,提高早期DN诊断效果。结论 尿RBP、血microRNA-183及microRNA-93-5p在诊断早期DN中的效能均高于UACR,三者连个应用可成为诊断早期DN的潜在指标。

miR-183对滑膜肉瘤细胞株SW982转移潜能及EGR1表达影响研究

目的探讨微小RNA-183(miRNA-183)对人滑膜肉瘤细胞株SW982转移潜能的影响,并分析miR-183对早期生长反应因子1(early growth response,EGR1)表达影响的研究。方法培养人滑膜肉瘤细胞株SW982细胞,采用脂质体转染方法转染miR-183mimics、inhibitor和negative control,并分为miR-183 mimics模拟物组(mimics组),miR-183inhibitor抑制剂组(inhibitor组),miR-183negative control阴性对照组(NC)以及正常对照组(normal)。流式细胞术检测各组细胞转染效率;MTT法检测各组细胞转染前后细胞增殖率的改变;Transwell实验检验各组转染前后SW982细胞迁移和侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测各组转染前后EGR1蛋白表达量的变化;双荧光素酶报告基因实验验证EGR1是否为miR-183靶基因。结果转染miR-183mimics、inhibitor和negative control后,SW982细胞中miR-183的相对含量明显改变;与正常对照组(1.16±0.52)相比,mimics组(75.30±9.90)miR-183含量明显增加(P<0.001),inhibitor组(0.22±0.09)miR-183含量明显降低(P<0.001),NC组(1.06±0.98)miR-183含量无明显变化,P=0.637。MTT法测得转染后24、48、72和96h,SW982细胞增殖率无明显变化。Transwell实验结果显示,在迁移实验中,mimics组和inhibitor组穿膜细胞数分别为(108.61±4.94)和(54.36±4.03)个,P<0.001。在侵袭实验中,mimics组和inhibitor组穿膜细胞数分别为(79.13±5.77)和(20.87±3.17)个,P<0.001。在EGR1表达分析中,转染48h后mimics组中EGR1的相对表达量(286.59±32.77)较正常对照组(373.00±38.40)明显降低,P<0.001;inhibitor组中EGR1的相对表达量(496.93±42.61)较正常对照组明显增高,P=0.012;双荧光素酶报告基因实验表明,miR-183特异性靶向EGR1基因。结论转染miR-183mimics后,miR-183表达增加,SW982细胞转移潜能增强,EGR1表达降低;转染miR-183inhibitor后,miR-183表达降低,SW982细胞转移潜能降低,EGR1表达增加。EGR1可作为miR-183的潜在靶点。