microRNA-513b-5p通过抑制αB-crystallin促进晶状体细胞氧化应激和凋亡

目的研究microRNA(miR)-513b-5p对晶状体稳定性调节蛋白αB-crystallin的调节关系,及miR-513b-5p对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)氧化应激和凋亡调节的下游机制。方法实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中miR-513b-5p及αB-crystallin的水平。miR-513b-5p拟似物mimic单独转染LEC细胞SRA01/04,或抑制剂和H 2O 2共处理SRA01/04;另外,mimic与αB-crystallin过表达质粒cDNA3.1-αB-crystallin(c-CRYAB)联合转染SRA01/04,试剂盒检测的细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blot法分别检测miR-513b-5p的水平及αB-crystallin、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,生物信息学分析和荧光素酶报告基因实验研究miR-513b-5p和αB-crystallin的靶向关系。结果白内障患者晶状体组织中miR-513b-5p的水平显著上调(P<0.05)和αB-crystallin的表达水平下调(P<0.05);过表达miR-513b-5p促进SRA01/04凋亡和活性氧ROS分子水平,下调抗氧化分子SOD;抑制miR-513b-5p降低H 2O 2所诱导的活性氧ROS(P<0.05);αB-crystallin的表达被miR-513b-5p过表达显著性下调(P<0.05),miR-513b-5p过表达对细胞凋亡和ROS与SOD水平的调控作用被αB-crystallin过表达显著削弱(P<0.05)。结论miR-513b-5p通过对αB-crystallin蛋白的负调节从而促进LEC的氧化应激和凋亡。

MicroRNA-513b-5p调控mGluR5表达对紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠的影响

目的:研究MicroRNA(miR)-513b-5p对代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的调节关系及其对紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠的影响。方法:RT-qPCR和Western blot法检测紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠DRG中miR-513b-5p和mGluR5的表达变化。根据生物信息学分析、双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证miR-513b-5p和mGluR5相互作用。大鼠紫杉醇造模同时行髓鞘内置管,然后按不同分组进行慢病毒髓鞘内注射:⑴对照组(Lv-NC组);⑵miRNA非特异性对照组(Lv-miRNA-NC组);⑶过表达miR513b-5p组(Lv-miR513b-5p组);⑷过表达mGluR5组(Lv-mGluR5组);⑸过表达miR513b-5p混合mGluR5组(Lv-mGluR5+Lv-miR513b-5p组),1周后使用Western blot法检测各组DRG中mGluR5水平,并后续进行热痛觉阈值检测及机械痛觉敏感性检测。结果:miR-513b-5p在紫杉醇疼痛模型大鼠DRG中表达水平明显降低,而mGluR5的水平明显升高(P<0.05),并且mGluR5的蛋白水平在造模后明显上调(P<0.05)。StarBase在线分析数据库(http://starbase.sysu.edu.cn/)显示mGluR5与miR-513b-5p存在互补位点,双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验均证实miR-513b-5p能特异结合mGluR5(P<0.05);鞘内注射慢病毒Lv-miR513b-5p在降低mGluR5蛋白表达水平同时,行为学结果显示大鼠TWL及MWT明显升高(P<0.05)。结论:miR-513b-5p可以通过靶向负调控大鼠DRG中mGluR5的表达水平,从而缓解紫杉醇诱导的神经病理性疼痛。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。

