结肠癌组织microRNA-223、FBXW7的表达及与其临床病理参数和预后的关系

目的研究结肠癌组织中microRNA-223(miR-223)、FBXW7的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法收集2015年1月—2017年4月钦州市第一人民医院146例经手术切除的结肠癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织中mi R-223、FBXW7表达。通过在线网站预测miR-223与FBXW7存在结合位点。Pearson法分析两者表达的相关性及其与临床病理参数的关系。根据结肠癌组织中miR-223、FBXW7表达的均值分为miR-223高表达组与miR-223低表达组,FBXW7高表达组与FBXW7低表达组。用Kaplan-Meier法绘制不同mi R-223、FBXW7表达结肠癌患者的生存曲线。多因素Cox回归分析结肠癌患者预后的影响因素。结果结肠癌组织miR-223 m RNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),FBXW7mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05)。病理分期Ⅲ期、有淋巴结转移结肠癌组织mi R-223mRNA相对表达量高于Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移(P<0.05);病理分期Ⅲ期、有淋巴结转移结肠癌组织FBXW7mRNA相对表达量低于Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及有无侵犯浆膜结肠癌组织miR-223、FBXW7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关系数分析显示,结肠癌组织miR-223表达与FBXW7表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。术后随访8~60个月,随访期间死亡35例,总生存率为76.03%(111/146)。miR-223高表达组总生存率低于mi R-223低表达组(P<0.05)。FBXW7高表达组总生存率高于FBXW7低表达组(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,侵犯浆膜[HR=1.454(95%CI:1.086,1.947)]、病理分期Ⅲ期[HR=1.744(95%CI:1.070,2.840)]、淋巴结转移[HR=2.896(95%CI:1.114,7.531)]、miR-223≥4.76[HR=2.196(95%CI:1.085,4.445)]为结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05),FBXW7≥1.23[HR=0.388(95%CI:0.172,0.875)]为保护因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,侵犯浆膜[HR=1.490(95%CI:1.154,1.924)]、病理分期Ⅲ期[HR=1.979(95%CI:1.132,3.460)]、淋巴结转移[HR=2.401(95%CI:1.015,5.677)]、miR-223≥4.76[HR=2.140(95%CI:1.063,4.309)]为结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05),FBXW7≥1.23[HR=0.625(95%CI:0.475,0.823)]为保护因素(P<0.05)。结论结肠癌组织mi R-223高表达、FBXW7低表达与结肠癌患者病理分期、淋巴结转移及预后有关。

microRNA-22抑制SIRT1表达对调控软骨细胞衰老的影响

目的研究microRNA-22在骨关节炎中对软骨细胞衰老的影响。方法原代培养人骨关节炎软骨细胞;软骨细胞转染microRNA-22模拟物、抑制物,通过MTT实验检测microRNA-22对于软骨细胞增殖活性的影响,通过半乳糖苷酶染色实验检测microRNA-22对于软骨细胞衰老的影响,通过Western blot检测microRNA-22对于靶基因SIRT1,以及细胞衰老标志物P16蛋白表达的影响。结果(1)与对照组软骨细胞相比,转染microRNA-22模拟物可显著抑制软骨细胞增殖速率,转染microRNA-22抑制物可促进软骨细胞增殖(P<0.01);(2)与对照组软骨细胞相比,转染microRNA-22模拟物可显著增加半乳糖苷酶染色阳性软骨细胞比例,促进软骨细胞衰老,转染microRNA-22抑制物可降低半乳糖苷酶染色阳性软骨细胞比例,减缓软骨细胞衰老(P<0.01);(3)与对照组软骨细胞相比,转染microRNA-22模拟物可显著抑制SIRT1蛋白表达水平,同时促进P16蛋白表达,转染microRNA-22抑制物可促进SIRT1蛋白表达,抑制P16蛋白表达水平(P<0.01)。结论在骨关节炎软骨细胞中,microRNA-22可抑制软骨细胞增殖,并通过抑制SIRT1蛋白表达、促进P16蛋白表达,促进软骨细胞衰老,从而在骨性关节炎的发生与进展中扮演了重要角色。

