miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

miR-223对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的影响

以中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(dairy cow mammary epithelial cell,DCMECs)为研究模型,探讨mi R-223对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的DCMECs炎症反应与乳脂合成的影响。应用Western blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)的表达情况,通过脂质体转染技术将mi R-223转染至DCMECs,qRT-PCR检测mi R-223的相对表达量,采用原位荧光技术分别检测DCMECs的凋亡与乳脂合成能力。结果表明LPS诱导DCMECs炎症反应的最佳浓度为1μg/m L;添加LPS可促进DCMECs mi R-223的表达;DCMECs转染mi R-223后,mi R-223的表达显著上调;mi R-223可下调LPS诱导的DCMECs炎症蛋白因子TNF-α,上调乳脂合成相关蛋白FASN,抑制LPS诱导的细胞凋亡,促进LPS诱导的乳脂合成。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

TLR4/miR-223/NLRP3信号通路的表达与脑卒中后抑郁大鼠海马炎症反应的关系

目的探究Toll样受体4(TLR4)/miR-223/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的表达与脑卒中后抑郁(PSD)大鼠海马炎症反应的关系。方法30只3月龄SPF级健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为假手术组,PSD模型组和TLR4抑制剂组,各10只。PSD模型组和TLR4抑制剂组建立PSD模型,TLR4抑制剂组给予0.3 mg/kg的TAK-242溶液腹腔注射,其余各组均腹腔注射等体积的生理盐水溶液,5次/周,连续4周。评定各组大鼠的神经行为学,ELISA法检测血清白介素-1β(IL-1β)和IL-10的表达水平,RT-PCR测定海马组织中TLR4/miR-223/NLRP3信号通路相关基因的表达,Western blot测定TLR4/miR-223/NLRP3信号轴蛋白的相对表达。结果与假手术组相比,PSD模型组和TLR4抑制剂组大鼠Longa评分以及血清IL-1β和IL-10的表达升高,糖水偏嗜比(SP)、移动情况(LA)显著降低(P<0.05);与PSD模型组相比,TLR4抑制剂组大鼠Longa评分以及血清IL-1β和IL-10的表达表达下降、LA和SP升高(P<0.05)。与假手术组相比,PSD模型组大鼠海马组织中TLR4 mRNA、miR-223和NLRP3 mRNA以及TLR4、NLRP3、IL-1β和IL-10蛋白的相对表达均显著升高(P<0.05);与PSD模型组相比,TLR4抑制剂组的TLR4 mRNA和NLRP3 mRNA以及TLR4、NLRP3、IL-1β和IL-10蛋白的相对表达显著降低,miR-223的表达显著升高(P<0.05)。结论TLR4/miR-223/NLRP3信号转导通路与PSD海马炎症反应密切相关,通过调控TLR4/miR-223/NLRP3信号转导通路可能成为临床防治PSD的新靶位和新思路。

酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用及潜在机制。方法 通过盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导脓毒症动物模型。通过酸枣仁皂苷A治疗实验动物,苏木精和伊红染色分析组织病理学变化。相应试剂盒分析肾损伤指标(血清BUN、SCr和NGAL水平)和血清炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的水平。生信分析miR-223-3p在脓毒症患者中的表达及其与炎症反应因子的相关性,预测miR-223-3p与SGK1的结合位点。双荧光素酶实验验证miR-223-3p与SGK1的结合关系。构建脂多糖(LPS)诱导的HK2细胞的体外模型。荧光实时定量PCR(qPCR)检测miR-223-3p在患者血清或LPS处理的HK-2细胞中的表达。脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹检测中BCL2相关的X(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和裂解的半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清或细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的水平。qPCR和蛋白质免疫印迹法检测不同处理组HK-2细胞中SGK1的表达,蛋白质免疫印迹检测不同处理组HK-2细胞中NLRP3的表达。结果 酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠急性肾小管坏死评分,减轻肾损伤。血清血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平降低,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平亦下降。酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠肾脏组织中miR-223-3p的表达水平。生信分析和临床样本分析显示,miR-223-3p在脓毒症患者中高表达。细胞实验结果显示,miR-223-3p在LPS处理的HK-2细胞中呈高表达。miR-223-3p促进LPS诱导的HK-2细胞凋亡和炎症反应,这种促进作用是由miR-223-3p通过负调控SGK1/NLRP3介导的。结论 酸枣仁皂苷A可能通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中发挥保护作用,可能为脓毒症治疗提供新的治疗靶点。

