慢性缺氧通过激活缺氧诱导因子1α/microRNA-96通路诱导小管上皮细胞自噬异常参与肾间质纤维化

目的:研究慢性缺氧诱导肾脏纤维化的机制。方法:缺氧诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2),Western Blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3Ⅰ/Ⅱ)和p62的表达及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测microRNA-96(miR-96)的表达。采用siRNA-HIF-1α(siHIF-1α)和pcDNA-HIF-1α处理缺氧诱导的肾小管上皮细胞,利用RT-qPCR检测miR-96的表达,探讨过表达和干扰HIF-1α对miR-96表达的影响。miR-96mimic处理常氧肾小管上皮细胞,Western Blot检测促纤维化因子α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)蛋白的变化,RT-qPCR检测自噬关键分子LC3Ⅰ/Ⅱ和p62的表达。小鼠腹腔注射miR-96 inhibitor的病毒载体,通过Masson染色检测各模型肾脏纤维化的程度及纤维化因子COL4A1的表达。结果:在缺氧诱导的肾小管上皮细胞中HIF-1α和miR-96表达均增加(P<0.05),与纤维化程度呈正相关性,自噬关键分子LC3Ⅰ/Ⅱ水平升高p62水平降低(P<0.05),表明缺氧诱导HK-2细胞自噬。pcDNA-HIF-1α处理常氧培养的HK-2,发现HIF-1α促进miR-96的表达,siHIF-1α处理缺氧诱导的HK-2细胞,发现沉默HIF-1α可降低由缺氧引起的miR-96的增加,常氧条件下过表达miR-96诱导HK-2的纤维化因子α-SMA和COL4A1的增加,同时自噬关键分子LC3Ⅰ/Ⅱ水平升高p62水平降低(P<0.05)。缺氧条件下抑制miR-96可降低自噬关键分子的LC3Ⅰ/Ⅱ表达水平,恢复p62的表达(P<0.05)。小鼠腹腔注射miR-96 inhibitor的病毒载体,与注射了对照病毒的小鼠相比可以抑制单侧输尿管梗阻(UUO)引起的肾脏纤维化,减低纤维化因子COL4A1的表达。结论:缺氧通过激活HIF-1α/miR-96信号通路诱导肾小管上皮细胞自噬异常、促纤维化因子增加,促进了肾脏纤维化。

microRNA-96-5p对胃癌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达的影响

目的探讨microRNA-96-5p对胃癌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(the mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响。方法利用慢病毒表达载体LV-hsa-mir-96-5p转染BGC-823胃癌细胞株。qRT-PCR检测胃癌细胞转染后miR-96-5p及mTOR mRNA的表达变化;Western blot检测mTOR蛋白表达的变化。结果病毒转染72 h后,实验组细胞miR-96-5p表达丰度是空白对照组的20.4倍(P<0.05),同时mTOR基因表达丰度下调至空白对照组的0.47倍(P<0.05),且mTOR蛋白的相对表达量与空白对照组相比明显下调(P<0.05)。结论胃癌细胞miR-96-5p的过表达可以下调mTOR基因mRNA及蛋白的表达,因此mTOR可能是miR-96-5p的下游靶基因之一。

七氟醚通过上调MicroRNA-96影响大鼠认知障碍的效果与机制研究

目的探讨七氟醚通过上调MicroRNA-96(miR-96)影响大鼠认知障碍的效果与机制。方法健康清洁级雄性SD大鼠15只随机数字表法分为3组,每组5只,分别为对照组、七氟醚暴露4 h组(实验1组)、七氟醚暴露8h组(实验2组),对照组在相同的环境下吸入2 L/min氧气8 h,实验1组停止吸入七氟醚后吸入2 L/min氧气4 h。采用水迷宫实验测定大鼠认知功能,检测不同时间点的认知功能、血气指标、体温、血清IGF-1水平和miR-96表达情况。结果实验1组与实验2组麻醉后3 d、7 d与14 d的逃避潜伏期显著高于对照组,目标象限累计时间低于对照组,比较差异有统计学意义(P <0. 05),实验1组与实验2组比较差异也有统计学意义(P <0. 05)。三组大鼠PaO_2与体温在麻醉前、麻醉4 h与麻醉8 h的组内与组间比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。实验1组与实验2组麻醉后3 d、7d与14 d的血清IGF-1含量均显著低于对照组(P <0. 05),实验2组显著低于实验1组(P <0. 05)。实验1组与实验2组麻醉后7 d海马组织的miR-96相对表达量显著低于对照组(P <0. 05),实验2组显著低于实验1组(P <0. 05)。结论七氟醚能通过上调大鼠海马组织miR-96的表达,抑制血清IGF-1的表达,从而损伤大鼠的认知功能,且七氟醚暴露8 h较暴露4 h对其损伤更明显。