磁共振成像联合血清microRNA-221对前列腺癌的诊断价值

目的探讨磁共振成像(MRI)结合血清microRNA-221-221(miR-221)检测在前列腺癌诊断中的价值。方法回顾性分析2019年5月—2023年1月襄阳市中心医院收治的103例疑似前列腺癌患者的临床资料,将前列腺穿刺病理结果作为金标准。所有患者行磁共振弥散加权成像(MRI-DWI)、动态增强磁共振成像(MRI-DCE)及血清miR-221检测,分析MRI参数、miR-221诊断前列腺癌的价值。结果穿刺活检病理诊断结果显示,103例前列腺癌疑似患者中,73例诊断为前列腺癌。前列腺癌患者表现弥散系数(ADC)值低于非前列腺癌患者(P<0.05)。前列腺癌患者容积转运常数(K_(trans))高于非前列腺癌患者(P<0.05),前列腺癌与非前列腺癌患者的速率常数(K_(ep))、细胞外间隙对比剂容积分数(V_(e))比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。前列腺癌患者miR-221相对表达量高于非前列腺癌患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,ADC、K_(trans)、miR-221及3者联合诊断前列腺癌的敏感性分别为72.60%(95%CI:0.607,0.821)、69.86%(95%CI:0.578,0.798)、73.97%(95%CI:0.622,0.832)、82.19%(95%CI:0.711,0.898),特异性分别为80.00%(95%CI:0.609,0.916)、73.33%(95%CI:0.538,0.870)、70.00%(95%CI:0.504,0.846)、86.67%(95%CI:0.684,0.956),AUC分别为0.756(95%CI:0.651,0.860)、0.741(95%CI:0.633,0.848)、0.739(95%CI:0.631,0.846)、0.907(95%CI:0.842,0.972)。结论ADC、K_(trans)、miR-221联合诊断前列腺癌效能较高,3者联合诊断前列腺癌可提供更加精确可靠的量化参数。

高表达microRNA-22改善小鼠心肌梗死后心功能

目的观察高表达microRNA-22对小鼠心肌梗死后心功能的保护作用及机制。方法构建小鼠心肌梗死模型,用携带microRNA-22的腺病毒载体转染至心肌梗死周围区域,观察高表达microRNA-22对小鼠心肌梗死后心功能的保护作用。采用超声心动图检测心功能,力竭游泳检测运动能力,HE及Masson染色检测心肌微结构及纤维化,Western blot检测PTEN蛋白表达情况。结果高表达microRNA-22组小鼠左心室射血分数（LVEF）（49.38%±2.51%比42.29%±2.74%,P〈0.05）及短轴缩短率（FS）（24.24%±0.64%比22.59%±0.73%,P〈0.05）较空载腺病毒组升高,心脏收缩功能维持较好;高表达microRNA-22组力竭运动时间较空载腺病毒组延长（8.13±1.01min比7.02±1.32 min,P〈0.05）,小鼠整体运动能力改善;高表达microRNA-22组小鼠HE染色示心肌结构维持较好,Masson染色示心肌纤维化程度较轻;高表达microRNA-22组心肌梗死周围区域内microRNA-22表达增加（6.66±2.01比1.22±0.07,P〈0.05）,PTEN蛋白表达下降（0.63±0.19比2.23±0.44,P〈0.05）。结论小鼠心肌梗死后在体高表达microRNA-22改善心脏收缩功能及运动能力,改善心肌微结构,减轻心肌纤维化。

