X射线对食管癌中microRNA-296表达的影响

目的探讨X射线对食管癌中microRNA-296的表达有无影响。方法人食管癌细胞Eca109被分为处理组和对照组,处理组采用X射线反复照射(累计放射剂量至60Gy),MTT法检测两组细胞增殖抑制率,单克隆形成实验检测放射敏感性,Northern blot检测microRNA-296的表达,Real time-PCR法检测食管癌亲本细胞经8Gy的X射线照射后不同时间点microRNA-296的表达情况。结果处理组细胞较对照组细胞增殖抑制率降低,显示出明显的放射抗性,但两组细胞中microRNA-296相对值分别为(0.032 5±0.001 6)和(0.034 1±0.003 2),表达差异无统计学意义。亲本细胞经8Gy射线照射后,计算不同时间点细胞中microRNA-296表达Ct值,30min,2h,6h,12h,24h,48h,72h,7d,10d,14d,18d,microR-296的Ct值分别为:(1.175 4±0.048 2),(1.412 3±0.140 9),(0.969 0±0.106 3),(1.048 8±0.099 9),(0.938 4±0.166 9),(0.870 5±0.213 8),(0.618 3±0.095 1),(1.608 1±0.223 0),(3.045 6±0.414 6),(1.073 5±0.110 2),(0.965 4±0.129 4),对照组Ct值为:(1.290 2±0.187 1)。第3天与第10天时与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 microRNA-296与食管癌放射抗拒的产生没有显示直接相关性;X射线对食管癌细胞中microRNA-296的表达有影响,microRNA可能参与食管癌的放射损伤修复机制。

经典Wnt通路与食管癌细胞放射抵抗相关关系探讨

目的明确经典Wnt通路在食管癌细胞放射抵抗中的作用,探讨经典Wnt通路介导食管癌细胞放射抵抗的机制,为临床上增强食管癌放射敏感性提供重要的分子靶点。方法应用克隆形成实验检测人食管癌细胞EC9706、ECA109、KYSE70、KYSE150的放射敏感性。通过蛋白质印迹和RT-PCR检测照射后经典Wnt通路的活化情况。通过添加经典Wnt通路激活剂(AZD2858)和抑制剂(XAV-939)综合评价经典Wnt通路对食管癌细胞放射敏感性的影响。通过细胞免疫荧光技术检测照射后细胞DNA双链断裂(DSB)的产生、修复和DNA双链断裂修复蛋白焦点的形成。结果4种食管癌细胞的放射敏感性由高到低分别为EC9706、ECA109、KYSE70、KYSE150细胞。KYSE150细胞照射后细胞核内β联蛋白增加,c-Myc基因转录上调(均P<0.05);而EC9706细胞照射后细胞核内β联蛋白、c-Myc基因转录与照射前相近(均P>0.05)。EC9706细胞经AZD2858处理后放射抗性增加(P<0.05),而KYSE150细胞经XAV-939处理后放射抗性降低(P<0.05)。AZD2858使EC9706细胞DNA双链断裂修复加快(P<0.05),而XAV-939使KYSE150细胞DNA双链断裂修复减慢(P<0.05);XAV-939通过抑制同源重组修复相关蛋白(BRCA1和RAD51),而不是非同源末端连接修复相关蛋白(Ku80和XRCC4)降低DNA双链断裂修复能力。结论经典Wnt通路通过调控照射后DNA双链断裂的同源重组修复参与对食管癌细胞放射敏感性的调控,抑制经典Wnt通路可以克服食管癌细胞的放射抵抗,增强放射对食管癌细胞的杀伤作用。