稳定过表达microRNA-96前列腺癌细胞株的建立及其对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的构建稳定过表达micro RNA-96(mi R-96)的前列腺癌DU-145细胞株并研究其对DU-145细胞增殖和迁移的影响。方法构建mi R-96慢病毒表达载体并转染前列腺癌细胞DU-145,嘌呤霉素筛选出稳定表达mi R-96(实验组)及阴性对照(对照组)的细胞株;通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测转染后两组细胞mi R-96的表达;克隆形成实验和MTT实验检测两组的细胞增殖情况。transwell迁移实验检测两组细胞的迁移能力。结果经过筛选后各组转染细胞发光效率均>90%;q RT-PCR结果显示实验组mi R-96表达水平明显高于对照组(P<0.05);克隆形成实验显示实验组克隆形成率明显低于对照组(P<0.05);MTT实验显示实验组各个时间点吸光度值均低于对照组(P<0.05);transwell迁移实验表明实验组穿膜细胞数明显少于对照组(P<0.05)。结论 mi R-96可抑制前列腺细胞的增殖和迁移能力,可能参与前列腺癌的发生、发展。

microRNA-96-5p靶向调控羊驼黑色素细胞中MITF基因的表达

旨在预测并验证调控小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因表达的关键miRNA。使用在线软件对与MITF具有靶向关系的miRNAs进行预测。在羊驼黑色素细胞中,利用荧光定量PCR检测过表达和抑制表达miR-96-5p后MITF基因的表达量;通过免疫细胞化学技术对过表达和抑制表达miR-96-5p的细胞进行MITF特异抗体的染色。结果表明,miR-96-5p是调控MITF表达的一个关键miRNA,经荧光定量PCR、免疫细胞化学技术检测,当过表达miR-96-5p后,MITF mRNA水平不变,但其下游基因表达量极显著降低(P<0.01),MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著低于空白组(P<0.01),当抑制表达miRNA-96-5p后,MITF mRNA水平不变,但其下游基因表达量显著升高(P<0.01),MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著高于空白组(P<0.01)。miR-96-5p可以靶向结合MITF基因,在MITF转录后水平发挥调控作用,抑制MITF的转录,抑制MITF及其下游基因TYR、TYRP1、TYRP2的表达。

microRNA-96在泌尿系三大肿瘤中的表达及对临床诊疗作用的研究进展

microRNA也称为微小RNA,是广泛存在于生物细胞体内的内源性非编码小分子RNA,其通过与靶基因3,UTR结合,抑制靶mRNA或降解靶mRNA,从而在转录后水平调节蛋白质的合成,发挥其生物学作用。现已发现多种具有调控细胞凋亡、增殖等生物学功能的miRNAs,并且与疾病的发生发展有着密切联系。近期许多研究表明,microRNA-96在泌尿系三大肿瘤中表达异常,且与肿瘤细胞的转移、侵袭有着密切关系,本文就microRNA-96在肾癌、膀胱癌及前列腺癌中的表达情况及对临床诊断作用的研究现状做一简要综述。

hsa-microRNA-96-5p down慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的 构建hsa-microRNA-96-5p down慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法 根据hsa-miR-9-5p基因序列设计合成hsa-miR-96-5p-inhibition-a和hsa-miR-96-5p-inhibition-b,将合成后成对的引物干粉溶解于退火缓冲液中引物退火.将慢病毒GV280载体酶切产物通过T4DNA连接酶将双酶切线性化的载体和退火双链DNA连接.经菌落筛选,菌落PCR及测序鉴定,荧光法及药筛法测定病毒效价.结果 菌落PCR和测序验证成功构建了hsa-miR-96-5p down慢病毒载体,经荧光法及药筛法测定病毒效价为3×108TU/ml.结论 成功构建了hsa-miR-96-5p down慢病毒表达载体,为后续深入研究miR-9-5p在肺癌细胞中的生物学行为及机制提供了前期实验基础.

