circPRMT5通过靶向miR-98-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭的机制研究

目的探究circPRMT5通过靶向miR-98-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭的机制研究。方法qRT-PCR检测永生化正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞(T24、J82、HT-1376)中circPRMT5、miR-98-5p和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA相对表达水平。核糖核酸酶(RNase)R和放线菌素D的消化实验鉴定circPRMT5的环状结构。将T24细胞分为si-NC组、si-circPRMT5组、miR-NC组、miR-98-5p组、si-circPRMT5+anti-miR-NC组、si-circPRMT5+anti-miR-98-5p组。qRT-PCR检测circPRMT5和miR-98-5p表达水平;MTT、克隆实验检测细胞增殖水平;Transwell检测迁移、侵袭能力;Western Blot检测MMP2、MMP9、XIAP蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circPRMT5和miR-98-5p靶向关系。结果与永生化正常尿路上皮细胞SV-HUC-1相比,膀胱癌细胞T24、J82、HT-1376中circPRMT5、XIAP mRNA相对表达水平增加,miR-98-5p降低。circPRMT5比线性PRMT5稳定性更强。沉默circPRMT5或过表达miR-98-5p降低膀胱癌细胞存活率,减少克隆细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数,降低MMP2、MMP9、XIAP蛋白表达。circPRMT5靶向负调控miR-98-5p的表达,抑制miR-98-5p可部分回复沉默circPRMT5对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及XIAP mRNA和蛋白表达的作用。结论circPRMT5靶向负调控miR-98-5p抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。

miR-98-5p通过STAT3通路抑制骨关节炎的发展

目的探究miR-98-5p调节骨关节炎(OA)发生发展的可能分子机制。方法①将大鼠软骨细胞分为对照组、白介素-1β(IL-1β)组、NC-agomir组、miR-98-5p-agomir组、NC-antagomir组和miR-98-5p-antagomir组。对照组软骨细胞采用正常DMEM培养基培养,其他组细胞在转染成功后在添加10 ng/mL IL-1β的培养基中继续培养24 h。采用MTT法和TUNEL法检测软骨细胞增殖和凋亡水平。采用RT-qPCR检测miR-98-5p、STAT3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平。采用ELISA法检测细胞培养上清液中的IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白水平。采用Western blot检测Bcl-2、Bax、p-STAT3和STAT3蛋白水平。②采用前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法建立OA大鼠模型。OA模型大鼠分为OA组、NC-agomir+OA组和miR-98-5p-agomir+OA组,每组12只;另取12只健康大鼠为假手术组。假手术组和OA组大鼠关节腔内注射40μL生理盐水,NC-agomir+OA组和miR-98-5p-agomir+OA组大鼠关节腔内分别注射40μL的NC-agomir和miR-98-5p-agomir(1 nmol/μL),每周注射1次,共4周。采用番红O-固绿染色观察大鼠软骨退变。采用TUNEL染色观察软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测软骨组织中miR-98-5p、STAT3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平。采用ELISA法检测软骨组织中IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白水平。采用Western blot检测软骨组织中Bcl-2、Bax、p-STAT3和STAT3蛋白水平。结果①与IL-1β组和NC-agomir组比较,miR-98-5p-agomir组相对细胞活力、Bcl-2 mRNA和蛋白水平和miR-98-5p水平均升高(P<0.05),TUNEL阳性率,Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、STAT3 mRNA和蛋白水平,p-STAT3蛋白水平和p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.05)。与IL-1β组和NC-antagomir组比较,miR-98-5p-antagomir组相对细胞活力、Bcl-2 mRNA和蛋白水平、以及miR-98-5p水平均降低(P<0.05),TUNEL阳性率,Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、STAT3的mRNA和蛋白水平,p-STAT3蛋白水平以及p-STAT3/STAT3比值均升高(P<0.05)。②与OA组和NC-agomir+OA组比较,miR-98-5p-agomir+OA组OARSI评分,TUNEL阳性率,Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、STAT3 mRNA和蛋白水平,p-STAT3蛋白水平和p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白水平、以及miR-98-5p水平均升高(P<0.05)。结论上调miR-98-5p可能通过降低STAT3的活性抑制OA中的炎症反应和细胞凋亡,从而抑制OA的发展。