高表达microRNA-22对缺氧心肌细胞的保护作用及机制

目的观察高表达microRNA-22对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用及机制。方法用携带microRNA-22的腺病毒载体和空载体转染体外缺氧条件下培养的原代心肌细胞,检测高表达microRNA-22后心肌细胞生物学特性的改变。采用MTT检测细胞活力,EdU检测细胞DNA合成能力,Caspase-3检测细胞凋亡情况。结果表达microRNA-22的腺病毒载体成功转染原代心肌细胞,流式细胞仪检测绿色荧光蛋白阳性细胞比例>95%,高表达microRNA-22从蛋白水平显著下调PTEN表达。与空载腺病毒组相比,高表达microRNA-22组细胞核增殖明显增加,细胞生长更快,细胞活力增加,细胞凋亡减少。结论体外高表达microRNA-22能保护缺氧条件下的心肌细胞。

肺炎支原体肺炎患儿血清microRNA-21和microRNA-221水平变化及与炎症因子、T淋巴细胞亚群的相关性

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清microRNA-21(miR-21)和microRNA-221(miR-221)的水平变化及与炎症因子、T淋巴细胞亚群的关系。方法选取2017年1月—2019年1月邯郸市中心医院就诊的MPP患儿120例为研究对象(MPP组),另选取本院同期体检的健康儿童100例为对照组(CON组)。比较两组研究对象血清miR-21和miR-221的水平差异,并分析二者与患儿外周血中炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))之间的相关性。结果MPP组血清miR-21和miR-221水平高于CON组(P<0.05)。MPP组外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)低于CON组,而IL-6、IL-8、TNF-α的水平高于CON组(均P<0.05)。MPP组血清miR-21和miR-221与患者外周血CD3^(+)(r=-0.494和-0.656,P=0.037和0.014)、CD4^(+)(r=-0.621和-0.554,P=0.015和0.031)、CD8^(+)(r=-0.772和-0.476,P=0.003和0.043)、CD4^(+)/CD8^(+)(r=-0.545和-0.660,P=0.023和0.014)均呈负相关,而与TNF-α(r=0.787和0.619,P=0.000和0.015)、IL-6(r=0.530和0.598,P=0.035和0.029)、IL-8(r=0.665和0.614,P=0.012和0.017)均呈正相关。结论MPP患儿血清miR-21和miR-221水平升高,且与患儿T淋巴细胞亚群水平的降低、炎症因子水平的升高有一定的相关性,监测两者的水平变化有助于评估MPP患儿的免疫状态和炎症反应,并为合理制订治疗方案提供帮助。

microRNA-224在肝细胞癌组织和血浆中表达的相关性

目的探讨microRNA-224(miR-224)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者癌组织与血浆中表达的相关性。方法采用qRT-PCR检测20例HCC患者的癌组织、癌旁组织、术前血浆及20例健康人血浆的miR-224表达量,比较癌组织与癌旁组织、HCC患者与健康人血浆miR-224的表达差异,分析miR-224在HCC血浆与癌组织中表达的相关性。结果①miR-224在HCC癌组织、癌旁组织、血浆及健康人血浆中的平均表达量分别为(0.14±0.04)、(0.02±0.01)、(1.15±0.26)和(0.11±0.03)。癌组织miR-224表达量高于癌旁组织(P<0.01),HCC患者血浆miR-224表达量高于健康人血浆(P<0.01);②miR-224在HCC血浆及相应癌组织中的相对表达量呈正相关(P<0.001)。结论 HCC血浆miR-224表达量高于健康人群,并与肝癌组织表达量呈正相关,血浆miR-224有可能成为一种新的血清学指标用于肝癌诊断。