未足月胎膜早破孕妇血清中miR-223-3p的表达水平及临床意义

目的 探讨miRNA-223-3p(miR-223-3p)在未足月胎膜早破(PPROM)孕妇血清中的表达水平及临床意义。方法 选取2023年4~9月徐州医科大学附属徐州妇幼保健院行剖宫产术分娩的孕妇91例,其中PPROM孕妇60例及同期足月正常孕妇31例(正常组)作为观察对象。根据胎膜病理结果将观察组分为:未足月胎膜早破(PPROM)未合并HCA组(PPROM组,n=37);PPROM合并HCA组(PPROM+HCA组,n=23)。收集入院治疗前孕妇血清样本,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测血清中miR-223-3p的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子水平。结果 PPROM+HCA组血清中miR-223-3p的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组孕妇血清中miR-223-3p的表达水平与IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平呈正相关(r=0.553、0.505、0438、0.656,P <0.05)。结论 miR-223-3p在PPROM+HCA孕妇血清中表达上调,与PPROM的炎症严重程度有关。

2型糖尿病患者外周血miR-223与2型糖尿病周围神经病变相关性分析

目的 分析miR-223与糖尿病周围神经病变的相关性。方法 收集2020年12月至2022年5月138例2型糖尿病患者的临床资料,根据是否发生周围神经病变,将患者分为2组,2型糖尿病组77例;2型糖尿病伴周围神经病变组61例。通过实时定量PCR方法检测所有患者血清miR-223的表达水平,ELISA法测定所有患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。比较两组miR-223及TNF-α的差异。结果 与2型糖尿病组比较,miR-223及TNF-α在2型糖尿病伴周围神经病变组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析,miR-223预测糖尿病周围神经病变的敏感度67.2%,特异度76.6%(95%CI:0.634~0.809,P<0.05),miR-223联合糖尿病病程预测糖尿病周围神经病变的敏感度73.8%,特异度为77.9%(95%CI:0.750~0.889,P<0.05)。结论 2型糖尿病患者外周血miR-223可作为预测糖尿病周围神经病变的分子标志物,联合糖尿病病程诊断价值更高。

miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制

目的探讨miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制。方法选取108例初诊为老年结肠癌患者,经手术切除的结肠癌组织标本作为研究标本,癌旁组织标本(距结肠癌组织边缘至少5 cm)作为对照标本。购置人结肠癌细胞(SW480)和人结肠癌细胞(SW620)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定结肠癌组织、癌旁组织、SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达水平,通过敲低或增加SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达观察miR-223-3p对细胞增殖、运动、侵袭、凋亡及凋亡蛋白的影响。结果结肠癌组织中miR-223-3p表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001);SW620细胞中miR-223-3p表达水平显著高于SW480细胞(P<0.05);SW480细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著高于未转染组(P<0.001);SW620细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著低于未转染组(P<0.001);转染24、48、72 h后SW480细胞转染组细胞计数显著多于未转染组(P<0.001);转染48 h和72 h后SW620细胞转染组细胞计数显著少于未转染组(P<0.001);转染24 h后SW480细胞转染组迁移率显著高于未转染组,SW620细胞转染组显著低于未转染组(P<0.001);转染48 h后SW480细胞转染组穿过基底膜细胞数量显著多于未转染组,SW620细胞转染组显著少于未转染组(P<0.001);转染48 h后SW480细胞转染组细胞凋亡率显著低于未转染组,SW620细胞转染组显著高于未转染组(P<0.001);SW480细胞转染组B细胞瘤淋巴(Bcl)-2蛋白表达水平显著高于未转染组,SW620细胞转染组显著低于未转染组,Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平显著高于未转染组(P<0.001)。结论miR-223-3p参与老年结肠癌发生发展,可通过促进Bcl-2蛋白表达抑制细胞凋亡,促进细胞增殖、迁移及侵袭能力发挥原癌基因作用。

