MicroRNA-520家族与血瘀证相关性探讨

从分子生物学的角度探讨microRNA-520家族与血瘀证的相关性,认为microRNA-520家族是通过介导炎症反应、免疫紊乱、NF-κB信号通路调节血瘀证的形成过程,可以作为血瘀证的生物标记物,为中医药防治血瘀证提供新的治疗依据,,具有重要的临床应用价值。

MicroRNA-520a用于异位妊娠血清学诊断的研究

目的评估microRNA-520a作为异位妊娠(ectopic pregnancy,EP)患者非侵入性血清学诊断标志物的临床应用价值。方法收集2017年1月至2018年12月首都医科大学附属北京妇产医院185例孕妇的病例资料及其首次就诊送检的血液标本,包括64例宫腔妊娠(viable intrauterine pregnancy,VIP)、48例自然流产(spontaneous abortion,SA)以及73例EP,采用定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测患者血浆中microRNA-520a的表达水平。同时检测血清绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG)和孕酮水平,并比较各组间差异。采用ROC曲线分析microRNA-520a浓度作为EP血清学诊断标志物的有效性。结果microRNA-520a在EP组血浆中的表达水平(1.88±0.50)与VIP组(2.67±0.61,P=0.000)及SA组(2.77±0.50,P<0.001)比较,均显著下降。用于VIP与EP的鉴别诊断,ROC曲线的AUC为0.82(95%CI:0.68~0.97,P=0.001)。结论异位妊娠者血浆标本中microRNA-520a表达水平显著下降,microRNA-520a可作为血清学标志物应用于早期EP诊断。

母血microRNA-520a水平与胎儿心脏缺陷关系的研究

目的本研究旨在评估母体血循环microRNA-520a作为先天性心脏缺陷胎儿非侵入性诊断标志物的临床应用价值。方法 44例先天性心脏缺陷胎儿孕妇为研究组,34例正常胎儿孕妇做为对照组。定量RT-PCR检测两组孕妇血浆中的microRNA-520a表达水平。结果 microRNA-520a在先天性心脏缺陷胎儿孕妇血浆中的表达水平与正常对照组相比显著上升(P<0.001),ROC特征曲线下面积(AUC)为0.92(95%可信区间为0.86-0.97;P<0.001)。研究显示,microRNA-520a的血浆表达水平可以相当准确地诊断妊娠期胎儿的先天性心脏缺陷。结论本研究的结果表明,microRNA-520a在先天性心脏缺陷胎儿孕妇的血浆中表达水平显著上升。母体血循环microRNA-520a表达水平可能作为先天性心脏缺陷胎儿的非侵入性诊断标志物。

Ascl2和microRNA-200家族在结肠癌组织和癌旁组织中的定量表达及二者的相关性分析

目的探讨Ascl2与MicroRNA-200家族在结肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及癌旁组织中的表达及二者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中Ascl2与MicroRNA-200家族表达,用SPSS 18.0统计软件进行统计分析。结果 Ascl2在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),除了MicroRNA-429在癌组织中的表达与癌旁组织相比无统计学差异(P=0.2139),MicroRNA-200家族成员在癌组织中的表达都显著低于癌旁组织(P<0.05);且Ascl2和MicroRNA-200家族成员在癌组织中表达都呈负相关(r<-0.5,P<0.05)。结论发现与正常结直肠黏膜组织相比,Ascl2在结直肠癌组织中表达增高,MicroRNA-200家族表达降低,它们在结直肠癌组织中的表达呈现负相关。

人microRNA-200家族靶基因预测及生物信息学分析

目的对microRNA-200(miR-200)家族成员的靶基因进行预测和生物信息学分析,为进一步探讨miR-200家族的功能及其调节机制提供证据。方法运用靶基因预测软件TargetScan、PicTar2和miRanda分别预测miR-200家族9个成员的靶基因,再分别取各自在三个软件下预测所得靶基因的交集,然后利用miRTarbase数据库获取这9个miRNA经过至少3种实验验证并且靶向关系类型为具有功能的miRNA-靶基因互作的靶基因,将软件预测所得结果与靶向关系预测结果取并集,作为所纳入每个miRNA的靶基因集合,然后分别对靶基因集合进行生物学过程的功能富集,信号通路及蛋白质互作网络分析。结果 miR-200家族的预测靶基因富集于多个生物学过程,其生物学过程主要富集于:RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录负调控、DNA模板转录负调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控等;信号通路主要富集于:肿瘤、胶质瘤、黑色素瘤、肺小细胞癌等多种肿瘤和EB病毒感染、乙型肝炎等感染相关通路,蛋白质互作网络显示9个成员的预测靶基因编码蛋白质间存在复杂的相互作用,靶基因编码蛋白质"RAC1"、"SRC"、"RHOA"、"CREBBP"、"CTNNB1"在互作网络中具有核心地位。结论 miR-200家族中的成员通过调控靶基因进而调节下游靶蛋白参与肿瘤、感染等病理生理进程。