microRNA-96与脓毒症新生儿炎症反应的关系研究

目的分析微小RNA-96(miR-96)与新生儿脓毒症(NS)炎症反应的关系。方法将2018年6月至2020年4月在该院治疗的65例NS患儿作为NS组,将同期65例非感染性全身炎症反应综合征(SIRS)患儿作为非感染性SIRS组,另选50例健康体检儿童作为健康组。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定miR-96水平,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,采用Pearson相关分析miR-96与炎症反应指标的相关性;随访后,将NS组分为存活组、死亡组,对比不同预后患儿血清各指标差异,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-96对NS患儿预后的预测价值。结果NS组序贯器官衰竭评估评分、急性生理学和慢性健康评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分比非感染性SIRS组高,差异均有统计学意义(P<0.05);NS组miR-96水平比非感染性SIRS组、健康组低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平比非感染性SIRS组、健康组高,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,miR-96水平与IL-1β、IL-6、TNF-α均呈负相关(r<0,P<0.05);死亡组miR-96水平比存活组低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平比存活组高,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC曲线结果显示,miR-96预测NS患儿病死的AUC为0.903(95%CI:0.846~0.978),以0.75为临界值,其灵敏度、特异度分别为0.894、0.855,约登指数为0.749。结论NS患儿miR-96水平下调,炎性因子水平上调,二者呈负相关;且miR-96水平对NS预后有一定的预测价值。

粪便microRNA-296-3p联合癌胚抗原在结直肠癌筛查中的应用价值

目的探讨粪便microRNA-296-3p(miR-296-3p)联合癌胚抗原(CEA)在结直肠癌筛查中的临床价值。方法选取2021年6月—2023年2月承德医学院附属医院收治并经病理检查确诊的104例结直肠癌患者为结直肠癌组,另选取同期在该院进行体检的61例健康人群作为健康对照组。比较两组的临床资料;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组人群粪便中miR-296-3p表达情况;多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌发生的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-296-3p、CEA单独及联合对结直肠癌的预测价值。结果RT-PCR结果显示,与健康对照组比较,结直肠癌组粪便中miR-296-3p mRNA相对表达量下降(P<0.05)。单因素分析结果显示,结直肠癌组与健康对照组miR-296-3p、CEA的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,miR-296-3p表达[OR=0.70(95%CI:0.55,0.90)]和CEA表达[OR=1.78(95%CI:1.32,2.40)]为影响结直肠癌发生的独立危险因素(P<0.05)。个体预测概率方程为=1/e^(-(-0.399-0.351X_(1)+0.577X_(2)))。miR-296-3p预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性分别为79.8%和42.6%,曲线下面积(AUC)为0.687,CEA预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性分别为81.4%和59.6%,AUC为0.800,miR-296-3p联合CEA预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性为86.3%和63.5%,AUC为0.847。结论miR-296-3p联合CEA的预测模型对结直肠癌有较好的预测价值。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

血清microRNA-155、microRNA-21、趋化素、瘦素与糖尿病肥胖患者胰岛素抵抗的相关性

目的 探讨糖尿病肥胖患者血清microRNA-155(miR-155)、microRNA-21(miR-21)、趋化素、瘦素水平与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法 选取2022年1月—2023年4月山东中医药大学第二附属医院收治的138例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,其中肥胖患者73例(肥胖组),非肥胖患者65例(非肥胖组)。肥胖组中有IR 45例(IR组),无IR 28例(非IR组)。收集患者一般资料,包括性别、体质量指数(BMI)、年龄、颈围(NC)、腰围(WC)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、miR-155、miR-21、趋化素、瘦素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平;通过多因素逐步Logistic回归模型分析T2DM肥胖患者发生IR的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的效能;Pearson法分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR的相关性。结果 肥胖组miR-155相对表达量低于非肥胖组(P <0.05),miR-21、趋化素、瘦素、HOMA-IR高于非肥胖组(P <0.05)。IR组miR-155相对表达量低于非IR组(P <0.05),NC、WC、miR-21、趋化素、瘦素水平高于非IR组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:NC [O^R=1.416(95%CI:1.038,1.932)]、WC [O^R=1.227(95%CI:1.049,1.435)]、miR-155 [O^R=1.763(95%CI:1.205,2.579)]、miR-21[O^R=1.932(95%CI:1.356,2.753)]、趋化素[O^R=2.074(95%CI:1.492,2.883)]、瘦素[O^R=1.628(95%CI:1.246,2.127)]是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的曲线下面积分别为0.865、0.909、0.874和0.871;敏感性为77.8%(95%CI:0.614,0.825)、86.7%(95%CI:0.792,0.917)、95.6%(95%CI:0.713,0.965)和80.0%(95%CI:0.692,0.917);特异性为85.7%(95%CI:0.647,0.903)、82.1%(95%CI:0.732,0.914)、75.0%(95%CI:0.675,0.928)和89.3%(95%CI:0.656,0.944)。miR-155与HOMA-IR呈负相关(r=-0.573,P=0.000),miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR均呈正相关(r=0.531、0.558和0.568,均P=0.000)。结论 T2DM肥胖患者中IR较多,且miR-155、miR-21、趋化素、瘦素是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素。