支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系

目的:分析支气管哮喘患儿外周血microRNA-30a(miR-30a)、microRNA-15b-5p(miR-15b-5p)水平与气道炎症、肺功能的关系。方法:选择2020年3月—2022年3月我院收治的123例支气管哮喘患儿作为研究组,另外选择同期在我院体检的100例健康儿童作为对照组。入院后均检测外周血miR-30a、miR-15b-5p水平,利用肺功能仪检测第1秒用力呼气量(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)及FEV_(1)/FVC等肺功能指标水平,同时检测气道炎症指标水平。比较各组血清miR-30a、miR-15b-5p水平及肺功能、气道炎症指标,采用Pearson相关分析探讨血清miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估外周血miR-30a、miR-15b-5p水平对支气管哮喘发生的预测价值。结果:研究组患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均高于对照组(P<0.05)。研究组患儿诱导痰中的细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞的数目均高于对照组,巨噬细胞的数目低于对照组(P<0.05)。研究组患儿FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC肺功能指标均低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均与肺功能指标(FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC)及巨噬细胞呈负相关(P<0.05),与细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞数目呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-30a、miR-15b-5p预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.841(95%CI:0.792~0.890)、0.862(95%CI:0.817~0.917),二者联合预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.911(95%CI:0.874~0.958)。结论:支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均呈高表达,且二者水平变化与气道炎症、肺功能密切相关,另外可作为预测支气管哮喘患儿发病的有效指标。

大疱性类天疱疮患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p的表达及其临床意义

目的探讨大疱性类天疱疮(BP)患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达的意义。方法选取2019年6月—2021年12月青岛市中医医院收治的79例BP患者作为研究组。另选取同期该院体检的61例健康群众作为对照组。收集两组基本资料、生化指标,采用实时荧光定量聚合酶链反应测定microRNA-146b-5p表达情况。采用多因素Logistic逐步回归分析影响BP诊断的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清外泌体microRNA-146b-5p对早期BP的诊断效能,采用Pearson分析BP患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达与病情严重程度的相关性。结果两组性别、年龄、体质量指数≥25 kg/m^(2)、合并高血压、合并糖尿病、合并高脂血症、合并冠心病、吸烟史、饮酒史,血肌酐、血尿酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血红蛋白、白蛋白、白细胞计数、血小板计数、降钙素原、肿瘤坏死因子α、CD14^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、白细胞介素6、白细胞介素4、白细胞介素21、血清25-羟维生素D比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组C反应蛋白、OX40、OX40L、巨噬细胞游走抑制因子、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量均高于对照组,研究组CD4^(+)T淋巴细胞水平低于对照组。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量[O^R=5.191(95%CI:2.136,12.617)]、CD4^(+)T淋巴细胞水平[O^R=4.894(95%CI:2.014,11.894)]、ECP[O^R=4.076(95%CI:1.677,9.905)]是BP诊断的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP的最佳截断值为1.11,敏感性为73.42%(95%CI:0.621,0.824),特异性为80.33%(95%CI:0.678,0.890),曲线下面积为0.766(95%CI:0.671,0.861)。Pearson相关性分析显示,BP患者疱液外泌体microRNA-146b-5p与BPDAI评分呈正相关(r=0.741,P<0.05),血清microRNA-146b-5p相对表达量与BPDAI评分呈正相关(r=0.736,P<0.05)。结论外泌体microRNA-146b-5p不仅与BP发生有关,也可能与其病情进展有关,且血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP发生效能良好。

微RNA-30b-5p通过靶向Atg5抑制多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬

目的·探究microRNA-30b-5p(miR-30b-5p)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠中的表达及miR-30b-5p过表达对卵巢颗粒细胞(granulosa cell,GC)自噬的影响。方法·采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建立PCOS大鼠模型,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blotting检测正常组和PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p和自噬相关蛋白5同源物(autophagy-associated protein 5 homologue,Atg5)的表达。分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组、miR-NC组、miR-30b-5p过表达组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-NC组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-Atg5组,另取正常组大鼠卵巢GC为空白组;将miR-30b-5p mimic和pcDNA3.1-Atg5及相应的阴性对照转染到细胞中,转染48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中miR-30b-5p和Atg5 mRNA表达,验证转染效果。CCK-8及流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡率;免疫荧光染色检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)阳性表达;Western blotting检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果·PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p表达水平显著低于正常组,Atg5 mRNA和蛋白水平显著高于正常组(均P=0.000)。转染后,与空白组相比,对照组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著降低,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(均P=0.000);与对照组相比,miR-30b-5p过表达组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著升高,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低(均P=0.000)。上调Atg5可明显减弱miR-30b-5p过表达对卵巢GC增殖和自噬的抑制作用(均P=0.000)。结论·MiR-30b-5p在PCOS中呈低表达;过表达miR-30b-5p可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖和自噬,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Atg5表达有关。