非小细胞肺癌患者瘤组织LncRNA LINC00460、miR-98-5p的水平及临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)LINC00460、microRNA-98-5p(miR-98-5p)表达及临床意义。方法 选取2017年1月至2018年12月57例NSCLC患者病例资料进行回顾性研究。术中留取癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘2 cm),比较癌组织及癌旁组织miR-98-5p、LncRNA LINC00460表达,分析癌组织miR-98-5p、LncRNA LINC00460表达与病理特征的相关性,比较不同预后患者miR-98-5p、LncRNA LINC00460表达,logistic回归分析癌组织miR-98-5p、LncRNA LINC00460表达与预后的关系,并比较癌组织miR-98-5p、LncRNA LINC00460表达不同患者总生存率,列线图分析miR-98-5p、LncRNA LINC00460对患者预后评估价值。结果 癌组织miR-98-5p表达低于癌旁组织,LncRNA LINC00460表达高于癌旁组织(P<0.05)。NSCLC患者癌组织miR-98-5p、LncRNA LINC00460表达与临床分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。死亡者癌组织miR-98-5p表达较存活者低,LncRNA LINC00460表达较存活者高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,癌组织LncRNA LINC00460高表达、miR-98-5p低表达是NSCLC患者预后死亡的独立危险因素(P<0.05)。癌组织LncRNA LINC00460高表达者总生存率低于低表达者,miR-98-5p高表达者总生存率高于低表达者(P<0.05)。构建miR-98-5p、LncRNA LINC00460评估患者预后的列线图预测模型与实际病死风险吻合度较高(χ^(2)=6.902,P=0.547)。结论 NSCLC患者癌组织LncRNA LINC00460异常高表达,miR-98-5p异常低表达,且异常表达程度与患者预后关系密切,可为临床评估预后提供参考。

miR-98-5p靶向HIF1AN对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨miR-98-5p对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡、炎症因子的影响及对HIF1AN的调控作用。方法:体外培养人支气管上皮细胞16-HBE,LPS刺激细胞建立细胞损伤模型(LPS组),分别将miR-NC、miR-98-5p mimics、si-NC、si-HIF1AN、pcDNA-NC、pcDNA-HIF1AN、miR-98-5p mimics与pcDNA-NC、miR-98-5p mimics与pcDNA-HIF1AN转染至16-HBE细胞后进行LPS处理(miR-NC+LPS组、miR-98-5p+LPS组、si-NC+LPS组、si-HIF1AN+LPS组、pcDNA-NC+LPS组、pcDNAHIF1AN+LPS组、miR-98-5p+pcDNA-NC+LPS组、miR-98-5p+pcDNA-HIF1AN+LPS组);qRT-PCR与Western blot分别检测miR-98-5p、HIF1AN表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1α水平;双荧光素酶报告实验检测miR-98-5p、HIF1AN的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、HIF1AN、BNIP3蛋白表达。结果:转染miR-98-5p mimics或si-HIF1AN可明显降低LPS诱导的16-HBE细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1α水平(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-98-5p可靶向结合HIF1AN;共转染miR-98-5p mimics与pcDNA-HIF1AN可明显提高细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、BNIP3蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1α水平(P<0.05)。结论:miR-98-5p过表达可通过下调HIF1AN表达抑制LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及炎症因子释放进而减轻细胞损伤。

circBPTF靶向miR-98-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制

目的 探讨circ溴结构域PDH指转录因子(BPTF)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 肾小管上皮细胞分为对照组(Con)、高糖组(HG)、HG+si-NC组、HG+si-circBPTF组、HG+miR-NC组、HG+miR-98-5p组、HG+si-circBPTF+anti-miR-NC组、HG+si-circBPTF+anti-miR-98-5p组。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circBPTF和miR-98-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;双荧光素酶报告实验证实circBPTF和miR-98-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,HG组肾小管上皮细胞中circBPTF表达、IL-6、TNF-α水平和凋亡率升高,miR-98-5p表达水平降低(P<0.05)。与HG+si-NC组或HG+miR-NC组比较,HG+si-circBPTF组和HG+miR-98-5p组IL-6,TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低(P<0.05)。circBPTF靶向调控miR-98-5p;下调miR-98-5p逆转了抑制circBPTF表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用。结论 抑制circBPTF表达通过靶向上调miR-98-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤起保护作用。