血清microRNA-21、microRNA-193a-3p表达与结直肠癌患者手术预后的关系

目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访16个月,记录患者的预后生存结局,多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌患者手术预后的影响因素,评估血清miR-21、miR-193a-3p对结直肠癌患者预后的预测效能。结果112例结直肠癌患者死亡22例,病死率为19.64%;生存90例,生存率为80.36%。死亡组术前血清miR-21 mRNA相对表达量、临床分期Ⅲ期占比、淋巴结转移率均高于生存组(P<0.05),血清miR-193a-3p m RNA相对表达量低于生存组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ期[OR=3.777(95%CI:1.399,10.194)]、淋巴结转移[OR=5.099(95%CI:1.715,15.156)]、miR-21表达升高[OR=4.889(95%CI:1.645,14.533)]、miR-193a-3p表达降低[OR=4.402(95%CI:1.481,13.084)]均是直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。受试者工作特性曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-193a-3p单一及联合预测结直肠癌预后的敏感性分别为69.04%(95%CI:0.487,0.813)、72.73%(95%CI:0.495,0.884)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为62.22%(95%CI:0.513,0.720)、68.89%(95%CI:0.581,0.780)、90.00%(95%CI:0.814,0.950),曲线下面积分别为0.782、0.731和0.901。结论结直肠癌患者术前miR-21、miR-193a-3p表达与术后预后密切相关,且在结直肠癌患者的预后结局中表现出良好的预测效能。

血管内超声参数联合microRNA-206评估非ST段抬高型急性心肌梗死患者病变严重程度及预后的价值

目的探讨血管内超声(IVUS)参数联合microRNA-206(miR-206)评估非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEAMI)患者病变严重程度及预后的价值。方法选取2019年3月-2021年4月河北北方学院附属第一医院收治的105例NSTEAMI患者,所有患者行经皮冠状动脉介入术(PCI),根据病变严重程度将患者分为单支病变组(55例)、双支病变组(32例)、多支病变组(18例)。对比不同病变程度患者IVUS参数、血清miR-206,分析IVUS参数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度的相关性。随访2年,根据是否发生MACE分为发生组与非发生组。对比发生组与非发生组的临床资料,采用多因素逐步Logistic回归模型分析NSTEAMI患者发生主要不良心脏事件(MACE)的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估IVUS参数、血清miR-206预测NSTEAMI患者发生MACE的效能。结果多支病变组斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于单支、双支组(P<0.05),且双支病变组均高于单支病变组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血管外弹力膜面积与NSTEAMI患者病变严重程度无相关性(r=0.271,P=0.325);斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度呈正相关(r=0.416、0.382、0.423、0.507和0.394,均P=0.000)。随访2年,失访2例,剩余103例患者中32例(31.07%)发生MACE,71例(68.93%)未发生MACE。发生组多支病变、血运未重建占比、斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于非发生组(P<0.05),淋巴细胞计数、血红蛋白水平均低于非发生组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:多支病变[OR=3.466(95%CI:1.523,7.884)]、血运未重建[OR=2.776(95%CI:1.220,6.315)]、斑块负荷[OR=3.155(95%CI:1.387,7.177)]、重构指数[OR=3.842(95%CI:1.689,8.740)]、偏心指数[OR=4.166(95%CI:1.831,9.477)]、血清miR-206[OR=4.500(95%CI:1.978,10.236)]为NSTEAMI患者发生MACE的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,斑块负荷、重构指数、偏心指数、血清miR-206四者联合预测NSTEAMI患者发生MACE的敏感性为88.52%(95%CI:0.674,0.957),特异性为92.86%(95%CI:0.713,0.968),曲线下面积为0.900(95%CI:0.812,0.953)。结论IVUS参数(斑块负荷、重构指数、偏心指数)、血清miR-206在评估NSTEAMI患者病变严重程度与预后中具有重要价值,且四者联合具有更高的预测价值。

