补肾宁心汤通过microRNA144/AKT/mTOR轴抑制过度自噬改善早发性卵巢功能不全大鼠卵巢功能的研究

目的观察补肾宁心汤对早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)大鼠的疗效,并探讨作用机制。方法21日龄大鼠随机分为对照组,模型组,补肾宁心汤低、中、高剂量组。对照组给予腹腔注射芝麻油,其余各组给予腹腔注射VCD溶液造模,造模同时,中药组分别给予低、中、高剂量的中药,对照组及模型组给予等体积的0.9%氯化钠溶液,持续45 d后,大鼠处死取材,测定相应指标。采用高通量测序结合公共数据库挖掘POI中miRNA和mRNA表达谱的变化,并预测microRNA-144的靶基因和潜在功能。结果随时间延长,模型组大鼠动情周期逐渐紊乱,表现为动情期缩短,动情间期延长,中药治疗后有改善。卵巢HE染色发现,模型组大鼠卵泡及黄体数均明显减少,中药干预后,卵泡和黄体数增加,中剂量组和高剂量组较为明显。子宫HE染色发现,模型组子宫内膜变薄,管壁子宫腺体数量明显减少,中药治疗后,内膜增厚,腺体数量明显增加。数据库分析提示microRNA144在POI中显著下调,与该实验结果一致。同时测序发现Beclin-1、LC3Ⅰ、ULK1在POI大鼠中显著上调。靶基因预测和功能富集分析显示:microRNA144与Beclin-1、LC3Ⅰ、ULK1存在相互作用且其靶基因显著富集在自噬、AKT/mTOR通路中。PCR测定大鼠卵巢中microRNA-144表达,发现模型组中该表达显著下降,中药治疗后显著升高。WB测定AKT/mTOR、自噬相关蛋白,结果发现以上指标在模型组中的表达分别受到抑制和促进作用,中药治疗后,均有改善。结论补肾宁心汤对POI大鼠的卵巢功能有保护作用,可改善大鼠内分泌和减缓卵泡闭锁,起效的机制可能与上调microRNA144/AKT/mTOR通路抑制过度自噬有关。