早发型子痫前期患者血清microRNA-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系

目的分析早发型子痫前期患者血清microRNA-26b(miR-26b)表达及其与胎盘早剥发生的关系。方法选取2019年8月至2022年8月荆州市中心医院收治的102例早发型子痫前期患者作为研究对象。检测所有患者miR-26b相对表达量,随访至患者分娩,根据胎盘早剥发生情况分成胎盘早剥组与非胎盘早剥组,分析早发型子痫前期患者血清miR-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系。结果随访至产妇分娩,102例早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率为17.65%(18/102)。胎盘早剥组血清miR-26b相对表达量高于非胎盘早剥组(P<0.05)。根据确诊疾病时血清miR-26b四分位数将患者分为Q1组(n=25)、Q2组(n=27)、Q3组(n=24)及Q4组(n=26),Q4组胎盘早剥发生率高于Q1组、Q2组及Q3组(P<0.05)。经点二列相关性分析检验,血清miR-26b与早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率呈正相关(r=0.458,P<0.05)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,血清miR-26b对早发型子痫前期患者胎盘早剥具有中等预测价值,且当血清miR-26b相对表达量为2.465时,可获得最佳预测价值。结论早发型子痫前期患者血清miR-26b与胎盘早剥发生有关,检测血清miR-26b相对表达量能为预测胎盘早剥发生提供重要价值。

MicroRNA-26b下调MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探索microRNA-26b(miR-26b)通过MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的分子机制。方法 以乳腺癌细胞系MCF-7作为研究对象,采用慢病毒LV-miR-26b-ctrl和LV-miR-26b转染肿瘤细胞,逆转录聚合酶链反应检测MALAT-1、miR-26a和miR-26b的mRNA表达,平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、软琼脂成瘤实验、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测肿瘤细胞的增殖、体外成瘤、迁移和侵袭能力。结果 E2组与Mock组MCF-7细胞24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)两组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),与Mock组比较,E2组72和96 h时细胞增殖能力较Mock组提高(P <0.05);(3)两组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Mock组相比,E2组MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),miR-26a、miR-26b mRNA相对表达量下降(P <0.05)。高表达miR-26b的乳腺癌患者的生存情况优于低表达miR-26b组,死亡风险更低(P <0.05),低表达miR-26a组患者的生存情况优于高表达miR-26a组(P <0.05),用Cox比例风险回归模型,将miR-26a作为一个独立的预后因素来比较,两组患者的死亡风险比较无差异(P>0.05)。与LV-miR-26b-ctrl组比较,LV-miR-26b-ctrl/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),与LV-miR-26b-ctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量降低(P <0.05)。LV-miR-26b-ctrl组、LV-miR-26b-ctrl/E2组、LV-miR-26b/E2组细胞在24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),LV-miR-26b-ctrl/E2组72和96 h时细胞增殖能力明显较LV-miR-26b-ctrl组增强(P <0.05),LV-miR-26b/E2组72和96 h时细胞增殖能力较LV-miR-26b-ctrl/E2组降低(P <0.05);(3)各组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。E2处理后的LV-miR-26b-ctrl肿瘤细胞增殖和体外成瘤能力增强。与LV-miR-26bctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组肿瘤细胞的增殖和体外成瘤能力降低。在24 h时,LV-miR-26b-ctrl/E2组细胞划痕间隙较LV-miR-26b-ctrl组变窄,LV-miR-26b/E2组24 h时细胞的划痕间隙较LV-miR-26bctrl/E2组明显增宽。LV-miR-26b-ctrl/E2组Transwell小室下方的乳腺癌细胞数量较LV-miR-26b-ctrl组增多,LV-miR-26b/E2组的肿瘤细胞数量较LV-miR-26b-ctrl/E2组减少。结论 下调MALAT-1可能是miR-26b抑制乳腺癌恶性生物学行为的分子机制之一,miR-26b有望成为乳腺癌治疗的调控靶点。