MicroRNA-183家族在肿瘤中的异常表达及其机制研究进展

MicroRNA-183(miRNA-183,miR-183)家族基因位于人类7号染色体,作为高度保守的miRNA家族成员,已有多项研究证实其与肿瘤的发生存在关联。该文总结了miR-183家族在不同肿瘤中表达变化的机制,以及其对肿瘤增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的调控机制,为miR-183家族作为肿瘤标志物单独及联合其他指标检测对肿瘤的诊断及预后价值提供依据。

MicroRNA-520b靶向白介素-2调节肝癌细胞生长、转移和药物敏感性研究

目的:研究microRNA-520靶向调节IL-2对肝癌细胞生长、转移和药物敏感性的影响。方法:选择并收集原发性肝细胞癌患者术后肝癌及其癌旁组织,采用RT-PCR检测miR-520b表达,采用免疫组化的方法检测IL-2的表达。培养肝癌细胞系HepG2,将细胞分为对照组、空白对照组和miR-520b过表达组(简称过表达组),空白对照组和过表达组细胞分别转染miR-NC及miR-520b mimics,3组细胞均加入重组IL-2培养12 h。检测miR-520b、IL-2的表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-520b对IL-2的靶向调控作用。采用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞转移和侵袭能力。检测细胞药物敏感性。结果:肝癌组织中miR-520b和IL-2表达均显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);体外模型中,过表达组细胞野生型IL-2的3′UTR的荧光素酶报告基因的表达较空白对照组降低(P<0.05)。转染miR-520b后,过表达组细胞生长率较对照组和空白对照组显著降低,凋亡率则显著增加,细胞转移和侵袭能力降低(P<0.05);miR-520b联合IL-2培养肝癌细胞的细胞增殖率较单独使用IL-2或miR-520b低(P<0.05)。结论:micro-520b可以靶向调节肝癌细胞中IL-2的表达,抑制癌细胞的生长、转移,增强药物敏感性,micro-520b对肝癌的诊断和治疗具有潜在的价值。

Nix和miR-520h对神经胶质瘤发生的影响及相互作用

目的通过综合分析肿瘤标本中基因和蛋白表达,及体外生物学作用的检测,来评价胶质瘤中Nix蛋白的作用以及Nix蛋白与miR-520h的关系。方法选取46例胶质瘤标本,RT-PCR检测miR-520h基因的表达,Western blotting检测Nix蛋白的表达;培养U251胶质瘤细胞,Western blotting检测Nix蛋白的表达;构建靶向Nix基因的shRNA敲除U251细胞中Nix基因(Nix-kn),Western blotting检测Nix,IKKα,i-κBα和p-NF-κB/p65等蛋白的表达水平;has-miR-520h抑制剂转染U251细胞,Western blotting检测Nix,IKKα,i-κBα和p-NF-κB/p65等蛋白的表达水平。结果胶质瘤标本的基因和蛋白检测表明,miR-520h的高表达伴随着Nix蛋白的高表达;体外实验结果表明,与正常培养的U251相比,缺氧培养的U251细胞Nix表达较高;与Nix-kn组相比,Nix-wt组胶质瘤细胞Nix和p-NF-κB/p65表达均明显增高,而NF-κB活性抑制剂蛋白i-κBα表达降低;200 nmol/L的has-miR-520h抑制剂处理细胞后,与正常对照组比较,Nix蛋白表达显著减少,而p-NF-kappaB/p65蛋白表达显著增加。结论在神经胶质瘤的发生发展中miR-520h与Nix蛋白的表达相关;miR-520h可能通过促进Nix合成,从而成为一个强大的肿瘤激活剂。

