长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1(musculin antisense RNA 1,MSC-AS1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用Lipofectamine TM 2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高(P<0.05);MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P<0.01),并提示患者的预后不良(P<0.01);敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。

microRNA-302a-3p对食管癌细胞顺铂药物耐药性的影响及相关机制

目的:探讨microRNA-302a-3p(miRNA-302a-3p)对食管癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及相关机制。方法:qRT-PCR检测食管癌组织和食管癌细胞中miRNA-302a-3p的表达;CCK-8法检测DDP的IC50;Eca109细胞分为阴性对照组(miRNA-NC组)和miRNA-302a-3p模拟物组(miRNA-302a-3p mimics组),并经DDP处理;细胞克隆形成实验和EdU检测各组细胞的增殖能力;细胞侵袭迁移实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力;细胞划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率和凋亡周期;TUNEL实验检测各组细胞的凋亡情况;Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。BALB/C裸小鼠分为miRNA-NC组和miRNA-302a-3p mimics组,并经DDP灌胃治疗;测量各组小鼠体重和肿瘤体积;免疫组织化学法检测各组肿瘤组织中Ki67的阳性表达。结果:miRNA-302a-3p在食管癌组织和食管癌细胞中低表达;与miRNA-NC组相比,miRNA-302a-3p mimics降低了对各种剂量DDP的细胞活力,并降低了Eca109细胞的IC50值(P<0.01);用DDP处理后,与miRNA-NC组相比,miRNA-302a-3p mimics组细胞的增殖能力下降(P<0.01),侵袭迁移能力下降(均P<0.01),细胞凋亡率提高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.001),Bax和Caspase-3蛋白表达上调(P<0.001);经DDP灌胃治疗后,与miRNA-NC组相比,miRNA-302a-3p mimics组小鼠体重明显增加(P<0.01),肿瘤体积明显减小(P<0.01),且小鼠肿瘤组织中Ki67的阳性表达明显下降(P<0.01)。结论:过表达miRNA-302a-3p可提高食管癌细胞对DDP的敏感性。

血浆microRNAs:HCV阳性肝硬化新的生物标记物

目的探讨血清micro RNA(mi RNA)在丙型肝炎病毒阳性的肝硬化中的表达情况。方法采用实时定量PCR(Real-time PCR)的方法检测mi R-30c-5p和mi R-302c-3p在丙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒阳性的肝硬化患者血清中的表达。结果 mi R-30c-5p和mi R-302c-3p在丙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒阳性的肝硬化患者中表达均增高。结论丙型肝炎病毒阳性的肝硬化患者血清中的mi R-30c-5p和mi R-302c-3p表达增高,可能作为监测和诊断丙型肝炎病毒阳性的肝硬化的生物标志物。

布比卡因对胃癌细胞抑制作用的机制研究

目的探讨布比卡因对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(LncRNA SNHG16)/微小RNA-302c-3p(miR-302c-3p)分子轴的调控作用。方法体外培养人胃癌细胞AGS,细胞中分别加入3个剂量(50,100,200μmol·L^(-1))的布比卡因处理细胞(命名为低、中、高3个剂量实验组),分别将pcDNA、pcDNA-SNHG16转染至AGS细胞随后加入高剂量布比卡因处理细胞(命名为第1转染组、第2转染组)。噻唑蓝法、Transwell实验用于检测AGS细胞增殖、迁移及侵袭,实时荧光定量-PCR法用于分析SNHG16和miR-302c-3p基因表达水平,通过双荧光素酶报告实验确定SNHG16和miR-302c-3p基因之间靶向关系。结果空白对照组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别为(99.21±5.45)%,(83.98±11.87)%,(59.78±4.93)%,(41.00±5.45)%;这4组的SNHG16基因的表达水平分别为0.98±0.05,0.70±0.06,0.49±0.07,0.30±0.06;这4组的miR-302c-3p基因的表达水平分别为0.98±0.04,1.26±0.11,1.65±0.12,2.29±0.31;这4组的迁移细胞数分别为(104.56±3.57),(84.56±6.86),(60.44±10.78),(36.11±5.42)个;这4组的侵袭细胞数分别为(117.89±7.66),(84.67±6.78),(63.56±6.48),(28.89±4.20)个。SNHG16可竞争性结合miR-302c-3p。第1转染组、第2转染组细胞存活率分别为(41.73±13.11)%,(90.15±5.83)%;miR-302c-3p的表达水平分别为0.99±0.06,0.47±0.17;迁移细胞数分别为(36.89±8.34),(74.78±8.63)个;侵袭细胞数分别为(28.67±4.87),(79.11±10.56)个。上述指标:3个剂量实验组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),且有剂量组依赖性;第2转染组与第1转染组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论布比卡因可通过下调SNHG16基因的表达而上调miR-302c-3p基因的表达进而减弱胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。