microRNA-26b对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨microRNA-26b(miR-26b)在宫颈癌组织的表达水平及其对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的影响。方法收集36例宫颈癌及癌旁组织的手术标本,应用实时荧光定量PCR技术,检测miR-26b mRNA的表达水平。以人宫颈癌细胞系HeLa细胞为研究对象,转染miR-26b成熟体及反义核苷酸,通过MTS方法和Transwell实验检测miR-26b对HeLa细胞增殖和侵袭的影响。结果 (1)miR-26b mRNA在宫颈癌组织中呈低水平表达。(2)MTS实验研究显示,与空白对照组(仅加转染试剂)相比,转染miR-26b成熟体,HeLa细胞的增殖能力明显下降(P<0.01);转染miR-26b反义核苷酸,HeLa细胞的增殖能力明显增强(P<0.01),而无义对照,没有明显变化(P>0.05)。(3)Transwell小室实验研究显示,与空白对照组相比,转染miR-26b成熟体,HeLa细胞的侵袭能力明显下降(P<0.01);转染miR-26b反义核苷酸,HeLa细胞的侵袭能力明显增强(P<0.05),而无义对照,没有明显变化(P>0.05)。结论 miR-26b具有抑制HeLa细胞的增殖和侵袭作用,miR-26b可能成为治疗宫颈癌的靶基因。

过表达microRNA-26a大鼠表皮干细胞来源外泌体对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响

目的 探究过表达microRNA-26a(miR-26a)的大鼠表皮干细胞(EPSC)来源外泌体(Exos)对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响。方法 体外培养大鼠EPSC,用携带miR-26a-绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒颗粒和阴性对照(NC-GFP)转染以上调miR-26a表达,并从未转染的EPSC、NC-GFP转染的EPSC或miR-26a-GFP转染的EPSC中分离Exos,透射电子显微镜(TEM)和纳米粒子追踪分析(NTA)观察Exos形态和大小,蛋白质印迹(Western blot)检测Exos表面标志物CD9、CD63和CD81的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测EPSC及EPSC-Exos中miR-26a表达,CCK-8法检测EPSC的增殖活性;小管形成实验评估miR-26a-EPSC-Exos对血管生成的影响。建立大鼠深Ⅱ度烧伤模型,分为对照组(control组)、NC-EPSC-Exos组和miR-26a-EPSC-Exos组,每组30只。NC-EPSC-Exos组和miR-26a-EPSC-Exos组大鼠给予相应的Exos干预,control组大鼠给予等体积的PBS,每周1次,持续3周。分别在烧伤后第7、14和21天,观察各组大鼠烧伤创面状况,计算创面愈合率;HE染色观察创面组织病理学变化,并进行组织学评分;免疫组织化学法检测创面CD31阳性表达,计算微血管密度(MVD)。结果 miR-26a转染可显著升高EPSC及其Exos中miR-26a表达,促进EPSC细胞增殖(P<0.05);TEM和NTA分析结果显示,Exos呈球形,直径范围在40~150 nm, CD9、CD63和CD81均呈阳性;小管形成实验结果显示,miR-26a-EPSC-Exos可显著增加管长度,促进内皮细胞血管生成(P<0.05)。体内动物实验结果显示,miR-26a-EPSC-Exos可显著加速深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合和修复,增加组织学评分和MVD(P<0.05)。结论 过表达miR-26a的EPSC-Exos可促进深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合。