STAT1诱导的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4促进人胶质母细胞瘤相关巨噬细胞向M2型极化

目的本研究旨在探讨STAT1激活的LINC00987对人胶质母细胞瘤(GBM)相关巨噬细胞向M2型极化的影响。方法通过GEO数据库分析筛选出GBM中表达失调的lncRNAs。RT-qPCR检测LINC00987、miR-223-3p、卷曲蛋白4基因(FZD4)的表达。将人单核细胞白血病细胞系THP-1分别诱导成M0、M1、M2型巨噬细胞,并将GBM细胞与THP-1细胞共培养,流式细胞测量术检测CD14^(+)/CD206^(+)巨噬细胞的占比,ELISA检测M2型巨噬细胞相关因子(VEGF、TGF-β1)的表达。结果相对于癌旁组织和人正常神经胶质细胞系HEB,GBM组织和细胞中的LINC00987、FZD4表达上调而miR-223-3p表达下调(P<0.05)。在GBM细胞中,STAT1能够激活LINC00987并影响miR-223-3p/FZD4轴。过表达LINC00987能够促进GBM相关巨噬细胞向M2型极化(P<0.05)。敲减LINC00987则能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被miR-223-3p抑制剂部分挽救(P<0.05)。敲减FZD4能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被过表达LINC00987部分挽救(P<0.05)。结论STAT1激活的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4轴诱导GBM相关巨噬细胞向M2型极化。

转甲状腺素蛋白介导STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞新生血管生成的影响

目的分析转甲状腺素蛋白(TTR)介导信号转导和转录激活因子4(STAT4)/miR-223-3p/F-box WD重复蛋白7(FBXW7)通路对高糖(HG)诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)新生血管生成的影响。方法将hRECs分为对照组、HG组、HG+TTR组、HG+NC mimic组、HG+miR-223-3p mimic组和HG+TTR+miR-223-3p mimic组。生物信息学分析STAT4与miR-223-3p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。ELISA检测细胞中TTR水平,RT-PCR检测miR-223-3p水平,CCK-8法检测细胞增殖,血管生成实验分析血管生成率,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、TTR、STAT4和FBXW7蛋白表达。结果与对照组相比,HG组hRECs中TTR水平升高(P<0.05)。培养24 h时,与HG组相比,HG+TTR组细胞活力明显下降(P<0.05)。与HG组血管生成率(38.12±4.91)%相比,HG+TTR组hRECs血管生成率[(19.46±2.12)%]明显较小(P<0.05)。与HG+NC mimic组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达上调,细胞活力增加(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达下调,细胞活力下降(均为P<0.05)。与HG+NC mimic组血管生成率(40.11±4.10)%相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(61.52±6.25)%]增多(P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(42.24±4.33)%]减少(P<0.05),且与HG+NC mimic组比较差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学分析结果显示,STAT4与miR-223-3p启动子区域相互作用。与HG组相比,HG+TTR组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均升高,FBXW7和VEGF蛋白表达均降低(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、VEGF、STAT4和FBXW7蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论TTR可能通过调节STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路抑制HG诱导的hRECs的血管生成。