颅内动脉瘤患者血清hsa-miR-513b-5p水平及作用机制研究

目的探讨血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中的表达水平及其可能的作用机制。方法收集颅内动脉瘤患者(颅内动脉瘤组)和无颅内动脉瘤的志愿者(对照组)各100例,采用定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)技术测定血清hsa-miR-513b-5p、肿瘤坏死因子(TNF-α)、MMP2、MMP3、MMP9(基质金属蛋白酶,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂4(TIMP4)水平。采用hsa-miR-513b-5p模拟物和抑制剂转染人血管平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMC),检测细胞增殖、凋亡和坏死变化。通过双荧光素酶报告基因分析hsa-miR-513b-5p的作用靶点COL1A1,并分析影响颅内动脉瘤形成的信号通路。结果颅内动脉瘤组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、TNF-α、MMP2、MMP3、MMP9水平高于对照组(P<0.05),而低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、血浆总同型半胱氨酸(Hcy)和TIMP4水平降低(P<0.05)。与对照组相比,颅内动脉瘤组患者血清hsa-miR-513b-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p模拟物转染的HASMC,与模拟物对照组比较,其细胞增殖能力降低,而凋亡和坏死水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p抑制剂转染的HASMC,与抑制剂对照组比较,其细胞增殖能力增强,而凋亡和坏死水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示has-miR-513b-5p可靶向抑制COL1A1表达,并上调RIP1-RIP3-MLKL和MMPs信号通路,抑制HASMC增殖和细胞外基质合成。结论血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中表达水平下降,并参与调节血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质合成影响动脉瘤形成。

LncRNA LINC01224/miR-513b-5p对结肠癌细胞SW1116增殖、迁移及侵袭的影响

背景我国结肠癌发病率与死亡率逐年上升,目前结肠癌的发病机制尚未阐明,LncRNA在结肠癌等肿瘤发生过程中可发挥重要调控作用,其主要通过竞争性结合miRNA而发挥作用,已知LncRNA LINC01224在肿瘤中可能发挥癌基因作用,但LINC01224在结肠癌形成及发展过程中的作用机制尚未阐明.目的探讨LncRNA LINC01224/miR-513b-5p对结肠癌细胞SW1116增殖、迁移、侵袭的影响及其可能作用机制.方法采用qRT-PCR法检测癌旁组织与结肠癌组织中LINC01224、miR-513b-5p的表达量;si-NC、si-LINC01224、si-LINC01224与anti-miR-NC、si-LINC01224与anti-miR-513b-5p分别转染入人结肠癌细胞SW1116;采用qRT-PCR法检测SW1116细胞中LINC01224、miR-513b-5p的表达量;采用MTT实验检测细胞存活率;应用流式细胞仪检测细胞周期;采用Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测LINC01224与miR-513b-5p的靶向关系;Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量.结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中LINC01224的表达水平升高(P<0.05),miR-513b-5p的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC01224组细胞存活率降低(P<0.05),G0-G1期细胞比例升高(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),N-cadherin蛋白水平降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC01224可靶向结合miR-513b-5p;与si-LINC01224+anti-miR-NC组比较,si-LINC01224+antimiR-513b-5p组细胞存活率升高(P<0.05),G0-G1期细胞比例降低(P<0.05),S期细胞比例升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05),N-cadherin蛋白水平升高(P<0.05).结论干扰LINC01224表达可通过上调miR-513b-5p而减弱结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并可诱导细胞周期阻滞于G0-G1期.

MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达及意义

目的研究MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达和临床意义。方法选取大肠癌组织和癌旁正常组织50例,应用qPCR法,检测MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p表达水平;应用免疫组化法,检测PI3K表达水平。结果 MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p和PI3K在大肠癌组织中的的表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05),且MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p均和PI3K具有明显正相关性(P<0.05)。结论 MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p通过PI3K/AKT信号通路在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用。

新肾癌标志物microRNA-130b-5p在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的本研究通过检测比较microRNA-130b-5p(miR-130b-5p)在肾癌及癌旁正常组织之间以及肾癌细胞系和正常肾细胞系之间的表达水平,并分析其表达水平与临床病理资料之间的关系,为进一步研究miR-130b-5p在肾癌中深入的功能和机制奠定基础。方法采用qPCR方法检测miR-130b-5p在42对肾癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异,并运用秩和检验方法分析肾癌组织中miR-130b-5p表达量与患者临床病理特征之间的相关性。培养肾癌细胞系(786-O和ACHN)和正常肾上皮细胞系(293T)并采用qPCR方法检测细胞中miR-130b-5p的表达量。结果miR-130b-5p在肾癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.01),且肾癌组织中miR-130b-5p表达量与患者AJCC临床分期呈正相关(P=0.041),与其他临床病理资料如年龄、性别、T分期、组织类型和Fuhrman分级未发现明显相关关系(P>0.05)。同时,miR-130b-5p表达量在肾癌细胞系中也明显高于正常肾上皮细胞系(P<0.01)。结论 miR-130b-5p在肾癌组织和细胞系中均高表达,且其在肾癌组织中的表达水平与患者AJCC临床分期呈正相关,提示miR-130b-5p与肾癌的发生、发展相关,有望成为新的肾癌肿瘤标志物。

MiR-513b-5p在结肠癌中的表达

目的探讨miR-513b-5p在结肠癌组织中的表达。方法选取69份结肠癌样本作为研究对象,采用qRT-PCR方法检测结肠癌组织和对应癌旁组织中miR-513b-5p的表达情况。结果 miR-513b-5p在肿瘤组织的相对表达量较癌旁正常组织低(P<0.001),结肠癌组织中miR-513b-5p表达水平与原发性肿瘤的发生,淋巴结的转移和临床分期有关联(P<0.001)。miR-513b-5p表达与性别,年龄和血道转移无统计学差异(P>0.05)。结论 miR-513b-5p可能在结肠癌的发生发展中发挥抑癌基因的角色。

急诊冠状动脉介入治疗术后循环microRNA-26b-5p水平与血糖水平变化的观察性研究

目的:评估急诊冠状动脉介入治疗术(PCI)后循环microRNA-26b-5p水平和血糖水平变化的趋势及相关性。方法:根据入选标准和排除标准,共入选接受急诊PCI术的急性前壁心肌梗死患者38例。详细记录临床相关资料,分别于术前、术后24h、术后72h行循环血microRNA-26b-5p和血糖水平检测。Real Time PCR法检测血液样本中microRNA-26b-5p表达量的变化。结果:对于成功行急诊PCI的急性心肌梗死患者,术后microRNA-26b-5p表达水平较术前明显升高(P<0.01),术后血糖水平逐渐下降(P<0.01),两者之间存在负相关(r=-0.332,P<0.01)。结论:急性心肌梗死患者往往存在应激性高血糖,microRNA-26b-5p可能参与血糖水平的相关。