MicroRNA-26a及靶基因CDK6在结外NK/T细胞淋巴瘤的表达研究

目的:探讨microRNA-26a(miR-26a)及靶基因CDK6在结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma,ENKTCL)的表达及其在ENKTCL发生发展中的可能作用。方法:采用实时荧光定量PCR法检测15例ENKTCL组织和10例正常NK细胞中miR-26a的表达;采用免疫组织化学M axvision法检测20例ENKTCL组织、10例增生性淋巴结炎组织和10例正常淋巴结组织中CDK6蛋白表达水平;结合ENKTCL患者临床特征,分析miR-26a及靶基因CDK6在ENKTCL发生发展中的可能作用。结果:ENKTCL组织miR-26a的表达显著低于正常NK细胞;ENKTCL组CDK6蛋白表达显著高于增生性淋巴结炎组和正常淋巴结组织。相关性分析显示,ENKTCL组织中miR-26a表达与CDK6表达呈显著负相关(r=-0.54,P=0.04)。同时,miR-26a表达与患者年龄、性别、Ann Arbor分期、LDH水平、B症状、国际预后指数评分(IPI)无关;CDK6表达与患者的Ann Arbor分期、IPI有关,但是与年龄、性别、LDH水平、B症状无关。结论:miR-26a的异常表达可能通过调控ENKTCL组织中靶基因CDK6的表达,参与ENKTCL的发生发展。

循环型microRNA-26a及其靶基因PTEN与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的探讨循环型micro RNA-26a(mi R-26a)及靶基因PTEN在系统性红斑狼疮(SLE)的表达,以及在SLE发生、发展中可能发挥的作用。方法选取36例SLE和10例健康体检者血液标本,实时荧光定量聚合酶链反应检测血清mi R-26a、外周血单个核细胞(PBMC)中PTEN的表达,统计分析mi R-26a、PTEN与SLE临床资料的相关性,利用双荧光素酶报告系统验证PTEN是否为mi R-26a的靶基因。结果 SLE患者血清mi R-26a m RNA的表达高于健康人群(P<0.05),PBMC中PTEN m RNA的表达低于健康人群(P<0.05)。SLE患者mi R-26a、PTEN的表达水平与C3、抗ds-DNA、红细胞沉降率、狼疮活动指数相关。mi R-26a转染Ba F3细胞后,PTEN表达下调,PI3K表达上调,转染组荧光素酶活性下降(P<0.05)。结论 SLE患者血清中过表达的mi R-26a可能通过下调靶基因PTEN,上调PI3K/AKT信号通路,参与SLE的发生、发展。

MicroRNA-26a-5p在重症脑梗死患者中的表达与预后的关系

目的探讨microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)在重症脑梗死患者中的表达与预后的关系。方法选取50例重症脑梗死患者、50例轻型急性脑梗死(ACI)患者,另选取健康体检者50例为对照组,分别测定3组人员血清中miR-26a-5p的相对表达水平,同时测定脑梗死患者血清中C反应蛋白(CRP)和S100钙结合蛋白β(S100β)含量。根据miR-26a-5p的相对表达水平将重症脑梗死患者分为miR-26a-5p高表达组和miR-26a-5p低表达组,分别比较两组患者性别、年龄、继发院内感染率、脑梗死再发率、APACHE-Ⅱ评分、NIHSS评分、改良Ranking量表评分以及30 d预后的关系。结果轻型ACI组和重症脑梗死组血清中miR-26a-5p相对表达水平均高于对照组(P<0.01),重症脑梗死组血清中miR-26a-5p相对表达水平高于轻型ACI组(P<0.01)。重症脑梗死组血清中CRP含量高于轻型ACI组(P<0.01),但S100β含量无差异(P>0.05)。相关性分析发现轻型ACI组和重症脑梗死组血清中miR-26a-5p表达水平与CRP含量呈正相关,相关系数r为0.651和0.731(P<0.01);但与S100β无明显相关性(P>0.05)。重症脑梗死患者miR-26a-5p高表达组继发院内感染率、脑梗死再发率、APACHE-Ⅱ评分、NIHSS评分均高于miR-26a-5p低表达组,而改良Ranking量表评分低于miR-26a-5p低表达组。重症脑梗死患者miR-26a-5p高表达组中位总体生存时间小于miR-26a-5p低表达组。结论在重症脑梗死患者中检测血清中miR-26a-5p相对表达水平对判断预后有重要临床意义。