MicroRNA-221通过抑制CDKN1C/p57表达促进结肠癌细胞增殖

目的探讨microRNA-221(MIR221)对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响。方法常规培养人结肠癌Caco2细胞系,预先给予或不给予CDKN1C/p57干扰性小RNA(anti-p57-siRNA)处理,再以脂质体分别转染MIR221前体(pre-MIR221)或MIR221特异性抑制剂(anti-MIR221)寡核苷酸,应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测Caco2细胞中MIR221表达状况,运用半定量RT-PCR及Western-blot分析CDKN1C/p57 mRNA及蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞的增殖状态;构建pGL3-p57荧光素酶报告载体并与pre-MIR221或anti-MIR221共转染Caco2细胞,检测转染细胞中荧光素酶活性变化。结果 Caco2细胞转染pre-MIR221后,CDKN1C/p57蛋白表达水平下降,细胞增殖显著(P<0.01);而anti-MIR221可上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖,且此种抑制作用可被anti-p57-siRNA逆转,说明此种抑制效应确由CDKN1C/p57所介导;在转染重组有CDKN1C/p57基因3'-UTR片段的荧光素酶报告载体的Caco2细胞中,共转染pre-MIR221后荧光素酶活性下降,而共转染anti-MIR221后荧光素酶活性增高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 MIR221可通过与CDKN1C/p57 mRNA 3'-UTR区域结合使结肠癌细胞中CDKN1C/p57蛋白表达下降而促进肿瘤增殖;anti-MIR221则可通过上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应。

microRNA-224通过调节Bim影响人非小细胞肺癌的增殖与凋亡

目的:研究microRNA-224(miR-224)在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及对NSCLC细胞增殖能力和凋亡的影响。方法:采用荧光实时定量PCR(q PCR)检测20对NSCLC组织与癌旁组织中miR-224的表达量,以及miR-224在NSCLC细胞A549与正常肺支气管上皮细胞中的表达量,并计算差值;转染anti-miR-224至A549细胞,q PCR检测anti-miR-224的转染效率;四甲基偶氮唑盐(MTT)实验及克隆形成实验检测miR-224对A549细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测细胞周期及凋亡;荧光素酶报告实验证实miR-224与靶基因Bim的结合;q PCR及Western blot检测转染anti-miR-224后A549细胞中Bim的表达量。结果:与癌旁正常组织相比,miR-224在NSCLC组织及细胞中均显著高表达(P<0.05);抑制miR-224能够显著抑制A549细胞的增殖能力并促进凋亡,并促进了Bim的表达。结论:miR-224在NSCLC中呈高表达,miR-224能够通过调控Bim抑制A549细胞的增殖能力并诱导凋亡。

MicroRNA-224-5p在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨microRNA-224-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:提取70例NSCLC和20例正常肺组织的总RNA,采用茎环逆转录-荧光定量聚合酶链反应检测microRNA-224-5p的相对表达量。结果 :Micro RNA-224-5p在NSCLC组织表达量明显上调,microRNA-224-5p在NSCLC中的表达量与患者的TNM分期及淋巴结转移有关,TNM分期越晚表达量越高,淋巴结转移的患者中microRNA-224-5p的表达量也上调,ROX曲线显示,其评价NSCLC患者是否发生转移敏感性为82.7%、特异性为77.8%。结论:Micro RNA-224-5p在NSCLC中的表达上调,可能作为一个癌基因参与NSCLC的发生、发展和转移。

神经胶质瘤患者脑脊液microRNA-221水平的测定及意义

目的探讨microRNA-221(miR-221)在神经胶质瘤患者脑脊液中的水平及其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测49例神经胶质瘤患者及40例健康人脑脊液中miR-221的水平,分析miR-221与病理分级间的关系。结果神经胶质瘤患者脑脊液中miR-221水平与对照组相比明显升高,差异具有统计学意义(0.68±0.10 vs0.47±0.07,P<0.01);神经胶质瘤患者脑脊液中miR-221水平随着病理分级增加有所增高,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论神经胶质瘤患者脑脊液中miR-21水平增高,miR-221可能参与了胶质瘤的发生、发展过程。