MicroRNA-20b-5p对早期膝骨关节炎模型大鼠软骨和软骨下骨血管新生的影响

背景:血管新生是早期膝骨关节炎膝关节微环境的重要病理特征,通过膝关节腔注射microRNA的方式抑制血管新生可能为早期膝关节的治疗提供新的作用靶点。目的:观察miR-20b-5p激动剂对早期膝骨关节炎大鼠关节软骨、软骨下骨血管生成的影响,探讨miR-20b-5p对早期膝骨关节炎大鼠软骨及软骨下骨可能的保护机制。方法:从12只SD雄性大鼠中随机抽取3只作为空白组,余下9只制备早期膝骨关节炎模型后随机分组,即模型组、miR-20b agomir组及miR-20b agomir NC组,每组3只大鼠。造模后1周,空白组不予处理,模型组、miR-20b agomir组、miR-20b agomir NC组分别于双后膝注射0.2 mL生理盐水、miR-20b-5p agomir溶液、miR-20b-5p agomir NC溶液1次。4周后处死各组大鼠取膝关节进行番红O-固绿、免疫组织化学染色及国际骨关节炎研究学会“软骨病理评价系统”评分,实时荧光定量PCR及Western blot检测软骨及软骨下骨中缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的mRNA和蛋白表达水平。结果与结论:①miR-20b agomir组国际骨关节炎研究学会“软骨病理评价系统”评分明显低于模型组和miR-20b agomir NC组(P<0.05);模型组与miR-20b agomir NC组的国际骨关节炎研究学会“软骨病理评价系统”评分相比差异无显著性意义(P>0.05);②膝关节病理切片显示,相比空白组,其他各组均有软骨基质流失和软骨、软骨下骨的缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白表达水平增加,其中miR-20b agomir组的软骨基质流失程度以及软骨、软骨下骨的缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白表达水平低于模型组和miR-20b agomir NC组(P<0.05);③miR-20b agomir组软骨、软骨下骨的缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的mRNA及蛋白表达水平均低于模型组和miR-20b agomir NC组(P<0.05);④提示过表达miR-20b-5p可下调早期膝骨关节炎软骨及软骨下骨缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子表达,抑制膝骨关节炎软骨及软骨下骨的血管新生,达到保护关节软骨的作用。

miR-513b-5p表达变化对结肠癌细胞增殖、迁移的影响及机制探讨

目的观察结肠癌(CC)组织、细胞中微小RNA-513b-5p(miR-513b-5p)的表达变化,以及miR-513b-5p对CC细胞增殖和迁移的影响,并探讨相关机制。方法采用qRT-PCR法检测CC组织、癌旁组织和CC细胞株(HCT116、RKO、SW480、LoVo、SW620)、人结肠成纤维细胞(CCD-112CoN)中的miR-513b-5p。将HCT116细胞分为miR-con组(转染miR-con)、miR-513b-5p抑制剂组(转染miR-513b-5p inhibitors);采用CCK-8试剂盒和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力。通过生物信息预测miR-513b-5p在信号传导及转录激活因子3(STAT3)上的结合位点;分别将野生型STAT3(STAT3-WT)质粒、突变型STAT3(STAT3-MUT)质粒和miR-513b-5p mimic、miR-con转染HCT116细胞;用荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性,采用Western blotting法检测STAT3蛋白。取部分HCT116细胞,分为miR-con组(转染miR-con)、miR-513b-5p模拟物组(转染miR-513b-5p mimics)、STAT3过表达组(共转染STAT3过表达质粒和miR-513b-5p mimics);采用CCK-8法和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力。结果CC组织和细胞中miR-513b-5p表达分别低于正常组织和CCD-112CoN细胞(P均<0.01)。miR-513b-5p抑制剂组细胞增殖活力和迁移数量均高于miR-con组(P均<0.05)。StarBase在线分析数据库显示,STAT3与miR-513b-5p存在结合位点;miR-513b-5p mimics可抑制STAT3-WT组荧光素酶活性(P<0.05),而对STAT3-MUT组荧光素酶活性无显著影响;miR-513b-5p mimics组STAT3蛋白相对表达量低于miR-con组、miR-513b-5p inhibitors组STAT3蛋白相对表达量高于miR-con组(P均<0.01)。miR-513b-5p模拟物组细胞增殖活力和迁移数量均低于miR-con组,STAT3过表达组细胞增殖活力和迁移数量均高于miR-513b-5p模拟物组(P均<0.01)。结论miR-513b-5p在CC组织和细胞中低表达,下调miR-513b-5p可促进细胞增殖和迁移;miR-513b-5p通过靶向STAT3起到抑制CC细胞增殖和迁移的作用。