结肠癌组织microRNA-223、FBXW7的表达及与其临床病理参数和预后的关系

目的研究结肠癌组织中microRNA-223(miR-223)、FBXW7的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法收集2015年1月—2017年4月钦州市第一人民医院146例经手术切除的结肠癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织中mi R-223、FBXW7表达。通过在线网站预测miR-223与FBXW7存在结合位点。Pearson法分析两者表达的相关性及其与临床病理参数的关系。根据结肠癌组织中miR-223、FBXW7表达的均值分为miR-223高表达组与miR-223低表达组,FBXW7高表达组与FBXW7低表达组。用Kaplan-Meier法绘制不同mi R-223、FBXW7表达结肠癌患者的生存曲线。多因素Cox回归分析结肠癌患者预后的影响因素。结果结肠癌组织miR-223 m RNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),FBXW7mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05)。病理分期Ⅲ期、有淋巴结转移结肠癌组织mi R-223mRNA相对表达量高于Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移(P<0.05);病理分期Ⅲ期、有淋巴结转移结肠癌组织FBXW7mRNA相对表达量低于Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及有无侵犯浆膜结肠癌组织miR-223、FBXW7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关系数分析显示,结肠癌组织miR-223表达与FBXW7表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。术后随访8~60个月,随访期间死亡35例,总生存率为76.03%(111/146)。miR-223高表达组总生存率低于mi R-223低表达组(P<0.05)。FBXW7高表达组总生存率高于FBXW7低表达组(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,侵犯浆膜[HR=1.454(95%CI:1.086,1.947)]、病理分期Ⅲ期[HR=1.744(95%CI:1.070,2.840)]、淋巴结转移[HR=2.896(95%CI:1.114,7.531)]、miR-223≥4.76[HR=2.196(95%CI:1.085,4.445)]为结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05),FBXW7≥1.23[HR=0.388(95%CI:0.172,0.875)]为保护因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,侵犯浆膜[HR=1.490(95%CI:1.154,1.924)]、病理分期Ⅲ期[HR=1.979(95%CI:1.132,3.460)]、淋巴结转移[HR=2.401(95%CI:1.015,5.677)]、miR-223≥4.76[HR=2.140(95%CI:1.063,4.309)]为结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05),FBXW7≥1.23[HR=0.625(95%CI:0.475,0.823)]为保护因素(P<0.05)。结论结肠癌组织mi R-223高表达、FBXW7低表达与结肠癌患者病理分期、淋巴结转移及预后有关。

解毒复正汤通过干扰miR-223-3p并靶向调控TGFBR3影响肺癌侵袭转移的实验研究

目的探讨解毒复正汤(JieduFuzhengdecoction,JDFZ)通过影响微小核糖核酸-223-3p(Mircro ribonucleic acid-223-3p,miR-223-3p)靶向调控转化生长因子β受体3(Transforming growth factorβReceptor3,TGFBR3)的表达及其对肺癌细胞迁移的影响。方法利用RT-qPCR技术检测肺腺癌患者癌组织及癌旁组织、肺腺癌患者及健康人外周血清中miR-223-3p表达水平的差异;并检测不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)以及人肺上皮细胞BEAS-2B中miR-223-3p的本底表达量,从组织、血浆及细胞3个维度验证miR-223-3p的差异性。利用生物信息学网站重叠分析,初步预测到miR-223-3p与TGFBR33’UTR具有潜在的结合位点序列。接着运用双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与TGFBR3的靶向关系。体外培养肺癌A549细胞,采用脂质体法分别将miR-223-3p-过表达序列(miR-223-3p-mimics)及携带TGFBR3全基因的重组载体(Over-expression-TGFBR3,OE-TGFBR3)分别转染至肺癌细胞,以转入无关序列的模拟剂(Negative control-mimics,NC)作为对照组,收集各组稳转细胞,Transwell小室检测转染处理后及JDFZ作用后的细胞迁移能力;收集各组细胞蛋白,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测细胞中EMT相关蛋白的表达。结果肺癌组织中miR-223-3p的表达量显著低于癌旁组织;肺癌患者血浆miR-223-3p表达水平明显低于健康正常人。不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)中的miR-223-3p表达量亦低于正常人肺上皮细胞BEAS-2B。利用生物信息学网站及荧光素酶报告基因实验证实了miR-223-3p与TGFBR3的靶向调控关系。与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组的细胞迁移能力均下降(P<0.05),上调TGFBR3和加入解毒复正汤均能有效增强miR-223-3p对A549细胞迁移的负向调节作用;Westenblot结果发现,与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组E-Cadherin的表达水平上调,NCadherin及Vimentin的表达水平下升(P<0.05),两组均在不同程度上抑制EMT的发生;上调TGFBR3和加入解毒复正汤作用能有效增加miR-223-3p对细胞迁移相关蛋白的负向调节作用(P<0.05)。结论解毒复正汤对肺癌A549细胞的侵袭迁移有抑制作用,其机制可能是通过调节miR-223-3p并靶向调控TGFBR3及其下游EMT相关指标的表达来实现的。