急诊冠状动脉介入治疗术后循环microRNA-26b-5p水平与血糖水平变化的观察性研究

目的:评估急诊冠状动脉介入治疗术(PCI)后循环microRNA-26b-5p水平和血糖水平变化的趋势及相关性。方法:根据入选标准和排除标准,共入选接受急诊PCI术的急性前壁心肌梗死患者38例。详细记录临床相关资料,分别于术前、术后24h、术后72h行循环血microRNA-26b-5p和血糖水平检测。Real Time PCR法检测血液样本中microRNA-26b-5p表达量的变化。结果:对于成功行急诊PCI的急性心肌梗死患者,术后microRNA-26b-5p表达水平较术前明显升高(P<0.01),术后血糖水平逐渐下降(P<0.01),两者之间存在负相关(r=-0.332,P<0.01)。结论:急性心肌梗死患者往往存在应激性高血糖,microRNA-26b-5p可能参与血糖水平的相关。

microRNA-26a在原发性肝癌患者中的表达及临床意义研究

目的探讨micro RNA-26a在原发性肝癌(HCC)患者中的表达及临床意义。方法选取HCC、慢性乙型肝炎(CH)患者各28例。HCC患者留取癌组织、癌旁组织、血浆标本,CH患者留取血浆标本,采用RT-PCR法检测标本micro RNA-26a的表达水平。比较HCC患者与CH患者micro RNA-26a表达水平;分析HCC患者癌组织、癌旁组织micro RNA-26a表达水平的相关性;比较血浆micro RNA-26a与血清甲胎蛋白(AFP)诊断HCC的灵敏度、特异度;以血浆micro RNA-26a水平最佳临界值(2.873)为界,将HCC患者分为micro RNA-26a高表达组和低表达组,比较两组患者术后1年生存率。结果 HCC患者血浆micro RNA-26a表达水平低于CH患者(P<0.05)。HCC患者癌组织micro RNA-26a表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。HCC患者癌组织、癌旁组织mic ro RNA-26a表达水平呈正相关(r=0.574,P<0.038)。血浆mic ro RNA-26a诊断HCC的灵敏度较血清AFP强(85.8%vs 57.8%,P<0.05),但特异度较血清AFP弱(65.2%vs 80.52%,P<0.05)。mic ro RNA-26a高表达组患者术后1年生存率高于低表达组(60.25%vs 45.77%,P<0.05)。结论 HCC患者micro RNA-26a表达水平较低,micro RNA-26a可作为早期诊断HCC的生物标志物,也可作为HCC患者预后评估指标。

MicroRNA-124 rs531564、microRNA-26A rs7372209和microRNA-126 rs4636297多态性与结直肠癌易感性关联研究

目的探讨microRNA-124 rs531564(miR-124 rs531564)、microRNA-26A rs7372209(miR-26A rs7372209)和microRNA-126 rs4636297(miR-126 rs4636297)基因多态性与结直肠癌遗传易感的关系。方法利用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术,对724例结直肠癌患者和626例健康对照个体的miR-124 rs531564、miR-26A rs7372209和miR-126 rs4636297多态位点进行分型。采用非条件逻辑回归分析统计该多态位点与结直肠癌易感的相关性,计算相对危险度的比值比(OR∧)及95%置信区间(CI)。结果该试验中miR-126 rs4636297多态位点,在病例中经调整年龄、性别、吸烟、饮酒等影响相对于CC基因型个体,发现携带AG或AA的基因型个体与结直肠癌的患病风险有一定的相关性(P<0.05),调整后的OR∧(95%)分别为[1.289(1.007,1.650)和1.383(0.396,4.834)]。相对于G等位基因,A等位基因显著提高个体患结直肠癌的风险(OR∧=1.307,95%CI=1.054,1.622,P=0.013);还发现携带A等位基因(AG+AA)的个体患结直肠癌风险是携带GG基因型个体的1.327倍(AG+AA vs GG,OR∧=1.327,95%CI=1.042,1.688,P=0.019)。而miR-124 rs531564、miR-26A rs7372209位点的多态性并未发现不同基因型个体与结直肠癌的患病风险相关(P>0.05)。结论miR-126 rs4636297基因多态性与结直肠癌的遗传易感有密切关系,携带A等位基因可能是促进结直肠癌发病风险的重要因素。

MicroRNA-26a及其靶基因Smad2在抑制增生性瘢痕形成中的作用

目的探讨microRNA-26a(miR-26a)及靶基因Smad2(mothers against decapentaplegic homolog 2)在增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)中的表达情况,以及在HS形成中可能发挥的作用。方法选取20例患者(年龄17~58岁;女性13例,男性7例),均接受过瘢痕切除及自体皮肤移植,获取的20对HS和正常皮肤组织(NS),以及人胚胎皮肤成纤维细胞(CCC-ESF-1)和人HS成纤维细胞(hHSF)等,采用RT-qPCR和Western blot检测HS和NS中miR-26a的表达,统计分析miR-26a、Smad2与HS的相关性,利用双荧光素酶报告系统验证Smad2是否为miR-26a的靶基因;通过过表达和干扰Smad2,用RT-qPCR和Western blot检测ColⅠ和ColⅢ表达的变化。结果 HS组织和hHSF中miR-26a的表达水平显著低于NS(P<0.05),在HS组织和hHSF细胞中Smad2表达显著升高(P<0.05);miR-26a能够靶向调节Smad2活性;Smad2过表达和敲低分别促进和抑制ColⅠ和ColⅢ的表达。结论 HS患者中低表达的miR-26a可能通过上调靶基因Smad2,参与HS形成。

LEF1介导的microRNA-26b抑制H9C2心肌细胞肥大机制研究

目的:探讨microRNA-26b(miR-26b)调控H9C2心肌细胞肥大的作用靶基因及其分子机制。方法:传代培养H9C2心肌细胞,分别转染miR-26b模拟物(miR-26b mimic)和淋巴样增强因子1(LEF1)siRNA(si-LEF1),以增加H9C2心肌细胞中miR-26b水平或抑制LEF1的表达水平。采用FITC-鬼笔环肽染色检测H9C2心肌细胞表面积,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-26b与潜在靶基因LEF13′端非翻译区(3′UTR)的结合作用。RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-26b、LEF1及心肌细胞肥大相关基因表达。结果:过表达miR-26b可明显增加H9C2心肌细胞中肥厚相关基因ANP,β-MHC的表达水平,缩小H9C2心肌细胞表面积;双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-26b与LEF13′UTR具有相互结合作用,miR-26b在转录水平抑制LEF1的表达;miR-26b mimic和si-LEF1均能抑制H9C2心肌细胞肥大基因的表达。结论:LEF1是miR-26b的作用靶基因,LEF1参与miR-26b抑制H9C2心肌细胞肥大的作用。

lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制研究

目的 探究lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p(miR-26b-5p)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法 体外培养人TNBC细胞系MDA-MB-231细胞,培养后分组转染。设置对照组(空载质粒转染),SNHG6敲减组(si-SNHG6慢病毒载体转染)、miR-26b-5p抑制组(空载质粒+miR-26b-5p-inhibitor转染)及共转染组(si-SNHG6慢病毒载体+miR-26b-5p-inhibitor转染)。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG6及miR-26b-5p的表达,分别进行CCK-8实验、划痕实验及Transwell实验检测MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力,采用双荧光素酶报告实验检测SNHG6与miR-26b-5p的靶向作用。结果 与对照组比较,SNHG6敲减组SNHG6 mRNA表达下调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达上调(P <0.05);与对照组比较,miR-26b-5p抑制组SNHG6 mRNA表达上调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达下调(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组SNHG6 mRNA表达上调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达下调(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组SNHG6 mRNA表达下调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达上调(P <0.05)。对照组、SNHG6敲减组、miR-26b-5p抑制组、共转染组24 h、48 h、72 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点OD值有差异(F=52.481,P=0.000)。(2)4组OD值有差异(F=50.336,P=0.000),与对照组比较,SNHG6敲减组及共转染组24 h、48 h及72 h的OD值降低(P <0.05),miR-26b-5p抑制组24 h、48 h及72 h的OD值升高(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组24 h、48 h及72 h的OD值升高(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组OD值降低(P <0.05)。(3)4组OD值变化趋势有差异(F=20.109,P=0.000)。与对照组比较,SNHG6敲减组和共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少(P <0.05),miR-26b-5p抑制组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少(P <0.05)。且SNHG6与miR-26b-5p基因序列上存在结合位点。结论 敲减SNHG6通过靶向上调MDA-MB-231细胞中miR-26b-5p的表达,抑制TNBC增殖、迁移及侵袭。

microRNA-26a和microRNA-199a在胃癌患者血清中的表达检测及其临床意义

目的探讨胃癌患者血清中micrRNA-26a和micrRNA-199a表达检测及其临床意义。方法收集佳木斯市中心医院2015年1月～2017年12月期间确诊且行根治术的胃癌患者20例作为实验组,健康人群20例作为对照组,使用qRT-PCR方法对实验组和对照组血清中micrRNA-26a和micrRNA-199a的表达水平进行定量检测,分析检测结果的临床意义。结果 micrRNA-26a在实验组术前血清样本中的表达水平(1.76±0.54)明显低于对照组(5.33±1.12)(t=4.55,P=0.002),也明显低于术后血清样本中的表达水平(3.89±0.87)(t=5.11,P=0.001);micrRNA-199a在实验组术前血清样本中的表达水平(29.54±3.12)明显高于对照组(6.07±1.34)(t=6.19,P=0.001),也明显高于术后血清样本中的表达水平(15.87±2.64)(t=5.76,P=0.001)。结论 micrRNA-26a和micrRNA-199a有可能成为胃癌早期诊断的血清标记物。

microRNA-26b靶向CDK6抑制H9C2心肌细胞肥大

目的已证实microRNA-26b(miR-26b)参与心肌肥厚的过程,然而其潜在分子机制仍有待研究,本文旨在研究microRNA-26b(miR-26b)调控H9C2心肌细胞肥大的作用的分子机制。方法FITC-鬼笔环肽染色检测H9C2心肌细胞面积;双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-26b与细胞周期素依赖性激酶6(Cyclin-dependent kinase 6,CDK6)3′UTR的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-26b和肥大标志基因ANP及β-MHC的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测相关肥大标志基因ANP及β-MHC的蛋白表达。结果过表达miR-26b可有效抑制H9C2心肌细胞的肥大表型;CDK6被证实是miR-26b作用的靶基因,miR-26b可抑制CDK6的蛋白表达;miR-26b及si-CDK6均能抑制H9C2心肌细胞的肥大标志基因ANP及β-MHC的mRNA及蛋白表达。结论CDK6是miR-26b的作用靶基因,CDK6参与miR-26b抑制H9C2心肌细胞肥大的作用。

MicroRNA-26a的表达对急性髓系白血病细胞增殖的影响

目的观察构建has-miR-26a重组慢病毒的表达载体对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响。方法构建人MicroRNA-26a慢病毒表达载体(LV-miR-26a-GFP)并感染人急性髓系白血病细胞系NB4;分为未感染组、感染组(感染LV-miR-26a-GFP)以及阴性对照组(感染LV-GFP);用real-time RT-PCR检测miR-26a在NB4细胞内的表达水平,Western blot检测PTEN的表达;用CCK-8法绘制细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖。结果成功构建miR-26a重组慢病毒的表达载体,感染白血病细胞NB4后,能够成功过表达miR-26a。生长曲线的结果显示与感染LV-GFP阴性对照组和未感染组相比,LV-miR-26a-GFP感染组细胞的增殖速度显著增加(P<0.01),软琼脂克隆形成实验证实了感染LV-miR-26a-GFP的NB4细胞的克隆形成能力(GFP+克隆数为75+10)与阴性对照组(感染LV-GFP)相比(GFP+克隆数为26+5)显著增强(P<0.05)。在NB4细胞中过表达miR-26a后,其靶基因PTEN的表达明显被抑制。结论 MicroRNA-26a的表达可增强急性髓系白血病细胞的增殖能力,促进白血病细胞的增殖。

MicroRNA-26a在心血管疾病中的研究进展

心血管疾病是心脏和血管系统的疾病,包括高血压、冠状动脉疾病、动脉粥样硬化、脑卒中、心力衰竭等。心血管疾病的发生发展受到多种因素影响,其中最常见的因素是遗传和环境变化。尽管心血管疾病在诊断和治疗方面取得了显著进展,但仍是导致死亡的主要原因。因此深入了解心血管疾病发生发展潜在的分子和细胞机制,开发新的心血管病防治方法,将有助于降低心血管疾病的发生率和病死率[1]。

MicroRNA-26b对糖氧剥夺诱导的BV-2细胞的神经毒性的保护作用

目的:研究microRNA-26b对糖氧剥夺(oxygen-glucosedeprivation,OGD)诱导BV-2细胞的神经毒性作用的影响。方法:OGD诱导BV-2细胞活化,通过ELISA检测培养上清中IL-6浓度,PCR检测BV-2细胞IL-6 mRNA水平。分别对BV-2细胞转染microRNA-26b拟物(miR-26b mimics)、阴性对照(negativecontrol,NC)、抑制物(mi R-26binhibitor),经OGD处理后检测培养上清中IL-6浓度并收集BV-2细胞上清配制成条件培养基作用于SH-SY5Y细胞,用CCK-8检测SH-SY5Y细胞活力。结果:与对照组相比,经OGD处理1h后,BV-2细胞IL-6表达增加,同时细胞上清使SH-SY5Y细胞死亡增加;对BV-2细胞转染mi RNA-26b可减少OGD引起的IL-6增加,使SH-SY5Y细胞的死亡减少。结论:经糖氧剥夺处理的BV-2细胞具有神经毒性作用,microRNA-26b可减轻其神经毒性作用。

MicroRNA-26b抑制胚胎干细胞的多能性

目的明确miRNA-26b(miR-26b)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能性的调控作用。方法实时荧光定量PCR检测miR-26簇前体在mESCs和小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中的表达。实时荧光定量PCR检测胚状体(EB)形成过程中成熟miR-26b的表达。CCK-8方法检测miR-26b对mESCs增殖能力的影响。流式细胞术测定miR-26b对mESCs细胞周期与凋亡的影响。使用碱性磷酸酶染色试剂盒检测miR-26b对mESCs中碱性磷酸酶活性的影响。实时荧光定量PCR检测miR-26b对mESCs中多能性转录因子(Oct4、Sox2和Nanog)mRNA表达的影响。使用蛋白质印迹法检测miR-26b对mESCs中3个关键转录因子的蛋白表达影响。用体外模型观察转染pcDNA-pre-miR-26b对mESCs形态的影响。结果 mESCs中,miR-26b的前体在miR-26簇群表达最高。MEF中所有miR-26前体均上调,其中pre-miR-26b上调幅度最大(上调约10倍)。成熟的miR-26b在EB形成过程中从第2天到第6天明显上调,并且成熟miR-26b在MEF中的表达水平明显高于其在mESCs中的表达水平。miR-26b的过表达抑制mESCs增殖,并显示miR-26b过表达诱导mESCs于细胞周期的G1期阻滞,miR-26b不影响mESCs的凋亡。ALP染色结果表明miR-26b导致mESCs中ALP活性降低。过表达miR-26b导致mESCs中多能性标志物(Oct4、Sox2和Nanog)的表达水平降低。体外模型研究miR-26b对mESCs分化的影响,在miR-26b诱导的第4天观察到了分化的细胞。结论此研究证实miR-26b对mESCs多能性的调控作用。