结肠癌组织中miR-98的表达及作用机制

目的探讨结肠癌组织中mi R-98的表达及作用机制。方法搜集40例结肠癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,实时PCR检测mi R-98在组织中的表达。在HCT116细胞中分别过表达/沉默mi R-98后,MTT实验观察mi R-98对其增殖的影响;流式细胞技术分析mi R-98对细胞周期的影响;Hochest 33258染色判断mi R-98对其凋亡的影响。结果实时PCR检测发现,与癌旁组织比较,mi R-98在肿瘤中低表达(P=0.022);生存分析发现mi R-98表达低的患者5年生存率较低(P<0.05)。MTT检测发现mi R-98可以抑制细胞增殖。mi R-98过表达可以抑制细胞周期进程,促进HCT116细胞凋亡。结论 mi R-98可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡。mi R-98表达与结肠癌患者的生存期密切相关。

MicroRNA-98对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和转移的影响

目的:探讨microRNA-98(miR-98)对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和转移的影响。方法:将人视网膜母细胞瘤细胞株Y79分为四组:miR-98干预组、阴性miRNA对照组、空白脂质体组和空白对照组。通过脂质体介导,将miR-98的拟似物(miR-98mimics)转染入上述四组细胞,逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测细胞miR-98的表达,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭能力变化。Western blot技术检测细胞信号分子Ras的表达。结果:脂质体转染成功地将miR-98mimics转染入Y79细胞,干预组miR-98的表达水平(89.15±3.25)显著高于对照组、空白脂质体组和空白对照组,且4组间有显著性差别(F=219.17 P<0.001)。miR-98对Y79细胞增殖有明显抑制作用。Y79细胞周期被抑制在G1期。对照组和干预组穿膜细胞数分别为(181.2±4.1)个/高倍视野和(50.6±3.5)个/高倍视野,两组相比有显著性差别(t=39.18,P<0.01),miR-98抑制了Y79细胞的侵袭能力。miR-98表达增高的Y79细胞的信号分子Ras表达下降。结论:miR-98可以抑制视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和转移,且负调控原癌基因Ras的表达。

circ_0031739通过下调miR-98-5p促进高糖诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨circ_0031739对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及其分子机制。方法 培养人心肌细胞系AC16,分别转染siRNA NC、siRNA circ_0031739、miRNA mimics miR-98-5p mimics、miRNA inhibitor、miR-98-5p inhibitor,给予细胞高糖(30 mmol/L)处理,CCK8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测细胞中circ_0031739和miR-98-5p表达,双荧光素酶实验验证circ_0031739和miR-98-5p的靶向关系。结果 高糖诱导心肌细胞中circ_0031739表达升高;抑制circ_0031739能够增强高糖诱导的心肌细胞增殖活性,减少心肌细胞凋亡;circ_0031739靶向负调控miR-98-5p的表达;高糖诱导心肌细胞中miR-98-5p表达降低,过表达miR-98-5p能够增强高糖诱导的心肌细胞增殖活性,减少心肌细胞凋亡;抑制miR-98-5p能够逆转circ_0031739的作用。结论 抑制circ_0031739可通过上调miR-98-5p,增强高糖诱导的心肌细胞增殖活性,减少心肌细胞凋亡,对心肌细胞起保护作用。

MicroRNA-98对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨MicroRNA-98(miR-98)对肺腺癌耐顺铂细胞系A549/DDP顺铂耐药性的影响。方法利用MicroRNA(miRNA)芯片及生物信息学筛选出miR-98。将miR-98质粒载体瞬时转染至A549/DDP细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果在A549/DDP细胞中miR-98表达水平下调。转染miR-98的A549/DDP细胞生长抑制率明显增高。结论miR-98能够增加肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的药物敏感性。