非编码小RNA200家族及U78在老年口腔鳞癌病人组织中的表达及功能分析

目的筛选并鉴定年龄≥60岁老年口腔鳞癌(OSCC)病人的癌组织及正常组织中的非编码小RNA(microRNA)的表达,分析其在OSCC发生中的临床意义。方法收集44例老年OSCC标本,23例正常口腔组织标本进行芯片检测,筛选与OSCC密切相关的micro RNA。采用Taqman定量PCR方法检测OSCC组织与正常组织中microRNA-200家族(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429)及U78的转录水平,对检测结果进行统计学分析,并采用生物信息学工具对其生物学功能进行预测分析。结果芯片及Taqman定量PCR结果证实,与正常口腔组织相比,OSCC组织中microRNA-200家族各microRNAs及U78的表达水平均有显著升高。生物信息学分析结果提示,microRNA-200家族microRNAs可靶向调控β-链蛋白和转化生长因子β2等与肿瘤发生发展密切相关的基因。多元线性回归分析表明,U78的表达量与肿瘤组织病理分级具有明显相关性(P=0.023),与临床分期及有无临床转移等临床指征无相关性。结论microRNA-200家族及U78作为生物诊断指标可用于辅助诊断OSCC。

MicroRNA-135a通过靶向Rap2a对肾细胞癌细胞迁移侵袭的影响

目的:探讨MicroRNA(miR)-135a对Ras家族小G蛋白2a(Rap2a)下游p-Akt表达及肾细胞癌(RCC)细胞迁移侵袭的影响,深入了解RCC恶化的潜在机制。方法:采用蛋白质印迹法检测正常肾组织细胞HK-2与RCC细胞Ketr-3、786-O、ACHN中Rap2a的表达水平; Target Scan软件预测靶向调控Rap2a的潜在miRNAs;双荧光素酶报告基因实验检测miR-135a与Rap2a基因的靶向关系;蛋白质印迹法检测Ketr-3细胞中Rap2a及其下游信号蛋白磷酸化蛋白激酶B(phosphate protein kinase B,p-Akt)表达;侵袭小室实验检测Ketr-3细胞的迁移侵袭能力。结果:Rap2a在正常肾组织细胞HK-2中低表达,在RCC细胞系中显著高表达;Target Scan软件预测发现miR-135a可与Rap2a的3'UTR互补结合;双荧光素酶报告基因检测与蛋白质印迹法实验均证实了miR-135a与Rap2a间的相互作用;过表达miR-135a可通过降低Rap2a及其下游蛋白p-Akt的表达抑制Ketr-3细胞的迁移侵袭能力。结论:本研究揭示了miR-135a通过靶向Rap2a/Akt信号途径抑制RCC细胞的迁移侵袭能力,miR-135a和Rap2a可能是治疗RCC的潜在分子靶点。

microRNA-34家族在肺癌中的作用机制

在许多癌症中， miR？34家族成员充当着极具潜力的具有肿瘤抑制活性的作用。例如，在肺癌中，外源性高表达miR？34a能够抑制肺癌细胞的增殖并诱导其凋亡。预示着利用miR？34a的恢复疗法（replace？ment therapy）治疗肺癌具有良好的前景，其作用机制也正在逐渐阐明。许多研究发现， miR？34a家族成员与肺癌细胞的增殖、转移、凋亡、细胞周期的调控息息相关。因此， miR？34a家族成员在肺癌的早期诊断、治疗、预后及发病机制的研究中发挥着重要作用。文章综述了miR？34家族的研究现状，重点总结了 miR？34家族在肺癌中的作用机制。

MicroRNA-520e通过靶向抑制AEG-1发挥抗结直肠癌特性

目的:探究MicroRNA-520e(miR-520e)在结直肠癌中的表达模式及其对细胞功能的影响。方法:采用qRT-PCR方法检测47例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织中miR-520e和星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)的mRNA表达水平。将SW480细胞分为对照组、miR-520e-mimic组、NC-mimic组、miR-520e-inhibitor组、NC-inhibitor组、miR-520e-mimic+AEG-1-pcDNA3.1组和miR-520e-mimic+NC-pcDNA3.1组。通过MTT法检测SW480细胞的增殖,通过Annexin V-FITC/PI双染色试剂盒检测细胞凋亡,通过Transwell检测细胞迁移和侵袭,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-520e和AEG-1的靶向关系,通过qRT-PCR或Western blotting检测AEG-1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、NF-κB p65(p65)和磷酸化的NF-κB p65(p-p65)的表达。结果:与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miR-520e的表达水平降低(t=9.353,P<0.001)。与对照组相比,miR-520e-mimic组的OD值降低,细胞凋亡率升高,细胞迁移和侵袭数量降低,MMP2、MMP9和p-p65蛋白表达水平降低(P<0.001)。与对照组相比,miR-520e-inhibitor组的OD值升高,细胞凋亡率降低,细胞迁移和侵袭数量升高,MMP2、MMP9和p-p65蛋白表达水平升高。与NC-mimic组相比,miR-520e-inhibitor组的相对荧光素酶活性降低(P<0.001)。与对照组相比,miR-520e-mimic组的AEG-1的mRNA和蛋白表达水平均降低,而miR-520e-inhibitor组均升高(P<0.001)。与miR-520e-mimic+NC-pcDNA3.1组相比,miR-520e-mimic+AEG-1-pcDNA3.1组的AEG-1的mRNA和蛋白表达水平升高,OD值升高,细胞凋亡率降低,迁移和侵袭细胞数增加,MMP2和MMP9的蛋白表达水平及p65的磷酸化水平均增加(P<0.001)。结论:miR-520e在结直肠癌中表达降低,可通过靶向抑制AEG-1来发挥抗结直肠癌特性,其抗癌机制可能通过NF-κB信号通路介导。