miR-451、miR-223在脓毒症患者中的变化及预后评估价值分析

目的分析外周血微小核糖核酸(miR)-451与miR-223在脓毒症患者中的变化及其对预后的评估价值。方法回顾性收集我院2020年1月至2022年12月收入的137例脓毒症患者临床资料,设为观察组,根据其28 d内死亡、存活情况将其分为死亡组(30例)、存活组(107例),另选同时间段来院体检健康者46例为对照组。所有受试者均于入院当日测外周血miR-451、miR-223水平(对照组于体检当日)。比较不同受试者miR-451、miR-223水平差异,采用二元logistics回归分析影响脓毒症患者预后的因素,建立受试者工作特征(ROC)曲线,评估miR-451、miR-223水平预测脓毒症患者预后的价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血miR-451与miR-223水平明显更高(P<0.05)。两组患者年龄、尿素氮、血肌酐、C-反应蛋白、APACHEⅡ评分、miR-451、miR-223有显著差异(P<0.05),与存活组相比,死亡组年龄更高、尿素氮、血肌酐、C-反应蛋白、APACHEⅡ评分、外周血miR-451与miR-223水平明显更高(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血肌酐、APACHEⅡ评分、miR-451、miR-223是影响脓毒症患者预后不良的因素(P<0.05)。相关性分析结果显示,脓毒症患者APACHEⅡ评分与miR-451呈负相关性,与miR-223水平呈正相关性(r=-0.978、0.635,P<0.05),APACHEⅡ评分与miR-451、miR-223关系紧密,APACHEⅡ评分与miR-451、miR-223关系紧密。ROC曲线结果显示,miR-451、miR-223单独、联合预测预后曲线下面积分别为0.829、0.755、0.947,特异度为0.813、0.888、0.925,敏感度为0.733、0.807、0.657,预测价值较好。结论脓毒症患者miR-451、miR-223水平存在异常表达,miR-451、miR-223是影响患者预后的因素,对预测脓毒症患者预后情况有一定参考价值。

Circ-CDYL通过miR-223-3p/PHF19轴调节多发性骨髓瘤对硼替佐米的敏感性

目的 探讨环状RNA Circ-CDYL调节多发性骨髓瘤(MM)对硼替佐米(BTZ)的敏感性,以及对miR-223-3p/PHD锌指蛋白19(PHF19)轴的影响。方法 收集盐城市第三人民医院118例MM患者血清标本,其中60例患者未接受任何化疗(BTZ敏感组),58例患者接受BTZ治疗并产生化疗耐药性(BTZ耐药组),比较两组Circ-CDYL及miR-223-3p、PHF19的表达情况。将MM1.R细胞根据细胞转染情况分为C组、sh-Circ-C组、sh-Circ-CDYL组、sh-Circ-CDYL+anti-miR-223-3p组和sh-Circ-CDYL+pcDNA-PHF19组,对5组细胞进行相应转染。采用荧光定量PCR(RT-qPCR)测定Circ-CDYL、miR-223-3p和PHF19 mRNA水平,CCK-8法测定MM1.R细胞活性。采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,采用免疫印迹法(Western blotting)检测凋亡蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(C-caspase 3)]及PHF19蛋白的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验检测Circ-CDYL与miR-223-3p/PHF19的靶向关系。结果 Circ-CDYL和PHF19在BTZ耐药组患者血清标本和MM1.R细胞中均呈高表达(P<0.05),miR-223-3p呈低表达(P<0.05)。下调Circ-CDYL表达下调Circ-CDYL表达可明显降低MM1.R细胞对BTZ的半数抑制浓度(IC_(50)),抑制增殖活力,使凋亡蛋白PCNA、Ki67表达水平均下调,细胞凋亡率、C-caspase 3蛋白表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-223-3p或过表达PHF19可部分逆转敲低Circ-CDYL后的MM1.R细胞对BTZ敏感性(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p可抑制Circ-CDYL、PHF19的表达,Circ-CDYL、PHF19是miR-223-3p的靶基因。结论 敲低Circ-CDYL可通过miR-223-3p/PHF19轴而提高MM1.R细胞对BTZ的敏感性。

