粪便microRNA-296-3p联合癌胚抗原在结直肠癌筛查中的应用价值

目的探讨粪便microRNA-296-3p(miR-296-3p)联合癌胚抗原(CEA)在结直肠癌筛查中的临床价值。方法选取2021年6月—2023年2月承德医学院附属医院收治并经病理检查确诊的104例结直肠癌患者为结直肠癌组,另选取同期在该院进行体检的61例健康人群作为健康对照组。比较两组的临床资料;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组人群粪便中miR-296-3p表达情况;多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌发生的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-296-3p、CEA单独及联合对结直肠癌的预测价值。结果RT-PCR结果显示,与健康对照组比较,结直肠癌组粪便中miR-296-3p mRNA相对表达量下降(P<0.05)。单因素分析结果显示,结直肠癌组与健康对照组miR-296-3p、CEA的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,miR-296-3p表达[OR=0.70(95%CI:0.55,0.90)]和CEA表达[OR=1.78(95%CI:1.32,2.40)]为影响结直肠癌发生的独立危险因素(P<0.05)。个体预测概率方程为=1/e^(-(-0.399-0.351X_(1)+0.577X_(2)))。miR-296-3p预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性分别为79.8%和42.6%,曲线下面积(AUC)为0.687,CEA预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性分别为81.4%和59.6%,AUC为0.800,miR-296-3p联合CEA预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性为86.3%和63.5%,AUC为0.847。结论miR-296-3p联合CEA的预测模型对结直肠癌有较好的预测价值。

miR-296-3p对胆总管结扎诱导的大鼠肝纤维化的影响

目的探究微小RNA-296-3p(miR-296-3p)对胆总管结扎(BDL)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法将25只SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型(BDL)组、NC adv组、miR-296-3p adv组和miR-296-3p sponge adv组,每组5只。通过苏木精-伊红(HE)、Masson染色和天狼星红(Sirius Red)染色观察大鼠肝组织病理变化;比较各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)含量;用qRT-PCR检测大鼠肝组织中miR-296-3p、白介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平以及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col1A1)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达水平;Western blot检测α-SMA、Col1A1、CTGF蛋白的表达水平;免疫组织化学染色(IHC)检测α-SMA的表达水平;生物信息学网站预测miR-296-3p的候选靶基因;检测锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)mRNA和蛋白的表达水平。结果病理学染色结果显示,与sham组相比,BDL组和NC adv组大鼠肝组织中大量炎症细胞浸润和胶原沉积,与NC adv组相比,miR-296-3p adv组肝组织中炎症细胞减少,胶原沉积减少,而miR-296-3p sponge adv组胶原聚积和炎症反应加重。与sham组相比,BDL组和NC adv组大鼠血清ALT、AST、TBIL含量升高,miR-296-3p的表达水平降低,IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平及α-SMA、Col1A1、CTGF mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);与NC adv组相比,miR-296-3p adv组大鼠血清ALT、AST、TBIL含量降低,miR-296-3p表达水平升高,IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平降低且肝组织中α-SMA、Col1A1、CTGF mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),miR-296-3p sponge adv组结果与miR-296-3p adv组结果相反(P<0.05)。生物信息学网站预测到ZBTB20可能是miR-296-3p的候选靶基因。与sham组相比,BDL组和NC adv组大鼠肝组织中ZBTB20 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),与NC adv组相比,miR-296-3p adv组肝组织中ZBTB20表达降低(P<0.05),而miR-296-3p sponge adv组肝组织中ZBTB20表达升高(P<0.05)。结论miR-296-3p在BDL诱导的大鼠肝纤维化组织中表达水平降低,miR-296-3p可能通过靶定ZBTB20抑制BDL大鼠肝纤维化。

艾滋病患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p和miR-296-5p的检测意义分析

目的研究艾滋病(AIDS)患者血清微小RNA(miR)-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p的检测意义。方法选取2020年5月至2023年5月鹤壁市传染病医院收治的100例AIDS患者作为研究对象,设为AIDS组。另选取同期健康志愿者100例设为参考组。比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p水平。根据AIDS患者预后将AIDS组分为预后不良组、预后良好组,比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p、miR-296-5p水平。采用多因素Logistic回归分析AIDS患者预后不良的影响因素。结果AIDS组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于参考组,miR-296-5p水平低于参考组,差异具有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于预后良好组,miR-296-5p水平低于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-210-5p、miR-23a-3p水平升高及miR-296-5p水平降低均是AIDS患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论AIDS患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平异常升高,miR-296-5p水平异常降低,其均对AIDS患者的预后具有一定的评估作用。

重度子痫前期孕妇胎盘中miR-296-3p和MMP9的表达及临床意义

目的探讨miR-296-3p和基质金属蛋白酶9(MMP9)在重度子痫前期(sPE)孕妇胎盘组织中的表达及临床意义。方法选取2021年1月至2022年1月在亳州市人民医院住院并剖宫产分娩的sPE孕妇52例为sPE组,另选取正常妊娠剖宫产分娩的孕妇52例作为对照组。应用逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组孕妇胎盘组织中miR-296-3p和MMP9 mRNA的表达情况,蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测MMP9蛋白的表达水平。采用Pearson法分析miR-296-3p与MMP9的相关性,以及两者与sPE孕妇的临床特征和妊娠结局的关系,双荧光素酶报告系统检测miR-296-3p和MMP9的靶向关系。结果sPE组miR-296-3p相对表达量高于对照组[(0.72±0.10)比(0.35±0.07)],sPE组MMP9 mRNA和蛋白表达均低于对照组[(0.21±0.06)比(0.57±0.10),(0.16±0.06)比(0.65±0.08)],差异有统计学意义(t=22.336、22.360、-35.602,P均<0.001);miR-296-3p和MMP9 mRNA的表达呈负相关(P<0.05);sPE胎盘组织中miR-296-3p表达与收缩压和舒张压呈正相关(P均<0.05),与新生儿出生体质量和分娩孕周呈负相关(P均<0.05),sPE胎盘组织中MMP9 mRNA的表达与收缩压和舒张压呈负相关(P均<0.05),与新生儿出生体质量和分娩孕周呈正相关(P均<0.05)。荧光素酶报告基因实验证实MMP9是miR-296-3p靶基因。结论miR-296-3p高表达、MMP9低表达与sPE的严重程度和预后相关,推测miR-296-3p可能通过负调控MMP9的表达参与sPE的发生发展。

miR-296-3p在心房颤动病人血清中的表达水平及其临床意义

目的:分析心房颤动病人血清miR-296-3p变化,探究miR-296-3p的潜在靶基因,探讨miR-296-3p在心房颤动发生机制中的作用。方法:选取2020年6月—2021年6月于我院心内科住院治疗的心房颤动病人50例作为心房颤动组,选取同期于我院体检中心进行体检的健康志愿者15名作为健康对照组。检测两组血清miR-296-3p的表达水平。通过分析临床资料及相关生化指标,探究血清miR-296-3p表达水平与之的相关性。采用TargetScan预测miR-296-3p的潜在靶基因。采用实时荧光定量法(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测miR-296-3p mimic抑制SCN5A的效果。结果:心房颤动组病人血清miR-296-3p水平明显高于对照组(P<0.01)。阵发性心房颤动组、持续性心房颤动组及永久性心房颤动组病人血清miR-296-3p表达水平具有明显差异,且随着心房颤动时间的延长,miR-296-3p的表达水平增加(P<0.05)。心房颤动病人血清miR-296-3p表达水平与左房内径呈正相关(r=0.422,P=0.030)。不同浓度的miR-296-3p可直接靶向作用于SCN5A的3′-UTR区域。不同浓度的miR-296-3p mimic可结合SCN5A的3′-UTR进而抑制SCN5A的mRNA和蛋白表达水平。结论:心房颤动病人血清miR-296-3p的表达水平上调,与病人的左房内径呈正相关,miR-296-3p可负调控SCN5A的表达参与心房颤动病人的心房重构。

miR-296-3p通过Wnt/β-catenin信号通路影响大鼠脊髓神经损伤

探究miR-296-3p在脊髓神经损伤中的作用以及相关机制。方法 选取我院神经外科2017年10月~2019年10月收诊的外伤所致脊髓神经损伤患者68例为研究组及同时期健康体检者75例为对照组进行分析,抽取两组空腹静脉血液,qRT-PCR检测两组外周血中miR-296-3p的表达情况,ROC分析miR-296-3p对发生脊髓神经损伤的预测价值-。另购买SD大鼠60只,采用随机数字表法分为3组,选择其中2组进行脊髓半切建模,一组不做处理作为正常组。建模完成后,随机挑选一组大鼠进行断颈处死,取得脊髓组织,分别转染阴性对照慢病毒载体和miR-296-3p过表达慢病毒载体于神经元细胞,流式细胞计数神经元细胞凋亡率,Western bolt检测Wnt/β-catenin信号通路Wnt3a、Wnt-1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达。另一组则作为模型组进行后续研究。分别与建模完成后(T0)、建模1周后(T1)、建模3周后(T2)检测模型组与正常组大鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α及miR-296-3p,并比较两组Tarlov评分与热缩足潜伏期(Thermal withdrawal latency, TWL)。结果 研究组外周血中miR-296-3p呈低表达(456);ROC分析显示当miR-296-3p<3.152时,对患者发生脊髓神经损伤的预测灵敏度为74.62%,特异度为82.63%(456)。检测模型组与正常组大鼠中miR-296-3p表达水平同样发现模型组低于对照组(456)。而比较大鼠炎症因子发生模型组均高于正常组(456)。结论 miR-296-3p与脊髓神经损伤的发生密切相关,其机制可能是通过Wnt/β-catenin信号通路促进脊髓神经元细胞的凋亡进行的。

miR-296-5p靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导骨肉瘤细胞中的自噬并抑制上皮-间质转化

目的 探讨miR-296-5p靶向PLK1对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞自噬及抑制上皮-间质转化(EMT)的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-296-5p在OS细胞中的表达.采用生物信息学分析预测miR-296-5p的靶基因,验证miR-296-5p对靶基因PLK1的直接靶向调控;细胞转染构建miR-296-5p过表达和干扰细胞,CCK-8、克隆形成、Transwell小室、流式、蛋白免疫印迹实验检测miR-296-5p的不同表达对U2OS细胞中PTBP1表达水平及细胞增殖、侵袭、凋亡、自噬及EMT的影响.结果 与对照组比较,miR-296-5p在OS中表达降低,而PLK1则升高(P<0.05);与miR-NC组比较,mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05);与PLK1组比较,PLK1+mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05).结论 miR-296-5p可能能够靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导OS细胞中的自噬并抑制EMT.

多囊卵巢综合征患者血清miR-194-3p、miR-296-3p和AMH水平及其诊断价值

目的 探讨血清miR-194-3p、miR-296-3p水平联合抗苗勒管激素(AMH)对多囊卵巢综合征(PCOS)的诊断价值。方法 选取2018年1月至2021年9月我院收治的137例PCOS患者(PCOS组)和50例健康女性(对照组)为研究对象。根据PCOS患者的胰岛素抵抗指数、体质量指数和睾酮水平,分别将其分为胰岛素抵抗组(n=90)和非胰岛素抵抗组(n=47)、肥胖组(n=43)和非肥胖组(n=94)、高雄激素组(n=76)和非高雄激素组(n=61)。比较各组血清miR-194-3p、miR-296-3p和AMH水平;应用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-194-3p、miR-296-3p和AMH对PCOS的诊断价值;采用Pearson相关分析miR-194-3p、miR-296-3p水平与AMH的相关性。结果 PCOS组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明显高于对照组(t值分别为15.284、19.360、14.608,P<0.001)。PCOS肥胖组、高雄激素组、胰岛素抵抗组血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平分别明显高于非肥胖组、非高雄激素组、非胰岛素抵抗组(P<0.001)。ROC分析显示,miR-194-3p、miR-296-3p及AMH三项指标联合诊断PCOS的诊断价值最大(AUC=0.917,95%CI:0.855~0.976),其敏感度为96.5%,特异度为81.4%。相关分析显示,PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p表达水平与AMH均呈正相关(r值分别为0.807、0.863,P<0.001)。结论 血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平在PCOS患者中呈高表达,三项指标联合检测对PCOS具有较高的诊断价值。

蜂胶黄酮PB3A作用下结肠癌细胞株中miRNA-198和miRNA-296-5p的表达及功能预测

目的:探讨蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯(pinobanksin-3-acetate,PB3A)对结肠癌SW480细胞微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的影响,为结肠癌的治疗及靶向药物研发提供理论依据。方法:使用miRNA芯片技术分析检测蜂胶黄酮PB3A处理人类结肠癌SW480细胞后miRNA表达谱的变化。通过实时荧光定量PCR方法检测miRNA-198和miRNA-296-5p的表达水平,以此来验证miRNA芯片结果的准确性和可靠性。利用miRWalk、Micro T、miRanda等12个网上数据库预测这2条miRNAs的靶基因并进行靶基因功能富集分析。结果:miRNA芯片分析结果显示,蜂胶黄酮PB3A干预24 h后结肠癌SW480细胞中差异表达倍数在2倍及以上的miRNA有267条,其中差异表达倍数达10倍及以上的miRNA有30条,28条为上调表达,2条下调表达;RT-qPCR实验结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的表达量趋势跟miRNA芯片结果一致,表达差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA靶基因预测发现miRNA-198有859个靶基因,miRNA-296-5p有906个靶基因;对这些可能被调控的靶基因进行Gene Class分析,结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的靶基因功能主要为转录因子、拷贝数变异、细胞分化、癌基因、蛋白激酶、组蛋白、转移癌基因、肿瘤抑制基因等(P<0.05)。信号通路富集分析结果显示,miRNA-198靶基因显著富集于肿瘤通路、Wnt信号通路、胞吞通路、Erb B信号通路、黏着斑通路、黑素生成通路等信号通路,而miRNA-296-5p靶基因在MAPK信号通路、胞吞通路、轴突导向通路、Wnt信号通路、胰岛素信号通路、钙离子信号通路等信号通路中出现聚集(P<0.05)。结论:蜂胶黄酮PB3A影响结肠癌SW480细胞的miRNA表达谱。PB3A作用下miRNA-198和miRNA-296-5p的异常表达可能参与PB3A抗结肠癌的过程。

circ-E2F3促进宫颈癌细胞增殖的机制研究

目的研究circ-E2F3通过抑制miR-296-5p影响宫颈癌进展的作用机制。方法采用qRT-PCR检测宫颈癌组织和癌旁组织中circ-E2F3的表达量,筛选宫颈癌细胞系,通过qRT-PCR检测宫颈癌细胞系和正常宫颈黏膜上皮细胞中circ-E2F3的表达量。采用CCK-8检测细胞活力,通过检索数据库筛查circ-E2F3可能的分子机制,并通过双荧光素酶分析、qRT-PCR等方法证实其调控机制。结果circ-E2F3在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系CaSki中表达上调。体外实验证实circ-E2F3能促进宫颈癌细胞增殖;体内实验证实circ-E2F3通过抑制miR296-5p促进肿瘤细胞生长。结论circ-E2F3通过抑制miR-296-5p在宫颈癌的进展中发挥重要作用,高表达的circ-E2F3可能是判断宫颈癌进展的重要指标。

血清miR-296-3p和miR-324-3p表达与肾癌患者临床病理特征及预后的关系

目的:分析血清微小核糖核酸-296-3p(microribonucleic acid-296-3p,miR-296-3p)和微小核糖核酸-324-3p(microribonucleic acid-324-3p,miR-324-3p)表达水平与肾癌患者临床病理特征及预后的关系。方法:选择2017年1月—2020年12月广安市人民医院收治的90例肾癌患者(肾癌组),另选择同时期本院收治的90例肾良性病变患者(良性组),同时期来院接受体检的90例健康体检者(健康组);采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测血清中miR-296-3p和miR-324-3p的相对表达量;采用Cox回归分析影响肾癌患者预后的因素;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-296-3p、miR-324-3p水平与肾癌患者预后的关系。结果:健康组、良性组、肾癌组血清miR-296-3p水平依次升高(P<0.05),miR-324-3p水平依次降低(P<0.05)。miR-296-3p高表达患者TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的例数显著高于miR-296-3p低表达患者(P<0.05);miR-324-3p低表达患者TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的例数显著高于miR-324-3p高表达患者(P<0.05)。生存组miR-296-3p水平显著低于死亡组,miR-324-3p水平显著高于死亡组(P<0.05)。TNM分期、miR-296-3p、miR-324-3p是影响肾癌患者生存或死亡的因素(P<0.05)。miR-296-3p高表达患者3年总生存率(43.75%,21/48)显著低于miR-296-3p低表达患者(95.24%,40/42)(χ^(2)=28.471,P<0.001);miR-324-3p低表达患者3年总生存率(43.48%,20/46)显著低于miR-324-3p高表达患者(93.18%,41/44)(χ^(2)=27.768,P<0.001)。结论:肾癌患者血清miR-296-3p水平显著升高,miR-324-3p水平显著降低,且与肾癌患者临床病理特征以及预后相关。

MiR-296-3p调节多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞凋亡的作用机制

目的:探讨miR-296-3p对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠颗粒细胞凋亡的影响。方法:全自动化学发光免疫分析法检测PCOS大鼠血清雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P)、睾酮(testosterone,T)水平;利用苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)检测卵巢病理学改变;TUNEL法检测卵巢细胞凋亡;qPCR检测卵巢miR-296-3p表达水平;将各质粒分别转染卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,GCs)后分为miR-NC、miR-296-3p mimic、miR-296-3p inhibitor、miR-296-3p mimic+Vector、miR-296-3p mimic+PRKCA和miR-296-3p mimic+PRKCA+NF-κB组,以未处理的GCs为对照组;Western blot法检测p38、p-p38及NF-κB的表达水平,利用StarBase在线预测和双荧光素酶报告实验验证miR-296-3p与PRKCA的靶向关系,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,PCOS大鼠卵巢中E2、P、T水平升高,细胞凋亡比例增加,miR-296-3p表达升高;miR-296-3p与PRKCA具有靶向关系,在3'UTR区存在结合位点;与miR-NC组相比,miR-296-3p mimic组PRKCA mRNA表达水平显著下调,p-p38/p38和NF-κB表达上调,miR-296-3p inhibitor组PRKCA mRNA表达水平显著上调,p-p38/p38和NF-κB表达下调;与miR-NC组相比,miR-296-3p mimic组和miR-296-3p mimic+Vector组细胞凋亡比例显著上调;与miR-296-3p mimic组和miR-296-3p mimic+Vector组相比,miR-296-3p mimic+PRKCA组卵巢颗粒细胞凋亡比例显著下调;与miR-296-3p mimic+PRKCA组相比,miR-296-3p mimic+PRKCA+NF-κB组卵巢颗粒细胞凋亡比例显著上调。结论:miR-296-3p通过靶向PRKCA激活p38 MAPK/NF-κB信号通路介导多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞凋亡。

miRNA-296-5p介导PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制神经细胞SK-N-SH中EV71病毒复制的作用机制

目的探讨miRNA-296-5p介导第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸蛋白激酶(PTEN/PI3K/AKT)信号通路发挥抑制神经细胞SK-N-SH中肠道病毒71型(EV71)病毒复制的作用机制。方法收集临床EV71病毒感染手足口病患儿及正常体检儿的血清样本,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组儿童血清炎症因子降钙素原(PCT)、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-13的表达变化。取对数生长期经EV71病毒感染的人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,设置对照组、miRNA-296-5p mimic组和miRNA-296-5p inhibitor组,根据Lipofectamine■2000■细胞转染试剂进行转染。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法观察三组细胞中EV71-VP1病毒基因mRNA和蛋白以及PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子表达。结果ELISA检测结果表明EV71病毒感染手足口病患儿血清炎症因子PCT、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-13的水平明显高于正常体检儿(P<0.05)。qRT-RCR和Western blot结果显示EV71病毒感染后神经细胞SK-N-SH中miRNA-296-5p和PTEN的mRNA和蛋白水平明显降低,而EV71-VP1和PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05);miRNA-296-5p mimic组中PTEN表达明显升高,同时抑制EV71-VP1的表达和PI3K/AKT信号通路的活化,而miRNA-296-5p inhibitor组可逆转上述作用(P<0.05)。结论miRNA-296-5p通过靶向PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制神经细胞SK-N-SH中EV71病毒的复制,同时降低细胞炎症反应,靶向miRNA-296-5p及其下游PTEN/PI3K/AKT信号通路有望为临床EV71病毒导致的手足口病治疗提供可行的治疗靶点。

微小RNA-296-3p靶向核蛋白1调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的研究微小RNA-296-3p对舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法以正常口腔上皮黏膜角质细胞HOK为对照,实时定量聚合酶链反应法检测舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p和核蛋白1(NUPR1)mRNA的表达,蛋白印迹法检测NUPR1蛋白表达水平。CAL27细胞分为对照组(NC组)、miR-con组、miR-296-3p组、si-con组、si-NUPR1组、miR-296-3p+pcDNA组和miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组,细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证CAL27细胞中miR-296-3p与NUPR1的调控关系。结果与HOK细胞相比,在舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p的含量显著降低(0.54±0.08、0.38±0.05、0.59±0.07比1.04±0.12,t=10.401、15.231、9.718,P均<0.05),NUPR1 mRNA(5.94±0.40、4.48±0.45、5.19±0.48比0.94±0.12,t=35.918、22.803、25.769)和NUPR1蛋白(0.79±0.09、0.54±0.05、0.62±0.08比0.28±0.04,t=15.535、12.182、11.404)表达量均显著升高(P均<0.05)。与NC组、miR-con组相比,miR-296-3p组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低(P均<0.05)。与NC组、si-con组相比,si-NUPR1组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低(P均<0.05)。miR-296-3p在CAL27细胞负调控NUPR1表达。与miR-296-3p+pcDNA组相比,miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组CAL27细胞活性(138.34±5.73比98.54±5.89,t=14.530)、迁移数(95.28±7.56比67.92±5.23,t=8.929)、侵袭数(184.53±17.57比101.26±10.64,t=12.162)及PCNA(0.68±0.07比0.35±0.06,t=10.738)、MMP-2(0.43±0.05比0.29±0.04,t=6.559)和MMP-9(0.58±0.06比0.33±0.08,t=7.500)的蛋白表达均升高(P均<0.05)。结论miR-296-3p通过靶向负调控NUPR1表达抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。