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microRNA-30c沉默对P19细胞增殖及分化的影响
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作者 刘雪华 朱莎莎 +6 位作者 余章斌 朱春 李萌萌 韩树萍 胡晓山 朱金改 彭宇竹 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期992-995,共4页
目的通过沉默microRNA(miRNA)-30c研究miRNA-30c对P19细胞增殖及分化功能的影响。方法将成功构建的miRNA-30c沉默质粒(miRNA-30c沉默组)与空载质粒(阴性对照组)通过lip02000法分别转染P19细胞,荧光表达观察质粒转染效率;通过杀... 目的通过沉默microRNA(miRNA)-30c研究miRNA-30c对P19细胞增殖及分化功能的影响。方法将成功构建的miRNA-30c沉默质粒(miRNA-30c沉默组)与空载质粒(阴性对照组)通过lip02000法分别转染P19细胞,荧光表达观察质粒转染效率;通过杀稻瘟菌素Blasticidin筛选出miRNA.30c沉默稳定表达的P19细胞株;使用双荧光素酶报告基因间接验证成功沉默稳定表达的P19细胞株;细胞增殖(CCK-8)法检测细胞增殖活性;使用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞分化;倒置显微镜观察细胞分化形态变化;使用聚合酶链反应检测心肌分化标志基因(cTnT、NKX2.5、GATA4)的核酸表达水平。结果通过荧光表达观察到质粒成功转染入P19细胞;双荧光素酶报告基因提示miRNA-30c沉默显著解除了miRNA-30c对靶基因Gf口的抑制作用,细胞株成功建立(P〈0.001);P19细胞分化过程中,倒置显微镜观察到miRNA-30c沉默组跳动心肌细胞的数量及频率均低于阴性对照组;检测心肌标志物发现miRNA-30c沉默组心肌细胞分化数量、标志基因表达均显著低于阴性对照组(P均〈0.05)。结论miRNA-30c沉默可以显著抑制P19细胞增殖功能,并抑制其向心肌细胞的分化,为其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 microrna-30p19细胞 细胞增殖 分化
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microRNA-379在胚胎心脏发育及P19细胞分化过程中的表达规律 被引量:2
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作者 王丽华 宋桂仙 +4 位作者 朱金改 余章斌 刘明 陈斌 周晓玉 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期1886-1888,共3页
目的 观察microRNA (miR)-379在正常小鼠胚胎心脏发育过程中表达水平的变化,结合其在P19细胞向心肌细胞分化过程中的表达情况,探讨其在心脏发育中可能存在的作用.方法 取孕第8.5、11.5、14.5、18.5天小鼠胚胎的心脏组织,采用实时荧光... 目的 观察microRNA (miR)-379在正常小鼠胚胎心脏发育过程中表达水平的变化,结合其在P19细胞向心肌细胞分化过程中的表达情况,探讨其在心脏发育中可能存在的作用.方法 取孕第8.5、11.5、14.5、18.5天小鼠胚胎的心脏组织,采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)技术检测基因miR-379的表达变化.应用10 mL/L二甲基亚砜诱导P19细胞向心肌细胞方向分化,细菌培养皿中悬浮诱导至第4天,形成细胞聚集体后转移至6孑板培养,采用RT-PCR技术分别检测诱导第0、4、6、10天P19细胞中miR-379基因的表达水平.结果 miR-379在小鼠胚胎心脏发育过程中表达量逐渐减低,各时间点之间比较差异有统计学意义(F=21.13,P<0.05).另一方面,在P19细胞诱导分化过程中心肌标志物肌钙蛋白T呈递增趋势,证明P19细胞被成功诱导为心肌样细胞.在P19细胞向心肌细胞分化的第0天表达量较低,第4天表达量最高,随后表达量又逐渐减低.结论 miR-379参与心脏发育过程,且可能与先天性心脏病的发生发展有关,但是具体机制还需要进一步的研究。 展开更多
关键词 microrna-379 心脏发育 心肌组织 p19细胞
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