miR-127、miR-221、miR-223在新生儿肺炎中的表达及临床意义

目的探讨miR-127、miR-221、miR-223在新生儿肺炎中的表达及临床意义。方法收集2022年3~10月入住我院诊断新生儿肺炎的患儿10例设为肺炎组,以未罹患肺部疾病或感染性疾病的新生儿10例设为对照组。在治疗前分别采集肺炎组及对照组血液标本,待肺炎组治疗7天后再次采集肺炎组血液标本。比较两组治疗前后血液中miR-127、miR-221、miR-223的表达水平。结果肺炎组(治疗前)miR-127、miR-221及miR-223的表达水平高于对照组(P<0.05);肺炎组治疗前后miR-127、miR-221及miR-223的表达水平明显下降(P<0.05);肺炎组(治疗后)与对照组比较,miR-127、miR-221及miR-223的表达水平差异没有统计学意义(P>0.05)。结论miR-127、miR-221、miR-223可能在新生儿肺炎发病中发挥关键作用,具有临床意义。

冠通方含药血清通过miR-223/NLRP3信号通路调控血管内皮细胞焦亡的作用及机制研究

目的:探究冠通方含药血清通过microRNA-223(miR-223)/NOD样受体家族3(NLRP3)信号通路调控血管内皮细胞焦亡的作用及机制研究。方法:将血管内皮细胞系人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为对照组、模型组、空白血清组和含药血清组。对照组仅进行常规培养,其余3组采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导HUVECs细胞损伤模型,模型组不进行任何干预,空白血清组采用空白血清干预,含药血清组则采用冠通方含药血清进行干预。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-223 mRNA表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase1)的蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)的含量,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活性,并计算乳酸脱氢酶(LDH)释放水平。碘化丙啶(PI)染色荧光显微镜下观察细胞膜完整性和细胞焦亡情况。结果:与对照组相比,模型组HUVECs细胞活力明显降低(P<0.05);与模型组相比,空白血清组细胞活力差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组的细胞活力则明显增强(P<0.05)。与对照组相比,模型组LDH释放水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,空白血清组LDH释放水平差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组LDH释放水平则明显下降(P<0.05)。与对照组相比,模型组PI染色程度明显增加;与模型组相比,空白血清组PI染色程度变化不明显,含药血清组PI染色程度明显减少。与对照组相比,模型组炎性因子IL-1β、IL-18含量明显升高(P<0.05);与模型组相比,空白血清组IL-1β、IL-18含量差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组IL-1β、IL-18含量明显下降(P<0.05)。与对照组相比,模型组Caspase1蛋白表达明显上调;与模型组相比,空白血清组Caspase1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组Caspase1蛋白表达明显下调。与空白血清组相比,含药血清组HUVECs细胞内miR-223的表达明显上调(P<0.05),NLRP3的表达明显下调(P<0.05)。结论:冠通方含药血清通过上调miR-223下调NLRP3,抑制炎性因子IL-1β、IL-18水平,抑制Caspase1诱导的血管内皮细胞焦亡,提示冠通方对于冠心病病人的血管内皮细胞具有较好的保护作用。

