雷公藤内酯醇对脑缺血再灌注大鼠小胶质细胞M1/M2型极化的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TPL)对脑缺血再灌注(CIR)大鼠小胶质细胞M1/M2型极化的影响。方法:选取192只SD大鼠设假手术组、模型组、丁苯酞(6 mg/kg)组和TPL低、中、高(0.2、0.4、0.8 mg/kg)剂量组,每组32只。除假手术组外,其余5组采用线栓阻断大脑中动脉2 h的方法复制CIR大鼠模型。各组均于造模前3 d开始给药,1次/d,再灌注24 h后,检测大鼠神经功能、脑梗死率、脑含水量,观察缺血侧皮层神经元病理学变化;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测缺血侧皮层组织炎症介质含量,免疫荧光标记法检测小胶质细胞表型M1型标志物CD86/离子钙结合衔接分子-1(Ionized Calcium-binding Adapter Molecule-1,Iba-1)、M2型标志物CD206/Iba-1,蛋白质免疫印迹法检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB、p-核因子κB蛋白表达。结果:与模型组比较,TPL中、高剂量组和丁苯酞组神经功能缺失评分、脑梗死率、脑含水量显著降低(P<0.05);缺血侧皮层神经元病理学变化明显改善,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量显著降低而IL-10含量显著升高,CD86/Iba-1阳性细胞率显著降低,CD206/Iba-1阳性细胞率显著升高(P<0.05);缺血侧皮层组织Toll样受体4(TLR4)、p-核因子κB表达显著下调,p-核因子κB/核因子κB比值显著降低(P<0.05)。除神经功能缺失评分、脑含水量、IL-1β含量外,TPL高剂量组对其他指标的影响均优于丁苯酞组(P<0.05)。结论:TPL可抑制大鼠CIR损伤,可能与促进小胶质细胞M1型向M2型极化,抑制TLR4/核因子κB通路活化及炎症反应有关。

HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

目的 探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

玻璃体视网膜界面巨噬细胞样细胞的研究进展

巨噬细胞样细胞(MLCs)是一类具有免疫功能的异质性细胞群,主要包括小胶质细胞、玻璃体细胞以及血浆单核-巨噬细胞等。在生理情况下,MLCs参与视网膜稳态维持,在病理情况下则参与视网膜炎性病变,如糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞、葡萄膜炎等。2020年,CASTANOS M V等首次使用临床光学相干层析成像(OCT)仪器将玻璃体视网膜界面MLCs可视化,至此越来越多的研究小组将其应用于各种视网膜及脉络膜炎性疾病的研究。本研究针对MLCs的一般特征以及其在各种视网膜及脉络膜炎性疾病中的研究进展进行阐述。

藁本内酯抑制缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织凋亡相关蛋白的表达

目的:通过检测体内外缺氧缺血条件下NOD样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、GSDMD-N蛋白水平评价藁本内酯(LGSL)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的神经保护作用。方法:选取7日龄SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、HIBD组和LGSL组各10只,采用左颈总动脉双重结扎构建HIBD模型,体外建立小胶质细胞氧糖剥夺(OGD)模型(OGD/R)。采用CCK-8评估不同浓度LGSL干预24 h对OGD/R小胶质细胞活力的影响;通过免疫印迹评估20μM LGSL对体内外缺氧缺血条件下NLRP3、Caspase1、IL-1β、GSDMD-N表达的影响。结果:在体内外模型中,NLRP3、IL-1β、Caspase1及GSDMD-N表达均上调(P<0.05);20μM LGSL干预24 h后,NLRP3、IL-1β、Caspase1及GSDMD-N表达均下调(P<0.05)。结论:LGSL可以显著抑制新生大鼠体内外因缺氧缺血引起的神经炎症反应。