miR-98靶向EZH2调控下咽癌细胞转移及其上皮-间充质转化的作用机制研究

目的探讨miR-98在下咽癌Fadu细胞中的表达及其调控癌细胞转移及其上皮-间充质转化(EMT)的作用机制。方法收集我院2016年10月~2021年1月临床确诊下咽癌患者的35例下咽癌组织及其28例癌旁正常组织,利用实时荧光定量PCR检测miR-98、EZH2其mRNA表达。通过转染技术下调miR-98表达,分别利用CCK-8法、Transwell和Western blot实验检测人下咽癌Fadu细胞的增殖、侵袭和上皮-间质质转化能力。通过生物信息学软件TargetScan分析miR-98的下游调控靶点,双荧光素酶报告基因实验进一步检测miR-98和EZH2之间的关系。通过转染技术下调EZH2表达,分析下调EZH2对Fadu细胞增殖、侵袭和EMT的影响。同时上调miR-98与EZH2表达,检测过表达miR-98通过EZH2对Fadu细胞转移及EMT的影响。下调或过表达EZH2后,Western blot检测Fadu细胞内JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白表达量。利用抑制剂AG490作用Fadu细胞,通过转染技术上调EZH2表达,检测Fadu细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果与癌旁正常组织相比,下咽癌组织中miR-98表达明显降低(P<0.01),EZH2表达明显上升(P<0.01)。下调miR-98促进了Fadu细胞的增殖、侵袭与EMT;miR-98靶向EZH2,和EZH2具有负调控关系;上调miR-98通过EZH2抑制了Fadu细胞的增殖、侵袭与EMT;下调EZH2抑制了Fadu细胞转移和EMT;上调EZH2激活了Fadu细胞内JAK/STAT3通路,且抑制剂AG490作用Fadu细胞能明显抑制过表达EZH2对Fadu细胞增殖、侵袭和EMT的上调作用。结论miR-98靶向EZH2激活JAK/STAT3通路调控下咽癌细胞转移及其上皮-间充质转化。

非小细胞肺癌组织长链非编码RNA LINC00265、microRNA-98-5p的表达及其临床意义

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00265、microRNA-98-5p(miR-98-5p)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法选取2016年1月—2017年12月乐山市人民医院收治的97例NSCLC患者的癌组织、相应癌旁正常组织进行研究。利用实时荧光定量聚合酶链反应测定癌组织及癌旁正常组织lncRNA LINC00265、miR-98-5p相对表达量;分析癌组织lncRNA LINC00265、miR-98-5p与患者临床病理特征及预后的关系;采用Pearson法分析癌组织lncRNA LINC00265与miR-98-5p的相关性;Cox回归分析影响NSCLC患者预后的因素。结果NSCLC患者癌组织lncRNA LINC00265相对表达量高于癌旁正常组织(P<0.05),miR-98-5p相对表达量低于癌旁正常组织(P<0.05)。有无淋巴结转移、不同临床分期和分化程度患者癌组织的lncRNA LINC00265和miR-98-5p表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织lncRNA LINC00265与miR-98-5p呈负相关(r=-0.580,P=0.000)。lncRNA LINC00265高表达、miR-98-5p低表达NSCLC患者36个月总生存时间、无病生存期较短(P<0.05)。淋巴结转移[HR^(^)=2.152(95%CI:1.431,3.235)]、临床分期[HR^(^)=2.136(95%CI:1.429,3.192)]、lncRNA LINC00265[HR^(^)=2.533(95%CI:1.552,4.135)]是NSCLC患者死亡的独立危险因素(P<0.05),而miR-98-5p[HR^(^)=0.618(95%CI:0.506,0.755)]是NSCLC患者死亡的独立保护因素(P<0.05)。结论NSCLC患者癌组织lncRNA LINC00265相对表达量升高,miR-98-5p相对表达量降低,其可能共同调控NSCLC的发生、发展,检测其相对表达量有利于判定NSCLC患者的预后。

