microRNA-30c沉默对P19细胞增殖及分化的影响

目的通过沉默microRNA（miRNA）-30c研究miRNA-30c对P19细胞增殖及分化功能的影响。方法将成功构建的miRNA-30c沉默质粒（miRNA-30c沉默组）与空载质粒（阴性对照组）通过lip02000法分别转染P19细胞，荧光表达观察质粒转染效率；通过杀稻瘟菌素Blasticidin筛选出miRNA．30c沉默稳定表达的P19细胞株；使用双荧光素酶报告基因间接验证成功沉默稳定表达的P19细胞株；细胞增殖（CCK-8）法检测细胞增殖活性；使用二甲基亚砜（DMSO）诱导P19细胞分化；倒置显微镜观察细胞分化形态变化；使用聚合酶链反应检测心肌分化标志基因（cTnT、NKX2．5、GATA4）的核酸表达水平。结果通过荧光表达观察到质粒成功转染入P19细胞；双荧光素酶报告基因提示miRNA-30c沉默显著解除了miRNA-30c对靶基因Gf口的抑制作用，细胞株成功建立（P〈0．001）；P19细胞分化过程中，倒置显微镜观察到miRNA-30c沉默组跳动心肌细胞的数量及频率均低于阴性对照组；检测心肌标志物发现miRNA-30c沉默组心肌细胞分化数量、标志基因表达均显著低于阴性对照组（P均〈0．05）。结论miRNA-30c沉默可以显著抑制P19细胞增殖功能，并抑制其向心肌细胞的分化，为其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。

microRNA-379在胚胎心脏发育及P19细胞分化过程中的表达规律

目的 观察microRNA （miR）-379在正常小鼠胚胎心脏发育过程中表达水平的变化,结合其在P19细胞向心肌细胞分化过程中的表达情况,探讨其在心脏发育中可能存在的作用.方法 取孕第8.5、11.5、14.5、18.5天小鼠胚胎的心脏组织,采用实时荧光定量PCR （RT-PCR）技术检测基因miR-379的表达变化.应用10 mL/L二甲基亚砜诱导P19细胞向心肌细胞方向分化,细菌培养皿中悬浮诱导至第4天,形成细胞聚集体后转移至6孑板培养,采用RT-PCR技术分别检测诱导第0、4、6、10天P19细胞中miR-379基因的表达水平.结果 miR-379在小鼠胚胎心脏发育过程中表达量逐渐减低,各时间点之间比较差异有统计学意义（F=21.13,P＜0.05）.另一方面,在P19细胞诱导分化过程中心肌标志物肌钙蛋白T呈递增趋势,证明P19细胞被成功诱导为心肌样细胞.在P19细胞向心肌细胞分化的第0天表达量较低,第4天表达量最高,随后表达量又逐渐减低.结论 miR-379参与心脏发育过程,且可能与先天性心脏病的发生发展有关,但是具体机制还需要进一步的研究。