基于双单倍体牙鲆挖掘与生长性状连锁的微卫星标记

利用中国水产科学研究院北戴河中心实验站2007年制备的双单倍体牙鲆为材料,根据生长性状表型值分成快速生长组（Fast growth group,FGG）和慢速生长组（Slow growth group,SGG）,进行微卫星标记与生长性状的连锁分析。从牙鲆遗传连锁图谱选择40个高多态性的微卫星标记,覆盖了24个连锁群中的22个。结果表明,FGG和SGG每组各30尾个体进行40个微卫星位点的PCR扩增,在两组内共计检出8个差异性片段。FGG内,差异性片段的出现率为66.67%~86.67%;SGG内,差异性片段的出现率为40.00%~80.00%。同一位点,比较FGG和SGG组内具有差异性片段的个体,在体重、全长、体高三个性状上表现出显著差异。总计,有Poli19TUF、Poli24MHFS、Poli150TUF、Poli190TUF等4个位点与牙鲆生长性状显著相关,能够作为牙鲆良种选育研究过程中的辅助标记。

牙鲆杂合克隆的鉴定及其生长性状的遗传分析

采用经紫外线灭活的真鲷精子激活牙鲆卵子,利用静水压处理抑制卵子发生第一次有丝分裂,制备牙鲆有丝分裂雌核发育二倍体。培育二倍体至性成熟,选择性腺发育良好的雄性个体9尾和雌性个体9尾进行交配,制备杂合克隆9个(HC1～HC9)。同时,诱导2尾雌性个体进行减数分裂雌核发育,制备纯合克隆2个(C1～C2)。由牙鲆第二代遗传连锁图谱筛选22个高多态性的微卫星标记,鉴定牙鲆杂合克隆的遗传背景,分析等位基因杂合位点数量与其生长性状表型值之间的关联性。鉴定结果表明,所有杂合克隆子代基因型完全一致,为亲本等位基因的组合,证实杂合克隆制备成功。2个纯合克隆生长性状表型值最低,其杂合位点数为0;9个杂合克隆中,随着杂合位点数的逐渐增加,杂合克隆的生长性状表型值呈现先升高后降低的趋势。HC5的生长性状表型值最高,其杂合位点数为5;HC9杂合位点数最多,但其生长性状表现值并不是最优,此现象还需今后进一步研究。