^(96)Y衰变能谱的精确计算

精确计算衰变能谱对探索不稳定原子核结构、获取中微子能谱及验证衰变理论等均有重要科学价值与意义。衰变能谱的精确计算依赖于衰变分支比和单条能级衰变能谱,前者通常利用γ-γ符合测量或全吸收谱仪对β衰变产物进行直接测量而获得,后者通常由费米衰变理论计算获得。本文以^(96)Y衰变为例,对^(96)Y衰变的实验衰变分支比数据进行评价,然后结合费米衰变理论进行理论分析,为提高能谱的精度,对能谱加入了形状因子修正,最终获得了高精度的^(96)Y衰变能谱。

胃镜活检组织SF3B4及miR-96表达在胃癌病情及预后评估中的临床价值

目的分析胃镜活检组织剪接因子3b亚基4(SF3B4)及微小RNA-96(miR-96)表达在胃癌病情及预后评估中的临床价值。方法选择2017年1—12月湖北省洪湖市人民医院普外科诊治胃癌患者95例为胃癌组,胃良性疾病患者60例为非胃癌组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测组织SF3B4、miR-96表达,比较不同临床病理资料中SF3B4、miR-96表达的差异;采用ROC曲线分析SF3B4及miR-96预测胃癌1年预后不良的价值;多因素Logistic回归分析胃癌患者死亡的危险因素;Kaplan-Meier法分析SF3B4、miR-96表达与生存期的关系。结果胃癌组肿瘤组织SF3B4、miR-96表达均显著高于癌旁组织、非胃癌组病灶组织(F/P=516.766/<0.001、887.495/<0.001)。胃癌低分化、肿瘤最大直径≥5 cm、T3-4、有淋巴结转移及cTNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者SF3B4及miR-96表达显著高于胃癌中-高分化、肿瘤最大直径<5 cm、T1-2、无淋巴结转移及cTNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者(SF3B4:t/P=4.151/<0.001、5.695/<0.001、6.561/<0.001、7.943/<0.001、4.629/<0.001;miR-96:t/P=4.543/<0.001、3.692/<0.001、5.061/<0.001、5.842/<0.001、5.109/<0.001)。SF3B4、miR-96及二者联合预测胃癌1年预后不良的AUC分别为0.785、0.779、0.952,二者联合优于各自单独预测效能(Z/P=3.451/0.017、3.565/0.014)。多因素Logistic回归分析显示SF3B4≥1.51、miR-96≥1.28、肿瘤分化程度低分化、肿瘤最大直径≥5 cm、肿瘤浸润深度T3-4、有淋巴结转移、cTNM分期Ⅲ~Ⅳ期为胃癌1年死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=4.225(1.034~4.623)、3.877(1.142~6.189)、2.261(1.275~5.726)、2.487(1.338~7.516)、2.088(1.023~5.367)、2.779(1.161~4.591)、3.013(1.416~5.791)]。95例胃癌患者随访至终点时存活36例,死亡59例。SF3B4≥1.51且miR-96≥1.28胃癌患者中位生存期(23.7±5.4)个月低于SF3B4<1.51或miR-96<1.28患者(31.2±6.5)个月(Log-rank=11.457,P<0.001)。结论胃癌患者胃镜活检组织SF3B4和miR-96表达显著升高,与病情严重程度、预后及生存期密切相关,可作为胃癌病情及预后评估的标志物,且二者联合检测时可提高预测胃癌预后不良的敏感度及特异度。