miR-98-5p与靶基因HMGA2相关调控机制抑制喉鳞癌的作用及临床意义

目的研究miR-98-5p通过靶向调控HMGA2在喉鳞癌中的相关作用及临床意义。方法采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中miR-98-5p的表达水平;检测转移的肿瘤组织和无转移的肿瘤组织间miR-98-5p的表达水平;分析miR-98-5p的表达与患者临床特征的相关性。microRNA靶基因数据库进行筛选,预测HMGA2为miR-98-5p的潜在靶基因:荧光素酶报告基因法进行验证;qRT-PCR和Western印迹检测miR-98-5pmimics对HMGA2的mRNA及蛋白表达的影响;qRT-PCR检测喉鳞癌组织中HMGA2的mRNA表达水平;用CCK8实验检测miR-NC对照组,miR-98-5pmimics转染组和miR-98-5pmimics+HMGA2转染组的吸光度(OD)值;使用流式细胞法检测miR-98-5pmimics转染组和miR-98-5p mimics+HMGA2转染组S期细胞的比值。在裸鼠右肩胛近腋窝处皮下接种喉鳞癌Hep-2细胞培养液,检测裸鼠肿瘤体积及重量;检测miR-98-5p在miR-98-5pmimics转染组裸鼠肿瘤组织中的表达水平。结果对比癌旁正常组织,喉鳞癌组织中miR-98-5p的表达水平明显降低;转移的肿瘤组织中miR-98-5p的表达水平明显低于无转移的肿瘤组织;miR-98-5p的表达随着分化程度及临床分期的升高呈下降趋势;无淋巴结转移患者miR-98-5p的表达水平明显高于有淋巴结转移患者。miR-98-5p可以通过结合HMGA2的3'-UTR,进而抑制HMGA2的表达;miR-98-5pmimics转染组中HMGA2蛋白表达量相比对照组明显降低;miR-98-5p能够抑制HMGA2的mRNA翻译及其蛋白表达;qRT-PCR检测结果也显示喉鳞癌组织相比癌旁正常组织,HMGA2的mRNA表达量明显升高;miR-98-5pmimics转染组的OD值明显低于对照组,而miR-98-5pmimics+HMGA2转染组的OD值明显高于miR-98-5pmimics转染组;miR-98-5pmimics转染组S期细胞比值明显低于对照组,而miR-98-5pmimics+HMGA2转染组S期细胞比值明显高于miR-98-5pmimics转染组;miR-98-5p可抑制喉鳞癌细胞Hep-2的增殖和细胞周期在S期聚集,而这些抑制效果可被HMGA2补回;miR-98-5p过表达能够抑制Hep-2细胞的增殖,抑制肿瘤的生长。结论 miR-98-5p能抑制HMGA2而抑制喉鳞癌的进程,可能成为喉鳞癌诊断及治疗的一个新靶点。

miR-98-5p靶向HMGA2通过PI3K/Akt/GSK-3β通路调控骨再生的机制研究

目的研究miR-98-5p靶向高迁移率族蛋白A2(HMGA2)通过PI3K/Akt/GSK-3β通路调控骨再生的机制。方法构建细胞培养模型,根据成骨细胞诱导分化中细胞类别不同分为mBMMSCs组、hBMMSCs组及MC3T3-E1组,并根据对成骨细胞质粒不同转染方法分为正常组、A组(MC3T3-E1细胞诱导分化)、B组(MC3T3-E1细胞诱导分化后转染mimic control)、C组(MC3T3-E1细胞诱导分化后转染miR-98-5p mimic)及D组(MC3T3-E1细胞诱导分化后转染miR-98-5p mimic和HMGA2 plasmid)。检测各组碱性磷酸酶(ALP)、miR-98-5p、Runt相关转录因子2(RUNX2)和Osterix mRNA、HMGA2 mRNA表达水平及HMGA2、Bax、Bcl-2、Caspase-3、PI3K/Akt/GSK-3β通路蛋白相对表达水平。比较各组MC3T3-E1细胞增殖和凋亡情况。结果与0 d时比较,mBMMSCs组、hBMMSCs组、MC3T3-E1组7、14 d时ALP、RUNX2及Osterix mRNA水平均明显上升,miR-98-5p mRNA水平下降(P<0.05)。miR-98-5p minic组wt-HMGA2荧光素酶活性低于mimic control转染组(P<0.01)。C组HMGA2 mRNA及HMGA2蛋白表达水平显著低于于A组、B组和D组(P<0.01)。与正常组比较,A、B、C、D组MC3T3-E1细胞内ALP、RUNX2、Osterix mRNA水平均显著增高(P<0.01)。与A组和B组比较,C组和D组MC3T3-E1细胞内ALP、RUNX2、Osterix mRNA水平降低,但D组上述指标显著高于C组(P<0.01)。与A、B组比较,C、D组MC3T3-E1细胞增殖活性显著降低,凋亡率及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白相对表达水平显著升高,且D组上述指标较变化C组更显著(P<0.01)。与A组、B组比较,C、D组MC3T3-E1细胞p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平升高,且C组高于D组(P<0.01)。与A组、B组比较,C、D组MC3T3-E1细胞PI3K、Akt、p-GSK-3β及GSK-3β蛋白相对表达水平降低,且C组低于D组(P<0.01)。结论miR-98-5p可促进成骨细胞增殖分化及抑制其凋亡,作用机制可能与靶向作用HMGA2进行结合激活PI3K/Akt/GSK-3β通路,上调ALP磷酸化等有关。