MicroRNA-224靶向CNNM1抑制前列腺癌血管生成的实验研究

目的研究microR NA-224(miR-224)对前列腺癌生化复发及血管生成的影响。方法生物信息学分析及荧光素酶报告实验预测细胞周期调节蛋白1(CNNM1)受miR-224负性调控。Taylor前列腺癌数据库分析、验证CNNM1、miR-224的表达关系及其与前列腺癌生化复发的相关性。前列腺癌PC3细胞体外培养及动物体内成瘤实验研究CNNM1、miR-224表达对前列腺癌微血管生成标志物CD31的影响。结果 CNNM1表达受miR-224靶向调节,前列腺癌组织中CNNM1与miR-224的表达呈负相关(P<0.05)。miR-224与前列腺癌的生化复发呈负相关(P<0.05),CNNM1与前列腺的生化复发呈正相关(P<0.05);在过表达miR-224的PC3细胞株内,CNNM1和CD31的表达量下降;CNNM1过表达能促进CD31的生成。前列腺癌细胞裸鼠体内成瘤组织免疫组织化学法染色提示,miR-224过表达能抑制前列腺癌组织内微血管形成。结论 miR-224通过靶向调控CNNM1表达,抑制前列腺癌微血管形成,控制前列腺癌生化复发。

microRNA-221在结直肠癌中的表达及其对癌细胞迁移的影响

目的研究上皮-间质转化(EMT)相关的微小RNA(micro RNA,以下简称miRNA)-221在结直肠癌患者中的表达水平,并探索其对结直肠癌细胞迁移水平的影响。方法选取该院40例结直肠癌患者为研究组,选取同期体检的40例健康人群为对照组。采用实时定量RT-PCR法检测结直肠癌患者癌组织以及癌旁组织中mi RNA-221表达水平,同时对比结直肠癌患者及正常人血浆中miRNA-221表达水平。对结直肠细胞采用miRNA-221的mimic及inhibitor分别高、低表达miRNA-221后,采用transwell法分别检测细胞的侵袭水平以及EMT相关蛋白表达。结果 miRNA-221在直肠癌组织的表达水平显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);mi RNA-221在直肠癌患者血浆中的表达水平显著高于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰结直肠癌HT-29细胞株中miRNA-221后,结直肠癌细胞迁移能力显著降低(均P<0.05),且细胞中EMT相关的上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达水平降低;而过表达HT-29细胞株中mi RNA-221,结直肠癌细胞迁移能力显著增加,且细胞中EMT相关的上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达水平增加。结论结直肠癌患者高表达的miRNA-221通过促进结直肠癌细胞的迁移水平来参与结直肠癌发生发展的进程。

难治性癫痫患者神经调节蛋白1、microRNA-221-3p表达与认知功能的关系

目的探讨难治性癫痫患者血清神经调节蛋白1(NRG1)、microRNA-221-3p(miR-221-3p)表达水平与认知功能障碍(CD)的关系。方法选取64例难治性癫痫患者(难治性癫痫组)和58例抗癫痫药物控制良好患者(药物控制良好组)作为研究对象,另选取同期本院70例健康体检者纳入对照组。采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估难治性癫痫患者的认知功能受损程度,并根据MoCA总分将难治性癫痫患者分为CD组40例和非CD组24例。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-221-3p水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清NRG1水平,并采用Pearson相关性分析探讨miR-221-3p、NRG1水平与MoCA总分的相关性,采用多因素Logistic回归分析探讨难治性癫痫患者发生CD的影响因素。结果难治性癫痫组血清miR-221-3p、NRG1水平高于对照组、药物控制良好组,差异有统计学意义(P<0.05);CD组血清miR-221-3p、NRG1水平高于非CD组,MoCA总分、空间与执行能力评分、语言评分、延迟记忆评分、计算力与定向评分低于非CD组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,难治性癫痫CD患者血清miR-221-3p、NRG1水平均与MoCA总分呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,NRG1、miR-221-3p均为难治性癫痫患者发生CD的影响因素(P<0.05)。结论难治性癫痫合并CD患者血清miR-221-3p、NRG1水平较高,且miR-221-3p、NRG1均与难治性癫痫患者CD进程密切相关。

microRNA-22-3p低表达上调幼年哮喘气道重塑大鼠的NK1R表达

目的探讨幼年哮喘气道重塑大鼠的microRNA-22-3p(miR-22-3p)表达水平和神经激肽受体1(NK1R)表达水平的相关性。方法将48只Wistar大鼠分为对照组、模型组、模型+mimic组、模型+mimic-NC组、模型+inhibitor组、模型+inhibitor-NC组。对照组注射生理盐水并吸入空气;模型组应用卵白蛋白(OVA)雾化吸入法建立哮喘大鼠模型;模型+mimic组、模型+mimic-NC组、模型+inhibitor组、模型+inhibitor-NC组,在大鼠每次激发前1 h内分别尾静脉注射1 mL的mimic、mimic-NC、inhibitor、inhibitor-NC。H&E染色法观察小鼠气道重塑变化,RT-qPCR检测miR-22-3p的水平变化。荧光素酶基因报告检测方法在大鼠气道平滑肌细胞RASMCs中验证miR-22-3p靶向NK1R。使用Western blot和免疫组织化学法检测NK1R的表达水平。结果与对照组比较,模型组发生明显的气道重塑现象,且气道组织中miR-22-3p水平降低(P<0.05)。在RASMCs细胞中,NK1R的3′UTR和miR-22-3p的直接结合,导致荧光素酶活性强度降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组的NK1R的mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P<0.01)。与模型+mimic-NC组比较,模型+mimic组miR-22-3p的水平上调,而NK1R的表达下调(均P<0.05)。与模型+inhibitor-NC组比较,模型+inhibitor组miR-22-3p的水平下调,而NK1R水平上调(均P<0.05)。结论哮喘诱发大鼠气道NK1R的表达增加,miR-22-3p直接靶向调节抑制哮喘大鼠气道重塑中NK1R的表达水平,下调miR-22-3p解除对NK1R的抑制从而上调NK1R水平。

X线辐射剂量对结直肠癌细胞中microRNA-221和p57^(kip2)表达的影响

目的探讨不同剂量X线辐射对人结直肠癌Caco2细胞系中microRNA-221(miR-221)和p57kip2表达的影响。方法常规培养Caco2细胞系并分为5组,分别给予不同剂量X线(0、2、4、6和8 Gy)照射,24 h后提取细胞总RNA和蛋白质,应用real-time Q-PCR检测细胞中miR-221和p57kip2mRNA的表达水平,Western blot检测p57kip2蛋白的表达变化。结果 Caco2细胞系在不同照射剂量下,miR-221表达水平随着照射剂量的增加而增加,而p57kip2蛋白表达水平则随着照射剂量的增加而逐步降低,且呈剂量依赖效应,两者差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论放射线辐射剂量可影响结直肠癌细胞中miR-221/p57kip2调控通路,抑制miR-221表达可能会提高结直肠癌细胞的放射敏感度。

MicroRNA-223表达与肝癌根治性切除术预后的相关性

目的识别可以作为肝癌根治性切除术患者预后标志物的microRNA(miRNA)分子。方法利用miRNA微阵列方法对2例原发性肝癌及对应的肺转移性肝癌进行miRNA表达分析。将原发性和转移性肝癌中表达量有2倍差异的miRNAs作为候选miRNAs分子。在miRNA验证过程中,运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析37例肝癌及相应癌旁非肿瘤组织中候选miRNAs分子的表达,并将其与患者的临床病理特征及生存情况进行相关性分析。结果最终选取8种miRNA(smiR-27b、122、142-5p、196a、223、590-5p、630及944)作为候选miRNA。只有miR-223表达水平与肿瘤分期、有丝分裂指数相关。将肝癌患者分为miR-223高表达组(25例)和miR-223低表达组(12例)后发现,miR-223高表达与较高T分期、淋巴结转移、较高丝分裂指数及较高Ki-67阳性指数相关。此外,miR-223高表达还与总体生存率和无病存活率下降相关(P<0.05),中位随访时间37.9个月[疾病复发危险比为16.267(95%CI:1.732,153.789)P=0.015]。结论肝癌组织中miR-223异常表达与肝癌患者治疗结束后发生复发转移,以及无病生存时间和总生存率有关,通过检测肿瘤组织中miR-223 qRT-PCR反应有可能预测患者预后。