miR-96对牦牛颗粒细胞凋亡和增殖的影响

为研究牦牛卵巢组织内miR-96对颗粒细胞凋亡、增殖及激素分泌的影响,本试验通过采集成年牦牛卵巢内颗粒细胞,分离培养后将其分为4个处理组,分别转染miR-96模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)及两者的阴性对照(NC)后培养并检测颗粒细胞受到的影响。使用流式细胞术和CCK-8法对细胞凋亡和增殖情况进行检测,采用qPCR和Western Blot检测凋亡相关基因表达情况,ELISA检测转染后类固醇激素分泌情况。结果表明:miR-96-mimics使颗粒细胞凋亡发生抑制促进细胞增殖,并促使凋亡相关基因Bcl-2表达极显著升高,Bax表达极显著降低;ELISA检测类固醇激素水平变化显示,与mimics NC组相比miR-96-mimics组细胞培养液中孕酮(P4)分泌水平极显著降低,雌二醇(E_(2))分泌水平极显著升高;与inhibitor NC组相比miR-96-inhibitor组孕酮(P4)分泌水平极显著升高,雌二醇(E_(2))分泌水平显著降低。miR-96可促进颗粒细胞增殖并抑制凋亡,同时会对生殖激素分泌产生影响,从而参与调控牦牛卵泡发育与闭锁的过程。

血浆microRNA-206联合床旁超声膈肌功能预测老年机械通气患者撤机结果的价值

目的观察血浆microRNA-206(miRNA-206)与床旁超声膈肌功能联合预测老年机械通气患者撤机结果的价值。方法选取2020年6月—2023年6月在南京医科大学附属淮安第一医院急诊重症监护室住院的老年机械通气患者102例,根据撤机结果分为成功组、失败组。比较两组患者血浆miRNA-206、膈肌功能指标及一般资料;采用多因素逐步Logistic回归模型分析老年机械通气患者撤机结果的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆miRNA-206、床旁超声膈肌功能单独及联合对老年机械通气患者撤机结果的预测价值。结果102例患者撤机失败率为33.33%。与成功组比较,失败组膈肌增厚率(DTF)、膈肌活动度(DE)、血浆miRNA-206、白蛋白(Alb)水平降低(P<0.05),膈肌收缩速度(DCV)加快(P<0.05),膈肌浅快呼吸指数(DRSBI)、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、早期气管切开百分率升高(P<0.05),年龄增大(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:年龄[OR=1.089(95%CI:1.041,1.139)]、APACHEⅡ评分[OR=1.079(95%CI:1.029,1.131)]、miRNA-206[OR=0.663(95%CI:0.502,0.876)]、DTF[OR=0.587(95%CI:0.389,0.887)]、DE[OR=0.744(95%CI:0.584,0.947)]、DCV[OR=1.213(95%CI:1.059,1.389)]和DRSBI[OR=1.931(95%CI:1.029,3.622)]是老年机械通气患者撤机结果的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-206、DTF、DE、DCV、DRSBI预测老年机械通气患者撤机结果的最佳截断值分别为0.50、34.36%、9.60mm、1.50 cm/s、1.90次/(min·mm),敏感性分别为73.53%(95%CI:0.556,0.871)、67.65%(95%CI:0.495,0.826)、61.76%(95%CI:0.436,0.778)、70.59%(95%CI:0.525,0.849)、64.71%(95%CI:0.465,0.803),特异性分别为70.59%(95%CI:0.583,0.810)、73.53%(95%CI:0.614,0.835)、75.00%(95%CI:0.630,0.847)、72.06%(95%CI:0.599,0.823)、79.41%(95%CI:0.679,0.883),曲线下面积(AUC)分别为0.709、0.715、0.645、0.742、0.719;联合预测的敏感性为97.06%(95%CI:0.847,0.999),特异性为69.12%(95%CI:0.567,0.798),AUC为0.851。结论血浆miRNA-206联合床旁超声膈肌功能对老年机械通气患者撤机结果具有较高的预测价值。