母血microRNA-520α水平与胎儿心脏缺陷关系的研究

目的探讨母血microRNA-520α水平对胎儿心脏缺陷的早期诊断价值及其临床意义。方法选取2016年5月~2018年4月怀有心脏缺陷胎儿孕妇23例(心脏缺陷组),同期产检的神经管畸形胎儿孕妇23例(神经管畸形组)和怀有正常胎儿孕妇30例(正常对照组)作为本文的主要研究对象,检测各组孕妇血液中的microRNA-520α水平,并通过ROC曲线分析评估母血microRNA-520α水平诊断胎儿心脏缺陷关系的价值。结果经分娩/引产证实胎儿心脏缺陷例数为22例,准确率为95.65%,误诊1例,漏诊率为4.35%。心脏畸形组的microRNA-520α水平(1.29±0.75)ng/ml,低于神经管畸形组的(1.81±0.95)ng/ml,显著低于正常对照组的(2.65±1.26)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步的ROC曲线分析得出母血microRNA-520α水平诊断胎儿心脏缺陷的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.854,在最佳临界值点对应的灵敏度、特异度分别为87%、71.7%,证明microRNA-520α对胎儿心脏缺陷的诊断效能较好。结论母血microRNA-520α水平对胎儿心脏缺陷具有诊断价值,且诊断准确性较好,可为胎儿心脏缺陷早期辅助评估提供客观参考。

血瘀证相关的microRNA-520b对白介素-8的影响及丹参酮Ⅱ_A的干预作用

目的:研究血瘀证相关的micorRNA-520b(miR-520b)对白介素-8(IL-8)的影响及丹参酮ⅡA(TanⅡA)的干预作用。方法:采用脂质体介导的转染方法将microRNA-520b模拟物(50 nmol·L-1)或抑制物(100 nmol·L-1)转染进入含1.6×104cells/well人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的6孔板中24,36,48 h,采用5,10,20,40 mg·L-1TanⅡA干预24,48 h。荧光显微镜观察转染情况,MTT法检测细胞活性(n=5),硝酸还原酶法、酶联免疫法(ELISA)测定培养液中一氧化氮(NO),内皮素(ET),蛋白C受体(EPCR),血管内假性血友病因子(v WF)和血栓调节蛋白(TM)含量(n=3)。半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测细胞IL-8信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平(n=3)。结果:与对照组比较,模型组(miR-520b组)细胞有荧光,48 h荧光最强。细胞活性降低(P<0.01)且48 h最显著,NO含量下降(P<0.01),EPCR,v WF,ET含量升高(P<0.01),转染48 h后IL-8 mRNA和蛋白质表达下调(P<0.01)。与模型(miR-520b)组比较,给药组(TanⅡA组)细胞活性升高(P<0.01),TanⅡA(10 mg·L-1,48 h)干预效果最佳;NO含量升高(P<0.01);EPCR,v WF,TM,ET含量降低(P<0.01),IL-8 mRNA和蛋白质表达上调(P<0.01)。结论:miR-520b调节IL-8在血瘀证中发挥作用,可能为TanⅡA作用靶点。

microRNA-200家族在三阴性乳腺癌中的研究进展

目的总结microRNA-200(miR-200)家族在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中的研究进展。方法系统检索并阅读国内外的相关文献,对近年来miR-200家族在TNBC中的研究进展进行综述。结果miR-200家族在TNBC的增殖、侵袭转移及治疗抵抗性中发挥重要作用,并可作为潜在的治疗靶点和生物预测因子。不同的miR-200家族成员及其差异表达介导不同的靶向作用,这可能与信号通路及细胞环境差异有关。结论miR-200家族在TNBC的发生和发展过程中具有关键性的调控作用,这有望为TNBC的治疗及预后评估提供新思路,但其作用机制仍待进一步的深入研究。