外泌体转运miR-223改善创伤性脑损伤的作用和机制

目的探究外泌体(Exo)转运miR-223对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织损伤与小胶质细胞活化的影响及机制。方法通过脂质体法分别将miR-NC质粒、miR-223 mimic质粒转染至HEK293细胞,实时荧光定量PCR测定细胞中miR-223表达水平;提取转染后HEK293细胞Exo,通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析及Western blot对Exo进行鉴定,并采用实时荧光定量PCR测定Exo中miR-223表达水平;将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NC-Exo组、miR-223-Exo组,每组10只。除假手术组外的3组大鼠均通过改良Feeney自由落体法制备TBI模型,NC-Exo组与miR-223-Exo组大鼠分别经尾静脉注射转染miR-NC质粒细胞来源的Exo、转染miR-223 mimic质粒细胞来源的Exo;2周后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠脑组织病理学变化,尼氏(Nissl)染色检测各组大鼠尼氏体改变与分布情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平,免疫荧光双染法观察各组大鼠脑组织内Nod样受体蛋白3(NLRP3)与离子钙接头蛋白(Iba-1)表达,Western blot测定各组大鼠脑组织内NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达水平。结果细胞转染后,与对照组和miR-NC组比较,miR-223组细胞中miR-223相对表达量显著增加(P<0.05);分离的颗粒物具有典型的Exo形态,粒径峰值大约处于120 nm,Exo标志蛋白CD9、CD63及CD81均明显高表达,且miR-223相对表达量显著增加(P<0.05)。与模型组比较,miR-223-Exo组大鼠脑组织损伤现象得到改善,尼氏体形态恢复且数目增加,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05),脑组织内NLRP3与Iba-1荧光染色强度减少(P<0.05),同时,脑组织内NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量均下调(P<0.05)。结论Exo转运miR-223能够明显改善TBI大鼠脑组织损伤,抑制小胶质细胞激活,该作用可能与抑制NLRP3炎性小体活化相关。

直肠癌肠造口术后感染患者血清miR-15a、miR-29b和miR-223表达及意义

目的探讨直肠癌肠造口术后感染患者血清miR-15a、miR-29b和miR-223表达及意义。方法选取2020年6月—2022年6月收治的直肠癌肠造口术100例,根据肠造口术后7 d内是否发生切口感染将其分为感染组(32例)和未感染组(68例)2组。比较2组血清炎性因子和miRNA,探讨肠造口术后感染患者血清炎性因子与miRNA相关性及血清炎性因子、miRNA对肠造口术后感染预测价值,比较血清炎性因子联合与miRNA联合对肠造口术后感染预测价值、不同疗效肠造口术后感染患者治疗前和治疗10 d后血清miRNA,探讨肠造口术后感染患者血清miRNA与抗感染疗效相关性。结果术后当天,感染组血清C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)及miR-29b、miR-223高于未感染组,血清miR-15a低于未感染组;肠造口术后感染患者术后当天血清CRP、PCT与miR-15a呈负相关,与miR-29b和miR-223呈正相关(P<0.01)。血清miRNA联合预测肠造口术后感染的曲线下面积大于血清炎性因子联合预测(P<0.05)。治疗10 d后,肠造口术后感染愈合患者血清miR-15a较治疗前升高,血清miR-29b和miR-223较治疗前降低;且血清miR-15a高于未愈合患者,血清miR-29b和miR-223低于未愈合患者(P<0.01)。肠造口术后感染患者血清miR-15a与抗感染疗效呈正相关,血清miR-29b和miR-223与抗感染疗效呈负相关(P<0.01)。结论直肠癌肠造口术后患者早期血清miR-15a、miR-29b和miR-223对感染有一定预测价值,且感染患者抗感染治疗后上述指标可反映疗效。