MicroRNA-21/PARP-1作为生物标志物在AR和CARAS中的诊断价值分析

目的:评估外周血microRNA(miR)-21、血浆聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]在过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)和过敏性鼻炎-哮喘综合征(combined allergic rhinitis and asthma syndrome,CARAS)中的诊断价值。方法:收集44例CARAS患者、31例AR患者和42例健康对照的外周血,采用RT-qPCR法检测外周血中miR-21的表达水平,采用ELISA法检测血浆中PARP-1蛋白水平。应用Pearson进行相关性分析。受试者工作特征(receiveroperatingcharacteris-tic,ROC)曲线判断miR-21和PARP-1的诊断灵敏度与特异度。结果:CARAS组患者外周血miR-21的表达较健康对照组升高。AR组患者血浆PARP-1的水平较CARAS组和健康对照组升高。Pearson相关性分析结果显示,外周血miR-21的表达水平在AR患者中与嗜酸性粒细胞计数相关,在CARAS患者中与鼻呼出气一氧化氮(fractionalnasalnitricoxide,FnNO)水平相关;血浆PARP-1在AR患者中与1秒钟用力呼气量占预计值百分比(forced expiratory volume in onesecond percent predicted,FEV1%pred)相关,在CARAS患者中与FEV1%pred及1秒钟用力呼气量(forced expiratory volume in one second,FEV1)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)(FEV1/FVC)相关。ROC曲线分析显示,外周血miR-21作为CARAS的诊断标志物时,灵敏度为51.35%,特异度为80.95%。血浆PARP-1作为AR的诊断标志物时,灵敏度为90.32%,特异度为54.76%。血浆PARP-1作为AR进展为CARAS的诊断标志物时,灵敏度为45.45%,特异度为90.32%。结论:AR和CARAS患者外周血miR-21、PARP-1存在差异表达,外周血miR-21可作为CARAS的诊断标志物,PARP-1可作为AR的诊断标志物及AR进展为CARAS的生物标志物。这对寻求AR和CARAS的诊治靶点有十分重要的价值。

MicroRNA-148a在妊娠期肝内胆汁淤积症中的表达及临床预测价值

目的 探讨microRNA-148a在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)中的表达及临床预测价值。方法选取2020年2月—2022年1月天水市中西医结合医院收治的113例ICP患者作为ICP组,另选取同期在该院产检的80例健康孕妇作为对照组。对比两组肝功能及microRNA-148a相对表达量。随访统计ICP患者妊娠结局,并依据妊娠结局分为不良组和良好组。对比不同妊娠结局ICP患者临床资料及microRNA-148a相对表达量。多因素逐步Logistic回归模型分析影响ICP患者妊娠结局的相关因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)分析microRNA-148a对ICP患者妊娠结局的预测效能。结果 ICP组总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)及microRNA-148a相对表达量高于对照组(P <0.05)。不良组与良好组年龄、体质量指数、孕周、产次构成、DBIL、AST、ALT、白细胞计数、血小板计数、平均血小板体积、血红蛋白、尿蛋白、血肌酐比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。不良组重度ICP病情占比高于良好组,TBA、TBIL、microRNA-148a相对表达量高于良好组(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:重度ICP病情[OR=2.875(95%CI:1.093,7.559)]、microRNA-148a高表达[OR=3.343(95%CI:1.272,8.791)]均为影响ICP孕妇预后的危险因素(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清microRNA-148a预测ICP孕妇妊娠结局的最佳截断值为1.12,敏感性、特异性及曲线下面积分别为72.73%(95%CI:0.496,0.884)、81.32%(95%CI:0.715,0.884)、0.798(95%CI:0.712,0.868)。结论 microRNA-148a在ICP患者中高表达,且血清microRNA-148a对ICP患者妊娠结局的预测效能较高。

microRNA-124在阿尔兹海默症中的作用及针刺干预研究进展

阿尔兹海默症(AD)是老年人常见的神经退行性疾病。目前认为AD的病因大多与大脑中β-淀粉样蛋白(Aβ)的异常沉积、相关蛋白Tau的过度磷酸化以及各种细胞因子、补体的释放有关。microRNA-124在中枢神经系统中高度表达,与许多神经生理和病理过程相关。microRNA-124通过Aβ沉积、Tau蛋白过度磷酸化、神经炎症、氧化应激、神经元兴奋性和神经分化等多种方式在AD中发挥作用。它还可能通过调节细胞凋亡对突触可塑性和轴突生长产生不利影响,进而影响AD。因此,探讨microRNA-124在AD中的表达变化以及靶向治疗至关重要。针刺治疗AD疗效明确,可能与microRNA-124调控相关。文章就AD所具有的几个典型组织病理学特征与microRNA-124的相关性进行综述,包括老年斑中Aβ的积累、Tau过度磷酸化、神经炎症和突触丧失。综述了microRNA-124通过靶向不同的基因与调节下游信号在AD中发挥作用,以及针刺治疗AD的可能干预机制,为未来治疗提供新思路。