microRNA-223对糖基化终产物诱导人脂肪间充质干细胞凋亡和氧化应激影响的体外研究

目的观察microRNA-223(miR-223)对糖基化终产物(AGE)诱导人脂肪间充质干细胞(h ADSC)凋亡和氧化应激的影响。方法采用酶消化法分离培养h ADSC,并应用流式细胞术对表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)进行检测。将h ADSC分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)作用组、miR-223模拟物转染组、miR-223模拟物转染+AGE-BSA组、miR-223抑制物转染组和miR-223抑制物转染+AGE-BSA组。应用CCK-8法和TUNEL染色检测各组细胞存活率和凋亡率,Western blot检测Cleaved Caspase3蛋白表达水平,应用双氯荧光素(DCFH-DA)试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)含量。结果流式细胞术检测结果表明,原代培养的h ADSC高表达CD14、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和HLADR。CCK-8法、TUNEL染色、Western blot和DCFH-DA法检测结果表明,与BSA对照组相比,AGE-BSA作用组h ADSC凋亡率、miR-223表达水平、Cleaved Caspase3蛋白表达水平、ROS生成显著升高,而细胞存活率下降(P<0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223模拟物转染能够进一步上调AGE-BSA引起的h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,下调AGE-BSA引起的h ADSC存活率减少(P<0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223抑制物转染能够抑制h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,拮抗AGEBSA引起的h ADSC存活率减少(P<0.05)。结论 miR-223高表达能够促进AGE-BSA引起的h ADSC细胞凋亡和ROS生成,其可能作为调控h ADSC促进糖尿病创伤愈合的新靶点。

microRNA-224对缺氧诱导结肠癌细胞凋亡的影响

目的:通过结肠癌细胞实验检测microRNA-224在结肠癌发生发展过程中的作用。方法:建立缺氧导致结肠癌细胞凋亡的模型,细胞计数盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测结肠癌细胞活力;Annexin/PI流式细胞术检测结肠癌细胞凋亡率的变化。Annexin/PI流式细胞术检测转染microRNA-224后结肠癌细胞凋亡的变化。蛋白免疫印迹检测转染microRNA-224后凋亡蛋白Caspase-3的变化。结果:凋亡率在缺氧的结肠癌细胞组高于正常结肠癌细胞组(P<0.05);缺氧诱导凋亡组转染microRNA-224后凋亡率低于空质粒对照组(P<0.05);在缺氧诱导凋亡组中转染microRNA-224,凋亡相关蛋白Caspase-3的表达低于对照组(P<0.05)。结论:microRNA-224可抑制结肠癌细胞凋亡,结肠癌细胞的凋亡失衡在结肠癌的发生发展过程中具有重要意义。

粪便microRNA-221对早期结直肠癌检出的意义

目的:探讨micro RNA-221在早期结肠癌患者粪便中的表达情况,并研究其作为早期结直肠癌以及癌前病变分子诊断标志物的可行性。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测245例大肠病变患者的粪便及30例正常人群粪便中micro RNA-221的水平,分析micro RNA-221与不同临床病理分级的关系。结果:结肠病变的患者粪便中micro RNA-221水平随着病理分级增加而增高,差异具有统计学意义(P<0.001)。进展型腺瘤和早期结直肠癌组织中micro RNA-221水平与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:早期结直肠癌粪便中micro RNA-221的表达上调,可能参与了结直肠癌的发生及发展,粪便micro RNA-221有可能成为筛查早期结直肠癌非侵入性的标志物。