MicroRNA-199b-5p在贝那普利改善自发性高血压大鼠心脏重构中的作用

目的探讨microRNA-199b-5p(miR-199b-5p)在贝那普利改善自发性高血压大鼠(SHR)心脏重构中的作用。方法取10周龄雄性SHR16只,随机分为两组:即SHR干预组和SHR对照组各8只;另取Wistar大鼠8只作为正常对照组即:NC组。SHR干预组:给予10mg/(kg.d)贝那普利灌胃8周;SHR对照组和NC组给予同等剂量蒸馏水灌胃8周。干预前后测量鼠尾动脉血压,测量后麻醉取心脏样本。HE染色、检测miR-199b-5p及TGF-β1、Smad3的表达水平。结果 SHR干预组心肌细胞形态学与NC组无明显差异;两组SHR心脏组织中的miR-199b-5p、TGF-β1、Smad3表达量高于NC组(P<0.01);但SHR干预组较SHR对照组低(P<0.01)。结论贝那普利可能通过抑制miR-199b-5p表达,下调TGF-β1、Smad3蛋白的表达从而改善SHR心脏重构。

lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制研究

目的 探究lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p(miR-26b-5p)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法 体外培养人TNBC细胞系MDA-MB-231细胞,培养后分组转染。设置对照组(空载质粒转染),SNHG6敲减组(si-SNHG6慢病毒载体转染)、miR-26b-5p抑制组(空载质粒+miR-26b-5p-inhibitor转染)及共转染组(si-SNHG6慢病毒载体+miR-26b-5p-inhibitor转染)。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG6及miR-26b-5p的表达,分别进行CCK-8实验、划痕实验及Transwell实验检测MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力,采用双荧光素酶报告实验检测SNHG6与miR-26b-5p的靶向作用。结果 与对照组比较,SNHG6敲减组SNHG6 mRNA表达下调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达上调(P <0.05);与对照组比较,miR-26b-5p抑制组SNHG6 mRNA表达上调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达下调(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组SNHG6 mRNA表达上调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达下调(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组SNHG6 mRNA表达下调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达上调(P <0.05)。对照组、SNHG6敲减组、miR-26b-5p抑制组、共转染组24 h、48 h、72 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点OD值有差异(F=52.481,P=0.000)。(2)4组OD值有差异(F=50.336,P=0.000),与对照组比较,SNHG6敲减组及共转染组24 h、48 h及72 h的OD值降低(P <0.05),miR-26b-5p抑制组24 h、48 h及72 h的OD值升高(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组24 h、48 h及72 h的OD值升高(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组OD值降低(P <0.05)。(3)4组OD值变化趋势有差异(F=20.109,P=0.000)。与对照组比较,SNHG6敲减组和共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少(P <0.05),miR-26b-5p抑制组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少(P <0.05)。且SNHG6与miR-26b-5p基因序列上存在结合位点。结论 敲减SNHG6通过靶向上调MDA-MB-231细胞中miR-26b-5p的表达,抑制TNBC增殖、迁移及侵袭。

过敏性紫癜患儿血清microRNA-6769b-5p的表达及与IL-10相关性

目的本研究旨在研究过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)患儿血清microRNA-6769b-5p、IL-10的表达,并探讨他们的相关性。方法选取2018年1月1日至2018年5月22日HSP患儿45例和27名健康儿童作为对照。研究中,使用荧光定量PCR检测分析microRNA-6769b-5p的水平,并通过ELISA检测血清IL-10的水平。结果MicroRNA-6769b-5p在HSP儿童血清中表达为下调,对腹痛有预测价值。此外,microRNA-6769b-5p与IL-10不具有相关性。结论这项研究表明,microRNA-6769b-5p、IL-10可能与HSP发病机理有关,并可能成为HSP的治疗靶标或诊断生物标志物。