STAT3通路调控miR-223抑制NLRP3表达对脓毒症炎症反应的影响及作用机制

目的:探讨STAT3通路调控miR-223抑制NLRP3表达对脓毒症炎症反应的影响及作用机制。方法:50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-NC组、miR-223组和miR-223抑制剂组,每组10只。观察各组大鼠肝、肺组织病理形态;检测各组大鼠肝、肺组织miR-223表达、血清炎症细胞因子表达、肝、肺组织STAT3、NLRP3蛋白表达。结果:与对照组相比,其余各组大鼠肝、肺组织结构均被破坏,miR-223组较优于模型组。模型组大鼠肝、肺组织miR-223表达降低(P<0.05)。与对照组相比,其余各组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,IL-10水平降低。与模型组相比,miR-223组、miR-NC组TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,IL-10水平升高(P<0.05)。与对照组相比,其余各组大鼠肝、肺组织STAT3蛋白表达降低,NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),与模型组相比,miR-NC组、miR-223组、miR-233抑制剂组STAT3表达升高,NLRP3蛋白表达降低(P<0.05);与miR-233组相比,miR-233抑制剂组STAT3蛋白表达升高,NLRP3蛋白表达降低(P<0.05)。结论:STAT3通路调控miR-223抑制NLRP3信号通路抑制脓毒症大鼠炎症反应。

脱氢姜酮通过调控miR-223-3p抑制喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及血管形成

目的探讨脱氢姜酮(DZG)对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及血管形成的影响及其相关机制。方法分别以不同浓度的DZG(0,75,150,300μmol/L)处理Hep-2细胞24 h,MTT法、Transwell、Western blot法、实时荧光定量PCR(RT-PCR)分别检测Hep-2细胞的存活率、迁移能力、迁移蛋白波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和血管形成蛋白血管内皮生长因子(VEGF)以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)相对表达水平和miR-223-3p mRNA相对表达量。将Hep-2细胞分别分为:①空白对照组(control组)、模拟物阴性对照组(miR-NC)、miR-223-3p组(转染miR-223-3p);②空白对照组(si-control组)、阴性对照组(si-NC)及miR-223-3p小干涉RNA组(si-miR-223-3p)。MTT法检测细胞增殖抑制能力,Transwell检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin蛋白相对表达量。结果0,75,150,300μmol/L的DZG培养Hep-2细胞,MTT结果显示,24 h细胞存活率随DZG浓度增加而下降(P<0.05);Transwell结果显示,细胞迁移能力随DZG浓度增加而下降(P<0.05);Western blot结果显示,VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin蛋白相对表达量随DZG浓度增加而降低(P<0.05);RT-PCR结果显示,miR-223-3p mRNA相对表达量随DZG浓度增加而增加(P<0.05)。将Hep-2细胞进行转染后,RT-PCR结果表明,miR-223-3p组Hep-2细胞miR-223-3p相对表达量较miR-NC组和control组明显升高,si-miR-223-3p组Hep-2细胞miR-223-3p相对表达量较si-NC组和si-control组明显降低(P<0.05)。MTT法结果显示,miR-223-3p组细胞存活率较miR-NC组明显降低(P<0.05)。不加DZG单独使用正常培养基培养验证miR-223-3p对Hep-2细胞存活率时发现,miR-223-3p组细胞存活率较miR-NC组和control组细胞明显下降,si-miR-223-3p组细胞存活率较si-NC组和si-control组明显升高(P<0.05);Transwell结果显示,miR-223-3p组细胞迁移率较miR-NC组和control组明显降低,si-miR-223-3p组细胞迁移率较si-NC组和si-control组明显升高(P<0.05)。Western blot结果显示,miR-223-3p组VGEF、MMP-2、Vimentin和N-cadherin蛋白相对表达量较miR-NC组和control组明显降低,si-miR-223-3p组VGEF、MMP-2、Vimentin和N-cadherin蛋白相对表达量较si-NC组和si-control组明显升高(P<0.05)。结论DZG可通过调控miR-223-3p抑制喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及血管形成,其机制可能与下调迁移及血管形成相关蛋白VGEF、MMP-2、Vimentin和N-cadherin相关。