TLR2介导小胶质细胞激活和神经炎症促进血管性痴呆进展的分子机制研究

目的探讨TLR2是否在血管性痴呆(vascular dementia,VaD)中参与介导小胶质细胞的病理性激活和神经损伤及其分子机制。方法体外实验使用LPS-诱导激活人小胶质细胞系HMC3细胞。CCK-8法测定HMC3细胞增殖能力。构建腺病毒Adv-TLR2 shRNA和Adv-shRNA NT载体并介导全身性敲低TLR2。通过永久性双侧颈总动脉闭塞(2VO)建立VaD大鼠模型。蛋白质印迹法测定HMC3细胞和大鼠脑白质组织中TLR2、NF-κB、Iba-1、Claudin-5和ZO-1的表达水平。ELISA法测定大鼠脑白质组织中炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平以及铁死亡相关指标Fe2+离子、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的水平。Morris水迷宫测试大鼠脑神经损伤。结果体外细胞实验,与对照组相比,脂多糖组细胞内TLR2、NF-κB和Iba-1表达水平增强(P<0.05);与脂多糖组相比,腺病毒-TLR2 shRNA敲低组逆转了上述指标的表达水平(P<0.05)。在体大鼠模型实验,与假手术组相比,模型组大鼠脑白质组织中TLR2/NF-κB和Iba-1表达水平上调,Claudin-5和ZO-1的表达水平降低(P<0.05);炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平上调(P<0.05);Fe2+离子和MDA水平升高,GSH水平降低(P<0.05);与模型组相比,模型+腺病毒-TLR2 shRNA敲低组逆转了上述指标的水平(P<0.05)。Morris水迷宫测试,与假手术组相比,模型组和模型+腺病毒-TLR2 shRNA敲低组大鼠找到目标象限(左上象限)所用时长较长(P<0.05),停留在目标象限(左上象限)的时间百分比(%)缩短(P<0.05),大鼠在MWM中4个象限的游泳路线分布较为均匀;与模型组相比,模型+腺病毒-TLR2 shRNA敲低组逆转了上述指标并且在MWM中目标象限(左上象限)的游泳路线分布较为密集。结论敲低TLR2可抑制小胶质细胞的激活及其介导的紧密连接蛋白降解和脑血管屏障网络渗漏,降低血管性痴呆大鼠模型的神经损伤。

天麻素对缺血缺氧诱导的小胶质细胞中TLR4表达的影响

目的:探究天麻素(GAS)对缺血缺氧性损伤(HIBD)后小胶质细胞toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:体内创建新生大鼠HIBD模型,将30只3 d龄SD大鼠随机组成3组:假手术组(sham)、HIBD模型组、HIBD模型+GAS干预组(HIBD+G);体外创建BV2细胞氧糖剥夺(OGD)模型,实验随机设置对照组(control)、OGD组、OGD+GAS干预组(OGD+G)。Western Blot和免疫荧光双标染色技术均检测体外各组细胞及体内大鼠模型左侧大脑胼胝体区TLR4的表达。结果:OGD诱导的小胶质细胞中TLR4表达显著增加;GAS干预后TLR4表达显著减少(P<0.05)。结论:GAS激活的小胶质细胞TLR4的表达具有抑制效应,从而对HIBD发挥神经保护作用。

Patient-specific monocyte-derived microglia as a screening tool for neurodegenerative diseases

Microglia, the main driver of neuroinflammation, play a central role in the initiation and exacerbation of various neurodegenerative diseases and are now considered a promising therapeutic target. Previous studies on in vitro human microglia and in vivo rodent models lacked scalability, consistency, or physiological relevance, which deterred successful therapeutic outcomes for the past decade. Here we review human blood monocyte-derived microglia-like cells as a robust and consistent approach to generate a patient-specific microglia-like model that can be used in extensive cohort studies for drug testing. We will highlight the strength and applicability of human blood monocyte-derived microglia-like cells to increase translational outcomes by reviewing the advantages of human blood monocyte-derived microglia-like cells in addressing patient heterogeneity and stratification, the basis of personalized medicine.

S100A9激活NF-кB促进小胶质细胞TLR7表达和炎症因子释放

目的:S100钙结合蛋白A9(S100A9)激活核因子κB(NF-κB)促进小胶质细胞toll样受体7(TLR7)的表达和炎症因子释放的作用及其机制研究。方法:CCK-8实验检测BV2小胶质细胞的增殖率;转录组测序并结合GO分析、KEGG富集分析和STRING数据库对差异基因(DEGs)进行比对并从差异表达基因中筛选出目标基因;Real time RT-PCR验证TLR7的表达;免疫荧光染色检测CD68、CD206的表达;Western Blot检测CD68、CD206、TLR7、p65、p-p65的表达;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:中等浓度的S100A9对小胶质细胞无增殖抑制效应;实验组CD68蛋白的表达水平较对照组明显增加,而CD206蛋白的表达水平明显下降,提示S100A9促进BV2小胶质细胞向促炎型激活;Toll样受体4(TLR4)的抑制剂TAK-242明显抑制S100A9刺激BV2小胶质细胞后TNF-α和IL-6的表达水平;TLR4/NF-κB通路激活促进TLR7蛋白表达。结论:中等浓度的S100A9可以促进小胶质细胞向促炎型极化,通过激活TLR4/NF-κB通路促进TLR7表达和包括TNF-α和IL-6在内的多种炎症因子的释放,S100A9具有明显的促炎作用。

羟考酮通过TLR4/p38MAPK通路抑制小胶质细胞的活化缓解大鼠骨癌痛

目的:通过制备骨癌痛大鼠模型,探究羟考酮是否通过调节Toll样受体4(TLR4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)参与调控小胶质细胞活化,缓解大鼠骨癌痛。方法:选取72只SD健康大鼠,随机分为假手术组、骨癌痛组、阳性药物组、羟考酮高浓度组、羟考酮低浓度组、羟考酮+TLR4激活组,每组12只。术前1 h、术后3 d、5 d、7 d、10 d进行动物行为学检测,测定各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)、后足热缩足反射潜伏期(TWL);ELISA检测各组大鼠脊髓TNF-α、IL-1β水平;免疫荧光染色法检测各组大鼠补体C3受体(OX-42)表达水平;Western blot检测各组大鼠脊髓TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK水平。结果:与假手术组相比,骨癌痛组大鼠术后各时间点TWL、MWT值显著降低,大鼠脊髓TNF-α、IL-1β、OX-42水平、TLR4蛋白表达量、p-p38MAPK/p38MAPK显著升高(P<0.05);与骨癌痛组相比,阳性药物组、羟考酮高浓度组、羟考酮低浓度组大鼠术后各时间点TWL、MWT值显著升高,大鼠脊髓TNF-α、IL-1β、OX-42水平、TLR4蛋白表达量、p-p38MAPK/p38MAPK显著降低(P<0.05);与羟考酮高浓度组相比,羟考酮低浓度组、羟考酮+TLR4激活组大鼠术后各时间点TWL、MWT值显著降低,大鼠脊髓TNF-α、IL-1β、OX-42水平、TLR4蛋白表达量、p-p38MAPK/p38MAPK显著升高(P<0.05);阳性药物组与羟考酮高浓度组相比,各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:羟考酮可通过抑制TLR4/p38MAPK通路相关蛋白表达和激活减轻炎症反应,抑制小胶质细胞活化,缓解骨癌疼痛。

毛蕊异黄酮对脑出血后继发急性炎症损伤的改善作用及机制

目的探讨毛蕊异黄酮(CA)对脑出血后继发急性炎症损伤的改善作用及机制。方法以雄性C57BL/6小鼠为对象,通过基底节注射Ⅶ型胶原酶构建脑出血模型,分为假手术组(以磷酸盐缓冲液代替胶原酶)、模型组、不同剂量(15、30、60、120mg/kg)CA组。在以改良神经功能缺损程度(mNSS)评分筛选干预剂量的基础上,检测各组小鼠的脑出血体积、脑含水量,脑组织中离子钙结合衔接分子1(Iba1)和脑组织中Toll样受体4(TLR4)及其下游炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)]的表达情况,以及脑组织中细胞的凋亡情况。体外培养原代小胶质细胞,检测其中TLR4及其下游炎症因子的表达情况;体外共培养原代神经元与原代小胶质细胞,检测其中神经元的凋亡情况。结果选取30、60mg/kg作为CA的干预剂量进行后续实验。与假手术组比较,模型组小鼠出现了脑出血现象,脑出血体积和脑含水量均显著升高(P<0.05),脑组织中Iba1蛋白的表达阳性率显著升高,脑组织中TLR4、TNF-α、IL-1β、iNOS蛋白的相对表达水平均显著上调,细胞凋亡率亦显著增加(P<0.05);与模型组比较,30、60mg/kgCA组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05)。CA显著降低了原代小胶质细胞中TLR4及其下游炎症因子的相对表达水平,显著减少了原代神经元与原代小胶质细胞共培养体系中神经元的凋亡(P<0.05)。结论CA可发挥脑保护作用,可能与抑制TLR4介导的炎症反应而减轻脑出血后继发的急性炎症损伤有关。

柴胡皂苷D对脑出血大鼠神经保护作用的机制研究

目的评价柴胡皂苷D对脑出血大鼠神经元损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法SD大鼠通过尾状核注入尾静脉自体血建立大鼠脑出血模型,分为假手术组、模型组、柴胡皂苷D组(8 mg/kg)、Toll样受体4(TLR4)激活剂(RS09)组(25μg/只)、TLR4抑制剂(TAK-242)组(0.5 mg/kg)、柴胡皂苷D+TLR4激活剂组,每组20只。各组干预给药结束后,进行神经功能缺损评分;干-湿重法检测脑含水量;伊文思蓝法检测血-脑屏障通透性;取血肿周围组织,ELISA法检测凝血酶-抗凝血酶(TAT)复合物水平;HE染色及TUNEL染色检测神经元损伤及凋亡率;免疫荧光共定位法检测M1型激活小胶质细胞(标记抗体为CD11b)与小胶质细胞(标记抗体为Iba-1)共表达水平;Western blotting法检测IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4、髓样分化因子88(MyD-88)、核转录因子-κB(NF-κB)、蛋白酶激活受体-1(PAR-1)、B类清道夫受体(CD36)表达水平。结果与假手术组相比,模型组EB含量、脑含水量、神经功能缺损评分、TAT复合物水平均明显升高,CD11b+Iba-1+水平、IL-10、CD36表达明显降低,TLR4、MyD-88、p-NF-κB/NF-κB、PAR-1蛋白表达明显升高(均P<0.05)。阻断TLR4活化及给予柴胡皂苷D干预处理,均可同等程度的改善脑出血大鼠病理症状,M1促炎相关因子IL-6、IL-1β表达明显下降,M2型抗炎相关因子IL-10、CD36表达明显升高(均P<0.05)。TLR4激活剂可明显削弱柴胡皂苷D的上述作用(P<0.05)。结论柴胡皂苷D可改善脑出血大鼠脑水肿、神经元炎性损伤凋亡等病理症状,且其改善作用可能与阻断TLR4通路介导的小胶质细胞M1型活化有关。

海马注射米诺环素对CCI大鼠热痛阈以及海马炎症因子表达的影响

目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠海马小胶质细胞激活、Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、IL-1β、TNF-α和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达的影响。方法:成年SD大鼠随机分为3组(n=8):(1)sham组(假手术组+0.01 mol/L PBS)、(2)CCI组(CCI+0.01 mol/L PBS)、(3)CCI+米诺环素组。大鼠海马CA1区置管7 d后行坐骨神经结扎,CA1区注射0.01 mol/L PBS或米诺环素(2μg/μl),每日2次,连续7 d。于CCI术前1 d,术后1、3、5和7 d测定海马给药1 h后热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);术后第7 d取海马,荧光定量PCR检测Iba-1、TLR2、TLR4、IL-1β、TNF-α和i NOS m RNA表达;酶联免疫吸附试验测定海马IL-1β和TNF-α含量。结果:大鼠CCI术后即形成稳定的热痛敏,与假手术组相比,TWL明显缩短(P<0.01);与CCI组相比,海马CA1区注射米诺环素可明显延长CCI大鼠的TWL(P<0.05)。与假手术组相比,CCI大鼠海马Iba-1、TLR2、TLR4、IL-1β、TNF-α和i NOS m RNA表达明显上调(P<0.01);与CCI组相比,海马CA1区注射米诺环素几乎完全抑制海马Iba-1、TLR2、TLR4和TNF-αm RNA表达上调(P<0.01),仅部分阻断IL-1β和i NOS m RNA表达上调(P<0.05)。与假手术组相比,CCI大鼠海马IL-1β和TNF-α含量明显增多(P<0.01);与CCI组相比,注射米诺环素后几乎完全抑制海马TNF-α水平上升(P<0.01),仅部分抑制IL-1β水平上升(P<0.05)。结论:海马CA1区注射米诺环素可明显缓解CCI大鼠热痛敏症状,其机制可能与抑制海马小胶质细胞激活和TLR2、TLR4表达,进一步抑制IL-1β、TNF-α及i NOS表达有关。

脑出血后的炎症机制

炎症可以加重脑出血后的继发性损伤,并在其中发挥重要作用。脑出血后,血肿成分通过激活小胶质细胞触发炎性通路。活化的小胶质细胞释放促炎性细胞因子和炎症趋化因子来募集周围的炎性细胞。渗入的炎性细胞和小胶质细胞释放炎性因子,最终导致细胞死亡。死亡的细胞释放危险相关分子,加重炎症反应,最终导致脑水肿和神经功能障碍。该文对脑出血后的炎症机制及其最新研究进展予以综述,以期发现脑出血新的治疗靶点。

电针对抑郁症大鼠海马齿状回亚颗粒区小胶质细胞活化和学习记忆能力的影响

目的探讨电针对抑郁症大鼠海马齿状回亚颗粒区(SGZ)小胶质细胞活化和学习记忆能力调控机制。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、NLRP3阻断剂组、电针组,采用孤养+慢性不可预知性温和刺激建立大鼠抑郁症模型。电针组给予电针刺激“百会”“印堂”穴位,持续20 min/d;NLRP3阻断剂组尾静脉注射MCC950溶液(3 mg/kg),连续21 d。采用旷场实验记录动物造模前后自主活动能力,Morris水迷宫实验检测学习记忆功能,免疫荧光双标法定量和定位SGZ中小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子(Iba-1)和炎性小体NOD样受体3(NLRP3)蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测SGZ中半胱天冬酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)基因相对表达量。结果与对照组比较,模型组大鼠自主活动和学习记忆功能明显减弱,SGZ中小胶质细胞出现明显的活化状态,NLRP3蛋白阳性率明显增加,Caspase-1和IL-1β蛋白相对表达量也相应升高(P<0.01);与模型组比较,电针组和NLRP3阻断剂组可明显改善大鼠的自主活动和学习记忆能力,NLRP3+Iba-1蛋白表达阳性率和Caspase-1 mRNA减少(P<0.05,P<0.01)、IL-1βmRNA相对表达量趋势性降低。结论电针可改善抑郁症模型大鼠学习记忆能力,这可能与调控海马亚颗粒区小胶质细胞活化状态和NLRP3/Caspase-1信号通路有关。

Toll信号通路在中枢神经系统损伤中的作用

Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是先天性免疫反应识别病原体的一个重要分子,在免疫系统中发挥关键作用.其家族各种成员的主要功能是识别入侵病原体表面的各种不同分子模式,随后启动免疫反应,达到保护机体作用.在大脑中,小胶质细胞可以作为抗原提呈细胞,参与脑内免疫反应,也可以通过分泌各种促炎症因子启动或促进免疫反应,而TLR家族在中枢神经免疫系统的作用仍存在争议,它既可以通过促进神经免疫反应枢纽因子的表达来增强免疫,也可因免疫过度而损伤神经细胞.总之,Toll信号通路对中枢神经系统疾病有一定的调控作用.

IgG刺激诱发的小胶质细胞Toll样受体4表达及细胞因子分泌

目的:了解在体外培养条件下免疫球蛋白G(IgG)刺激对小胶质细胞表达Toll样受体4(TLR4)和分泌细胞因子的作用。方法:用不同浓度的IgG(2mg/L、20mg/L、200mg/L)及脂多糖(LPS)(10mg/L)刺激原代培养的大鼠小胶质细胞,24h后以免疫荧光染色观察TLR4的表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量。结果:IgG直接作用于体外培养的小胶质细胞后,以剂量依赖的方式引起TLR4的表达和TNF-α的分泌,但未检测到IFN-γ含量的变化。作为阳性对照的LPS引起了小胶质细胞TLR4表达,并诱导了TNF-α及少量IFN-γ的分泌。结论:同种IgG刺激可使体外培养的小胶质细胞大量表达TLR4,可能通过MyD88依赖途径导致炎性细胞因子分泌。结果提示至少在中枢神经系统的固有免疫反应中,TLR4可能发挥识别病原体之外的蛋白分子,例如IgG的作用。

小鼠脑梗死后小胶质细胞内Toll样受体9选择性上调

目的:观察脑梗死后Toll样受体9(TLR9)表达量及其在神经元和神经胶质细胞中的表达变化。方法:线栓法制备C57小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,90 min后再灌注。假手术组为对照。再灌注后6 h、3d、7 d和14 d处死动物(n=3),制备脑冠状位冰冻切片。免疫荧光染色观察TLR9表达量及其在神经元和神经胶质细胞中的表达变化。结果:梗死灶边缘区TLR9的表达量随时间增加,始终高于对侧及假手术组。病变全程偶见神经元胞内小点状TLR9,TLR9阳性率无时间、组间差异。激活态小胶质细胞聚集于梗死灶边缘区,胞内TLR9由散在小点状变为团块状粗颗粒样。TLR9阳性率随时间先升后降,始终高于对侧及假手术组。星形细胞和少突胶质细胞未见TLR9阳性染色。结论:脑梗死后,中枢定居细胞中神经元TLR9维持固有表达,仅小胶质细胞TLR9表达选择性上调,星形细胞及少突胶质细胞无TLR9表达。

阿片成瘾中的神经免疫机制

综述小胶质细胞参与阿片类物质成瘾行为的细胞和分子机制,以及神经免疫抑制剂防治阿片成瘾的研究进展。阿片类物质成瘾是严重的医学和社会问题。目前针对阿片成瘾的研究主要集中在神经元,戒毒药物也主要针对阿片受体,然而其效果有限。神经元不是神经通路的唯一组分,神经小胶质细胞占中枢神经系统细胞总数的10%~15%,然而其作用和功能一度被忽视。阿片能激活Toll样受体4(TLR4),活化小胶质细胞,分泌大量炎症因子,从而调节奖赏信号通路,增加神经元兴奋性,参与成瘾行为的形成和表现。研究调节性神经免疫因子以及它们所造成神经炎症反应,将为理解阿片所造成的大脑功能改变和成瘾行为提供新的思路。

小胶质细胞M1型极化诱发小鼠焦虑样行为及其对前额叶神经元树突棘密度的影响

目的:焦虑样行为与脑内小胶质细胞M1型极化关系密切,但M1型小胶质细胞如何作用于神经元导致焦虑样行为并不清楚,因此本研究的目的在于观察小鼠脑内小胶质细胞向M1型极化诱发产生焦虑样行为,并探讨其对神经元树突棘的影响。方法:实验组采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)脑内注射诱导C57小鼠小胶质细胞向M1型极化,通过旷场实验和高架十字迷宫实验观察小鼠的行为学改变;应用免疫荧光染色方法观察实验组和对照组小鼠的内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,m PFC)内一氧化氮合酶(i NOS)与小胶质细胞标志物iba-1的表达变化,通过Western Blot方法观察实验组和对照组小鼠的m PFC内i NOS、致炎因子白介素1(IL-1)β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达变化,以i NOS、IL-1β和TNF-α表达量均显著增加作为小胶质细胞向M1型极化的标志。采用高尔基(Golgi)染色观察m PFC内神经元树突棘的变化。结果:(1)实验组小鼠mPFC内小胶质细胞i NOS、IL-1β和TNF-α表达量均升高,提示小胶质细胞向M1型极化。(2)实验组小鼠在旷场内的中央活动距离和中央活动时间比对照组均明显减少(P<0.001);实验组小鼠在高架十字迷宫开臂停留时间比正常组明显减少(P<0.05)。(3)Golgi染色结果显示实验组小鼠mPFC内神经元树突棘的密度相较于对照组增多(P<0.05)。结论:mPFC内小胶质细胞M1型极化可诱发小鼠产生焦虑样行为,并伴随mPFC内神经元树突棘密度增多,提示脑内小胶质细胞M1型极化可诱导焦虑样行为,可能与内侧前额叶皮质锥体神经元树突棘可塑性改变相关。

栀子苷下调Toll样受体4表达并拮抗脂多糖诱导的小胶质细胞炎性反应

目的:观察栀子昔对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响并探讨其作用机制。方法:LPS诱导BV2小胶质细胞活化,CCK-8方法检测细胞存活率,Griess法测定NO释放量,ELISA测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量,免疫印迹检测Toll样受体4(TLR4)蛋白表达。结果:栀子苷在10～100μg/ml浓度范围内对小胶质细胞活力影响不显著,此浓度范围内,栀子苷剂量依赖性的减少LPS诱导的NO、TNF-α和IL-1β释放。此外,栀子苷还可抑制LPS诱导的BV2细胞形态活化改变,并降低LPS诱导的TLR4蛋白表达。结论:栀子苷可以拮抗LPS诱导的BV2小胶质细胞炎性反应,其机制可能与下调TLR4信号通路有关。