LINC 01296/miR-1255 b-5 p促进非小细胞肺癌进展的研究

目的探究下调LINC 01296的表达对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)进展的影响,以及LINC 01296调控miR-1255 b-5 p在NSCLC发生发展中的分子机制。方法培养6种NSCLC细胞系;实时荧光定量聚合酶链反应法检测LINC 01296在NSCLC细胞系以及在48例患者样本中表达水平的高低;细胞计数试剂盒-8法检测稳转细胞株的细胞增殖情况;克隆形成实验检测细胞的生长以及增殖状况;划痕实验检测细胞的迁移情况;FITC-Annexin-V法检测细胞凋亡;动物实验,包括裸鼠尾静脉和皮下瘤注射,观察癌细胞的转移以及成瘤情况;双荧光素酶报告基因实验验证LINC 01296与miR-1255 b-5 p之间存在靶向结合关系。结果LINC 01296在NSCLC中高表达;LINC 01296基因敲低抑制NSCLC细胞生长、迁移;LINC 01296敲低抑制体内瘤体的生长和转移;LINC 01296与miR-1255 b-5 p的之间存在海绵吸附作用;LINC 01296与miR-1255 b-5 p的表达呈负相关。结论LINC 01296作为NSCLC的促癌分子,通过抑制miR-1255 b-5 p的表达水平,促进了NSCLC的发展。

miR-199b-5p靶向Klotho对脂多糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探究MicroRNA-199b-5p(miR-199b-5p)和Klotho在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤中的表达变化,并进一步探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,分为正常对照组(NC组)、LPS组、inhibitor-NC组、miR-199b-5p沉默组、sh-NC组、sh-Klotho组、miR-199b-5p沉默+sh-NC组、miR-199b-5p沉默+sh-Klotho组,除NC组外,其他组采用LPS刺激建立脓毒症细胞模型,诱导细胞损伤。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测细胞中miR-199b-5p、Klotho mRNA和蛋白表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;荧光探针DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)含量;试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;流式细胞术测定细胞凋亡率;Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3的表达。结果与NC组比较,LPS组细胞中miR-199b-5p表达、TNF-α、IL-6水平、ROS的荧光强度、细胞中MDA含量、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达显著升高(P<0.05),Klotho mRNA和蛋白表达、GSH-PX和SOD活性、Bcl-2表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较,miR-199b-5p沉默组细胞中miR-199b-5p表达、TNF-α、IL-6水平、ROS的荧光强度、细胞中MDA含量、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达显著降低(P<0.05),Klotho mRNA和蛋白表达、GSH-PX和SOD活性、Bcl-2表达显著升高(P<0.05);且在沉默miR-199b-5p的基础上,下调Klotho后细胞抗氧化能力降低(P<0.05),凋亡增加(P<0.05)。结论miR-199b-5p在LPS诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤中表达升高,沉默miR-199b-5p可能通过靶向上调Klotho的表达,增强细胞的抗氧化能力,从而减少肾小管上皮细胞凋亡。

Lnc-MEG3调控miR-10b-5p/CD82轴对垂体瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的探究lnc-MEG3对垂体瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法取垂体瘤HP75细胞分为对照组、si-NC组、si-MEG3组、pcDNA3.1-NC组、oe-MEG3组、oe-MEG3+mimic-NC组、oe-MEG3+miR-10b-5p mimic组。转染后,检测细胞中lnc-MEG3、miR-10b-5p和CD82 mRNA的表达水平、细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞中CD82、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、MMP-9蛋白表达。结果Lnc-MEG3过表达可降低miR-10b-5p,上调CD82和E-cadherin水平,降低PCNA、N-cadherin、MMP-9水平,抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05);上调miR-10b-5p可抑制CD82,减弱lnc-MEG3过表达对垂体瘤细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-10b-5p mimic后,细胞中MEG3-WT和CD82-WT的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。结论Lnc-MEG3过表达可能通过靶向下调miR-10b-5p,进而上调CD82的表达,抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭。