胶质瘤组织lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达与临床特征及预后的关系研究

目的探讨胶质瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)25、微小RNA(miR)-497-5p表达与临床特征及预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月该院收治的157例胶质瘤患者为胶质瘤组,同期该院100例因颅脑损伤接受手术治疗的患者为对照组。分别取术中切除的胶质瘤组织和正常脑组织检测lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平,术后随访3年。分析lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p的相关性,lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平与患者临床特征和预后的关系。结果与对照组比较,胶质瘤组lncRNA SNHG25表达水平升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。与肿瘤最大径<4 cm、世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分级Ⅰ~Ⅱ级比较,肿瘤最大径≥4 cm、WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级的胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。胶质瘤患者的lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p呈负相关(r=-0.370,P<0.05)。lncRNA SNHG25高表达组累积生存率低于lncRNA SNHG25低表达组(P<0.05),miR-497-5p低表达组累积生存率低于miR-497-5p高表达组(P<0.05)。WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、lncRNA SNHG25高表达是胶质瘤患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-497-5p高表达则是保护因素(P<0.05)。结论胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低,且与肿瘤最大径增大、WHO中枢神经系统肿瘤分级高有关,可导致胶质瘤患者不良预后。

具核梭杆菌与miR-497对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其调控关系

目的观察具核梭杆菌与微小RNA(miR)-497对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响并分析其调控关系。方法将结直肠癌细胞系HCT116转染miR-497过表达质粒miR-497 mimic,随机分为感染指数(MOI)100组、MOI 200组、MOI 500组、MOI 1000组,分别与MOI为100、200、500、1000的具核梭杆菌进行共培养,实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-497,选择miR-497表达最低的细菌处理浓度作为具核梭杆菌后续的作用浓度。取HCT116细胞随机分为对照组、miR-497过表达组、miR-497降表达组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组,对照组不做处理正常培养,miR-497过表达组、miR-497降表达组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组通过Lipofectamine 2000分别转染miR-497 mimics、miR-497 inhibitor、mimic NC及inhibitor NC,CCK-8法观察细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,划痕愈合实验观察细胞迁移能力。另取HCT116细胞随机分为对照组、miR-497过表达组、过表达阴性对照组及过表达+具核梭杆菌组,对照组不做处理正常培养,miR-497过表达组转染miR-497 mimic,过表达阴性对照组转染mimic NC,过表达+具核梭杆菌组在转染miR-497 mimic后与选定浓度的具核梭杆菌进行共培养,CCK-8法观察细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,划痕愈合实验观察细胞迁移能力。结果miR-497表达MOI 100组>MOI 200组>MOI 500组>MOI 1000组(P均<0.05),选择MOI 1000作为具核梭杆菌后续作用浓度。细胞增殖率、侵袭细胞数、细胞迁移率miR-497降表达组>对照组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-497过表达组(P均<0.05);细胞增殖率、侵袭细胞数、细胞迁移率miR-497过表达组<过表达+具核梭杆菌组<对照组、过表达阴性对照组(P均<0.05)。结论具核梭杆菌可以通过负向调控miR-497促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。

慢性心力衰竭患者血清miR-497、Sirt4表达与病情严重程度及预后的关系

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血清微小RNA-497(miR-497)、沉默调节蛋白4(Sirt4)表达与病情严重程度及预后的关系。方法选取2021年6月至2022年6月于廊坊市中医医院收治的223例CHF患者为CHF组,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级分为Ⅰ级组56例、Ⅱ级组47例、Ⅲ级组52例、Ⅳ级组68例,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组,另选取同期68例健康体检志愿者为对照组。收集CHF患者临床资料,采用qPCR和酶联免疫吸附法检测血清miR-497与Sirt4表达。采用Spearman相关性分析CHF患者血清miR-497、Sirt4表达与NYHA心功能分级的相关性,采用多因素Logistic回归分析CHF患者预后不良的影响因素,采用ROC曲线分析血清miR-497、Sirt4表达对CHF患者预后不良的评估价值。结果与对照组比较,CHF组血清miR-497表达更低,Sirt4表达更高(P均<0.001)。Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组血清miR-497表达依次降低,Sirt4表达依次升高(P均<0.001)。Spearman相关性分析显示,CHF患者血清miR-497与Sirt4表达呈负相关(rs=-0.729,P<0.001),NYHA心功能分级与血清miR-497表达呈负相关(rs=-0.807,P<0.001),与Sirt4表达呈正相关(rs=0.895,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加(OR=1.047,95%CI:1.001~1.096,P=0.046)、NYHA分级≥Ⅲ级(OR=3.286,95%CI:1.325~8.145,P=0.010)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)升高(OR=1.110,95%CI:1.019~1.209,P=0.017)、Sirt4升高(OR=1.405,95%CI:1.092~1.807,P=0.008)为CHF患者预后不良的独立危险因素,miR-497升高(OR=0.839,95%CI:0.734~0.958,P=0.009)、左室射血分数升高(OR=0.855,95%CI:0.759~0.964,P=0.010)为独立保护因素。ROC曲线分析显示,血清miR-497、Sirt4联合(AUC=0.863,95%CI:0.811~0.905,P<0.001)评估CHF患者预后不良的曲线下面积(AUC)>miR-497(AUC=0.778,95%CI:0.717~0.830,P<0.001)、Sirt4(AUC=0.786,95%CI:0.726~0.838,P<0.001)单独评估(P均<0.05)。结论CHF患者血清miR-497低表达和Sirt4高表达,与病情严重程度和预后密切相关,血清miR-497、Sirt4联合评估CHF患者预后不良的价值较高。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

microRNA-497在肾小球系膜细胞焦亡中的作用及机制

目的:探讨microRNA-497(miR-497)对高糖和胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡的调控作用。方法:高糖和胰岛素处理人肾小球系膜细胞(HRMC),在不同时间运用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时定量PCR检测HRMC细胞中miR-497表达水平;转染不同浓度miR-497 mimic,检测细胞焦亡通路关键基因mRNA表达水平,运用Western印记检测NLRP1蛋白的表达水平;运用生物信息学和萤光素酶报告基因技术预测并验证miR-497对炎性小体NLRP1基因的靶向结合作用;miR-497 mimic和pc DNA-NLRP1分别单独转染或共转染后检测细胞增殖。结果:高糖和胰岛素处理48 h以上HRMC细胞焦亡水平显著增加(P<0.05),miR-497表达水平显著降低(P<0.05);miR-497 mimic转染显著抑制HRMC细胞焦亡,和焦亡通路关键基因IL-1β、TNFα和caspase-1表达水平下降(P<0.05);miR-497可直接靶向作用于NLRP1基因并抑制NLRP1蛋白的表达;NLRP1过表达可消除miR-497对细胞焦亡的抑制作用。结论:miR-497 mimic抑制高糖和胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡。

血清microRNA-497定量检测与结直肠癌血管生成的关系及其临床意义

目的定量检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者血清microRNA-497(miR-497)表达量,探讨其与结直肠癌血管生成的关系及其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测93例CRC患者术前、30例健康者血清miR-497表达量;以ELSIA法检测血清VEGF、血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)含量;以免疫组化法检测93例CRC癌组织及30例正常结直肠黏膜组织中CD34表达,计算肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD);术后随访3年;分析术前血清miR-497表达量与CRC血管生成、病理特征及预后的关系。结果CRC组血清miR-497表达量显著低于正常对照组(P<0.01),血清VEGF、Ang-2含量及癌组织中MVD显著高于正常对照组(P<0.01);miR-497低表达组血清VEGF、Ang-2含量及MVD均显著高于miR-497高表达组(P<0.01);CRC组血清miR-497表达量与血清VEGF、Ang-2含量及MVD均呈负相关(r=-0.437、-0.461、-0.383,P<0.01);术前血清miR-497表达量与CRC分化程度、TNM分期、是否淋巴结转移及是否远处转移呈负相关(P<0.01),与术后复发转移呈负相关(P<0.01)、与生存期长短呈正相关(P<0.01)。Cox多因素分析显示术前血清miR-497表达量是影响CRC患者术后预后的独立高危因素。结论血清miR-497表达量降低可促进CRC新生血管生成及侵袭转移,与CRC患者不良预后相关;术前血清miR-497表达量可成为CRC患者预后评价指标。

血浆microRNA-497表达水平与急性心肌梗死的相关性

目的探讨血浆microRNA-497表达水平与急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的相关性。方法选取2015年1月-2016年9月于河北省涿州市医院就诊的疑似AMI患者,根据AMI诊断标准将患者分为AMI组与非AMI组;以同期健康体检者作为对照组。荧光定量反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测血浆microRNA-497含量,电化学发光法检测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)及肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)水平。应用受试者工作特征曲线分析血浆microRNA-497、cTnⅠ及CK-MB对AMI的诊断价值,多元Logistic回归模型分析血浆microRNA-497与AMI的关系。Spearman秩相关分析AMI患者血浆microRNA-497水平与cTnⅠ、CK-MB的相关性。结果 AMI组血浆microRNA-497、CTnⅠ及CK-MB水平[3.41±0.94;2.94(0.57,10.25);37.48(18.75,101.28)]较非AMI组[1.35±0.63;0.06(0.01,0.21);16.73(13.46,19.57)]和对照组[0.64±0.12;0.00(0.00,0.00);9.25(8.36,9.92)]明显升高(P均<0.05)。血浆microRNA-497、cTnⅠ及CK-MB诊断AMI的曲线下面积及95%CI分别为0.895(0.831~0.960)、0.902(0.839~0.968)、0.784(0.726~0.843),当microRNA-497取值为1.58时,其诊断AMI的敏感度和特异度最好,分别为85.0%和94.2%。Logistic回归分析显示,血浆microRNA-497及cTnⅠ为AMI的独立危险因素(OR=2.637,95%CI:1.574~5.327;OR=2.152,95%CI:1.126~4.975;P均<0.05)。AMI患者血浆microRNA-497与cTnⅠ、CK-MB均呈正相关(r=0.673、0.328,P均<0.01)。结论血浆microRNA-497可作为早期诊断AMI的生物学指标,其诊断效能与cTnⅠ相当,二者联合应用有望提高AMI早期诊断的准确性。

结直肠癌患者血清microRNA-335、microRNA-497表达与临床病理特征及预后的关系

目的探究结直肠癌患者血清microRNA-335(miR-335)、microRNA-497(miR-497)表达与临床病理特征及预后的关系。方法选取2013年2月—2014年9月于邯郸市中心医院诊治的99例结直肠癌患者作为结直肠癌组,选择同期在该院体检的99例健康者作为健康组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组的血清miR-335、miR-497表达水平,比较不同临床病理特征患者血清miR-335、miR-497的表达水平,采用Kaplan-Meier法估计不同血清miR-335、miR-497表达水平患者的生存率。结果结直肠癌组患者血清miR-335、miR-497表达水平低于健康组(P <0.05);浸润深度T1、T2,TNM分期Ⅰ、Ⅱ,及无淋巴结转移患者血清miR-497表达水平高于浸润深度T3、T4,TNM分期Ⅲ,及有淋巴结转移患者(P <0.05);TNM分期Ⅰ、Ⅱ和中高分化患者血清miR-355表达水平高于TNM分期Ⅲ和低分化患者(P <0.05);血清miR-335和miR-497高表达的结直肠癌患者5年生存率分别高于血清miR-497和miR-335低表达患者(P <0.05)。结论结直肠癌患者血清miR-335、miR-497表达水平下降与结直肠癌的发生、发展,病情恶化及预后不良有关。

microRNA-194及microRNA-497在结直肠癌患者血清中的表达和临床意义

目的探讨microRNA-194(miR-194)、microRNA-497(miR-497)在结直肠癌(CRC)患者血清中的表达及临床意义。方法收集52例CRC患者(CRC组)和22例健康体检者(对照组)血清标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-194、miR-497的表达量。结果 CRC组血清中miR-194表达为1.90(0.86~3.35),明显高于对照组[0.76(0.69~0.93)],CRC组血清中miR-497表达为1.57(0.62~2.38),高于对照组[0.79(0.36~1.15)],差异均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、肿块大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及TNM分期的CRC患者miR-194、miR-497水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-194和miR-497在CRC患者血清中表达上升,其异常表达可能与CRC的发生有关。

MicroRNA-497对人膀胱癌EJ细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨microRNA-497(miR-497)对人膀胱癌EJ细胞增殖和凋亡的影响。方法将人膀胱癌细胞株EJ分为4组:miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor、inhibitor NC;通过脂质体Lipfectami-neTM2000介导将miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor、inhibitor NC瞬时转染至上述4组细胞中,转染6 h后,在荧光显微镜下观察转染效率;转染48h后,采用qRT-PCR技术检测各组细胞中miR-497的表达;平板克隆实验和噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达变化。结果荧光显微镜下观察结果显示:各组细胞转染效率均>90%;qRT-PCR结果显示:与各自阴性对照组相比,转染miR-497 mimics组,EJ细胞中miR-497表达明显增加(P<0.01),而转染miR-497 inhibitor后表达明显下调(P<0.01)。过表达miR-497后,EJ细胞的增殖能力较阴性对照组明显减弱(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01);而抑制miR-497表达后,EJ细胞的增殖能力较阴性对照组明显增强(P<0.05),凋亡率明显降低(P<0.01)。Western blot结果示:与阴性对照组相比,过表达miR-497可使EJ细胞的Bcl-2表达降低(P<0.01),Caspase-3表达增加(P<0.01)。结论miR-497可抑制膀胱癌EJ细胞增殖,促进其凋亡,可能与影响Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关。

原发性肝癌组织MicroRNA-497表达及与患者临床特征和生存率的关系

目的:回顾性分析microRNA-497(miRNA-497)在原发性肝癌(HCC)患者癌组织中的表达及与患者临床特征和生存率的关系。方法:收集2010-01—2010-10接受手术治疗的61例HCC患者,采用荧光定量PCR检测其癌组织及癌旁组织miRNA-497的相对表达量。以癌组织miRNA-497相对表达水平的中位数为界限,将61例患者分为miRNA-497高表达组(n=21)和miRNA-497低表达组(n=40)。比较癌组织与癌旁组织miRNA-497水平差异;同时分析miRNA-497高表达组与miRNA-497低表达组临床特征和预后危险因素;比较两组平均生存率和累计生存率的差异。结果:miRNA-497在癌组织中的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。HCC患者癌组织miRNA-497低表达组血清AFP水平、肿瘤大小、TNM分期、血管侵犯与高表达组分布差异有统计学意义(P<0.05)。多因素回归分析显示血管侵犯、TNM分期、miRNA-497表达量是影响HCC患者预后的独立危险因素。Kaplan-Meier分析表明,miRNA-497低表达组平均生存期明显低于高表达组(19.0个月vs 33.3个月),1年、3年、5年累计生存率也较miRNA-497高表达组明显降低(55.0%vs 71.4%、20.0%vs 42.9%、15.0%vs 37.5%,P<0.05)。结论:miRNA-497在HCC组织中的低表达提示预后不良。

miR-497-5p在肝细胞癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-497-5p在肝细胞癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的影响。方法(1)选取46例肝细胞癌患者的肝细胞癌组织和癌旁组织,以及正常肝细胞株(THLE-3细胞)、人肝癌细胞株(SMCC7721细胞、MHCC97H细胞、LM3细胞、HepG2细胞、Hep3B细胞),检测miR-497-5p表达水平;取上述组织,检测胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)mRNA表达水平。比较不同miR-497-5p表达水平的肝细胞癌患者的临床病理特征。(2)将LM3细胞和HepG2细胞分为阴性对照组、miR-497-5p模拟物组和miR-497-5p+IGF-1R组进行实验。将miR-497-5p对照物、miR-497-5p模拟物分别转染至阴性对照组、miR-497-5p模拟物组细胞,将过表达IGF-1R慢病毒、miR-497-5p模拟物先后转染至miR-497-5p+IGF-1R组细胞。转染后48 h,检测3组细胞增殖情况,以及阴性对照组、miR-497-5p模拟物组细胞的IGF-1R mRNA表达水平。(3)应用TargetScan在线预测软件和双荧光素酶报告实验分析miR-497-5p与IGF-1R的关系。分析肝细胞癌组织中miR-497-5p表达水平与IFG-1R mRNA表达水平的相关性。结果(1)肝细胞癌组织中miR-497-5p表达水平低于癌旁组织,且各人肝癌细胞株的miR-497-5p表达水平均低于正常肝细胞株(均P<0.05)。相比于miR-497-5p高表达组,低表达组肿瘤大小>5 cm的患者比例、静脉侵犯的患者比例、TNM分期为Ⅱ~Ⅲ期的患者比例更高(均P<0.05)。(2)miR-497-5p模拟物组LM3细胞培养48 h、72 h、96 h后的吸光度值均小于阴性对照组,HepG2细胞培养24 h、48 h、72 h、96 h后的吸光度值均小于阴性对照组(均P<0.05)。无论是LM3细胞还是HepG2细胞,miR-497-5p模拟物组的IGF-1R mRNA表达水平均低于阴性对照组(均P<0.05)。miR-497-5p+IGF-1R组LM3细胞培养48 h、72 h、96 h后的吸光度值均大于miR-497-5p模拟物组,miR-497-5p+IGF-1R组HepG2细胞培养72 h、96 h后的吸光度值均大于miR-497-5p模拟物组(均P<0.05)。(3)生物信息学预测和双荧光素酶报告实验结果提示IGF-1R是miR-497-5p的直接作用靶基因。肝细胞癌组织中IGF-1R mRNA表达水平高于癌旁组织,且与miR-497-5p表达水平呈负相关(均P<0.05)。结论miR-497-5p在肝细胞癌组织和人肝癌细胞系中表达下调,过表达miR-497-5p可以抑制肝癌细胞的增殖能力。miR-497-5p可能通过靶向调节IGF-1R抑制肝癌细胞的增殖,miR-497-5p可能是一种潜在的治疗肝癌的新靶点。

microRNA497在多发性骨髓瘤的诊断价值与预后价值

目的探讨microRNA497在多发性骨髓瘤中的诊断价值与预后价值。方法将63例多发性骨髓瘤患者设定为治疗组,另取50例健康人士设定为对照组。治疗前,使用FISH技术对多发性骨髓瘤患者进行核型归类;使用qRT-PCR方法检测两组血清中microRNA497表达水平;随后构建ROC曲线以评估microRNA497对多发性骨髓瘤患者的区别能力。多发性骨髓瘤患者均接受3个月的标准VTD治疗;治疗后,进行20个月的随访,使用Kaplan-Meier方法构建无事件生存期曲线,以评价microRNA497表达水平与多发性骨髓瘤患者预后之间的关系。结果治疗组的microRNA497的表达量显著低于对照组(P<0.001);血清中microRNA497的表达水平与多发性骨髓瘤的髓外浸润显著相关;并且microRNA497的表达水平在Ⅲ期患者中显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05)。ROC曲线分析指出血清中microRNA497的表达水平对多发性骨髓瘤患者的诊断具有一定的准确性,曲线下面积为0.9333(P<0.001);microRNA497高表达组患者的无事件生存期显著低于低表达组患者(P<0.05)。结论血清中microRNA497的表达含量与患者的发病与预后显著相关。可作为多发性骨髓瘤的临床生物标志物。

miR-497 CCNE1在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后的关系

目的:探讨微小RNA-497(miR-497)、细胞周期蛋白E1(CCNE1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达特点,分析其与临床病理特征以及患者预后的关系。方法:选择2016年2月至2017年12月我院收治的102例NSCLC患者,选取手术切除的癌组织(NSCLC组)及癌旁组织(距肿瘤组织边缘≥5cm)(癌旁组)标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-497、CCNE1表达,Pearson相关性分析miR-497、CCNE1间相关性。分析miR-497、CCNE1与患者临床病理特征关系。术后保持随访,采用Kaplan-Meier法分析不同miR-497、CCNE1表达患者生存率差异,采用Cox比例风险模型分析影响NSCLC患者预后的相关因素。结果:NSCLC组miR-497表达低于癌旁组(P<0.001),CCNE1表达高于癌旁组(P<0.001)。miR-497、CCNE1表达与肿瘤直径、分化程度、TNM分期有关(P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示miR-497表达与CCNE1呈负相关(r=-0.539,P<0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示miR-497低表达组PFS生存率、OS生存率低于miR-497高表达组(P<0.05),CCNE1高表达组PFS生存率、OS生存率低于CCNE1低表达组(P<0.05)。Cox比例风险回归分析显示TNM分期Ⅲ期、miR-497<0.56、CCNE1≥1.05是NSCLC患者不良预后的危险因素(P<0.01)。结论:NSCLC组织中miR-497表达下调,CCNE1表达上调,miR-497可能通过负向调控CCNE1表达参与NSCLC恶性生物学行为以及不良预后的发生。

miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌患者中的表达差异及机制研究

目的:探讨微小核糖核酸miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌(EOC)患者中表达的差异及机制。方法:选取2008年1月-2012年1月于我院妇产科行卵巢癌分期手术或肿瘤细胞减灭术的EOC患者72例,术后均行以铂类药物为基础的规范化疗,并进行随访(时间为2008年7月-2016年7月)。根据患者对铂类药物的敏感性将其分为铂敏感组(42例)和铂耐药组(30例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测两组患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平,并考察其与患者总生存时间的相关性;采用巢式降落式甲基化特异性聚合酶链反应法检测患者miR-497和miR-34a启动子区DNA甲基化水平,采用蛋白印迹法考察组蛋白H3第9位赖氨酸残基二甲基化(H3K9me2)水平,采用染色质免疫共沉淀法检测miR-497和miR-34a启动子区H3K9me2水平。结果:铂敏感组患者miR-497和miR-34a的表达水平均显著高于铂耐药组,差异均有统计学意义(P<0.05);72例患者的总生存期为(45.7±17.5)个月,与其miR-497和miR-34a表达水平呈正相关(r2分别为0.2714、0.3782,P<0.01)。铂耐药组患者miR-497和miR34a启动子区DNA甲基化水平均显著高于铂敏感组,且其启动子区H3K9me2水平也显著高于铂敏感组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而铂耐药组患者H3K9me2水平虽略高于铂敏感组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EOC患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平与铂化疗的敏感性及患者的生存时间有关,启动子区DNA甲基化和组蛋白甲基化可能是其表达变化的机制之一。

血清微RNA-497-5p对进展期结直肠癌患者预后的预测价值

目的探讨进展期结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者血清中微RNA-497-5p(microRNA-497-5p,miR-497-5p)的表达水平及对患者预后的预测价值。方法选取2017年1月至2018年12月北京中医药大学东直门医院收治的90例进展期CRC患者为研究对象,根据随访结束时患者的生存状态将其分为存活组(52例)和死亡组(38例)。采用Trizol法提取所有患者的总RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-497-5p的相对表达水平,比较两组患者血清miR-497-5p水平及其与CRC患者临床特征的关系,绘制受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析血清miR-497-5p水平对CRC患者预后的预测效能。采用多因素Logistic回归分析探讨CRC患者死亡的危险因素。结果死亡组患者血清miR-497-5p水平显著低于存活组(P<0.05),有淋巴结转移、肿瘤最大径≥50 mm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的CRC患者血清miR-497-5p水平均显著低于无淋巴结转移、肿瘤最大径<50 mm、TNM分期Ⅱ期的CRC患者(均P<0.05)。ROC曲线显示,血清miR-497-5p水平对CRC患者预后有一定的预测价值,曲线下面积为0.831(95%CI:0.681~0.972,P=0.003),灵敏度为86.47%,特异度为65.06%。多因素Logistic回归分析显示,有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、血清miR-497-5p水平降低均是CRC患者死亡的危险因素(均P<0.05)。结论CRC患者血清miR-497-5p水平降低,与临床病理特征相关,血清miR-497-5p水平对CRC患者预后具有一定预测作用,有望成为预测CRC预后的潜在标志物。

微小RNA-497抑制甲状腺乳头状癌细胞活力、侵袭和迁移

目的:研究微小RNA-497(miR-497)抑制甲状腺乳头状癌(PTC)细胞活力、侵袭和迁移的作用机制。方法:采用Target Scan 6. 0软件预测miR-497的靶基因,通过萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot进行靶基因验证,再通过RT-qPCR检测PTC组织中miR-497及其靶基因的表达,并通过基因转染研究miR-497及其靶基因对PTC细胞活力、侵袭和迁移的影响。结果:Target Scan 6. 0软件预测、萤光素酶报告基因检测法、RTq PCR和Western blot均证明AKT3是miR-497的直接靶基因。此外,PTC组织中的AKT3表达水平较正常组织高(P <0. 05),且与miR-497表达呈负相关(r=-0. 573 7,P <0. 01)。下调AKT3可以抑制PTC细胞的活力、迁移和侵袭,与miR-497过表达在PTC细胞中具有相似的作用。结论:miR-497通过直接靶向调节AKT3抑制甲状腺乳头状癌细胞的活力、侵袭和迁移。

miR-497与肾癌预后的关系及其对肾癌786-0细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的：探讨微小RNA-497（miR-497）与肾癌预后的关系及其对肾癌786-0细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法：收集2011年～2015年80例肾细胞癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织并回顾性分析患者随访资料。采用实时定量PCR法检测癌组织及配对的癌旁组织中miR-497的表达。在肾癌细胞系786-0中转染miR-497模拟物,应用MTT法、台盼兰拒染法活细胞计数、流式细胞术和Transwell小室实验检测miR-497对786-0细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。通过生物信息学预测miR-497在786-0细胞中作用的靶基因。Western blotting法检测miR-497对靶基因蛋白表达影响。结果：肾癌组织中miR-497的表达量明显低于癌旁组织（P〈0.05）。786-0中miR-497表达量明显低于正常肾上皮细胞中miR-497表达量（P〈0.05）。随访时间2～48个月,中位随访时间29个月,失访6例,随访率92.5%。76例患者3年无复发生存率（recurrence-free survival,RFS）为55.2%。高miR-497表达组和低miR-497表达组肾癌患者的RFS分别为71.2%和40.1%,差异有统计学显著性（P〈0.05）。过表达miR-497可显著抑制786-0细胞的增殖和侵袭能力,显著促进细胞凋亡（P〈0.05）。过表达miR-497可显著抑制786-0细胞中cyclin D1蛋白的表达（P〈0.05）。结论：miR-497与肾癌预后相关,miR-497能明显抑制肾癌786-0细胞的增殖和凋亡,其机制可能与其靶向抑制cyclin D1有关。

卵巢癌患者miR-497、miR-125a-5p的表达及与其临床特征和生存率的关系

目的:分析卵巢癌患者癌组织中微小RNA-497(miR-497)和微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)的表达情况及其临床意义。方法:选取2018-06—2019-12在本院手术治疗的96例卵巢癌患者作为研究对象,将手术切除的卵巢癌组织作为试验组,癌旁(>2cm)正常组织为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-497和miR-125a-5p的表达情况;比较不同临床病理特征卵巢癌患者miR-497和miR-125a-5p表达水平的差异;分析卵巢癌患者三年生存率与miR-497和miR-125a-5p水平的关系;分析影响卵巢癌患者生存率的危险因素。结果:试验组miR-497和miR-125a-5p的表达量均明显低于对照组(P<0.01);与Ⅰ-Ⅱ期卵巢癌患者相比,Ⅲ-Ⅳ期患者miR-497、miR-125a-5p表达水平均较低(P<0.01),与无淋巴结转移患者相比,淋巴结转移者miR-497、miR-125a-5p表达水平均较低(P<0.05);miR-497、miR-125a-5p低表达组生存率均明显低于高表达组(P<0.05);COX回归分析显示miR-497低表达及miR-125a-5p低表达是影响卵巢癌患者生存率的独立危险因素。结论:卵巢癌患者癌组织中miR-497和miR-125a-5p表达下调,其表达水平与卵巢癌患者三年生存率密切相关。

非小细胞肺癌组织中miR-497与患者临床病理特征及预后的关系

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中microRNA-497(miR-497)的表达水平,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2015年1月至2016年1月我院收治的NSCLC患者60例,取患者癌变组织和癌旁正常组织,应用qRT-PCR检测组织中miR-497的相对表达量,分析癌变组织中miR-497的表达水平与患者临床病理特征和预后的关系。结果 NSCLC患者癌组织中miR-497的表达量为0.46±0.02,明显低于癌旁正常组织的1.00±0.04(P<0.05);miR-497相对表达量与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、TNM分期和术后复发密切相关(P<0.05),而与性别、年龄、吸烟史和病理类型无关(P>0.05);miR-497高表达的NSCLC患者三年无复发生存率(RFS)高于miR-497低表达的NSCLC患者,其生存率比较差异有统计学意义(P<0.05);ROC分析知:miR-497对预后(复发情况)的预测诊断价值的AUC为0.837,理论阈值为0.42,灵敏度和特异性分别为0.832、0.803。结论 miR-497在NSCLC组织中呈异常低表达,且其与NSCLC的发生发展及患者预后密切相关。