转染pre-hsa-miR-98对BV-2细胞活化和凋亡的影响

目的用pre-hsa-miR-98转染鼠小胶质细胞系BV-2细胞,观察转染率、转染后细胞活化或凋亡的影响。方法构建pre-hsa-miR-98质粒HmiR和对照质粒CmiR转染BV-2细胞,荧光显微镜与流式细胞仪计数计算转染率,MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法流式细胞术检测细胞凋亡率。结果转染后,荧光显微镜观察和流式细胞术计数显示两组细胞转染率均达60%左右。转染HmiR后,MTT法检测细胞增殖率随转染时间延长有所降低。转染后各组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义。结论构建的pre-hsa-miR-98质粒HmiR和对照质粒CmiR能成功转染BV-2细胞,细胞增殖率比较差异不明显,转染后未明显诱导细胞凋亡,可用于后续研究。

MiR-98靶向MTDH调控鼻咽癌恶性进展的实验研究

目的探讨miR-98对鼻咽癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法利用脂质体介导的miR-98 mimic(及阴性对照)转染鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞,CCK-8检测其体外增殖能力的改变,划痕愈合及Transwell侵袭小室实验检测鼻咽癌细胞的体外迁移及侵袭潜能变化,生物信息学软件预测miR-98可能的靶基因,并经双荧光素酶及Western blotting验证靶基因。结果 MiR-98过表达能抑制鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞的体外生长增殖、迁移及侵袭能力;miR-98对MTDH具有直接靶向调控作用。结论本研究表明miR-98能够靶向MTDH调控鼻咽癌细胞株的体外生长增殖及侵袭能力。

miR-98对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的研究miR-98对肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC瞬时转入肝癌Hep G2细胞内,应用噻唑盐(MTT)法、流式细胞仪、Transwell小室实验检测miR-98对肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用Western blot法检测各组Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT实验表明miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin VFITC/PI凋亡实验证实上调miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell小室实验表明上调miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当miR-98被抑制后,肝癌Hep G2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。Western blot实验检测发现miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调Bcl-2的表达,促进肝癌Hep G2细胞凋亡。

miR-195过表达促进人神经胶质瘤细胞T98G凋亡

目的检测过表达miR-195对人神经胶质瘤细胞T98G增殖的影响,探讨miRNA-195在胶质瘤发病过程中可能机制。方法用合成的miR-195模拟物,转染miR-195表达水平较低的人神经胶质瘤细胞T98G,用MTT、流式细胞术和TUNEL法分别检测T98G细胞增殖、细胞周期和凋亡,用Western blot检测细胞BCL-2的表达。结果 miR-195模拟物转染T98G后,成熟miR-195明显升高(P<0.05)。在T98G中过表达miR-195后,可明显抑制细胞增殖,过表达miR-195能促进T98G细胞的凋亡和下调细胞BCL-2的表达。结论过表达miR-195能显著促进T98G细胞凋亡,提示miR-195可能对胶质瘤的治疗起作用。

pre-hsa-miR-98对卵巢癌细胞增殖活性抑制的影响

目的卵巢癌的死亡率占各类妇科恶性肿瘤的首位,对女性患者的生命造成严重威胁。miR-98可抑制多种癌细胞增殖,但未见关于其应用于卵巢癌治疗的报道。文中为探讨卵巢癌治疗的新方法,用pre-hsa-miR-98转染卵巢癌SKOV3、HO8910和A2780细胞,观察转染率并研究转染后对卵巢癌细胞的增殖抑制作用。方法利用构建的pre-hsa-miR-98质粒HmiR和连接随机序列的质粒CmiR转染人卵巢癌细胞SKOV3、HO8910和A2780细胞,荧光显微镜与流式细胞仪计数计算转染率,MTT法检测细胞增殖抑制率与细胞计数绘制生长曲线研究转染对卵巢癌细胞的增殖抑制作用。结果转染HmiR后,荧光显微镜观察和流式细胞术计数结果显示SKOV3、HO8910、A2780细胞的转染率均在60%左右。转染HmiR后,MTT法检测SKOV3、HO8910、A2780细胞的增殖抑制率随转染时间延长而增加,72 h分别达到49.54%、53.25%、46.09%。生长曲线显示在72 h及96 h抑制率达到高峰,随后随时间延长抑制率不再显著升高。结论 3种卵巢癌细胞的转染率达到实验要求,HmiR转染后可抑制卵巢癌细胞增殖,其抑制作用随转染时间延长而增强。

脓毒症患者外周血miR-98-5p与全身炎症反应激活及预后的相关性研究

目的研究脓毒症患者外周血miR-98-5p与全身炎症反应激活及预后的相关性。方法选择2019年1月至2021年1月期间自贡市第四人民医院收治的102例脓毒症患者作为脓毒症组,同期体检的100例健康志愿者作为对照组,采用荧光定量PCR法检测外周血miR-98-5p的表达水平,采用Elisa法检测血清炎症细胞因子TNF-α、HMGB-1、IL-1β的含量,采用急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEII)、序贯性器官衰竭评分(SOFA)评分评估脓毒症病情,采用28d生存情况评估预后。结果脓毒症组患者外周血miR-98-5p的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症组中miR-98-5p表达≥中位数患者的APACHEII、SOFA评分低于miR-98-5p表达<中位数患者,差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症组中miR-98-5p表达≥中位数患者的血清TNF-α、HMGB-1、IL-1β含量低于miR-98-5p表达<中位数患者,差异有统计学意义(P<0.05);经K-M曲线分析,脓毒症组中miR-98-5p表达≥中位数患者的28 d累积生存率高于miR-98-5p表达<中位数患者差异有统计学意义(P<0.05);外周血miR-98-5p表达水平对脓毒症患者28 d生存具有预测价值(P<0.05)。结论脓毒症患者外周血miR-98-5p表达降低与病情加重、全身炎症反应激活及预后不良有关。

结直肠癌组织中DCAF7、miR-98-3p表达和意义

目的探讨DCAF7、miR-98-3p在结直肠癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法选取在辽宁省肿瘤医院行结直肠癌根治术的患者70例为研究对象。术中收集患者的结直肠癌组织及癌旁正常组织。采用免疫组织化学染色法检测结直肠癌组织中DCAF7分布情况,Western Blot法检测结直肠癌组织中DCAF7蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌组织中miR-98-3p水平,Pearson法分析DCAF7与miR-98-3p表达的相关性。结果结直肠癌患者癌组织中DCAF7表达水平(0.61±0.11)上调,miR-98-3p表达水平(1.93±0.34)下调(P<0.05);结直肠癌组织中DCAF7和miR-98-3p的表达水平呈显著负相关(r=-0.376,P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,外周血DCAF7蛋白和miR-98-3p含量评估结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.864、0.835,对应的敏感度分别为82.86%、90.00%,特异度分别为78.57%、68.57%。二者联合评估结直肠癌的AUC为0.952,敏感度为97.14%,特异度为77.14%。结论DCAF7在结直肠癌组织中显著高表达,miR-98-3p呈低表达,二者显著负相关,且与结直肠癌患者部分临床病理特征密切相关。DCAF7和miR-98-3p有望成为结直肠癌诊断的潜在指标。